一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法技术领域
本发明涉及一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法。
背景技术
近年来发现的硫酸酯多糖具有抗艾滋病病毒(HIV)的活性，使多糖硫酸酯化的研究成
为热点。日本学者报道，从香菇子实体中获得的一种具有良好抗肿瘤作用的葡聚糖的硫酸
化衍生物具有较好的抑制HIV的活性。我国学者王顺春、方积年对该类衍生物的结构进行了
研究，制备了一系列的不同硫酸取代度的硫酸酯化香菇多糖，制备的硫酸酯化香菇多糖经
验证具有良好的抗HIV活性。但相对于多糖的研究来说有关多糖硫酸酯化研究报道仍然较
少，且缺乏后续的一系列相关试验研究。
发明内容
本发明提出一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法。
一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）取香菇多糖，用蒸馏水将粗多糖溶解，将Sevage试剂加入多糖液中，振荡，离心，重
复5-8次直至有机层没有絮状沉淀为止；
（2）取步骤（1）上清液，将上清液在pH8下滴加双氧水至淡黄色或无色，在50℃下保温
2h，然后浓缩，装入透析袋中用双蒸水透析，每8h换一次水，透析3～5d至离子强度不变为
止；
（3）用EAE-纤维素柱层析，经梯度洗脱，收集占较大部分的多糖组分，然后用
SephadexG-200柱进一步纯化香菇多糖，增大上样量，收集其中占较大部分的组分；
（4）将无水毗啶置于附有冷凝管和搅拌装置的三颈烧瓶中，经冰盐浴冷却后，剧烈搅拌
下，按氯磺酸：吡啶比例为1:2-1:4缓慢滴加氯磺酸；
（5）用无水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃搅拌反应4h，反应液经中
和、离心后，用蒸馏水透析，减压浓缩，加入乙醇，静置过夜后离心，收集沉淀物，干燥后得到
硫酸酯化产物。
优选地，所述步骤（4）的氯磺酸：吡啶比例为1:2。
优选地，所述步骤（5）的搅拌温度为60℃。
本发明所述方法制备的硫酸酯化香菇多糖水溶性较好，活性强，具有良好的抗HIV
性能，本发明所述方法步骤简单，可工业化生产，实用性强。
具体实施方式
实施例1。
一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）取香菇多糖，用蒸馏水将粗多糖溶解，将Sevage试剂加入多糖液中，振荡，离心，重
复5-8次直至有机层没有絮状沉淀为止；
（2）取步骤（1）上清液，将上清液在pH8下滴加双氧水至淡黄色或无色，在50℃下保温
2h，然后浓缩，装入透析袋中用双蒸水透析，每8h换一次水，透析3～5d至离子强度不变为
止；
（3）用EAE-纤维素柱层析，经梯度洗脱，收集占较大部分的多糖组分，然后用
SephadexG-200柱进一步纯化香菇多糖，增大上样量，收集其中占较大部分的组分；
（4）将无水毗啶置于附有冷凝管和搅拌装置的三颈烧瓶中，经冰盐浴冷却后，剧烈搅拌
下，按氯磺酸：吡啶比例为1:2-1:4缓慢滴加氯磺酸；
（5）用无水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃搅拌反应4h，反应液经中
和、离心后，用蒸馏水透析，减压浓缩，加入乙醇，静置过夜后离心，收集沉淀物，干燥后得到
硫酸酯化产物。
（6）优选地，所述步骤（4）的氯磺酸：吡啶比例为1:2。
实施例2。
一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）取香菇多糖，用蒸馏水将粗多糖溶解，将Sevage试剂加入多糖液中，振荡，离心，重
复5-8次直至有机层没有絮状沉淀为止；
（2）取步骤（1）上清液，将上清液在pH8下滴加双氧水至淡黄色或无色，在50℃下保温
2h，然后浓缩，装入透析袋中用双蒸水透析，每8h换一次水，透析3～5d至离子强度不变为
止；
（3）用EAE-纤维素柱层析，经梯度洗脱，收集占较大部分的多糖组分，然后用
SephadexG-200柱进一步纯化香菇多糖，增大上样量，收集其中占较大部分的组分；
（4）将无水毗啶置于附有冷凝管和搅拌装置的三颈烧瓶中，经冰盐浴冷却后，剧烈搅拌
下，按氯磺酸：吡啶比例为1:2-1:4缓慢滴加氯磺酸；
（5）用无水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃搅拌反应4h，反应液经中
和、离心后，用蒸馏水透析，减压浓缩，加入乙醇，静置过夜后离心，收集沉淀物，干燥后得到
硫酸酯化产物。
（6）优选地，所述步骤（4）的氯磺酸：吡啶比例为1:2。
优选地，所述步骤（5）的搅拌温度为60℃。