丹参饮提取物的制备方法技术领域
本发明涉及一种丹参饮提取物的制备方法，属药物领域。
背景技术
丹参饮源于陈修园《时方歌括》，由丹参、檀香、砂仁组成，具有活血
化瘀、行气止痛等功效。由于其配伍精当、疗效显著，被广泛地应用于高血
压、冠心病心绞痛、慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡、胃神经官能症等疾病的
治疗。丹参饮组方简单，药味较少且化学成分种类不多，仅含有挥发油、菲
醌类、皂苷等，因此可作为进行中药复方研究的理想方剂。目前，制备丹参
饮提取物的方法较多，其共同点在于：提取丹参的有效成分时均采用了煎煮
提取方法，如，蒲清荣，黄锐，等.丹参饮中檀香和砂仁挥发性成分的提取及
鉴别研究[J].云南中医中药杂志，2014，35(11)：57-58.公开了一种丹参饮
提取物的制备方法：a.按处方比例称取檀香、砂仁各16g，加入10倍量水浸
泡30min，用水蒸汽蒸馏法收集蒸馏液；b.取a步骤的药渣与丹参96g加8
倍量水浸泡1h，煎煮3次，每次1h，合并煎液，过滤，浓缩至800ml，冷藏
48h，取上清液；c.将a步骤的蒸馏液与b步骤的上清液混合，加纯化水至
1000ml，搅匀。该方法在提取丹参有效成分时，采用了煎煮方法，导致丹参
中丹参酮类有效成分损失较多，无法发挥药材的最佳药效。因此，寻找一种
制备工艺简便、成本低廉，且能够提高药材有效成分含量的制备方法对丹参
饮提取物制剂的开发和应用具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种丹参饮提取物的制备方法。
本发明提供了一种丹参饮提取物的制备方法，其特征在于：包括下述步
骤：
a.取檀香和砂仁，加水浸泡后蒸馏提取，收集蒸馏液和药渣备用；
b.取丹参，加乙醇渗漉提取，收集渗滤液和药渣，其中，渗漉液经浓缩
后加入羟丙基-β-环糊精，搅匀，备用；
c.取步骤a和步骤b的药渣混合，加水提取，滤过，浓缩，离心；
d.取步骤c的离心液，加入步骤b羟丙基-β-环糊精的渗漉液，回收乙
醇，再加入步骤a的蒸馏液，搅匀，过滤，即得。
具体地，步骤a中加8-12倍量水，浸泡0.5-2h；
步骤b中加2-8倍量60-95v/v乙醇提取；
步骤c中加5-10倍量水，煎煮1-3次，每次0.5-1h。
优选地，步骤a中加10倍量水，浸泡0.5h；
步骤b中加4倍量95％v/v乙醇提取；
步骤c中加8倍量水，煎煮3次，每次1h。
本发明还提供了所述的制备方法制备得到的丹参饮提取物。
本发明方法制备工艺简便、生产成本低，明显提高了丹参中丹参酮类有
效成分的含量。制备得到的丹参饮提取物在预防和/或治疗心肌缺血、心肌损
伤以及镇痛、促胃肠消化方面发挥显著的药效，对丹参饮提取物制剂的开发
和应用具有非常重要的意义。
附图说明
图1薄层色谱图；
图中，从左至右依次为：丹参酮IIA、丹参饮、本发明丹参饮提取物
图2注射ISO前10min各组大鼠心电图
图3注射ISO后30min空白对照组大鼠心电图
图4注射ISO后30min阳性对照组大鼠心电图
图5注射ISO后30min低剂量组大鼠心电图
图6注射ISO后30min中剂量组大鼠心电图
图7注射ISO后30min高剂量组大鼠心电图
图8注射异丙肾上腺素2h后空白对照组大鼠心肌HE染色(×200)
图9注射异丙肾上腺素2h后阳性对照组大鼠心肌HE染色(×200)
图10注射异丙肾上腺素2h后低剂量组大鼠心肌HE染色(×200)
图11注射异丙肾上腺素2h后中剂量组大鼠心肌HE染色(×200)
图12注射异丙肾上腺素2h后高剂量组大鼠心肌HE染色(×200)
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发
明，本领域技术人员根据本发明作出的各种改变和替换，只要不脱离本发明
的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
具体实施方式
实施例1本发明丹参饮提取物的制备
按下述配比称取原料：
丹参200g、檀香33.33g和砂仁33.33g
制备方法如下：
a.檀香和砂仁加10倍量水，浸泡0.5h，蒸馏，收集蒸馏液416mL，备
用；
b.丹参用4倍量95％乙醇作溶剂进行渗漉，收集渗漉液，回收乙醇浓缩
至800mL，加入120g羟丙基-β-环糊精，搅匀，备用；
c.将步骤a和步骤b的药渣混合，加8倍量水，煎煮3次，每次1h，合
并煎液，滤过，浓缩至584mL，离心；
d.取步骤c的离心液，加入羟丙基-β-环糊精的渗漉液，回收乙醇至无醇
味，加入檀香、砂仁蒸馏液，加入纯化水至1000mL，搅匀，过滤，即得。
每ml含原生药0.26666g。
实施例2本发明丹参饮提取物的制备
按下述配比称取原料：
丹参200g、檀香33.33g和砂仁33.33g
制备方法如下：
a.檀香和砂仁加12倍量水，浸泡2h，蒸馏，收集蒸馏液416mL，备用；
b.丹参用8倍量75％乙醇作溶剂进行渗漉，收集渗漉液，回收乙醇浓缩
至800mL，加入120g羟丙基-β-环糊精，搅匀，备用；
c.将步骤a和步骤b的药渣混合，加10倍量水，煎煮2次，每次1h，合
并煎液，滤过，浓缩至584mL，离心；
d.取步骤c的离心液，加入羟丙基-β-环糊精的渗漉液，回收乙醇至无醇
味，加入檀香、砂仁蒸馏液，加入纯化水至1000mL，搅匀，过滤，即得。
每ml含原生药0.26666g。
实施例3本发明丹参饮提取物的制备
按下述配比称取原料：
丹参200g、檀香33.33g和砂仁33.33g
制备方法如下：
a.檀香和砂仁加8倍量水，浸泡1h，蒸馏，收集蒸馏液416mL，备用；
b.丹参用2倍量60％乙醇作溶剂进行渗漉，收集渗漉液，回收乙醇浓缩
至800mL，加入120g羟丙基-β-环糊精，搅匀，备用；
c.将步骤a和步骤b的药渣混合，加5倍量水，煎煮1次，每次0.5h，
合并煎液，滤过，浓缩至584mL，离心；
d.取步骤c的离心液，加入羟丙基-β-环糊精的渗漉液，回收乙醇至无醇
味，加入檀香、砂仁蒸馏液，加入纯化水至1000mL，搅匀，过滤，即得。
每ml含原生药0.26666g。
以下通过具体实验证明本发明的有益效果。
实验例1丹参饮提取物药效学研究
1材料
1.1药物与试剂
本发明丹参饮提取物(按照实施例1制备)、欣康(单硝酸异山梨酯缓释
片)：20mg×48片，山东鲁南贝特制药有限公司生产，批号：20150321。
盐酸异丙肾上腺素注射液(ISO)：lmg*2ml，上海禾丰制药有限公司生产，
批号20140201。
冰醋酸，分析纯，购自成都市科龙化工试剂厂，批号：20140104。
阿斯匹林：0.1g×30片，丽珠集团利民制药厂生产，批号：140923。
西沙比利：5mg×10片，浙江京新药业股份有限公司生产，批号：
20141208。
1.2动物
SD大鼠，雄雄各半，体重：180g～220g；KM小鼠，雌雄各半，体重：
18～22g。以上动物均为SPF级实验动物，实验前适应性喂养一周，由四川医
科大学动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK(川)2013-17，使用许可证
号：SCXK(川)2013-065。
1.3仪器
RM6240生物信号采集处理系统，成都仪器厂生产；FAl004电子天平
(上海民桥精密科学仪器有限公司)；9mm圆形打孔器：自制；PV－200足
趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公司)；YLS－6B智能热板仪(安徽淮北
正华生物仪器设备有限公司)。
2实验方法
2.1剂量设置
丹参饮的临床人用量为一次20mL(每ml含原生药0.26666g)，一日3
次。药效学研究时三个剂量组通常设置为临剂用量的1、2、4倍，成人按
60kg计算，由于大鼠与人的等效剂量比值为6.25：1，小鼠与人的等效剂量
比值为9.1：1，因此丹参饮大鼠低剂量1.67g生药/kg、中剂量3.34g生药/kg、
高剂量6.68g生药/kg，小鼠低剂量2.43g生药/kg、中剂量组4.86g生药/kg、
高剂量9.72g生药/kg。临用时高剂量组将丹参饮浓缩1倍，中剂量组不变，
低剂量组将丹参饮稀释1倍后，大鼠均按1.25ml/100g体重灌胃，小鼠均按
0.182ml/10g体重灌胃
2.2对ISO致大鼠心肌缺血的影响
取大鼠50只,随机分为空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(欣康
30mg/kg)、丹参饮低中高剂量组(1.68g生药/kg、3.36g生药/kg、6.72g生
药/kg)，均按1.25ml/100g灌胃。各组大鼠灌胃给药，连续灌胃14天。于
末次给药2h后,腹腔注射1％戊巴比妥钠1ml/100g麻醉。置于操作台上，按
“生物电电缆的正极(红色)接左下肢，负极(绿色)接右上肢，参考极(黑
色)接右下肢”的顺序将3个针形电极分别插于大鼠四肢皮下，检查记录注
射ISO前10min和注射ISO(10mg/Kg)后30min大鼠标准肢体II导联心电图
(走纸速度为50ms/div，标准电压为lmv＝10mm)。各组自身对照比较大鼠注
射ISO前后心电图的变化。末次注射IS02h后经腹主动脉采血,分离血清,4℃
保存,待测CPK、LDH。在处死大鼠后2min内迅速切取大鼠心尖同一部位心
肌组织，修整成1×1×3mm规格大小的标本，放入中性甲醛溶液固定，进
行石蜡包埋、切片，HE染色后，光学显微镜下观察心肌细胞结构。
2.3对小鼠常压耐缺氧时间的影响
取KM种小鼠50只，随机分为为空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(欣
康30mg/kg)、丹参饮低、中、高剂量组(2.43g生药/kg、4.86g生药/kg、
9.72g生药/kg)，均按0.182ml/10g体重灌胃。各组小鼠灌胃给药，连续灌
胃14天。于末次给药2h后,将广口瓶瓶口涂以凡士林，其中放入钠石灰5g。
给药30min后，将小鼠放入广口瓶内，每瓶1只，加盖密封。观察并记录以
小鼠呼吸停止作为耐缺氧时间。
2.4对异丙肾上腺素致心肌缺血模型小鼠耐缺氧时间的影响
取KM种小鼠50只，分组给药同2.3。于末次给药2h后,皮下注射异丙
肾上腺素10mg/kg,诱发小鼠心肌缺血模型。将广口瓶瓶口涂以凡士林，其中
放入钠石灰5g。给药30min后，将小鼠放入广口瓶内，每瓶1只，加盖密
封。观察并记录以小鼠呼吸停止作为耐缺氧时间。
2.5对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
KM小鼠50只，雌雄各半，随机分为空白对照组(生理盐水)、阳性对照
组(阿斯匹林，200mg/Kg))、丹参饮低中高剂量组(2.43g生药/kg、4.86
g生药/kg、9.72g生药/kg)，均按0.182ml/10g灌胃，连续灌胃14天。于
末次给药0.5小时后，腹腔注射0.5％冰醋酸0.2ml/只，观察并记录每只小鼠
自注射醋酸致痛后至出现第一次扭体反应的时间(扭体潜伏期)和15分钟内
出现扭体反应的次数，计算各组药物扭体抑制率(对应组扭体次数/阴性组扭
体次数)。
2.6对小鼠热板性疼痛的影响
KM小鼠70只，雌性，用YLS-6B智能热板仪测定痛阈值(调节热板温
度使恒定于55±0.5℃，以小鼠自置于仪器上至出现舔后足所需时间作为该鼠
的痛阈值)，凡舔后足时间小于5s或大于30s或跳跃者弃之不用，筛选出合
格的KM小鼠50只，随机分为空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(阿斯匹
林，200mg/Kg))、丹参饮低中高剂量组(2.43g生药/kg、4.86g生药/kg、
9.72g生药/kg)，均按0.182ml/10g灌胃，连续灌胃14天。于末次给药后
30min后分别测小鼠痛阈值，如60s仍无反应，则其痛阈值以60s计算。
2.7对胃肠功能的影响(胃排空和肠推进实验)
取健康KM小鼠50只，雌雄各半，实验前进食不进水20小时，随机分
为空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(西沙必利，4mg/kg)、丹参饮低中
高剂量组(2.43g生药/kg、4.86g生药/kg、9.72g生药/kg)，均按0.182ml/10
g灌胃，连续灌胃14天。于末次给药后40min后，每只小鼠用营养性半固
体糊(取5g羧甲基纤维素溶于25ml蒸馏水中，然后分别加入8g奶粉、4g糖、
4g淀粉、3g活性炭，搅拌均匀，配成150ml约150g的半固体糊，置冰箱中
冷藏12h，使用前2h取出恢复常温)0.8ml灌胃，20min后脱颈椎处死小鼠。
结扎小鼠胃喷门和幽门，取胃，沿胃大弯剪开胃体，洗出胃内容物后称净重，
计算胃残留率。同时自胃幽门剪至回盲部，用镊子不加牵引的取出整个小肠
段，铺直于表面湿润的板子上，测量幽门至炭糊最前端的距离和小肠全长，
计算小肠推进率。
胃残留率＝(全胃重量-胃净重量)/灌胃营养性半固体糊重量×100％
小肠推进率＝幽门至炭糊最前端的距离/小肠全长×100％
3结果
3.1对心肌缺血模型大鼠心电图的影响，见表1、图2-图7。
表1.注射ISO后30min各组大鼠心电图阳性反应情况(n＝10)
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，各组大鼠注射ISO前10min心电图全部正常(图2)，未出现
阳性反应。空白对照组10只大鼠给ISO后30min均出现阳性反应，表现为
出现大Q波或ST段明显抬高(图3)，差异具有统计学意义(P<0.01)，表明ISO
造模成功。丹参饮三个剂量组和阳性对照组大鼠在给ISO后30min阳性反应
率明显下降(图4，图5，图6，图7)，与空白对照组比较，差异有显著性(P<0.05
或P<0.01)。
3.2对心肌缺血模型大鼠血清心肌酶的影响，见表2。
表2.注射异丙上腺素2h后各组大鼠的血清心肌酶(n＝10)
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，腹腔注射异丙上腺素2h后,丹参饮高剂量组大鼠LDH、CPK
活性明显降低，与空白对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.01)。
3.3对心肌缺血模型大鼠心肌组织结构的影响，见图8-图12。
结果显示，腹腔注射异丙上腺素2h后,光镜下显示空白对照组大鼠心肌
纤维排列紊乱，细胞核模糊或消失(图7)；阳性对照组及丹参饮低、中剂量组
心肌纤维排列轻度紊乱，部分细胞核变得较为模糊(图9、图10、图11)；丹
参饮高剂量组心肌纤维排列基本正常，病变轻微(图12)。
3.4对小鼠耐缺氧时间的影响，见表3。
表3.丹参饮对小鼠常压耐缺氧时间的影响
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，丹参饮低、中剂量组对小鼠耐缺氧时间无明显影响，但丹参
饮高剂量组能延长小鼠耐缺氧时间，与空白对照组比较，差异有显著性
(P<0.05)。
3.5对ISO致心肌缺血模型小鼠耐缺氧时间的影响，见表4。
表4.丹参饮对ISO致心肌缺血模型小鼠耐缺氧时间的影响
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，腹腔注射ISO 30min后，丹参饮低剂量组对小鼠耐缺氧时间
无明显影响，但丹参饮中、高剂量组和阳性对照组能延长小鼠耐缺氧时间，
与空白对照组比较，差异有显著性(P<0.05或P<0.01)，
3.6对醋酸所致小鼠扭体反应的影响，见表5。
表5.丹参饮对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，小鼠注射0.5％冰醋酸后，丹参饮低剂量组对小鼠扭体反应无
明显影响，但丹参饮中、高剂量组能延长出现扭体反应的平均时间(潜伏期)，
减少扭体反应的平均次数，与空白对照组比较，差异有显著性(P<0.05或
P<0.01)。
3.7对小鼠热板性疼痛的影响，见表6。
表6.丹参饮对小鼠热板性疼痛的影响
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，丹参饮各剂量组在给药后30min后对小鼠的痛阈值无明显影
响，与生理盐水组比较，差异有显著性(P>0.05)。
3.8对小鼠胃肠运动功能的影响，见表7。
表7.丹参饮对小鼠胃肠运动功能的影响
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，小鼠灌胃营养性半固体糊后，丹参饮低剂量组对小鼠胃残留
率和小肠推进率无明显影响，但丹参饮中、高剂量组能促进胃排空和小肠推
进运动，其胃残留率和小肠推进率与空白对照组比较，差异有显著性(P<0.05
或P<0.01)。
综上，本发明丹参饮提取物能有效缓解ISO致心肌缺血模型大鼠的心电
图表现，降低心肌酶LDH、CPK的活性，改善缺血心肌的组织结构，对心肌
缺血具有明显的防治作用；能提高小鼠常压耐缺氧时间，并明显延长ISO致
心肌缺血模型小鼠的耐缺氧时间，对缺血性心肌损伤具有保护作用；能延长
出现扭体反应的平均时间，减少扭体反应的平均次数，具有明显的镇痛作用；
本发明丹参饮提取物还能减少胃残留率，提高小肠推进率，具有显著地促进
胃肠消化功能的作用。
本发明方法制备工艺简便、生产成本低，明显提高了丹参中丹参酮类有
效成分的含量。制备得到的丹参饮提取物在预防和/或治疗心肌缺血、心肌损
伤以及镇痛、促胃肠消化方面发挥显著的药效，对丹参饮提取物制剂的开发
和应用具有非常重要的意义。