南瓜组培工厂化种苗快速繁殖方法 本发明属于植物种苗的快速繁殖技术领域，专用于日本南瓜组培苗快速繁殖及田间栽培的技术。
南瓜(Cucurbiramoschata)为葫芦科(Cucurbiraceae)，一年生蔓性草本植物。做为瓜类蔬菜，因其适应性强、产量高、用途广泛，而在世界广为栽培。1993年以来，我国各地从日本和台湾引进特种南瓜进行试种。“艾西丝”即为从日本引进的优质南瓜杂交新品种。其主要特点为肉厚皮薄、质地细腻、嫩而粉糯、营养丰富，且有预防糖尿病、减肥美容的药用价值，在国际市场上，艾西丝南瓜价格昂贵且供不应求。1997年，日本市场上艾西丝南瓜速冻制品每吨价值1万2千美元，在国内，艾西丝南瓜也颇受各大宾馆的欢迎，每年5至8月间上市，十分畅销，其销售价高出一般南瓜6倍多。发展艾西丝南瓜生产对提高我国外向型农业水平，丰富城乡蔬菜市场具有重要意义。
由于艾西丝为F1代杂交种，生产单位需要每年从日本进口种子，而进口种子价每粒为1元以上，且还存在货源不稳和质量等问题。
利用组织培养法是解决种苗繁殖的有效途径。本发明的目的就是提供一种艾西丝南瓜种苗快速繁殖的方法，在短时间内提供大量种苗，以代替进口种子，满足大规模生产的需要，本发明试管苗增殖系数为5以上，一年可继代9次，在厂房面积为100m2的条件下，每一粒种子可年产试管苗200万株，株成本0.4元人民币，且遗传性状稳定，完全可以进行商品化生产。田间试验结果表明，艾西丝南瓜试管苗结果早、产量高、种性不变。
以下详细叙述本发明的主要内容：
一种艾西丝南瓜种苗快速繁殖方法，包括无菌培养物的获得、芽的分化与增殖、生根培养、驯化移栽等步骤，其特征在于芽的分化与增殖培养基为MS+0.25～2.0mg/L BA或MS+0.5～1.0mg/L BA+0.1～0.5mg/LIAA；诱导生根培养基为1/2MS+琼脂0.6-0.7％+蔗糖2％或1/2MS+脱脂棉(少许)+蔗糖2％或1/2MS+0.05～0.1mg/L PP333+琼脂0.6～0.7％+蔗糖2％(PP333为多效唑)。
本发明所提供的艾西丝南瓜种苗快速繁殖方法，其具体操作步骤如下：
1、无菌培养物的获得：将种子用自来水洗净后于70％乙醇中浸泡3-5分钟，再置于饱和漂粉精液中浸泡2小时，然后用无菌水冲洗3次，在无菌条件下剖出种胚接种于1/2MS培养基中，10天左右，种子萌发，获得无菌芽苗。将无菌芽苗从子叶基部剪断，带子叶转入MS+0.25mg/L BA(单位下同)的培养基中，约经30天的培养，可长成10厘米左右，带8-12片叶的健壮无菌苗。
2、芽的分化与增殖：将无菌苗切成1厘米左右带腋芽茎段，接转于MS+0.25～2.0mg/L BA或MS+0.5～1.0mg/L BA+0.1～0.5mg/LIAA的培养基中，一周后腋芽开始萌动并逐渐形成芽丛。获得的芽丛可不断切割繁殖，继代周期25-30天，增殖系数不低于5。试验证明本步骤最佳培养基为MS+1.0mg/L BA+0.1～0.5mg/L IAA。
3、试管苗的复壮：试管苗在反复继代过程中，为改善种苗质量，工艺上可酌情增加种苗复壮阶段，其适合地培养基为MS+0.5～1.0mg/L BA+0.05～0.5mg/LPP333(PP333为多效唑)，试验证明，本步骤的最佳培养基为MS+1.0mg/LBA+0.1～0.5mg/LPP333。
4、诱导生根：将株高2.5厘米以上的健壮无根苗分别转入以下培养基中，2周即可获得完整植株。本步骤最佳培养基为1/2MS+0.1mg/LPP333。培养基 生根率 根的特征1)1/2MS+琼脂0.6-0.7％+蔗糖2％ 88％ 发根条数较少，根细长2)1/2MS+脱脂棉(少许)+蔗糖2％ 92％ 发根条数较多，主根粗壮，3)1/2MS+0.05-0.1mg/LPP333+0.6mg/L琼脂 92％ 根发达，根毛多。0.7％+蔗糖2％ 发根条数较多，根粗短
5、上述艾西丝南瓜种苗快速繁殖各阶段培养条件为：温度24℃±2℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12小时。
6、驯化移栽：将已生根的试管苗开瓶，置于散射光下锻炼一周，然后取出、洗净培养基，移栽于上层细沙，中层腐殖土、下层粗沙的苗床或营养钵中，以1/2MS营养液浇透并保湿培养一周，试管苗即恢复生长，随后逐渐降低湿度，20-30天即可定植于大田。成活率达90％以上。
7、试管苗的田间栽培：试管苗定植大田后，为使其高产、质优的潜力得以充分发挥，栽培中还需配合以精细的田间管理技术，其技术要点如下：
1)选地：为创高产，种植地以选土层深厚、有水浇条件的沙壤土为宜。
2)定植：在我国烟台地区，艾西丝南瓜的播种期为4月下旬至5月上旬。为延长生育期，提早开花结瓜，增加产量，试管苗应提前在4月上、中旬定植。
3)肥水管理：春季与翻地同时每亩施撒5千公斤土杂肥。生育期再结合浇水每20天追施磷酸二铵一次(10公斤/亩)。定植前，应灌底水一次；定植时再适量浇水；生育前期应控制水分以促进扎根；进入抽蔓中期，需增加灌水次数，原则上以保持地面不干为宜。
4)整蔓：一般宜用三蔓整枝法，即留一根主蔓，二根侧蔓。
5)授粉：为提高座果率，需进行人工授粉，授粉时间以上午8-9点为好。
6)摘心：为保证商品瓜的质量，对枝蔓应及时摘心，一般主蔓留三个瓜，侧蔓留一个瓜然后摘心。
8、为降低工厂化生产成本，本方法也可采用散射日光(小于5000lx)代替灯光；食用白糖代替蔗糖；自来水代替蒸馏水，普通果酱瓶代替锥形瓶；脱脂棉代表琼脂做培养基支持物(诱导生根阶段)。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：
1、本发明提供了一条新的艾西丝南瓜种苗生产方法，解决了国内艾西丝南瓜生产种源完全依赖进口的问题。
2、本发明繁殖艾西丝南瓜试管苗较之生产杂交种子，不受季节、地域限制，其生产程序简便，繁殖速度快，生产成本低。一粒种子可年继代9代，生产试管苗200万株，成本较进口种子降低60％左右。
3、田间生产性状及细胞学检查表明：艾西丝南瓜试管苗的遗传特性稳定，可以用于商品化生产。
4、艾西丝南瓜试管苗与进口种子相比，生长更为强旺，结果期提前7天，平均增产20-30％，经济效益十分可观。
实施例
1、取进口艾西丝种子用自来水洗净后于70％乙醇中浸泡3-5分钟，再置于饱和漂粉精液中浸泡2小时，然后用无菌水冲洗3次，在无菌条件下剖出种胚接种于1/2MS培养基中，10天后种子萌发，获得无菌芽苗。将无菌芽苗从子叶基部剪断，带子叶转入MS+0.25mg/L BA(单位下同)的培养基中，约经30天的培养，可长成10厘米左右，带8-12片叶的健壮无菌苗。
2、芽的分化与增殖：将无菌苗切成1厘米左右带腋芽茎段，接转于MS+1.0mg/L BA+0.5mg/L IAA的培养基中，一周后腋芽开始萌动并逐渐形成芽丛。获得的芽丛可不断切割繁殖，继代周期30天
3、诱导生根：将株高2.5厘米以上的健壮无根苗转入1/2MS+0.1mg/LPP333培养基中，2周即可获得完整植株。
4、上述艾西丝南瓜种苗快速繁殖各阶段培养条件为：温度24℃，光照强度1800lx，每日光照12小时。
5、驯化移栽：将已生根的试管苗开瓶，置于散射光下锻炼一周，然后取出、洗净培养基，移栽于上层细沙，中层腐殖土、下层粗沙的苗床或营养钵中，以1/2MS营养液浇透并保湿培养一周，试管苗即恢复生长，随后逐渐降低湿度，25天即可定植于大田。成活率达90％以上。
6、试管苗的田间栽培：试管苗定植大田后，为使其高产、质优的潜力得以充分发挥，栽培中还需配合以精细的田间管理技术，其技术要点如下：
1)选地：为创高产，种植地以选土层深厚、有水浇条件的沙壤土为宜。
2)定植：在我国烟台地区，艾西丝南瓜的播种期为4月下旬。为延长生育期，提早开花结瓜，增加产量，试管苗应提前在4月上旬定植。
3)肥水管理：春季与翻地同时每亩施撒5千公斤土杂肥。生育期再结合浇水每20天追施磷酸二铵一次(10公斤/亩)。定植前，灌底水一次；定植时再适量浇水；生育前期应控制水分以促进扎根；进入抽蔓中期，需增加灌水次数，原则上以保持地面不干为宜。
4)整蔓：一般宜用三蔓整枝法，即留一根主蔓，二根侧蔓。
5)授粉：为提高座果率，需进行人工授粉，授粉时间以上午8-9点为好。
6)摘心：为保证商品瓜的质量，对枝蔓应及时摘心，一般主蔓留三个瓜，侧蔓留一个瓜然后摘心。
7、为降低工厂化生产成本，上述方法也可采用散射日光(小于5000lx)代替灯光；食用白糖代替蔗糖；自来水代替蒸馏水，普通果酱瓶代替锥形瓶；脱脂棉代表琼脂做培养基支持物(诱导生根阶段)。