一种化合物的提取分离方法及其作为药物的应用.pdf

本发明涉及一种化合物单体，特别是一种从夜香树中提取分离出来，且具有抗肿瘤作用的化合物，以及将这种化合物单体制成的中药制剂；经波谱分析，这种化合物单体分子式为C51H82O20，名称为Nocturnoside B；从夜香树中提取分离得到的化合物单体及其中药制剂，动物试验结果表明，具有抗肿瘤作用。

权利要求书
1.  一种中药制剂，其特征在于：以重量计，从夜香树提取的化合物单体在其中的含量为0.01％～99.99，余量为辅料。

2.  根据权利要求1所述的化合物单体，其制备方法如下：夜香树枝叶，用乙醇提取，乙醇浸膏用硅胶拌匀，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇回流提取；正丁醇浸膏用硅胶拌样，置硅胶干柱顶上，用氯仿-甲醇梯度洗脱，在80％氯仿-20％甲醇流份中结晶得到；经波谱分析，分子式为C51H82O20，名称为Nocturnoside B。

3.  根据权利要求1所述的化合物单体及其中药制剂，其特征在于：具有抗肿瘤作用。

说明书一种化合物的提取分离方法及其作为药物的应用
技术领域
本发明属中药领域，涉及从夜香树中提取分离一种具有抗肿瘤作用的化合物单体的方法，以及以该化合物单体为原料制备的中药制剂。
背景技术
夜香树，又名夜来香，为茄科夜香树属植物(Cestrum nocturnum Linn)，广泛分布于热带地区，我国广西、广东、福建、云南有栽培。其性温、味辛，具行气止痛、镇定之功效，可用于治疗胃肮痛。民间有用夜香树治疗肿瘤的说法，但没有文献记载。现有文献报道只涉及挥发油的提取和镇痛作用的研究结果，如下：
1.【题名】夜来香白天花朵及嫩枝挥发油成分分析【作者】陈志行，石春芝，谭晓风等【机构】深圳大学理学院应用化学系；深圳市环境保护监测站；【刊名】中草药，2002，33(11)：976-978.【文摘】使用连续抽提法分别提法提取其夜间和白天花朵及嫩枝中的挥油，并经气相色谱-质谱联用分析其主要成分，结果发现：白天花朵挥发油以二十一烷为主要成分(24.53％)，以十九烯(11.62％)、沉香烷(7.37％)为次主成分；嫩枝挥发油以十九烷为主( 9.34％)，间二甲苯(8.61％)、1,2,3-三甲苯(5.46％)次之。同期对照样品夜间花朵中主成分也为二十一烷(23.09％).次主成分十九烯(9.17％)，9二十三烯(6.03％)。花朵在发香期(夜间)与无香期(白天)主成分相同且含量相近。花朵中的挥发油成分有31种在嫩枝挥发油中未检出，含量约占花挥发油的22.8％。其中差异分别为醋类8种(占含量5.76％)，醇类3种(5.60％)，烷类5种(2.68％)，酚类2种(2.54％).烯类4种(1.66％)，酮类4种(1.60％)，酸类4种(1.56％n)，醚类1种(0.69％n)。白天无香的花朵、嫩枝的挥发油中驱蚊叮(分别占4.88％，3.80％)，苯系物(分别占10.93％，32.11％)，与夜间花朵挥发油存在的具有驱蚊作用的成分相似。夜香树的根、径、叶等化学成分在国内外文献尚未见报道。
2.【题名】夜来香正丁醇提取物镇痛作用的研究【作者】曾靖；黄志华；李良东；周俐；周青；【机构】赣南医学院药理教研室；赣南医学院生理教研室；赣南医学院机能实验室；江西赣州；【刊名】赣南医学院学报【文摘】采用醋酸扭体法、热板致痛法、电刺激致痛法研究夜来香正丁醇提取物对小鼠镇痛作用的影响。结果：夜来香正丁醇提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应，热板致痛、电刺激致痛诱发的疼痛有显著的镇痛作用，且呈剂量依赖性。但纳洛酮不能对抗其镇痛作用。结论：夜来香正丁醇提取物有明显的镇痛作用。
我们制备的夜香树提取物，发现确有抗肿瘤作用，因此进一步进行研究，从中分离出—种化合物单体，药理研究结果表明，这种化合物单体具有良好的抗肿瘤作用。现有公开的专利中，只有一个与夜香树有关的专利，也是与本发明人有关的：夜香树及其提取物在抗肿瘤方面的应用，，申请号200610019989.8。
发明内容
发明人从夜香树中提取分离出一种具有抗肿瘤作用的化合物，这是国内外尚未有文献报道过的。
本发明的技术方案述及了从夜香树中的提取分离一种化合物的方法，以及将这种化合物单体制备成中药制剂的方法。
化合物单体的提取分离方法，采用硅胶柱层析法；化合物的结构鉴定，采用波谱分析法；这种化合物单位，可制备成供口服的中药制剂，如片剂、口服液、丸剂、胶囊剂、颗粒剂，以及肌肉和静脉注射用的注射液，其制法与文献记载的相应剂型的制法是通用的。化合物单体与药用辅料的重量比范围如下：
余甘子叶提取物0.01～99.99％
药用辅料0.01～99.99％。
与现有技术相比，本发明突出的实质性特点和显著的进步是：
1.首次公开了从夜香树中提取分离Nocturnoside B的方法；
2.首次公开了Nocturnoside B及其制剂具有抗肿瘤作用。
具体实施方式
下列实施例子用于举例说明本发明，并不是对本发明保护范围的任何限制。
具有抗肿瘤作用的化合物单体的提取分离方法：1000克夜香树粗粉，用12倍95％乙醇回流提取2次，合并提取液，回收乙醇至稠膏，稠膏用10倍热水悬浮，用正丁醇萃取。萃取液回收正丁醇，用95％乙醇溶解滤，与100克硅胶拌样，烘干，共重111g，用3000mL和氯仿1100g硅胶上柱。用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，收集情况如下。注意，展开剂均加入醋酸，以防止拖尾。
 溶剂洗脱比例 收集瓶子编号 簿层展开剂比例(氯 仿：甲醇) 备注 100∶0(纯氯仿) 80∶1 40∶1 30∶1 20∶1 15∶1 13∶1 1——30 31——47 48——73 74——92 93——150 151——214 215——249 15∶1 10∶1 8∶1 8∶1 混合斑，显著圆斑
 11∶1 9∶1 7∶1 5∶1 3∶1 1∶1 0∶100(纯甲醇) 250——274 275——304 305——344 345——380 381——409 410——460 461——471 5∶1 4∶1 3∶1 双斑，274开始有 黄色析出物，瓶底 粘稠物。 312黄色析出物渐 多，粘稠物渐少。 329黄色析出物大 量。底部粘稠几乎 消失。
合并151号及以后的瓶子，静置1-3周，缓慢挥去溶剂，有结晶析出；再用甲醇进行重结晶，具体操作如下：把结晶移入干净瓶子中，加入少许甲醇，振摇，如结晶仍没有完全溶解，用水浴加热，直到结晶完全溶解，静置，缓慢挥去溶剂，直到有结晶析出。过滤，45℃烘24小时后，置干燥器中干燥48小时。即得。
具有抗肿瘤作用的化合物单体的结构鉴定：氢谱和碳谱(600MHz)元素分析表明，具有抗肿瘤作用的化合物单体含C、H、O等3种元素；LC-MS中-MS中有1013的M-H峰，+MS中有m/z1037的M+Na+峰，m/z869的M-Rha+峰，m/z723的M-Rha-Rha+峰，m/z415的M-Rha-Rha-Glu+峰，表明其分子量为1014，分子式为C51H82O20，甾体类反应呈阳性，水解产物中可检出Rha和Glu。经文献资料检索比对，特别是氢谱和碳谱的数据对照分析，该化合物为Nocturnoside B。结构式如下。

下面是将Nocturnoside B制备成药物的实施例子。
药物制剂实施例一
取Noctumoside B细粉200g，加淀粉300g，制粒，压成片剂，片重0.25g，每片含Noctumoside B 0.1g。
药物制剂实施例二
取Noctumoside B细粉50g，加糖粉950g，制粒，得颗粒剂，分装，每小包5g，每小包含Nocturnoside B 0.25g。
药物制剂实施例三
取Nocturnoside B细粉25g，加白砂糖600g和200ml水，加热溶解，最后加水到1000ml，过滤，得口服液，分装，每支10ml，每支含Noctumoside B 0.25g。
药物制剂实施例四
取Nocturnoside B细粉333.33g，加糖粉666.67g，制粒，装入胶囊壳，每个胶囊重0.3g，得胶囊剂，每个胶囊含Noctumoside B 0.1g。
药物制剂实施例五
取Nocturnoside B细粉2.5g，吐温-80 10ml，注射用水加至1000ml，制备成注射液。药理作用
动物试验表明，Nocturnoside B及其制剂，具有良好的抗肿瘤作用。