本发明涉及高效花生增产剂及其制备方法，属于微生物菌剂和植物生长调节剂领域。 农作物的增产是受多种因素影响的综合结果，除选用优良品种，合理施用氮、磷、钾肥之外，还需要供给作物生长所需的常量和微量元素并进行病虫害防治。花生的主要地下虫害是花生线虫，在危害严重的地区，可使花生减产20-30%，甚至完全绝收。现在防治花生线虫的有效方法是施用杀线虫剂，例如施用DD混剂、呋喃丹、铁灭克等。其缺点是成本高、毒性大，特别是残留于土壤中的上述药物造成土壤环境污染，长期施用会严重地破坏土壤生态平衡，对发展农业极为不利。
本发明的目的是提供一种兼生物防治花生线虫危害，减少花生线虫病的发生率，又能提供花生生长所需的多种微量元素，促进有效结瘤固氮，调节作物新陈代谢，使花生作物健壮生长，提高花生果实质量和产量，并且是无毒、无害、无污染的多功能高效花生增产剂。达到既能防治花生线虫危害又能增产又无环境污染的目的。
本发明的解决方案是：采用花生线虫的天敌进行生物防治，同时接种优良的花生根瘤菌，提高花生根瘤的固氮效率，满足花生自身生长所需的氮肥，施用适量的植物生长调节剂和生长所必需的多种微量元素。
本发明的高效花生增产剂包括：
1.芽孢杆菌、花生根瘤菌分别发酵培养的发酵液的混合物，其中所述的芽孢杆菌包括：短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、巨大芽孢杆菌（Bacillus megatherium）、球状芽孢杆菌（Bacillus sphaericus）、地衣芽孢杆菌（Bacillus Licheniformis），可只使用其中一种，也可以两种或多种组合使用。所选用的上述芽孢杆菌皆具有防治花生线虫的作用，是土壤中花生线虫地天敌。两种发酵液的体积比依次为：2∶1。用于芽孢杆菌的发酵培养基是至少含有大豆粉、玉米粉、饲料母粉、磷酸氢二钾和硫酸锰的水溶液;花生根瘤菌（Rhizobium arachis）的发酵培养基是至少含有蔗糖、饲料酵母粉、大豆粉或豆饼粉、玉米粉、磷酸二氢钾、磷酸氢二甲、硫酸镁、氯化钠、碳酸钙、硫酸亚铁、钼酸钠、硼酸和硫酸锰的水溶液。于27-33℃，pH6.4-7.2发酵。
2.植物微量元素，包括：锌、硼、锰、钼、铁、钴、钾和氯的化合物，旨在提高花生的有效结瘤率和根瘤菌的固氮活性，其中锌、钾和氯与植物细胞分裂素产生协同效应，能数倍地加速叶绿素的形成，增强植物的光合作用。可选用硫酸锌1-6%、四硼酸钠1-4%、氯化钴0.01-0.06%、氯化钾2-5%、钼酸钠0.03-0.2%、硫酸铁0.05-0.3%、硫酸锰0.3-2%，其中百分数皆为重量百分数。
3.植物细胞分裂素，可选用的包括：次黄嘌呤、N6-异戊烯基腺嘌呤、N6-异戊烯基腺苷、玉米素、二氢玉米素或玉米素核糖，可只选用其中一种，也可选用其中两种或多种混合使用，含量为5-60ppm。所选用的上述植物细胞分裂素具有加速植物细胞分裂，促进作物生长和叶绿素的形成，调节作物新陈代谢，提高作物抗逆力的功能。
4.吸附剂用于吸附混合发酵液，可选用的包括：腐植酸或其碱金属盐或腐植酸土、草炭粉、褐煤粉、高岭土、轻质碳酸钙粉或蛭石粉，可只选用其中一种或选用其中两种或多种混合使用。上述各种物质的粒度为100-120目，并在120℃-160℃灭菌后使用。
上述1-4中的物质在本发明的高效花生增产剂中的重量比依次为混合发酵液∶植物微量元素∶植物细胞分裂素∶吸附剂＝（25-35%）∶（4-10%）∶（5-60ppm）∶（65-72%），经混合均匀制成产品，密封包装。
本发明的高效花生增产剂含芽孢杆菌总数为（1-1.5）×109个/克，花生根瘤菌（5-8）×108个/克。施用时，既可配水浇灌，也可拌种或拌种加叶面喷施。
本发明的高效花生增产剂的制备方法包括：
一、微生物发酵培养：
（一）三角瓶培养：
按常规方法配制营养肉汁培养基和YMA培养基各2-4升∶调节pH 7.0-7.2，分装于500毫升的三角瓶中。每个三角瓶装150毫升，15磅/英寸2灭菌20分钟。
将前述的芽孢杆菌和花生根瘤菌种，在超净工作台上分别接种在装有营养肉汁培养基和YMA培养基的三角瓶中，控制温度28-30℃，置于摇床上振荡培养3-5天。
（二）种子罐发酵培养
1.发酵培养基配制
在A、B、C三个种子发酵罐中，按如下配方（Ⅰ）配制一定量的培养基，并将其平均分装于A、B发酵罐中，用于芽孢杆菌的发酵。按配方（Ⅱ）于C发酵罐中，配制与A或B罐等量的培养基，用于花生根瘤菌发酵。
配方（Ⅰ）（重量百分比）∶大豆粉0.5-3.0%，玉米粉0.5-2.0%，饲料酵母粉0.5-1.5%，磷酸氢二钾0.2-0.4%，氯化钠0.025-0.05%，硫酸锰0.001-0.005%，其他为水。pH 7.0-7.2，15磅/英寸2灭菌20钟。
配方（Ⅱ）（重量百分比）∶蔗糖0.5-2.5%，饲料酵母粉0.5-1.5%，大豆粉1.0-2.8%，玉米粉0.25-0.7%，磷酸氢二钾0.05-0.2%，硫酸镁0.05-0.1%，氯化钠0.05-0.1%，碳酸钙0.15-0.3%，硫酸亚铁0.002%，钼酸钠0.001%，硼酸0.001%，硫酸锰0.001%，其余的为水。pH6.8-7.0，15磅/英寸2灭菌20分钟。
2、接种发酵：
待发酵罐中发酵培养基的温度下降至28-32℃时，将三角瓶中的芽孢杆菌接种在A和B发酵罐中，花生根瘤菌接种在C发酵罐中，接种量为（0.6-2）×108个/毫升发酵液，控制pH6.4-7.0，温度28-32℃，通气量1∶0.25-0.7）发酵，直至显微镜检A、B发酵罐中菌数为（1-1.5）×1010个/毫升，C发酵罐菌数为（8-10）×109个/毫升，停止发酵。
在大量生产时，可在A、B、C发酵罐的菌数达到（1-5）×106个/毫升时，按同样的接种方法，把此发酵液接种到装有大量相应培养基的生产发酵罐中，并以同样的条件进行发酵，当其菌数达到上述要求时止。
二、混合制成产品
将A、B、C发酵罐中的发酵液在配料糟中按体积比1∶1∶1混合，加入5-60ppm的前述的植物细胞分裂素搅均匀。按重量比25-35份的混合发酵液，65-72份120-160℃烘干灭菌的，粒度为100-120目的前述吸附剂粉，4-10份前述的植物微量元素混合均匀成产品，密封包装。按照本发明生产的高效花生增产剂，每克含有所述的芽孢杆菌（1-1.5）×109个，花生根瘤菌（5-8）×108个。
本发明的高效花生增产剂与已有技术比较的突出优点是，采用线虫的天敌控制线虫对花生的危害，不需要再使用农药从而避免了其对土壤和花生果实的污染，又能调节作物的新陈代谢，增强作物的抗逆力，使作物健壮生长，促进结瘤固氮，提高花生产量，同时降低花生生产成本。
为了更清楚地说明本发明，例举以下实施例，但其对本发明无任何限制。
实施例1
本发明的一种高效花生增产剂，其组成包括：
经120-150℃烘干灭菌，粒度为100-110目的腐植酸钾粉1400公斤，硫酸锌50公斤、四硼酸钠41公斤、氯化钾42公斤、钼酸钠1.25公斤、硫酸铁1.42公斤、氯化钴0.8公斤、硫酸锰4.20公斤和短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、花生根瘤菌1∶1∶1的发酵液混合物525公斤并于其中加入45ppm玉米素、次黄嘌呤和N6-异戊烯基腺嘌呤三者等量混合的混合物。上述各种物质经均匀混合后分装在密封袋中保存。
以上所述的芽孢杆菌也可只用其中的短小芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌，但其发酵液与花生根瘤杆菌发酵液的体积混合比为2∶1。
实施例2
上例中高效花生增产剂的制备方法：
1.三角瓶培养：按照前述的微生物发酵培养中所述的三角瓶种子培养基配制方法，配制培养基。然后，将短小芽孢杆菌和枯草孢子杆菌分别接种在装有营养肉汁培养基的三角瓶中。将花生根瘤菌接种在装有YMA培养基的三角瓶中，塞上棉花塞，于28-32℃，摇床上振荡培养4天。
2.在300升A、B发酵罐中各配制175升水溶液培养基，其中含大豆粉2%、玉米粉1.5%、饲料酵母粉1%、磷酸氢二钾0.25%、氯化钠0.03%、硫酸锰0.002%，pH 7.0-7.2，15磅/英寸2灭菌20分钟。
在300升C发酵罐中配制花生根瘤菌水溶液培养基175升，其中含蔗糖1.5%、饲料酵母粉1.0%、大豆粉2.0%、玉米粉0.5%、磷酸二氢钾0.07%、磷酸氢二钾0.067%、氯化钠0.08%、碳酸钙0.2%、硫酸亚铁0.002%、钼酸钠0.001%、硼酸0.001%、硫酸锰0.001%和硫酸镁0.09%。pH6.8-7.0，于15磅/英寸2灭菌20分钟。
于28-32℃，将三角瓶中培养的短小芽孢杆菌和枯草芽杆菌分别接种在A和B发酵罐中;将花生根瘤菌接种在C发酵罐中，接种量为（1-2）×108个/毫升发酵液，控制pH6.4-7.0，保持温度28-32℃，通气量1∶（0.25-0.5），发酵至A、B罐菌数为（1-1.5）×1010个/毫升，C罐菌数为（8-10）×109个/毫升停止。
3.将A、B、C发酵罐中的发酵液按体积比1∶1∶1混合，加入45ppm玉米素、次黄嘌呤和N6-异戊烯基腺嘌呤等量混合的混合物。按重量比将25.42%的上述混合发酵液，67.77%于120-150℃烘干灭菌的腐植酸土和6.81%植物微量元素混合在一起，混合均匀、用塑料袋密封包装。其中芽孢杆菌也可只用短小芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌，但其发酵液与花生根瘤发酵液的体积混合比为2∶1。
本发明的高效花生增产剂的施用实例：
例一、每亩分别用本发明的上述高效花生增产剂1000克，配成1/200浓度水溶液，浇灌于播种穴内。对线虫危害的病情指数防治效果列于表一。
表一
经病情指数成对数统计分析，t值为5.023＞t0.05＝3.182，5%显著水平。
例二、在土质贫瘠的砂石岭地，每亩用1000克本发明的高效花生增产剂拌种，花期用1/100浓度的溶液喷施一次，供试花生品种为白沙1016。试验结果列于表二。
表二
经方差分析，处理间F值113.58＞F0.01＝18.0，1%极显著水平。
例三、在平坦的壤土，每穴用2%浓度的本发明的高效花生增产剂20毫升浇灌，花期用1/100浓度溶液喷施一次，供试花生品种为79-266大花生，试验结果列于表三。
表三
经方差分析，处理间F值6.83＞F0.05＝4.76，5%显著水平。
从表一、表二、表三可以看出，施用本发明的高效花生增产剂，对花生线虫的防治效果为21.5-44.4%，平均为34.3%，为5%显著水平。在贫瘠的沙石地增产21.58-25.83%，在平坦的壤土地增产17.08-18.11%，每亩净增花生47.9-50.8公斤，折每公顷增产花生718.5-762公斤。说明施用本发明的高效花生增产剂，能有效地控制花生线虫病的发生率并显著增加花生产量，施用量少，施用成本低，无环境污染，是一种发展优质生态农业的高效花生增产剂。