ATF3蛋白激动多肽及其应用技术领域：
本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗肿瘤的多肽。
背景技术
ATF3(activating transcription factor 3)为ATF/CREB(the activating
transcription factor/cyclic amp response element-binding)家族中成员之一。最新
的研究发现，ATF3是一种压力响应蛋白，当细胞感受到诸如DNA损伤等压力时，会被诱导启
动修复功能。因此，在DNA修复一个早期的关键步骤中发挥重要作用。一般来说，DNA损伤会
提高癌症的风险。当DNA损伤时，ATF3作为响应者，可以提高其蛋白水平表达水平，随后找到
并结合另一种蛋白Tip60，提高了Tip60的稳定性和表达水平，Tip60转而改变ATM蛋白，帮助
它形成一种支架，其他的作用蛋白很快便会聚集到这一支架上，最终帮助吸引了一大群其
他的蛋白到达损伤位点，从而促进DNA损伤修复功能。尽管细胞有可能需要数年的时间才能
识别出DNA损伤，然而一旦DNA损伤被识别出来，在数分钟内就会产生反应。强有力的肿瘤抑
制子p53是最早到达ATM支架处的蛋白之一。一旦到达现场，p53会帮助评估损伤是否可以修
复。如果无法修复，p53会触动细胞自杀。如果损伤可以修复，它会阻止细胞增殖，帮助启动
修复。
ATF3在静息细胞中低表达，但可被一系列应激信号快速诱导，已被证明的因素包
括缺氧、代谢性应激、DNA损伤，以及多种生理性应激，如肝再生、脑癫痫、心脏缺血/再灌注、
神经损伤、紫外线损伤，一系列抗癌复合物，如姜黄素、非甾体类抗炎药、黄体酮、磷脂酰肌
醇抑制剂LY294002、蛋白酶体抑制剂(热休克蛋白90抑制剂)等，这些应激信号不仅可使
ATF3转录增强，mRNA水平及稳定性也随之增强。如果抑制ATF3，Tip60激活和ATM信号均下
降。细胞开始累积DNA损伤，变得对附加压力更加的敏感，这为癌症出现创造了条件。因此，
ATF3与肿瘤生长密切相关，可以作为治疗肿瘤的新靶点。
发明人认为如果找到一种靶向性的ATF3激活剂，可以在机体内提高ATF3表达的药
物，并且增多的ATF3可以提高Tip60活性，整体上促进细胞对DNA损伤的反应，可以达到治疗
癌症的目的。
尽管如此，并没有成熟开发的ATF3蛋白激动制剂，尤其是ATF3蛋白激动剂多肽被
开发，临床上用于治疗肿瘤。
发明内容：
本发明目的是针对现有肿瘤患者治疗的药物特点，设计一种ATF3蛋白激动多肽，
能有效治疗肿瘤。
技术方案
一种ATF3蛋白激动多肽，其序列为SEQ ID NO1。所述多肽的治疗肿瘤的应用。其用
途可通过多种给药方式治疗肿瘤，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注等实现。所
述ATF3蛋白激动多肽用于激活ATF3蛋白的活性。
有益结果：
本发明中的ATF3蛋白激动多肽序列SEQ ID NO1，可以靶向激活ATF3蛋白，ATF3蛋
白产生的效应，达到治疗肿瘤的效果。试验结果表明：ATF3蛋白激动多肽能够抑制体外的多
种肿瘤细胞增殖活性，促进肿瘤细胞中ATF3蛋白表达，以及抑制肿瘤模型裸鼠的肿瘤生长，
提高荷瘤小鼠生存率。
具体实施方式
ATF3蛋白激动多肽由上海生工吉尔合成。
实施例1
用肿瘤模型检测ATF3蛋白激动多肽的体内抑瘤作用。6-8龄雌性C57BL/6裸鼠，裸
鼠随机分成4组，每组10只。(1)空白组；(2)ATF3蛋白激动多肽低剂量组；(3)ATF3蛋白激动
多肽中剂量组；(4)ATF3蛋白激动多肽高剂量组。建立卵巢癌肿瘤模型，方案为：空白组加入
相同体积的溶剂，实验组ATF3蛋白激动多肽(上海生工吉尔合成)设3个剂量：2.5、5.0、
10.0mg/Kg，在肿瘤周围多点注射。连续给药21天后，观察裸鼠存活数量，计算存活率。结果
显示，ATF3蛋白激动多肽可有效地保护裸鼠，提高荷瘤裸鼠的生存率，10.0mg/Kg时的生存
率达到87.3％。
实施例2
ATF3蛋白激动多肽对人卵巢癌细胞OVCAR-3T中ATF3蛋白表达的影响：将OVCAR-3T
细胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基，在37℃、5％CO2的培养箱中培养至90％
以上的汇合度时，用0.25％胰蛋白酶消化细胞，计数，3000rpm离心5min收集细胞；加入10％
小牛血清的RPMI 1640培养液(5ml)悬浮细胞，细胞计数，调整细胞浓度为5*106个/ml，于6
孔培养板中培养。实验设空白对照组、ATF3蛋白激动多肽各剂量(5、10、20mg/ml)组。各组分
别加入OVCAR-3T细胞悬液600μl/孔后，空白对照组加入1640培养液600μl，ATF3蛋白激动多
肽各剂量组在加入不同浓度的多肽。按20μl/1×105个细胞加入蛋白质提取液，吹吸打散细
胞，4℃放置30min使细胞裂解，用于检测细胞裂解液中ATF3蛋白表达量。
结果显示，ATF3蛋白激动多肽处理的OVCAR-3T中ATF3蛋白表达明显升高。OVCAR-
3T细胞裂解液中ATF3蛋白表达(29.71±16.87pg/(mg总蛋白)(p<0.05)，175.29±25.41pg/
(mg总蛋白)(p<0.05)，45.62±20.32pg/(mg总蛋白)(p<0.05))，与OVCAR-3T对照组(10.32
±4.88pg/(mg总蛋白))相比有显著性差异。由此可见，ATF3蛋白激动多肽能促进人卵巢癌
细胞OVCAR-3T中ATF3蛋白表达。
实施例3
人卵巢癌细胞OVCAR-3T的增殖作用：将OVCAR-3T细胞加入10％小牛血清的RPMI
1640培养液(5ml)悬浮细胞，细胞计数，调整细胞浓度为5*106个/ml，于96孔培养板中培养。
实验设阴性对照组、ATF3蛋白激动多肽各剂量(5、10、20mg/ml)组。各组分别加入OVCAR-3T
细胞悬液100μl/孔后，阴性对照组加入1640培养液100μl，ATF3蛋白激动多肽各剂量组在加
入不同浓度的多肽。37℃细胞培养箱静止培养48h，培养结束后每孔加入20μl MTT，继续培
养4h，最后弃掉每孔所有溶液，每孔加入100μlDMSO，震荡，用酶标仪检测570nm处OD值，每孔
设5个平行。
表1 ATF3蛋白激动多肽对OVCAR-3的增殖作用
*P<0.05，**P<0.01与对照组相比。
实验结果见表1，与对照组比较，ATF3蛋白激动多肽能抑制人卵巢癌细胞OVCAR-3T
的增殖，在剂量为5～20mg/ml的范围呈现很好的剂量依赖关系，以20mg/ml的抑制增殖率最
高，为51.99％。
SEQUENCE LISTING
<110> 罗瑞雪
<120> ATF3蛋白激动多肽及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 55
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Pro Cys Leu Ser Pro Pro Gly Ser Leu Val Phe Glu Asp Phe Ala Asn
1 5 10 15
Leu Thr Pro Phe Arg Phe Ala Ile Gln Asn Lys His Leu Cys His Arg
20 25 30
Met Ser Ser Pro Leu Gly Val Ser Ile Thr Lys Ala Glu Val Ala Pro
35 40 45
Glu Glu Asp Glu Arg Lys Lys
50 55