一种凝血酶的制做方法.pdf

本发明涉及一种止血药，特别是对各种出血都能达到速效止血的一种凝血酶的制做方法。
    目前，临床上对各种出血所采用的是用常规止血药止血，止血时间长，又有付作用，特别是对血液病所致出血，止血效果更差;而使用凝血酶，止血时间短，作用迅速，疗效显著，使用方便，无副作用。凝血酶直接作用于凝血，使纤维蛋白原迅速转变为纤维蛋白多聚体，同时包括红细胞、白细胞、血小板、血浆构成血凝块，堵塞出血点，达到止血目的。

    Cohn于1940年建立了低温乙醇法，该法主用是通过五个因素的变动（五变系统），使血浆蛋白得以分离。欧洲专利56629、德国专利2902657和美国专利92626分别介绍的是以硫酸钡、氢氧化铝、磷酸钙、磷酸钠、聚二醇和羟基烷酸为制剂，用钙离子进行吸咐、分离，达到把血浆蛋白质的分离和提纯的目的，采用上述几种方法制做的凝血酶的不足之处是：工艺流程复杂，投资大，成本高，时间长，纯度低，活性低、得利少。

    本发明目的在于避免上述现有技术的不足之处，提供一种工艺流程简单，投资小，成本低，时间短，纯度高，活性高，得利多的速效止血药-凝血酶的制做方法。

    本发明的目的可以通过以下措施来达到：一种凝血酶的制做方法，其特征在于：在动物血液中加入抗凝剂后，再加入乙醇和缓冲液，PH调节值，离心分离，有沉淀物产生（即凝血酶原）;加水溶解沉淀物，上层析柱层析，流出液用缓冲液调节PH值离心，有沉淀物产生;再加水溶解沉淀物，常温下活化一小时以上，用缓冲液调PH值，上层析柱层析，洗脱液即为凝血酶。

    本发明的目的还可以通过以下措施达到：加入乙醇或缓冲液后，调PH值为5.3时，即可离的分离;上肝素琼脂糖层析柱层析，流出液用缓冲液调PH值为4.4时离心;常温下活化3小时以上地溶液，用CaHPO4调H7.2，上葡聚糖G-25层析。

    本发明以下将结合（附图）实施例作进一步的详述：

    取动物血（如猪血或牛血）液，加入抗凝剂柠檬酸钠抗凝;离心分离后的血浆中加入10%的无水乙醇，用缓冲液HAC10%调PH5.3时离心，沉淀物产生，即为凝血酶原;凝血酶原沉淀加入水溶解，上肝素琼脂糖层析柱，控制一定流量，经层析柱流出的液体用HAC调PH4.4后离心，沉淀为精制的凝疗酶原;沉淀加入10倍以上体积水溶解，常温下水浴化1小时，用CaHPO4调PH7.2，加入CaCl2，然后上G-25层析，流出液即为精制凝血酶，经除菌，无菌分装，冻干后即为成品。

    本发明比较现有技术，具有如下优点：工艺流程简单，投资小，成本低，时间短，纯度高，活性高，得利多等等。