可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂.pdf

本发明公开一种可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂，其特征在于各组分重量百分比如下：枸杞15～25％、女贞子15～25％、益母草15～25％、厚朴5～15％、茯苓10～20％、香附2～8％。中草药配伍可明显提高黄颡鱼肠道脂肪酶和蛋白酶活性，促进了对营养物质的消化吸收，使肌肉中粗脂肪和血液中血脂含量升高，提高了脂类的转运能力(降低血液中n－3脂肪酸含量)，增强了性激素与靶器官的结合(血液性激素含量降低)，卵径增大、性腺指数升高；提高黄颡鱼的繁殖能力，使亲鱼的受精卵及出苗率大幅提升。克服了现有技术的激素等化学品所带来的降低苗种质量以及污染环境的问题，具有原料来源广泛、价格低廉、使用方便的优点，具有较高的社会效益和经济效益。

权利要求书
1.  一种可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂，其特征在于各组分重量百分比如下：
枸杞                               15～25％
女贞子                             15～25％
益母草                             15～25％
厚朴                               5～15％
茯苓                               10～20％
香附                               2～8％。

2.  根据权利要求1所述的可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂，其特征在于各组分重量百分比如下：
枸杞                               20％
女贞子                             20％
益母草                             20％
厚朴                               12％
茯苓                               20％
香附                               8％。

说明书可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂
技术领域：
本发明涉及一种鱼类用饲料添加剂，尤其是一种可避免激素等化学类药所产生的副作用、保证苗种质量、防止环境污染、可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂。
背景技术：
黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco Richardson)肉质细嫩，无肌间刺，市场需求日益增加，养殖规模也逐渐扩大。但是，由于黄颡鱼繁殖效率低且不稳定，故苗种数量严重不足。目前，为了缓解苗种数量不足的问题，有的采用在饲料中添加化学激素等药物的方式，以促进黄颡鱼的成熟和繁殖。但是，长期使用不但会降低苗种质量，而且还存在污染环境的问题。
发明内容：
本发明为了解决现有技术所存在的降低苗种质量，污染环境等技术问题，提供一种可避免化学激素类药所产生的副作用、保证苗种质量、防止环境污染、可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂。
本发明的技术解决方案是：一种可增强黄颡鱼繁殖能力的中草药饲料添加剂，其特征在于各组分重量百分比如下：
枸杞                15～25％
女贞子              15～25％
益母草              15～25％
厚朴                5～15％
茯苓                10～20％
香附                2～8％。
各组分重量百分比最好如下：
枸杞                20％
女贞子              20％
益母草              20％
厚朴                12％
茯苓                20％
香附                8％。
本发明是用中草药配伍，添加到饲料中喂食黄颡鱼，可明显提高黄颡鱼肠道脂肪酶和蛋白酶活性，促进了对营养物质的消化吸收，使肌肉中粗脂肪和血液中血脂含量升高，提高了脂类的转运能力(增加了卵巢中∑n-3脂肪酸含量)，增强了性激素与靶器官的结合(血液性激素含量降低)，卵径增大、性腺指数升高；提高黄颡鱼的繁殖能力，使亲鱼的受精卵及出苗率大幅提升。克服了现有技术的激素等化学品所带来的降低苗种质量以及污染环境的问题，具有原料来源广泛、价格低廉、使用方便的优点，具有较高的社会效益和经济效益。
附图说明：
图1是对比组雌鱼性腺切片放大图。
图2是本发明实施例1、2雌鱼性腺切片放大图。
图3是对比组雄鱼性腺切片放大图。
图4是本发明实施例1、2雄鱼性腺切片放大图。
具体实施方式：
实施例1：
取总重量15～25％的枸杞、总重量15～25％的女贞子、总重量15～25％的益母草、总重量5～15％的厚朴、总重量10～20％的茯苓、总重量2～8％的香附2～8％。中草药总重量可根据饲料的多少而定，每味药可在上述范围内选取。可按常规方法煎成药液，即加水浸泡1小时，按每100克原料加水1升后，大火煮30分钟、再小火煮30分钟，倒出药液；再向药中加水，大火煮30分钟、再小火煮30分钟，倒出药液；将两次药液混合。将混合后的药液按饲料重量2％的用量，均匀喷洒在现有饲料(以鱼粉、豆饼为蛋白源，加入等量的各种添加剂，配成粗蛋白含量为42.0％的饲料)的表面，自然风干后即制成混有中草药的饲料。其喂养方法同现有饲料喂养方法，蛋白质、脂类和糖类等营养必需充足。
实施例2：
取22克枸杞、20克女贞子、20克益母草、12克厚朴、20克茯苓、8克香附。可按常规方法煎成药液。即加水浸泡1小时，按每100克原料加水1升后，大火煮30分钟、再小火煮30分钟，倒出药液；再向药中加水，大火煮30分钟、再小火煮30分钟，倒出药液；将两次药液混合。将混合后的药液按饲料重量2％的用量，均匀喷洒在现有饲料(以鱼粉、豆饼为蛋白源，加入等量的各种添加剂，配成粗蛋白含量为37.5％的饲料)的表面，自然风干后即制成混有中草药的饲料。其喂养方法同现有饲料喂养方法，蛋白质、脂类和糖类等营养必需充足。
实验条件、测试方法及结果如下：
一.性腺发育阶段
1.实验条件
1.1实验鱼  实验鱼来自辽宁省辽阳市忠信养殖公司，挑选规格整齐、体质健壮的2冬龄鱼540尾，雄鱼平均体重为78.0g、雌鱼平均体重为58.0g，用高锰酸钾溶液消毒后，随机分成2组，放入6个120cm×120cm×150cm的网箱中，投喂2种饲料，每组3个重复。网箱放在室外2个6.0m×2.0m×1.2m的微流水池中。
1.2实验用饲料  现有饲料(F0组)，本实施例1或2(F4组)
1.3饲养管理  饲养管理同现有技术，即水温变化在19.0～25.0之间，日投饲率(F0及F4)，每天在日出前和日落后分别投喂日投饲量的30％和70％，保持微流水，每3天换水一次，溶解氧保持在5.0mg/L以上。
2.测试方法
2.1血清生化分析  性激素用日本产的OlympusACS：180化学发光免疫仪测定；雌二醇和睾酮试剂盒分别来自沈阳鑫华医疗设备有限公司和美国Bayer公司；血脂用日本产OlympusAU 400血脂分析仪测定。
2.2鱼体生化组成析  实验开始和结束时从各网箱中随机取雌雄鱼各5尾。将样品在75℃下烘至恒重，测定水分含量；用凯式定氮法(总氮×6.25)、索氏抽提法(以乙醚为抽提液)和马福炉中灼烧(550℃)5h分别测定粗蛋白、粗脂肪和灰分含量；用改进的Folich法和液相色谱提取和测定鱼体肌肉中的脂质和脂肪酸(中国国标GB/TS.124-2003，HPLC，日本产Thermo Quest GC/MS型)。
2.3消化酶活性测定  蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分别采用福林—酚试剂法、碘显色法和冯俊荣等(2004)[1]的方法测定。
2.4性腺的组织学观察  结束时从各网箱中随机取雌、雄鱼各5尾，摘取性腺置Bouin氏液中固定24h后，移入70％乙醇中保存。各级乙醇冲洗、脱水，经二甲苯透明，石蜡包埋，制成厚5-8μm切片，H.E.染色，中性胶封片后置显微镜下观察、拍照。
2.5数据处理  所有实验数据用SPSS11.0软件进行相关性检验、方差分析和LSD多重比较。以p＜0.01为差异极其显著，p＜0.05为差异显著。
3.结果
3.1本发明实施例1、2增强了黄颡鱼肠道脂肪、蛋白酶活性。
方差分析表明，雄黄颡鱼肠道脂肪酶、肠蛋白酶、粉酶活性差异不显著。F4组雌鱼肠道脂肪酶活性高，与F0组差异性极显著(p＜0.01)；F4雌鱼肠蛋白酶活性与F0组差异显著(p＜0.05)；F4、F0组雌鱼淀粉酶活性差异不显著。具体数据见表1。
                     表1  项目  F0  F4  雄  鱼  脂肪酶  77.13b  79.59b  蛋白酶  102.42b  101.48b  淀粉酶  109.77a  103.17a  雌  鱼  脂肪酶  60.82c  86.57b  蛋白酶  96.39b  119.89a  淀粉酶  121.93a  116.73a
3.2本实施例1、2提高了黄颡鱼(雌鱼)肌肉中粗脂肪及血液中血脂含量，降低了血液中激素含量分别见表2、表3。
                      表2  项目  F0  F4  雄  鱼  粗蛋白(％)  85.37a  66.4b  粗脂肪(％)  20.05b  20.64b  灰分(％)  5.40a  5.23a  雌  鱼  粗蛋白(％)  90.92a  83.89b  粗脂肪(％)  11.45c  25.63a  灰分(％)  7.72a  3.60c
                        表3  项目  初始值  末值  F0  F4  雄  鱼  甘油三脂  2.82  2.59  4.42  总胆固醇  3.90  3.79  3.93  HDL  0.95  0.47  0.39  LDL  0.25  0.22  0.15  睾酮  8.04  1.67  1.56  雌  鱼  甘油三脂  0.95  1.77  5.63  总胆固醇  4.31  6.4  8.56  HDL  0.72  0.50  0.86  LDL  0.71  1.10  1.28  雌二醇  237.71  76.22  53.37
3.3本实施例1、2提高了黄颡鱼脂类的转运能力(增加了卵巢中∑n-3脂肪酸含量)，雄鱼、雌鱼分别见表4、表5。
                  表4  脂肪酸  F0  F4  14:00  0.9199  1.6933  22:6n-3  24.7453  15.176  22:5n-3  1.9702  1.72805  22:5n-6  0.6072  0.34135  20:5n-3  3.7254  2.6151  20:4n-3  0.5354  0.5195  20:4n-6  2.5537  0.6728  20:3n-6  1.1353  0.9998  20:2n-6  1.1857  1.11495  18:3n-3  0.59  1.0339  18:2n-6  7.8571  10.33545  18:01  20.4112  24.9498  18:00  6.1517  4.8489  16:01  2.533  3.7315  16:00  20.7266  18.0088  ∑SFA  21.7982  24.551  ∑MUFA  25.161  30.44565  ∑n-3  31.5663  20.9166  ∑n-6  13.339  12.88505  ∑UFA  70.0663  64.2473  n-3/n-6  2.366467  1.623323
                 表5  脂肪酸  F0  F4  22:6n-3  33.4839  14.7762  22:5n-3  2.3204  1.5887  22:5n-6  0.8403  痕量trace  20:5n-3  4.1414  2.8  20:4n-3  痕量Trace  0.6138  20:4n-6  6.2582  1.5163  20:3n-6  0.4449  0.7217  20:2n-6  0.6293  1.2241  20:01  0.7036  1.9019  18:3n-3  0.4655  1.2468  18:2n-6  2.3131  11.7606  18:01  12.2298  29.6426  18:00  9.1133  5.2044  16:01  0.4129  4.5367  16:00  1.62  18.7472  14:00  22.3372  1.3264  ∑SFA  10.7333  25.278  ∑MUFA  13.3463  36.0812  ∑n-3  40.4112  21.0255  ∑n-6  10.4858  15.2227  ∑UFA  64.2433  72.3294  n-3/n-6  3.8539  1.3812
3.4本发明实施例1、2提高黄颡鱼性腺指数和性细胞发育能力90天的饲养表明，摄食含本发明实施例1、2饲料的F4组雌鱼的性腺指数(2.085％)极显著地(P＜0.01)高于F0(1.206％)组鱼72.89％。
如图1、2、3、4所示：组织学观察表明，雌鱼卵径分别极显著(P＜0.01)和显著(P＜0.05)高于F0组；F4组鱼卵巢卵母细胞的核径与F0组差异极显著(P＜0.01)，F4组鱼卵巢每个视野的平均卵粒数与F0组差异极显著(P＜0.01)。
F0组和F4组在显微镜下每个视野中的壶腹数和卵粒数如表6。
                      表6  项目  F0  F4  雄鱼  壶腹数  11a  13a  雌  鱼  卵径  28.85b  57.38a**  核径  13.8b  21.25a**  卵径/核径  2.105a  2.705a  卵粒/视野  26b  12c**
注：**表示差异极显著(P＜0.01)，*表示差异显著(P＜0.05)(附表1)。
二.亲鱼培育阶段
1.实验条件
1.1实验池  实验在辽宁省灯塔市忠信淡水渔业有限公司进行，实验池4个，2个为雌亲鱼池，2个为雄亲鱼池，每个亲鱼池为长方形。
1.2实验鱼  挑选规格整齐、体质健壮的3冬龄鱼，雄鱼平均体重为160g、雌鱼120g，用高锰酸钾溶液消毒后，按性别随机放养到2个雌亲鱼池(34#-35#)和2个雄亲鱼池(36#、37#)中，每个池塘放5000尾。
1.3实验饲料  以现有饲料作为对照组(34#、37#)、35#和36#亲鱼池投喂本发明实施例1或2。具体亲鱼入池和实验分组见表7。
                            表7  性别  雌鱼  雄鱼  池号  34#  35#  36#  37#  投喂  现有饲料  本发明实施例1、2  现有饲料  本发明实施例1、2
1.4饲养管理  同现有技术。
1.5催产方式  选取发育较好的亲鱼进行两次背鳍肌肉注射催产，催产方法同现有技术。
1.6指标测定  性腺指数(％)＝性腺重(g)/鱼体重(g)×100。每次产卵24h后采集10片产卵片，计数受精率。
2.测试方法
2.1实验开始、中期和结束时从各池塘中随机取鱼4-8尾，断尾采血，取肌肉。每组取肌肉50g以上，将样品在75℃下烘至恒重，用凯氏定氮法(总氮×6.25)、索氏抽提法(以乙醚为抽提液)和马福炉中灼烧(550℃)5h测定粗蛋白、粗脂肪和灰分含量；用改进的Folich法和液相色谱提取和测定鱼体肌肉中的脂质和脂肪酸(中国国标GB/TS.124-2003，HPLC，日本产Thermo QuestGC/MS型)。雌二醇和睾酮试剂盒分别购自沈阳鑫华医疗设备有限公司和美国Bayer公司，用日本产OlympusACS：180化学发光免疫仪测定。
2.2数据处理  实验数据用平均数±SE表示，经SPSS11.0软件进行相关性检验、方差分析和LSD多重比较。以p＜0.05为差异显著，p＜0.01为差异极其显著。
3.结果
3.1本实施例1、2提高了黄颡鱼亲鱼肌肉中粗脂肪含量，具体数据见表8。
                                      表8  项目  34#  35#  36#  37#  中  期  粗蛋白(％)  67.39  ±0.061  abcd  59.27  ±0.033  ac*  73.31  ±0.060  e  67.38  ±0.019  e  粗脂肪(％)  34.05  ±0.044a*  41.01  ±0.014b*  29.42  ±0.002C  28.73  ±0.003c  灰分(％)  8.67％  ±0.044a  7.41％  ±0.014a  8.90％  ±0.002b  7.83％  ±0.003b  末  期  粗蛋白(％)  51.65％  ±0.017b*  42.59％  ±0.022a  65.31％  ±0.005e  72.94％  ±0.033d  粗脂肪(％)  40.52％  ±0.007a**  49.46％  ±0.019b  45.49％  ±0.024c  44.99％  ±0.006c  灰分(％)  5.35％  ±0.001a  7.24％  ±0.020a  4.83％  ±0.008b  6.24％  ±0.008b
3.2本发明实施例1、2提高了黄颡鱼亲鱼(雌鱼)脂类的转运能力(增加了卵巢中∑n-3脂肪酸含量)，中期、后期具体数据分别见表9、表10。
                   表9  脂肪酸  34#  35#  22:6n-3  14.5876  14.9674  22:5n-3  2.0454  1.5536  22:5n-6  0.4895  0.5474  20:5n-3  3.7276  2.5434  20:4n-3  0.7008  0.6849  20:4n-6  2.3079  2.0466  20:3n-6  1.6853  1.9261  20:2n-6  1.193  1.128  20:01  2.0591  1.4297  18:3n-3  1.1774  1.1209  18:2n-6  6.1289  6.2647  18:01  27.1859  27.5335  18:00  8.8574  8.7902  16:01  7.6966  6.9277  16:00  20.1619  22.536  ∑SFA  29.0193  31.3262  ∑MUFA  36.9416  35.8909  ∑n-3  22.2388  20.8702  ∑n-6  11.8046  11.9128  ∑UFA  70.985  68.6739  n-3/n-6  1.88391  1.751914
                 表10  脂肪酸  34#  35#  22:6n-3  15.747  14.4878  22:5n-3  1.8573  1.4505  22:5n-6  0.4845  0.3662  20:5n-3  2.847  2.1747  20:4n-3  0.5562  0.5853  20:4n-6  1.8634  1.4019  20:3n-6  2.01  1.9584  20:2n-6  1.1106  0.9271  20:01  1.5027  1.624  18:3n-3  0.9921  6.2601  18:2n-6  5.3746  0.3899  18:01  28.8392  31.1462  18:00  9.8333  8.8192  16:01  6.8416  6.7379  16:00  20.1445  21.8408  ∑SFA  29.9778  30.66  ∑MUFA  37.1835  39.5081  ∑n-3  21.9996  24.9584  ∑n-6  10.8431  5.0435  ∑UFA  70.0262  69.51  n-3/n-6  2.028903  4.948627
3.3本发明实施例1、2降低了黄颡鱼亲鱼血液中激素含量，具体数据见表11。
                                        表11  性别  激素  初始值  中期  末期  34#  35#  34#  35#  雌鱼  雌二醇  23.6  434.1  ±167.0  a  356.2  ±87.6  a  104.0±46.1  b  208.9±14.6  b  雄鱼  睾酮  1.11  36#  37#  36#  37#  2.12±0.290a  2.30±2.30a  8.62±0.32b  68.5±13.44c**
3.4本发明实施例1、2提高黄颡鱼亲鱼性腺指数、受精率和出苗量。
2个多月的亲鱼培育期间，各组雌鱼的性腺指数随水温的升高而增加。中期35#池塘雌鱼的性腺指数(14.94％)显著高于34#池塘雌鱼(P＜0.05)，末期35#池塘雌鱼的性腺指数仍最高(26.17％)，显著高于34#(17.97％)；中期、末期各组雄鱼的性腺指数差异不显著。
繁殖结果表明，35#池塘雌鱼的卵受精率最高(87.50％)，极显著地高于34#(63.56％)池塘雌鱼P＜0.01)。
35#池塘(4965尾水花/组亲鱼、)雌鱼的平均出苗率(3824尾水花/组亲鱼)比34#(2413尾水花/组亲鱼)高58.47％；出苗总量35#(1837万尾)池塘比34#(1110万尾)(980万尾)高出65.50％。
参考文献：
[1]冯俊荣，刘红梅，韩茂森等。宝石斑鱼体内蛋白酶和脂肪酶活性的研究[J].淡水渔业，2004，34(5)：17-19。