一种具有抗氧化活性的芦丁芸香苷化合物及其提取方法技术领域
本发明涉及一种具有抗氧化活性的芦丁芸香苷化合物及其制备方法，属于烟草化
学技术领域。
背景技术
芦丁(Rutin)，亦称芸香苷，广泛存在于植物界中。现已发现的含芦丁的植物已有
50种以上。芦丁属于黄酮类化合物，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血
细胞凝聚，在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用。同时，芦丁还具有抗炎、抗过
敏、利尿、解痉、镇咳、降血脂等方面的作用。临床上芦丁主要用于高血压病的辅助治疗和用
于防治因芦丁缺乏所致的其它出血症，如防治脑血管出血、高血压、视网膜出血、紫癜、急性
出血性肾炎、慢性气管炎、血液渗透压不正常、恢复毛细血管弹性等症，同时还用于预防和
治疗糖尿病及合并高血脂症。
申请人发现，现有芦丁芸香苷并不具备抗氧化活性，因此限定了其应用范围。具体
限制其作为为烟草香精香料添加剂的应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种具有抗氧化活性的芦丁芸香苷化合物及其
制备方法，具有较好的抗氧化活性，可扩大芦丁芸香苷化合物的应用范围，以克服现有技术
的不足。
本发明的技术方案：一种具有抗氧化活性的芦丁芸香苷化合物，所述化合物具有
下述结构式：
白色晶体(CD3OD)，Chemical Formula：C27H30O16，Exact Mass：610.15，Molecular
Weight：610.52m/z：610.15(100.0％)，611.16(30.2％)，612.16(7.7％),613.16(1.4％)，
Elemental Analysis：C，53.12；H，4.95；O，41.93。
所述的具有抗氧化活性的芦丁芸香苷化合物的制备方法，该方法采用下述步骤：
(1)用乙醇水溶液浸提烟草样品后，通过减压浓缩得烟草浸膏；
(2)将烟草浸膏水溶后，采用有机溶剂萃取后，减压浓缩萃取液至十分之一体积，
得到萃取液；
(3)将D101大孔树脂活化后，装入层析柱中，纯净水冲洗至无醇味，将上一步骤中
得到的萃取液至上而下倒入大孔树脂层析柱中，然后，以不同浓度梯度的乙醇对大孔树脂
柱进行洗脱；
(4)收集洗脱液后，对洗脱液进行减压浓缩，浓缩至十分之一体积后进行毛细管取
样薄层层析，展开系统为氯仿：甲醇，显色剂为5％硫酸乙醇溶液，显示方法为加热显色，将
含有相似成分的洗脱液进行合并；减压浓缩洗脱液至干得烟草极性提取物；
(5)采用薄层层析法，展开剂为氯仿：丙酮，显色剂为α-萘酚5％乙醇溶液，显色方
法为加热显色，合并显示出紫红色斑点的样品减压浓缩后得到糖苷类粗提物浸膏；
(6)糖苷类粗提物浸膏与硅胶搅拌均匀后，采用正相硅胶色谱柱进行分离，流动相
为氯仿：甲醇梯度洗脱，洗脱液比例为100:0-0:100；收集各部分洗脱液；
(7)通过薄层层析法，展开剂为氯仿：丙酮，显色剂为α-萘酚5％乙醇溶液，显色方
法为加热显色，根据不同的Rf值，按照不同极性合并糖苷类物质，得到糖苷类细提物；
(8)对烟草细提物进行正相柱层析，以甲醇：氯仿为流动相梯度洗脱，TLC检测分段
为A-E5个部分，将其中的A段通过凝胶柱层析后，进样至半制备色谱系统中进行分离；在色
谱条件：流动相为甲醇:水，体积比33:67，保留时间6.99分钟，分离得到该单体化合物。
所述的步骤(5)展开剂中氯仿：丙酮体积比为5:1。
所述的步骤(7)展开剂中氯仿：丙酮体积比为10:1。
所述的步骤(5)和(7)中显色剂为α-萘酚5％乙醇溶液，显色方法为加热显色。
本发明的有益效果是：在本发明工艺中，各个步骤的提取手段，尤其是步骤8中对
TLC检测分段中A段通过反相硅胶柱层析后，进样至半制备色谱系统中进行分离；在各色谱
条件下，保留时间6.99分钟得到芦丁芸香苷是及其重要的步骤，尤其是其中的保留时间，保
留时间的长短，甚至是0.1-0.2分的差别，都会导致分离产物的变化，这是发明人在实验中
不断摸索反复试验得到的。
本发明通过分离提取技术从烟草中提取得到芦丁芸香苷，芦丁芸香苷作为卷烟添
加剂能降低卷烟的气相自由基，其可能机理是中草药中的有效成分阻断了卷烟在燃烧时自
由基的产生或是对生成的自由基进行迅速的淬灭。同时，由于是烟草自身的物质，在添加至
卷烟产品中后，不会由于添加非烟草制品类物质而给卷烟产品产生不好的气味等不良影
响。
附图说明
图1为本发明化合物的核磁共振氢谱(1H-NMR)；
图2为本发明化合物的核磁共振碳谱(13C-NMR)；
图3为本发明化合物的异核多量子相干谱；
图4为本发明化合物双量子过滤的1H 1H COSY谱；
图5为本发明化合物异核多糖相关谱；
图6为本发明中YC-9(芦丁芸香苷)和VC的体外抗氧化活性图；
图7为本发明化合物半制备色谱分析检测结果图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一
步地详细描述。
(1)用75％乙醇水溶液浸提烟草样品后，通过减压浓缩得烟草浸膏；
(2)将烟草浸膏用水，超声波助溶后，采用乙酸乙酯或石油醚萃取后，减压浓缩萃
取液至十分之一体积，得到萃取液；
(3)将D101大孔树脂按照说明书要求活化后，装入适当尺寸的层析柱中，纯净水冲
洗至无醇味，将上一步骤中得到的萃取液至上而下倒入大孔树脂层析柱中，然后，以不同浓
度梯度的乙醇(10％-100％)对大孔树脂柱进行洗脱；
(4)收集多瓶洗脱液后，对每一瓶洗脱液进行减压浓缩，浓缩至十分之一体积后进
行毛细管取样薄层层析，展开系统为氯仿：甲醇，显色剂为5％硫酸乙醇溶液，显示方法为加
热显色。将含有相似成分的洗脱液进行合并；；减压浓缩洗脱液至干得烟草极性提取物；
(5)采用薄层层析法，展开剂为氯仿：丙酮(5:1)，显色剂为α-萘酚5％乙醇溶液，显
色方法为加热显色，合并显示出紫红色斑点的样品减压浓缩后得到糖苷类粗提物浸膏；
(7)糖苷类粗提物浸膏与硅胶搅拌均匀后，采用正相硅胶色谱柱进行分离，流动相
为氯仿：甲醇梯度洗脱，洗脱液比例为100:0-0:100；收集各部分洗脱液；
(8)通过薄层层析法，展开剂为氯仿：丙酮(10:1)，显色剂为α-萘酚5％乙醇溶液，
显色方法为加热显色，根据不同的Rf值，按照不同极性合并糖苷类物质，得到糖苷类细提
物；
(9)对烟草细提物进行正相柱层析，以甲醇：氯仿为流动相梯度洗脱，TLC检测分段
为A-E5个部分，将其中的A段通过凝胶柱层析后，进样至半制备色谱系统中进行分离；在色
谱条件下(流动相为甲醇:水，33:67)，保留时间6.99分钟，分离得到该单体化合物。
抗氧化活性实验：
(1)DPPH储备液的配制准确称取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)0.078g，用无水
乙醇溶解定容至100ml棕色容量瓶中，摇匀，得浓度为2mmol/L母液，4℃保存。用时取10ml母
液稀释定容到100ml容量瓶中，得浓度为0.2mmol/L。
(2)VC溶液的配制精密称取VC 0.25g，水溶解得母液浓度2.5mg/ml，分别取母液
0.01ml、0.02ml、0.03ml、0.05ml、0.08ml、0.1ml、0.15ml定容至25ml容量瓶中，得一定浓度
梯度0.001mg/L、0.002mg/L、0.003mg/L、0.005mg/L、0.008mg/L、0.01mg/L、0.015mg/L摇匀，
室温放置。分别吸取2ml样品溶液按照步骤(4)方法测定。
(3)供试品溶液配制取一定量所分离的单体化合物，按照一定浓度梯度稀释，再分
别取2ml供试溶液，按照步骤(4)方法测定。
(4)自由基清除率测定方法取2ml不同浓度供试品溶液与2ml 0.2mmol/L DPPH溶
液加入比色管中，混匀后室温放置30min，于517nm处测定A值，平行测定三次，以VC为阳性对
照。利用DPPH溶液的特征紫红色基团的吸收，用紫外－可见分光光度法测定反应后的供试
溶液在517nm吸收的下降程度表示其对有机自由基的清除能力。
试样对DPPH清楚率按照以下公式计算：
DPPH清除率＝1－(Ai－Aj)/A0
Ai为样品+DPPH吸光度的平均值；
Aj为样品溶液吸光度的平均值；
A0为DPPH吸光度的平均值。
表1 YC-9(芦丁芸香苷)和VC的体外抗氧化活性
样品
线性回归
R2
IC50/(mg·mL-1)
YC-9(芦丁芸香苷)
y＝3123.3x+10.834
0.998
0.0125
VC
y＝6573.2x-3.1645
0.9996
0.0081
芦丁芸香苷具有较强的体外抗氧化活性。