3－氨基－1,2,4－苯并三嗪－1,4－二氮氧化物二水合物,其制备方法及在肿瘤放疗和化疗中的应用.pdf

本发明涉及3－氨基－1，2，4－苯并三嗪－1，4－二氮氧化物二水合物，其晶体、制备方法以及肿瘤放疗和化疗中的应用。本发明还涉及将3－氨基－1，2，4－苯并三嗪－1，4－二氮氧化物二水合物制备得到高纯度的3－氨基－1，2，4－苯并三嗪－1，4－二氮氧化物晶体的方法。

权利要求书
1.  下式所示的3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物：


2.  权利要求1所述二水合物的晶体，其特征为晶体呈红色柱状，属单斜晶系，空间群为P21，晶胞参数：a＝4.775(1)，b＝13.689(10)β＝98.68(1)。晶胞体积为：V＝481.6(1)3，晶胞内分子数Z＝2。

3.  权利要求1所述二水合物的制备方法，由苯并呋咱-1-氧化物、单氰胺在氢氧化钠醇溶液中加热制备，其特征为包括以下步骤：
a)将苯并呋咱-1-氧化物溶于甲醇，优选按1摩尔的苯并呋咱-1-氧化物溶于400毫升甲醇的比例，再加入等量的水，加入单氰胺搅拌使溶解；
b)在室温搅拌的条件下，缓慢加入固体氢氧化钠，控制温度不超过60℃；
c)固体氢氧化钠全部加完溶解后，将温度升至58℃-60℃并保持60分钟；冷却，过滤，弃去滤液，得到3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物钠盐的沉淀物；
d)将沉淀物溶于水，过滤收集母液，冷却后加入乙酸，调节pH值在5～6.5，优选调节pH值为6过滤得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物粗品；
e)将粗品加入水中，优选按每10克的3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物粗品加入500～1500毫升水的比例，加热使其完全溶解，冷却，得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物的红棕色透明柱状晶体。

4.  根据权利要求3所述的制备方法，其特征为反应物按苯并呋咱-1-氧化物、单氰胺与氢氧化钠的先后顺序加入，三者摩尔比为1∶3∶6。

5.  根据权利要求3所述的制备方法，其特征为反应物按苯并呋咱-1-氧化物、单氰胺与氢氧化钠的先后顺序加入，三者摩尔比为1∶3∶6，包括以下步骤：
a)将苯并呋咱-1-氧化物按1摩尔加入400毫升甲醇的比例溶于甲醇，加热至60℃使其完全溶解，再加入等量的水，加入单氰胺搅拌使溶解；
b)在室温搅拌的条件下，缓慢加入固体氢氧化钠，控制温度不超过60℃；
c)固体氢氧化钠全部加完溶解后，将温度升至58℃-60℃并保持60分钟；冷却，过滤，弃去滤液，得到3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物钠盐的沉淀物；
d)将沉淀物溶于水，过滤收集母液，冷却后加入乙酸，调节pH值为6，过滤得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物粗品；
e)取上述粗品按每10克加入1000毫升水的比例加入水中，加热使其完全溶解，冷却，得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物的红棕色透明柱状晶体。

6.  一种3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物的晶体，其特征为晶体呈红褐色透明柱状，衍射实验用晶体大小为0.10×0.15×0.50mm，属正交晶系，空间群为P212121，晶胞参数：a＝4.876(1)，b＝7.431(1)，c＝20.347(2)。晶胞体积为：V＝737.24(14)3，晶胞内分子数Z＝4。

7.  权利要求6所述氮氧化物晶体的制备方法，其特征为包括以下步骤：
将3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物溶于DMF，优选每10克二水合物加入100至600毫升DMF，更优选为200毫升，加热使其溶解，重结晶得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物的晶体。

8.  权利要求1所述二水合物在制备肿瘤放疗或化疗增敏药物中的应用。

9.  权利要求2或6所述晶体在制备肿瘤放疗或化疗增敏药物中的应用。

说明书3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物，其制备方法及在肿瘤放疗和化疗中的应用
技术领域
本发明涉及一种肿瘤治疗过程中的放疗和化疗增敏药物。具体的说，涉及3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物及其晶体、制备方法及在肿瘤放疗和化疗中的应用；另一方面，还涉及3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物晶体、其制备方法及在肿瘤放疗和化疗中的应用。
背景技术
目前所知的肿瘤放疗、化疗药物以及放疗增敏剂药物价格都比较昂贵，主要原因之一就是合成及处理过程复杂，中间环节多且原料药价格高。3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物(TPZ)作为一种疗效可靠的放疗及化疗增敏药物，目前已经进入三期临床。TPZ是一种新型的具有生物还原作用的肿瘤放化疗增敏剂，研究表明TPZ能明显增加肿瘤细胞对射线的敏感性，对很多肿瘤具有明显的增敏效果，可显著提高肿瘤放射治疗的效果。TPZ的作用机制新颖，具有双重的作用机制：除具有以前研究较多的放化疗增敏剂的能提高肿瘤组织内乏氧细胞对射线敏感性的作用外，同时TPZ又有生物还原作用，它可以在肿瘤的乏氧区还原，转变成具有细胞毒性作用的代谢产物，大大提高对肿瘤细胞的杀灭作用，所以TPZ较之以前的一些放疗增敏剂具有更好的治疗效果。另外值得重视的是TPZ的毒付作用小。
现有的制备TPZ方法如下：1摩尔苯并呋咱-1-氧化物-1-氧化物与3摩尔氰胺二钠在50％甲醇水溶液中反应，将立即放热且温度难以控制，更为重要的是温度过高苯并呋咱-1-氧化物可以发生自身缩合反应，生成很难处理的吩嗪类化合物。在加入氰胺二钠的过程中采用循环冷却的方法，可很好地控制温度，但短时间内即有黑紫色的粘稠状物质生成，使得搅拌很难进行，勉强进行反应后用乙酸酸化，得到很少的红色产物，且纯度很低。
在CN01136096.8号专利申请中公开了一种TPZ的制备方法，是由氰胺在氢氧化钠醇溶液中与苯并呋咱-1-氧化物于50～60℃加热得到，冰冻12小时后用乙醇重结晶，产率40％。该方法产率低，耗时长，不适合工业化生产，为此有必要研究新的制备方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种TPZ的二水合物、其制备方法及其晶体，另外还提供了一种TPZ的晶体及制备方法。
具体的，本发明提供了一种3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物，结构式如下：

本发明还提供了该二水合物的制备方法，是由苯并呋咱-1-氧化物、单氰胺在氢氧化钠醇溶液中加热制备，其特征为包括以下步骤：
a)将苯并呋咱-1-氧化物溶于甲醇，再加入等量的水，加入单氰胺搅拌使溶解；
b)在室温搅拌的条件下，缓慢加入固体氢氧化钠，控制温度不超过60℃；
c)固体氢氧化钠全部加完溶解后，将温度升至58℃-60℃并保持60分钟；冷却，过滤，弃去滤液，得到3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物钠盐的沉淀物；
d)将沉淀物溶于水，过滤收集母液，冷却后加入乙酸，调节pH值在5-7，过滤得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物粗品；
e)取上述粗品加入水中，加热使其完全溶解，冷却，得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物的红棕色透明柱状晶体。
其中，反应物按苯并呋咱-1-氧化物、单氰胺与氢氧化钠的先后顺序加入，三者摩尔比为1∶3∶6。
步骤a)中，优选的按1摩尔的苯并呋咱-1-氧化物加入400毫升甲醇的比例，加热至60℃使其完全溶解；步骤d)中，优选的调节pH值为6；步骤e)中，优选的按每10克粗品加入500～1500毫升水的比例，加热使其完全溶解。
由上述方法制备得到该二水合物的晶体，其特征为晶体呈红色柱状，属单斜晶系，空间群为P21，晶胞参数：a＝4.775(1)，晶胞体积为：晶胞内分子数Z＝2。
本发明还提供了一种3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物的晶体，晶体呈红褐色透明柱状，衍射实验用晶体大小为0.10×0.15×0.50mm，属正交晶系，空间群为P212121，晶胞参数：a＝4.876(1)，b＝7.431(1)，晶胞体积为：晶胞内分子数Z＝4。
该晶体可由3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物制备得到。具体的说，将3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物溶于DMF，优选每10克二水合物加入100至600毫升DMF，更优选为200毫升，加热使其溶解，重结晶得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物的晶体。
本发明选用苯并呋咱-1-氧化物直接与单氰胺和氢氧化钠来进行反应，这可使化学反应简化，克服用氰胺二钠合成3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物出现的问题，并能提高所得产物的纯度。
反应中如果采用甲醇水的体系，由于苯并呋咱-1-氧化物溶解不好，因此反应将是多相反应体系，在这种条件下，所进行的反应就要延长反应时间，而且反应并不完全。发明人发现苯并呋咱-1-氧化物易溶于非极性溶剂如苯和甲苯中，但在乙醇中溶解度却很小，在冷的甲醇中溶解度也很小；而在60℃的热甲醇中，其溶解度却很大。因此先将苯并呋咱-1-氧化物加至甲醇中，加热至60℃，搅拌使其完全溶解；待苯并呋咱-1-氧化物溶解后，再加入相等量的水；然后加入单氰胺，搅拌使溶解；再缓慢加入固体氢氧化钠，搅拌，使溶解；这样可以溶解单氰胺和氢氧化钠，这种反应条件相当于均相反应，因而避免了在多相反应体系中进行反应，缩短了反应时间。
在苯并呋咱-1-氧化物的甲醇水溶液中如果先加入氢氧化钠固体而后加入单氰胺，反应产率非常低，原因是在温度升高时，在过量的氢氧化钠条件下加入单氰胺，单氰胺很快分解为甲酸和氨气，同时单氰胺还很快聚合成二聚体和三聚体，且这种聚合也是不可逆的反应，因此先加入单氰胺而后再加入氢氧化钠固体就可以避免该问题的产生。
由于苯并呋咱-1-氧化物在高于60℃条件下易于发生自身缩合反应，因此把反应温度的上限定为60℃。从反应的定量关系上看，苯并呋咱-1-氧化物与单氰胺及氢氧化钠的摩尔比为1∶3∶6，温度在58-60℃时，产率较高。在不同温度和不同投料下的实验结果见表1。
                       表1不同温度、不同投料比例下粗品产率  反应温度  (℃)  苯并呋咱-1-氧化物  (摩尔数)  单氰胺  (摩尔数)  氢氧化钠  (摩尔数)  粗品产率  (％，以苯并呋咱-1-氧化物计)  55-60  60-62  60-70  55-60  58-60  55-62  55-62  1  1  1  1  1  1  1  2  2  2  3  3  3  3  4  4  6  6  6  6  7  48  52  38  68  71  70  61
在反应过程中，实际得到的是3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物的钠盐，因此需要进行酸化使其转变成产物3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物，实验表明应选择用乙酸调节pH值在5～6.5。
                   表2不同pH值、不同酸化条件下粗品产率  粗品摩尔数  酸  体系的pH  粗品  (％，以苯并呋咱-1-氧化物计算)  0.79  0.79  0.79  0.79  0.79  0.79  0.79  0.79  0.79  0.79  0.5mol/l硫酸  1mol/l硫酸  0.5mol/l盐酸  1mol/l盐酸  乙酸  乙酸  乙酸  乙酸  乙酸  乙酸  2.3  1.7  3.3  2.1  2.8  3.2  4.4  5.2  6.2  6.4  11  5  33  42  47  55  51  66  88  82
将3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物粗品10克溶解于1000毫升的热水(70-95℃)中，放置冷却后析出9克的晶体，经证明结晶中含有2个结晶水。即3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物，并将其进行单晶X-射线衍射试验，确定其结构。
经离体细胞和动物移植瘤的肿瘤生长延迟实验结果表明，TPZ二水合物结合化疗或放疗亦可明显增强单纯放化疗的抗瘤效果。该二水合物可制备成口服或注射用的制剂，用于进行肿瘤的放疗和化疗的治疗。上述制剂所选药用载体是指药学领域常规载体，例如稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等。本发明的药物制剂可通过口服、透皮吸收或胃肠外给药方式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规固体制剂如片剂、胶囊剂、口服凝胶胶囊剂等，制成液体制剂如水或糖浆剂等。用于胃肠外给药可制成注射剂，以及按常规方法制成的霜剂、软膏、硬膏、膜剂和喷雾剂等。本发明的药物的各种剂型可按照药学领域常规方法制备，例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后制成所需制剂。
本发明采用的方法产率高、杂质少，重结晶时采用水作溶剂，成本低，耗时短，操作简便。得到的TPZ二水合物也具有肿瘤放化疗增敏效果，可用于制备肿瘤放化疗增敏药物。
附图说明
图1：TPZ二水合物分子立体结构投影图
图2：TPZ二水合物晶胞内分子沿α轴方向的投影图
图3：TPZ二水合物原子坐标参数及等价温度因子
图4：TPZ二水合物成键原子间的键长及键角
具体实施方式：
下面的实施例将对本发明作进一步的解释，但是本发明并不仅仅局限于这些实施例，这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，但所作改动或修改的等价形式同样落在本申请权利要求书所限定的范围之内。
实施例一：3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物的制备与纯化
将136克(1mol)苯并呋咱-1-氧化物加入至400毫升的甲醇中，加热至60℃，搅拌使其完全溶解；冷却后，再加入等量的水(400毫升)，加入126克(3mol)单氰胺，搅拌使溶解；在室温搅拌的条件下，缓慢加入固体氢氧化钠240克(6mol)，注意温度不得超过65℃；待固体氢氧化钠全部加完溶解后，将温度升至58℃-60℃℃并保持60分钟使反应进行完全，得到3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物钠盐的沉淀物。
冷却，过滤，弃去滤液，收集沉淀物；将沉淀物溶解于300毫升水中；过滤，弃去滤渣，收集母液。将上述母液在冷却条件下，加入乙酸，使其pH值为6，过滤，收集得到3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物粗品。
取上述粗品按每10克粗品加入1000毫升水的比例，加入至水中，加热使其完全溶解，冷却，得到红棕色透明柱状晶体，即为3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物。
实施例二：单晶X-射线衍射试验
(一)衍射实验：样品晶体呈红棕色透明柱状，衍射实验用晶体大小为0.05×0.20×1.00mm，属单斜晶系，空间群为P21，晶胞参数：a＝4.775(1)，晶胞体积为：晶胞内分子数Z＝2。
用MACDIP-2030K面探测仪收集衍射强度数据，Moka辐射，石墨单色器，晶体与IP板距离d＝100mm，管压50Kv，管流60mA，ω扫描，最大2θ角为50.0°，扫描范围为0-180°，回摆角度为5°，间隔为5°，扫描速度为1.5°/min，每个画面扫描2次，总计摄取36幅图像，独立衍射点为810个，可观察点(|F|2≥8σ|F|2)为810个。
(二)结构计算：在微机上用直接法解析晶体结构，在E图上直接获得13个非氢原子位置，交迭使用最小二乘法和差值Fourier法获得其它非氢原子位置，用最小二乘法修正结构参数和判断原子种类，用几何计算法和差值Fourier法交迭计算获得全部氢原子位置，最终可靠因子Rf＝0.061，Rw＝0.059(w＝1/σ|F|2)。最终确定一个不对称单位化学计量式为C7H6N4O2.2H2O，不计水分子的计算分子量为178.15，计算晶体密度是1.477g/cm2。
分子立体结构投影图见图1，晶胞内分子沿α轴方向的投影图见图2。原子坐标参数及等价温度因子见图3，成键原子间的键长及键角见图4。
(三)分析结果
结果表明：样品为苯并三嗪类化合物。该化合物分子骨架由六元环A、B构成一个大的共轭系统，分子为一平面结构且呈红棕色。其中1，2，4-三嗪的1、4位氮原子均被氧化，形成氮氧化合物，其配位键长均值为1.305A.晶态下一个不对称单位内包含1个RS-27分子和2个结晶水。晶态下分子排列属第一类空间群，故该化合物在晶态下应具有旋光活性。分子内无氢键联系，分子间氢键：OW1......OW2(-1+x，y，1+z)2.8753A，OW1......OW2(1-x，1/2+y，1-z)2.8421A，OW2......OW1(x，y，1+z)2.7786A，OW2......O13(x，y，z)2.7909A。晶态下分子以氢键作用力和范德华维系其在三维空间的稳定排列。
实施例3    3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物二水合物的制备与衍射实验
将3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物的二水合物10克溶解于200毫升N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，加热到90-95℃，滤去不溶物，经旋转蒸发溶剂，冷却后，得到红色结晶性粉末7.5克，经HPLC峰面积归一化法测纯度大于99％。纯化后的总产率为理论产率的65％。将所得3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物，进行单晶X-射线衍射试验，确定其结构，具体如下：
(一)衍射实验
样品晶体呈红褐色透明柱状，衍射实验用晶体大小为0.10×0.15×0.50mm，属正交晶系，空间群为P212121，晶胞参数：a＝4.876(1)，b＝7.431(1)，晶胞体积为：晶胞内分子数Z＝4。
用MACDIP-2030K面探测仪收集衍射强度数据，Moka辐射，石墨单色器，晶体与IP板距离d＝100mm，管压50Kv，管流60mA，ω扫描，最大2θ角为50.0°，扫描范围为0-180°，回摆角度为5°，间隔为5°，扫描速度为1.5°/min，每个画面扫描2次，总计摄取36幅图像，独立衍射点为916个，可观察点(|F|2≥8σ|F|2)为728个。
(二)结构计算
在微机上用直接法解析晶体结构，在E图上直接获得13个非氢原子位置，交迭使用最小二乘法修正结构参数和判别原子种类，使用几何计算法和差值Fourier法交迭计算获得全部氢原子位置，最终可靠因子Rf＝0.066，Rw＝0.064(w＝1/σ|F|2)。最终确定一个不对称单位化学计量式为C7H6N4O2.2H2O，计算分子量为178.15，计算晶体密度是1.605g/cm2。
(三)分析结果
结果表明：样品为苯并三嗪类化合物。该化合物分子骨架由两个合并的六元环A、B构成一个大的具有平面结构的共轭系统，而使晶体呈现红褐色。其中1，2，4-三嗪的1、4位N原子均被氧化，形成氮氧化合物，其配位键长均值为1.305A.晶态下分子排列属于第一类空间群。晶态下分子间以范德华力维系其在三维空间的稳定排列。
实施例三：肿瘤放/化疗增敏试验
选择HeLa(人宫颈癌细胞S-3系)、CNE-2(人鼻咽癌细胞系)、A549(人肺腺癌细胞系)和HCT(人结肠癌细胞系)个肿瘤细胞株及CNE-2细胞球，在有氧及乏氧条件下，肿瘤细胞设置四个待试药物剂量(0、1.25、2.5、5μM)组，细胞球设置四个药物剂量(0、7、14、28μM)组，给药后1h经60CO-γ射线照射，通过培养细胞的集落形成试验，计算各组细胞的存活率，采用计算机进行多靶单击模型拟合，计算出平均致死剂量(D0)、氧增比(OER)、增敏比(SER)、C1.6等值。
结果：四株肿瘤细胞药物剂量为0μM组(即不给药组)乏氧部分D0值，均明显高于有氧部分D0值，OER值均大于2.5，符合乏氧模型的要求(OER介于2.5～3.0之间)，TPZ·2H2O低、中、高三个剂量对四株肿瘤细胞均具有明显的增敏作用，SER值(增敏比)均大于1.4，符合放射增敏剂对SER的要求(SER＞1.4)。CNE-2细胞、A549细胞、HeLa细胞和HCT细胞C1.6分别约为：2.2、1.8、2.1和2.0μM。采用CNE-2细胞作细胞球体培养，体外模拟肿瘤组织的乏氧特征，在7、14、28μM三个药物剂量组增敏试验的SER分别为1.59、1.65、1.77，C1.6值约为10μM。
结论：TPZ·2H2O对CNE-2细胞、A549细胞、HeLa细胞、HCT细胞和CNE-2多细胞球体具有较明显的放射增敏作用，并呈较好的剂量效应关系。表明TPZ·2H2O可作为放射增敏剂进行进一步的研究。
TPZ·2H2O复合60Coγ射线照射BALB/c小鼠实验移植性乳腺癌和S-180肉瘤、裸小鼠实验移植性人肺腺癌，均有明显的放射增敏作用，对肿瘤体积、相对肿瘤增殖率及肿瘤生长抑制率有明显抑制作用，且随TPZ·2H2O剂量及照射剂量增加，抑制作用越明显。TPZ·2H2O在各剂量控制肿瘤生长50％所需的照射剂量(TCD50)均比照射对照组(不给药)明显降低，10、20mg/kg TPZ·2H2O的放射增敏比(SER)均大于1.4，其C1.6值分别为11.0～16.5mg/kg、7.0～11.5mg/kg、12.5～15.0mg/kg。TPZ·2H2O复合60Coγ射线照射对裸小鼠实验移植性人宫颈癌及C57小鼠实验移植性黑色素瘤也有明显的放射增敏作用，对肿瘤体积及相对肿瘤增殖率(T/C)有明显抑制作用，且随TPZ·2H2O剂量及照射剂量增加，抑制作用越明显，均能使肿瘤生长延缓时间(TGD)明显延长。
实施例四：TPZ二水合物的制剂
1.片剂：TPZ·2H2O                       85g
        乳糖                            50g
        淀粉                            35g
        羧甲基淀粉钠                    4g
        硬脂酸镁                        1g
        HPMC(羟丙基甲基纤维素)          适量
制备：将处方中的原料药与辅料，包括TPZ·2H2O、乳糖、淀粉等过80目筛，混匀，用2％HPMC水溶液，制粒，干燥，整粒，加入处方量的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁，混匀，压片，得到片剂，每片含85mg的TPZ·2H2O。
2.凝胶胶囊剂：TPZ·2H2O                 85g
              大豆油                    180g
              卵磷脂                    4g
              黄蜡                      8g
              加氢植物油                30g
制备：将加氢植物油和黄蜡加入至容器中，将容器加热并搅拌内容物直至熔化。充分混合大豆油和卵磷脂，然后加入至熔融的加氢植物油/黄蜡混合物中，温热得到的混合物并搅拌，直至得到均匀的混合物，然后边搅拌边向混合物中加入TPZ·2H2O，得到的悬浮液进行均匀化。再加工制备成凝胶胶囊，每粒含85mg的TPZ·2H2O。
3.注射剂：TPZ·2H2O                   0.85g
          氯化钠                      8.70g
          柠檬酸                      0.96g
          氢氧化钠                    0.25g
          加适量水至1000毫升，调至pH 4.0
制备：称取上述处方量原料药及辅料，加水，搅拌使溶解，调至pH 4.0，过滤，灌封于安瓿中，灭菌，得成品，每支含85mg的TPZ·2H2O。
4.颗粒剂：TPZ·2H2O                     85g
          乳糖                          80g
          淀粉                          90g
          HPMC(羟丙基甲基纤维素)        适量
制备：将处方中的原料药与辅料，包括TPZ·2H2O、乳糖、淀粉等过80目筛，混匀、用2％HPMC水溶液稀释，制粒，干燥、分装，每袋含85mg的TPZ·2H2O。