降低潜在感染材料的感染性的方法 本发明的目标是一种降低潜在感染材料的病毒感染性的方法，潜在感染材料如人或动物体液或从中可分离出生物活性物质的体液部分，其中感染性归因于非脂包被的病毒。
人或动物体液等潜在感染材料是生物活性、从而宝贵的物质的重要来源。然而，从这些来源分离生物活性物质并非毫无问题，这在过去已很明显，尤其是在来自血浆的制品传播HIV时。因而使用这些制品时一个必须的要求是它们是无病毒的，即这些制品应当不能传播感染性颗粒。
脂包被的病毒可以非离子型生物相容的溶剂和去污剂处理有效地灭活。这些方法在EP0131740中有介绍。非脂包被地病毒这样处理不能充分地灭活。WO94/17834报道了一种充分灭活甲肝病毒等非脂包被的病毒的方法。但该方法只有用非离子型去污剂和60到65℃加热联合处理才可灭活病毒。但加热处理时间长达5到30小时是一个缺点，因为宝贵的生物活性物质主要是蛋白质，其复杂的结构被这样的热处理改变甚至破坏。这包括降低相应部分的活性。因而，已知的方法引起这些物质的可能收率的降低。
DE4021542A1公开了一种处理无感染性血浆制品的联合方法。血浆用非离子型表面活性剂处理，除去脂层之前加入生物相容性脂类。此后，在疏水性材料上进行固相抽提分出脂层并除去非离子型表面活性剂。
EP-A0239859涉及一种由含脂溶性加工化学制剂的生物材料中除去脂溶性加工化学制剂的方法。该方法包括使含脂溶性加工化学制剂的生物材料与有效量的天然存在的油或具有类似化学结构的合成物质作用，上述天然存在的油来自植物或动物。振荡所得混合物，沉淀分开上相和下相，移出上相。该方法在制备相对无病毒、生理可接受的血浆时特别有用。
欧洲专利申请EP-A0525502公开了一种制备用于静脉使用、病毒已灭活的免疫球蛋白溶液的方法。免疫球蛋白以非离子型表面活性剂处理，随后在疏水材料上进行固相抽提将其除去。
欧洲专利申请EP-A0112563公开了一种血浆蛋白制品的溶剂处理方法。血浆蛋白制品以干燥形式与一种有机溶剂混合以除去病毒感染性。
WO-A83/04371公开了一种灭活位于蛋白载体上的脂病毒的方法，所说的病毒选自乙肝病毒(HBV)和非甲非乙型肝炎(NANBH)病毒，该方法是使上述病毒与一种卤代烃处理剂在常温下长时间作用，卤代烃的用量为5％(v/v)到50％(v/v)，优选卤代烃为氯仿。
本发明要解决的问题是提供一种方法，该方法可降低潜在感染材料或已知感染材料中所含非脂包被病毒的感染性。
奇怪的是，我们发现潜在感染材料中非脂包被病毒的感染性可用疏水相处理该材料得以降低，疏水相与该潜在感染材料可形成双相系统，随后分离形成的两相。
根据本发明降低潜在感染材料的病毒感染性的方法其特征在于以下措施，其中潜在感染材料如人或动物体液或从中可分离出生物活性物质的部分，其感染性可归因于非脂包被的病毒。欲从中分离生物活性物质的潜在感染材料以基本不溶于水的疏水相处理，它与该潜在感染材料将会形成两相系统。此后，将疏水相与这样处理的潜在感染材料分开。
以下，潜在感染材料也包括已知感染材料。尤其包括血或血浆等体液或冷沉淀物等处理过的或血浆。此外还包括这些潜在感染材料的任何部分以及细胞裂解物或类似的天然物。
可从潜在感染材料中分离的生物活性物质尤指蛋白质，如因子VIII或维生素K依赖因子等血液凝固级联因子，如C或S蛋白，γ-球蛋白，补体因子和丝氨酸蛋白酶抑制剂。
尤其，根据本发明可用来与潜在感染材料形成两相系统的疏水相为一种非极性有机液体，如植物油或低熔点脂肪等在室温下是油状的液体。
根据本发明的方法不但与利用非离子型去污剂和二烷基或三烷基磷酸酯灭活病毒的现有方法相容，而且还被证实有另一个优点，即将潜在感染材料的疏水相处理和非离子型去污剂和二烷基或三烷基磷酸酯，特别是三正丁基磷酸酯(TNBP)的处理联合使用。这种联合处理可同时或依次进行。
下列衍生物可作为非离子型去污剂，其含量应为以重量计至少0.1％胆汁盐、脂肪酸的聚氧乙烯衍生物、部分酯化的山梨糖醇酐，如商品名为Tween 80、Tween 20和Polysorbat 80的产品，以及非离子型、溶于油的表面活性剂，尤其是商品名为Triton X-100(乙氧基化的烷基酚)的表面活性剂。两性离子试剂也可以使用，如N-十二烷基-N，N-二甲基-2-氨基-1-乙烷磺酸盐或其衍生物等磺基甜菜碱，或辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷等非离子型去污剂。去污剂的用量优选为0.01％到10％。优选使用TNBP、Tween和Triton或胆酸钠/TNBP联合处理。
以疏水相处理潜在感染材料基本可以代替WO94/17834中必需的热处理，该热处理与非离子型去污剂和烷基磷酸酯联合使用可灭活非脂包被病毒。
可能的非脂包被病毒尤指甲肝、柯萨奇、脊髓灰质炎和细小病毒。
根据本发明的方法在疏水相与潜在感染材料充分混合时特别有效。这可通过例如机械作用达到，如超声处理、高效搅拌、强烈振荡等。
两相系统形成后，尤可通过离心或过滤除去疏水相。疏水相尤可使用大豆油和/或蓖麻油等植物油。油相可通过疏水滤器过滤除去。疏水相需要分离的程度主要取决于后续处理过程。若非脂包被病毒的感染性已降低的材料还需用阴离子交换或亲和层析纯化，则疏水相无需定量分离。因而必须确保可能抽提到疏水相的感染性颗粒被分开。然而，若疏水相需要定量分离，则其可用类似于DE4008852所述的方法除去。该分离过程可使用常规生化分离过程，包括电泳。
根据本发明的方法极适合分离生物活性物质，如因子VIII、维生素K依赖的凝血因子等凝血级联因子。
本发明用以下实施例进一步说明。
实施例
向潜在感染血浆部分加入非脂包被病毒。各病毒层可见附表。非包被病毒则使用柯萨奇B6和脊髓灰质炎1。脂包被的PRV病毒用作对照。实验过程如下：非脂包被病毒以非离子型去污剂和TNBP(SD)处理，或不用TNBP处理(表中SD栏为(-))。样品以油处理。
各种血浆部分(如含因子VIII的部分)大约20ml均加入柯萨奇、脊髓灰质炎或假性狂犬病病毒至表中所列感染性病毒的水平。
随后强烈振荡。
1.将0.2ml Tween 80和0.06ml TNBP加入19.74ml的部分，或
2.将0.2ml TritonX-100和0.2ml TNBP加入19.6ml的部分。
向制品1和2中各加入1ml蓖麻油，随后在室温下强烈抽提1小时。
3.另一含病毒的20ml部分同上以1ml蓖麻油短暂处理，但此前没有用去污剂处理(SD-)。
上述各例均以离心分相。处理前后由水相取出1ml样品作为感染性对照。病毒SD 处理前水平*处理后水平* 下降水平PRV- 6.84±0.32 6.18±0.30 0.66±0.62柯萨奇B6+ 6.96±0.32 2.79±0.17 4.17±0.49- 6.78±0.23 3.56±0.32 3.22±0.55脊髓灰质炎1+ 7.02±0.38 ＜2.73±0.12 ＞4.29±0.50- 6.90±0.32 4.16±0.28 2.74±0.60
*每毫升的log10TCID50