改善妊娠结局的方法和组合物.pdf

本发明涉及一种提高女性对象妊娠率的方法，所述女性对象或引入该女性对象的卵母细胞已被来自男性对象的精子受精。该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：(i)有效量的抗氧化剂；和(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

权利要求书
1.  一种提高女性对象妊娠率的方法，所述女性对象或引入该女性对象的卵母细胞已被来自男性对象的精子受精，该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

2.  一种改善女性对象妊娠结局的方法，所述女性对象或引入该女性对象的卵母细胞已被来自男性对象的精子受精，该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

3.  如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述妊娠是自然受孕妊娠。

4.  如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述妊娠是通过辅助生殖技术产生的妊娠。

5.  如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述辅助生殖技术选自：人工受精、体外受精、配子输卵管内移植(GIFT)、子宫内授精(IUI)、精子卵浆内注射技术(ICSI)、睾丸精子提取(TESE)和经皮附睾支精子抽取术(PESA)。

6.  一种减轻对男性对象制造的精子的自由基损伤的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

7.  一种减少男性对象生殖道和/或精子内自由基产生的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

8.  一种降低男性对象生殖道和/或精子内的白细胞活性和/或浓度的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

9.  一种减少男性对象生殖道和/或精子内的炎性细胞因子产生的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

10.  一种改善男性对象精子功能的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

11.  一种提高男性对象精子活动力的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

12.  一种减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

13.  一种提高男性对象精子产量的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

14.  一种提高通过用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的胚胎质量的方法，该方法包括在用来自该男性对象的精子受精所述卵母细胞之前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

15.  一种改善通过用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的胚胎的发育的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

16.  一种提高胚胎植入率的方法，所述胚胎是用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的，该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

17.  如权利要求15或16所述的方法，其特征在于，所述胚胎是通过辅助生殖技术产生的胚胎。

18.  如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述辅助生殖技术是选自下组的辅助生殖技术：人工受精、体外受精、配子输卵管内移植(GIFT)、子宫内授精(IUI)、精子卵浆内注射技术(ICSI)、睾丸精子提取(TESE)和经皮附睾支精子抽取术(PESA)。

19.  一种提高男性对象生育力的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

20.  一种预防和/或治疗男性对象不育的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

21.  一种提高男性对象睾酮浓度的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

22.  一种降低对象中继承自该对象父亲的DNA损伤的程度的方法，所述DNA损伤是由于对该对象父亲精子DNA的自由基损伤造成的，该方法包括在所述对象受孕前给予该父亲以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

23.  一种预防对象的疾病或症状的方法，所述疾病或症状与继承自该对象父亲的由于对精子DNA的自由基损伤造成的DNA损伤有关，该方法包括在所述对象受孕前给予该父亲以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

24.  如权利要求1-23中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗氧化剂选自下组中的一种或多种：β-类胡萝卜素，包括番茄红素、叶黄素和玉米黄质；维生素C；维生素E；辅酶Q10；硒；锌；L-肉碱；乙酰肉碱；N-乙酰半胱氨酸；谷胱甘肽；丙酮酸盐；和亚牛磺酸。

25.  如权利要求1-24中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗氧化剂是番茄红素、维生素C、维生素E、硒、锌和任选的辅酶Q10的组合。

26.  如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述给对象施药包括每日施用0.5-50mg番茄红素，10-1000mg维生素C，40-4000I.U.维生素E，10-250μg硒，2.5-100mg锌，和任选的4-400mg辅酶Q10。

27.  如权利要求26所述的方法，其特征在于，所述给对象施药包括每日施用2-10mg番茄红素，20-200mg维生素C，200-600I.U.维生素E，20-50μg硒，10-50mg锌，和任选的10-100mg辅酶Q10。

28.  如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述给对象施药包括每日施用约6mg番茄红素，约100mg维生素C，约400I.U.维生素E，约26μg硒，约25mg锌，和任选的约40mg辅酶Q10。

29.  如权利要求1-28中任一项所述的方法，其特征在于，所述给对象施药为期至少10周。

30.  如权利要求1-29中任一项所述的方法，其特征在于，所述施用抗氧化剂是给对象口服施药。

31.  如权利要求1-30中任一项所述的方法，其特征在于，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂选自下组中的一种或多种：大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物；绿茶，或由其衍生的提取物或活性化合物；N-3脂肪酸，二十二碳六烯酸，姜或由其衍生的提取物或活性化合物；减少白细胞产生TNFα的试剂，包括己酮可可碱；一旦TNFα产生时阻断其作用的试剂，包括英夫利昔单抗；和从海洋软体动物提取的脂质。

32.  如权利要求1-30中任一项所述的方法，其特征在于，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂是大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物。

33.  如权利要求1-32中任一项所述的方法，其特征在于，所述提高睾丸睾酮浓度的试剂选自下组中的一种或多种：大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物；锌；蒺藜或由其衍生的提取物或活性化合物；减少巨噬细胞内诱导型氧化氮合酶的试剂；和减少氧化氮产生的试剂。

34.  如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述提高睾丸睾酮浓度的试剂是大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物。

35.  如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述给对象施药包括每日施用500mg以上大蒜油。

36.  如权利要求35所述的方法，其特征在于，所述方法包括每日施用约1000mg大蒜油。

37.  如权利要求1-36中任一项所述的方法，其特征在于，所述给对象施用减轻男性生殖道内炎症的试剂为期至少10周。

38.  如权利要求1-37中任一项所述的方法，其特征在于，所述施用减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或施用提高睾丸睾酮浓度的试剂是口服施药。

39.  如权利要求1-38中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包含给对象施用叶酸，或其盐。

40.  如权利要求39所述的方法，其特征在于，所述方法还包含施用约500μg叶酸盐。

41.  如权利要求1-40中任一项所述的方法，其特征在于，所述男性对象是人类对象。

42.  如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述男性对象选自：精子膜氧化水平升高的对象，包括丙醛或氧化应激的其他生物标记的水平升高的对象；吸烟者；生育力降低的对象，包括精子活动力弱导致的生育力降低，或未知原因的生育力降低；接受过输精管切除逆转术的对象；患有生殖道感染如附睾炎的对象；和患有精索静脉曲张的对象。

43.  分离自用权利要求6-13中任一项所述方法处理的男性对象的精液或精子。

44.  一种组合物，其包含：
维生素E；
维生素C，或其盐；
番茄红素；
硒；
锌；和
500mg以上大蒜，或其提取物或油；或任何上述组分的药学上可接受的衍生物；所述组合物任选还含有叶酸，或其盐，和/或辅酶Q10。

45.  如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含0.5-50mg番茄红素，10-1000mg维生素C，40-4000I.U.维生素E，10-250μg硒，2.5-100mg锌，和任选的4-400mg辅酶Q10。

46.  如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含2-10mg番茄红素，20-200mg维生素C，200-600I.U.维生素E，20-50μg硒，10-50mg锌，和任选的10-100mg辅酶Q10。

47.  如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含约6mg番茄红素，约100mg维生素C，约400I.U.维生素E，约26μg硒，约25mg锌，和任选的约40mg辅酶Q10。

48.  如权利要求44-47中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含约1000mg大蒜油。

49.  如权利要求44-48中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含约500μg叶酸盐。

50.  一种组合物，其包含：
约400I.U.维生素E；
约100mg维生素C，或其盐；
约6mg番茄红素；
约26μg硒；
约25mg锌；
约40mg辅酶Q10；和
约1000mg大蒜。

51.  一种组合物，其包含：
约400I.U.维生素E；
约100mg维生素C，或其盐；
约6mg番茄红素；
约26μg硒；
约25mg锌；
约500μg叶酸盐；和
约1000mg大蒜。

52.  一种包含以下组分的组合产品：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。

53.  如权利要求52所述的组合产品，其特征在于，所述抗氧化剂选自下组中的一种或多种：β-类胡萝卜素，包括番茄红素、叶黄素和玉米黄质；维生素C；维生素E；辅酶Q10；硒；锌；L-肉碱；乙酰肉碱；N-乙酰半胱氨酸；谷胱甘肽；丙酮酸盐；和亚牛磺酸。

54.  如权利要求52或53所述的组合产品，其特征在于，所述抗氧化剂是番茄红素、维生素C、维生素E、硒、锌和任选的辅酶Q10的组合。

55.  如权利要求54所述的组合产品，其特征在于，所述组合产品包含0.5-50mg番茄红素，10-1000mg维生素C，40-4000I.U.维生素E，10-250μg硒，2.5-100mg锌，和任选的4-400mg辅酶Q10。

56.  如权利要求54所述的组合产品，其特征在于，所述组合产品包含2-10mg番茄红素，20-200mg维生素C，200-600I.U.维生素E，20-50μg硒，10-50mg锌，和任选的10-100mg辅酶Q10。

57.  如权利要求54所述的组合产品，其特征在于，所述组合产品包含约6mg番茄红素，约100mg维生素C，约400I.U.维生素E，约26μg硒，约25mg锌，和任选的约40mg辅酶Q10。

58.  如权利要求52-57中任一项所述的组合产品，其特征在于，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂选自下组中的一种或多种：大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物；绿茶，或由其衍生的提取物或活性化合物；N-3脂肪酸，二十二碳六烯酸，姜或由其衍生的提取物或活性化合物；减少白细胞产生TNFα的试剂，包括己酮可可碱；一旦TNFα产生时阻断其作用的试剂，包括英夫利昔单抗；和从海洋软体动物提取的脂质。

59.  如权利要求52-57中任一项所述的组合产品，其特征在于，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂是大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物。

60.  如权利要求52-59中任一项所述的组合产品，其特征在于，所述提高睾丸睾酮浓度的试剂选自下组中的一种或多种：大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物；锌；蒺藜或由其衍生的提取物或活性化合物；减少巨噬细胞内诱导型氧化氮合酶的试剂；和减少氧化氮产生的试剂。

61.  如权利要求60所述的组合产品，其特征在于，所述提高睾丸睾酮浓度的试剂是大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物。

62.  如权利要求59-61中任一项所述的组合产品，其特征在于，所述组合产品包含500mg以上大蒜油。

63.  如权利要求62所述的组合产品，其特征在于，所述组合产品包含约1000mg大蒜油。

64.  如权利要求52-63中任一项所述的组合产品，其特征在于，所述组合产品还包含叶酸，或其盐。

65.  如权利要求64所述的组合产品，其特征在于，所述组合产品还包含约500μg叶酸盐。

66.  如权利要求52-65中任一项所述的组合产品，其特征在于，出于以下一个或多个目的将所述组合产品施用于男性对象：减轻对该男性对象产生的精子的自由基损伤；减少该男性对象生殖道和/或精液中自由基的产生；降低该男性对象生殖道和/或精液中白细胞的活性和/或浓度；减少该男性对象生殖道和/或精液中炎性细胞因子的产生；改善该男性对象的精子功能；提高该男性对象的精子活动力；减轻对该男性对象精子DNA的自由基损伤；提高该男性对象的精子产量；提高通过用来自该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎的质量；改善通过用来自该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎的发育；改善被该男性对象受精的女性伴侣的妊娠结局或妊娠率；降低该男性对象后代中由于对该男性对象精子DNA的自由基损伤而造成的DNA损伤的程度；预防该男性对象后代中由于对该男性对象精子DNA的自由基损伤而造成的疾病或症状；改善和/或处理该男性对象的生育力；和提高该男性对象的睾酮浓度。

67.  一种组合物，其包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。

68.  如权利要求67所述的组合物，其特征在于，所述抗氧化剂选自下组中的一种或多种：β-类胡萝卜素，包括番茄红素、叶黄素和玉米黄质；维生素C；维生素E；辅酶Q10；硒；锌；L-肉碱；乙酰肉碱；N-乙酰半胱氨酸；谷胱甘肽；丙酮酸盐；和亚牛磺酸。

69.  如权利要求67或68所述的组合物，其特征在于，所述抗氧化剂是番茄红素、维生素C、维生素E、硒、锌和任选的辅酶Q10的组合。

70.  如权利要求69所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含0.5-50mg番茄红素，10-1000mg维生素C，40-4000I.U.维生素E，10-250μg硒，2.5-100mg锌，和任选的4-400mg辅酶Q10。

71.  如权利要求69所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含2-10mg番茄红素，20-200mg维生素C，200-600I.U.维生素E，20-50μg硒，10-50mg锌，和任选的10-100mg辅酶Q10。

72.  如权利要求69所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含约6mg番茄红素，约100mg维生素C，约400I.U.维生素E，约26μg硒，约25mg锌，和任选的约40mg辅酶Q10。

73.  如权利要求67-72中任一项所述的组合物，其特征在于，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂选自下组中的一种或多种：大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物；绿茶，或由其衍生的提取物或活性化合物；N-3脂肪酸，二十二碳六烯酸，姜或由其衍生的提取物或活性化合物；减少白细胞产生TNFα的试剂，包括己酮可可碱；一旦TNFα产生时阻断其作用的试剂，包括英夫利昔单抗；和从海洋软体动物提取的脂质。

74.  如权利要求67-73中任一项所述的组合物，其特征在于，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂是大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物。

75.  如权利要求67-74中任一项所述的组合物，其特征在于，所述提高睾丸睾酮浓度的试剂选自下组中的一种或多种：大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物；锌；蒺藜和/或由其衍生的提取物或活性化合物；减少巨噬细胞内诱导型氧化氮合酶的试剂；和减少氧化氮产生的试剂。

76.  如权利要求75所述的组合物，其特征在于，所述提高睾丸睾酮浓度的试剂是大蒜，或由其衍生的提取物、油或活性化合物。

77.  如权利要求74-76中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含500mg以上大蒜油。

78.  如权利要求767所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含约1000mg大蒜油。

79.  如权利要求67-78中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含叶酸，或其盐。

80.  如权利要求79所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含约500μg叶酸盐。

81.  一种分离来自男性对象的精子的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)给予所述男性对象有效量的抗氧化剂；
(ii)给予所述男性对象有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂；和
(iii)分离该男性对象的精子。

82.  按照权利要求81所述方法从男性对象分离的精子。

83.  一种用权利要求82所述精子受精雌性非人动物而获得的非人动物。

说明书改善妊娠结局的方法和组合物
本申请要求2005年7月5日提交的美国临时专利申请No.60/696,746的优先权，该申请的内容通过该引用纳入本文。
发明领域
本发明涉及提高妊娠率和改善妊娠结局的方法和组合物。
本发明还涉及降低对男性对象精子损伤的方法和组合物。
发明背景
尽管生殖药品有了许多进展，但仍有很大一部分情侣由于男性生育力减退而无法怀孕。尽管造成男性生育力减退的原因很多，但对精子的自由基损伤似乎是造成生育力减退的主要原因之一。已在未知原因的不育男性、吸烟男性、与精子活动力弱相关的不育男性和接受输精管切除逆转术的男性的精液中测出高水平的自由基。
自由基能够通过三种机制之一影响生育力。首先，对精子膜的自由基损伤会干扰精子尾的功能，降低精子活动力。其次，对头膜的自由基损伤会妨碍顶体反应，顶体反应是一种对于卵母细胞-精子融合和受精异常重要的自然反应。最后，如果精液自由基水平非常高，它们会损害精子的遗传物质(DNA)，导致胚胎质量差和不育/流产。在许多研究中已经发现父亲吸烟造成的精子DNA损伤与他们后代的幼年期癌症有关。
采用辅助生殖技术能够进行干预以治疗生育力低下。然而，尽管辅助生殖领域已经取得了许多进展，但辅助生殖技术的成功率一般仍旧较低。辅助生殖技术如体外受精(IVF)、精子卵浆内注射技术(ICSI)和子宫内授精(IUI)的低成功率可能一部分是由于在男性体内发生的对精子的自由基损伤。
因此，需要有新的方法和组合物以提高自然妊娠和辅助妊娠的提高妊娠率和妊娠结局。本发明涉及提高辅助妊娠和自然妊娠的妊娠率和妊娠结局的方法和组合物，并涉及减低对男性对象产生的精子的损伤的方法和组合物，该方法是通过将抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂组合给予该男性对象。
文中，对作为现有技术给出的专利文献或其他资料的引用并非承认在任一权利要求的优先权日，该文献或资料是已知的或其所含的信息是公知常识的一部分。
发明概述
本发明提供了一种提高女性对象妊娠率的方法，所述女性对象或引入该女性对象的卵母细胞已被来自男性对象的精子受精，该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种改善女性对象妊娠结局的方法，所述女性对象或引入该女性对象的卵母细胞已被来自男性对象的精子受精，该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种减轻对男性对象制造的精子的自由基损伤的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种减少男性对象生殖道和/或精子内自由基产生的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种降低男性对象生殖道和/或精子内的白细胞活性和/或浓度的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种降低男性对象生殖道和/或精子内一种或多种炎性剂的水平和/或产生的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种改善男性对象精子功能的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种提高男性对象精子活动力的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种提高男性对象精子产量的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种提高男性对象生育力的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种治疗男性对象不育的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种提高通过用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的胚胎质量的方法，该方法包括在用来自该男性对象的精子受精所述卵母细胞之前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种改善通过用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的胚胎的发育的方法，该方法包括在用来自该男性对象的精子受精所述卵母细胞之前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种降低对象中继承自该对象父亲的DNA损伤的程度的方法，所述DNA损伤是由于对该对象父亲精子DNA的自由基损伤造成的，该方法包括在所述对象受孕前给予该父亲以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种预防对象的疾病或症状的方法，所述疾病或症状与继承自该对象父亲的由于对精子DNA的自由基损伤造成的DNA损伤有关，该方法包括在所述对象受孕前给予该父亲以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种提高男性对象睾酮浓度的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种组合物，其包含以下组分：
维生素E；
维生素C，或其盐；
番茄红素；
硒；
锌；和
500mg以上大蒜，或其提取物或油，或任何上述组分的药学上可接受的衍生物；该组合物任选还包含叶酸，或其盐，和/或辅酶Q10。
本发明还提供了一种组合物，其包含：
约400I.U.维生素E；
约100mg维生素C，或其盐；
约6mg番茄红素；
约26μg硒；
约25mg锌；
约40mg辅酶Q10；和
约1000mg大蒜。
本发明还提供了一种组合物，其包含：
约400I.U.维生素E；
约100mg维生素C，或其盐；
约6mg番茄红素；
约26μg硒；
约25mg锌；
约500μg叶酸盐；和
约1000mg大蒜。
本发明还提供了一种包含以下组分的组合产品：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
本发明还提供了一种组合物，其包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明还提供了一种分离来自男性对象的精子的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)给予所述男性对象有效量的抗氧化剂；
(ii)给予所述男性对象有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂；和
(iii)分离该男性对象的精子。
本发明源自发现了一种组合物，该组合物包含至少一种抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂(例如，减轻男性生殖道内炎症的试剂)和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，当施用于男性对象时它能有效提高用来自该男性对象的精子受精的女性对象的自然和辅助妊娠率。
不受理论的局限，妊娠率的提高似乎是由于以下事实，即施用至少一种抗氧化剂并同时施用减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂能有效降低对男性对象中精子的自由基损伤，从而提高妊娠率。
将用于整篇说明书的多个术语具有熟练技术人员熟知的含义。然而，为简便起见，现在将定义其中的一些术语。
术语“抗氧化剂”用在整篇说明书中应理解为是指直接或间接减轻氧和/或自由基在细胞内的损害作用的分子，并包括与氧反应的分子，或可能保护抵抗自由基和/或与自由基反应的分子。
在这点上，应理解术语“抗氧化剂”包括前药，即当施用于对象时形成或代谢成具有抗氧化剂活性的试剂的试剂。还将理解，对各种示例性抗氧化剂而言，本发明包括该抗氧化剂的盐(如果可接受的话)，或者该抗氧化剂的药学上可接受的化学衍生物。
术语“减轻男性生殖道内炎症的试剂”用在整篇说明书中应理解为是指直接或间接导致男性生殖道炎症减轻的分子。比如当给予对象时能够例如直接或间接减少男性生殖道内的白细胞数目、白细胞增殖或白细胞活性的试剂，和/或直接或间接导致白细胞产生的一种或多种炎性细胞因子如TNF-α和IL-1β减少的试剂。该术语包括前药，即当施用于对象时形成或代谢成减轻男性生殖道内炎症的试剂的试剂。还将理解，对各种示例性试剂而言，本发明包括该试剂的盐(如果可接受的话)，或者该试剂的药学上可接受的化学衍生物。
在这点上，男性生殖道将理解为包括附睾、阳茎、前列腺、精囊、睾丸、输精管和精液。
术语“提高睾丸睾酮浓度的试剂”用在整篇说明书中应理解为是指直接或间接导致睾丸内睾酮浓度升高的分子。该术语包括前药，即当施用于对象时形成或代谢成提高睾丸睾酮浓度的试剂的试剂。还将理解，对各种示例性试剂而言，本发明包括该试剂的盐(如果可接受的话)，或者该试剂的药学上可接受的化学衍生物。

附图简述
图1显示了OSMI营养素(nutraceutical)对一组已知有自由基损伤的男性活动精子总数的影响。
图2显示了采用HOST试验测得的OSMI营养素对一组已知有自由基损伤的男性精子膜完整性的影响。
图3显示了采用TUNEL试验测得的OSMI营养素对一组已知有自由基损伤的男性精子DNA断裂的影响。
图4显示了采用TBARS试验测得的OSMI营养素对精子膜脂过氧化反应的影响。
发明概述
如上所述，一实施方式中，本发明提供了一种提高女性对象妊娠率的方法，所述女性对象或引入该女性对象的卵母细胞已被来自男性对象的精子受精，该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明基于以下发现，即给男性对象施用至少一种抗氧化剂，并同时施用减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂可有效提高用来自该男性对象的精子受精的女性的自然妊娠和辅助妊娠的妊娠率和妊娠结局。
因此，本发明可用于提高自然妊娠(自然受孕妊娠)和辅助妊娠(通过辅助生殖技术产生的妊娠)的妊娠率和妊娠结局。
辅助生殖技术的例子包括人工受精、体外受精、配子输卵管内移植(GIFT)、子宫内授精(IUI)、精子卵浆内注射技术(ICSI)、睾丸精子提取(TESE)和经皮(percutanenous)附睾支精子抽取术(PESA)。将辅助生殖技术用于人和动物的方法是本领域已知的，其中包括分离卵母细胞以供受精的方法。
测定妊娠率的方法是本领域已知的。通常，妊娠率是指特定女性对象通过自然或辅助手段实现可确认的妊娠的可能性值。可确认的妊娠是通过一种或多种特定结果测出的成功妊娠，所述特定结果如阳性βHCCG或在孕早期扫描时检测到存活的胎心(通常称为可存活妊娠率)。
就接受本发明所述治疗的单独的对象而言，妊娠率因此是指对象在受精后实现可确认的妊娠的可能性。妊娠率提高意味着与对象未接受治疗的情况相比，该对象实现可确认的妊娠的可能性提高。
就对象群体而言，妊娠率是指在接受本发明的治疗时女性对象群体实现可确认的妊娠的比例。例如，在IVF妊娠的情况下，可通过胚胎转移获得的存活任选的比例来测量妊娠率。
此外，对于其中的男性伴侣之前已经用至少一种抗氧化剂联合施用减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂治疗的情侣而言，自然和辅助妊娠的结局达到了改善。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种改善女性对象妊娠结局的方法，所述女性对象或引入该女性对象的卵母细胞已被来自男性对象的精子受精，该方法包括在受精前给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
确定妊娠结局的方法是本领域已知的。通常，妊娠结局是指与自然或辅助妊娠相关的可确认的结果，如通过一种或多种特定参数(例如，阳性βHCCG，或在孕早期扫描时检测到存活的胎心)测出的成功妊娠、妊娠开始到活产的可能性、或对象不发生流产的可能性。
给男性对象施用抗氧化剂并联合施用减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂还可降低对来自男性对象的精子的自由基损伤。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减轻对男性对象制造的精子的自由基损伤的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂联合施用抗氧化剂还可以降低男性生殖道和精液内的自由基水平。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减少男性对象生殖道和/或精子内自由基产生的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
不受理论的局限，施用抗氧化剂并联合施用减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂显然可通过以下一种或多种机制有效降低自由基损伤：(i)直接降低男性生殖道和/或精液内的自由基水平；(ii)通过减少白细胞产生炎性细胞因子而降低由白细胞在男性生殖道和/或精液内产生的自由基的水平；和(iii)通过减轻对产生睾酮的莱迪希细胞的自由基损伤提高睾丸内的睾酮浓度，从而提高睾酮水平并改善精子功能。
与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂联合施用抗氧化剂还可导致增加男性对象的精子数、提高精子活动力、提高精子膜完整性和减少精子内的DNA损伤。
还预计，采用之前已经用抗氧化剂联合减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂治疗的男性对象的精子可以提高胚胎质量，例如可通过胚胎形成胚细胞的能力来测量胚胎质量。
在这点上，本发明还可用于提高自然受孕得到的或通过辅助生殖技术得到的胚胎的质量。
未知原因的不育男性、吸烟男性、与精子活动力弱相关的不育男性和接受输精管切除逆转术的男性的精液中通常存在高水平的自由基。
不受理论的局限，似乎自由基能够通过至少三种机制直接影响男性的生育力。
首先，对精子膜的自由基损伤会干扰精子尾的功能，降低精子活动力。其次，对精子头部的自由基损伤会妨碍顶体反应，顶体反应是一种对于卵母细胞-精子融合和受精异常重要的自然反应。最后，如果精液自由基水平非常高，它们会损害精子的遗传物质，导致胚胎质量差和不育/流产。
此外，精子DNA损伤与他们后代的幼年期癌症有关。一些研究，例如，吉(Ji)等，(1997)J.Natl.Cancer Inst.89(3)：238-244和桑(Sun)等，(1997)Biol.Reprod.56：602-607，证实，父亲吸烟造成的精子DNA损伤与他们后代的幼年期癌症的发展有关。因此，按照本发明提前治疗男性对象可能降低该男性对象后代的DNA损伤，从而减轻与遗传性DNA损伤相关后代的疾病和/或症状。
本发明各种实施方式中的男性对象可以是，例如，男性人类或雄性哺乳动物，其中包括灵长类动物、家畜(例如马、母牛、绵羊、猪、羊)、伴侣动物(例如狗、猫)、实验室动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠)、或者任何白细胞在生殖道/精液内产生自由基的其他雄性动物。一实施方式中，所述男性对象是男性人类。
因此，应理解，本发明可延伸至用于人和动物，且本发明同样可用于人类或动物以达到自然受孕目的和辅助生殖目的。
在这点上，本发明适用于辅助生殖技术，如人工受精、体外受精(IVF；提取卵母细胞、在实验室内受精并将胚胎转移入受体)、配子输卵管内移植(GIFT；将卵母细胞和精子置入输卵管内)、子宫内授精(IUI)、精子卵浆内注射技术(ICSI)、睾丸精子提取(TESE)和经皮附睾支精子抽取术(PESA)。
本发明还提供了从按照本发明处理的男性对象分离的精子(和/或精液)。这种精子(例如，作为分离的精子或以精液样品的形式)可用于人类和动物进行辅助生殖。从人类和动物分离精子的方法是本领域已知的。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种分离来自男性对象的精子的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)给予所述男性对象有效量的抗氧化剂；
(ii)给予所述男性对象有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂；和
(iii)分离该男性对象的精子。
本发明还提供了从雄性动物分离的精子(或精液)，以及用该精子受精雌性非人动物而得到的非人动物，或用该精子受精卵母细胞而得到的非人动物。分离精子的方法是本领域已知的。通过受精产生非人动物的方法是本领域已知的。
如此分离的精子也可能对冻融效应有较好的抵抗性。在这点上，深低温保藏和解冻与氧化应激诱导的精子功能(包括精子活动力)的显著下降有关。因此，本发明还可延伸至一种通过用有效量的抗氧化剂以及有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂处理男性对象而改善精子的深低温保藏的方法。
一实施方式中，本发明的男性对象本发明选自：精子膜氧化水平升高的对象，包括丙醛或氧化应激的其他生物标记的水平升高的对象；吸烟者；生育力降低的对象，包括精子活动力弱导致的生育力降低，或未知原因的生育力降低；接受过输精管切除逆转术的对象；患有生殖道感染如附睾炎的对象；和患有精索静脉曲张的对象。
一实施方式中，本发明所述的对精子的自由基损伤是由男性生殖系统、包括精液内产生和/或存在的自由基造成的损伤。在进一步的实施方式中，损伤自由基损伤是由于男性生殖道和/或精液内的白细胞和/或精子产生的自由基造成的损伤。
评价对精子的自由基损伤程度的方法是本领域已知的。例如，可采用TBAR试验(涉及测量作为精子膜氧化标记的丙醛)或LPO-856分光光度试验。这些方法描述于，例如，格蒙滋(Gomez)等，(1998)International Journal of Andrology 21(2)：81-96和艾肯(Aitken)等，(1993)Molecular Reproduction and Development 35：302-315。
一实施方式中，给对象施药导致对精子的自由基损伤减轻，与施药前相比，在精子中测得的丙醛水平下降了10％或更多(pmol/107精子)。另一实施方式中，给对象施药导致对精子的自由基损伤减轻，与施药前相比，在精子中测得的丙醛水平下降了15％或更多(pmol/107精子)。
用于本发明各种实施方式的抗氧化剂可以是一种或多种单独的抗氧化剂。在这点上，抗氧化剂是直接或间接降低细胞内的氧和/或自由基的损伤效应的分子，并包括与氧反应的分子，或可能保护抵抗自由基和/或与自由基反应的分子。
一实施方式中，所述抗氧化剂选自下组中的一种或多种：β-类胡萝卜素，包括番茄红素(衍生自番茄皮的类胡萝卜素)、叶黄素和玉米黄质；维生素C；维生素E；辅酶Q10；硒；锌；L-肉碱；乙酰肉碱(acetylcarnitene)；N-乙酰半胱氨酸；谷胱甘肽(glutathionine)；丙酮酸盐；和亚牛磺酸；或任何上述试剂的盐(如果可接受的话)或药学上可接受的衍生物。
其他抗氧化剂通常描述于阿格沃(Agarwal)等，(2004)Reproductive BiomedicineOnline 8(6)：616-27。
在本发明各种实施方式中，对一种或多种抗氧化剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的一种或多种特定抗氧化剂。
在这点上，对于用于本发明各种实施方式的多种抗氧化剂而言，合适的浓度如下：
维生素E(醋酸d-α-生育酚)：40-4000I.U，常用范围是200-1200I.U.，尤其是200-600I.U.。
维生素C(抗坏血酸或其盐)：10-1000mg，常用范围是20-200mg。
番茄红素：0.5-50mg，常用范围是1-20mg，以及2-10mg。
辅酶Q10：4-400mg，常用范围是10-100mg。
硒：10-250μg，常用范围是20-50μg。
锌：2.5-100mg，常用范围是10-50mg。
谷胱甘肽：100-1000mg，常用范围是400-600mg。
L-肉碱：1-5g，常用范围是2-3g。
己酮可可碱：200-1500mg，常用范围是300-1200mg。
一实施方式中，施用于对象的抗氧化剂是以下抗氧化剂的组合：番茄红素、维生素C、维生素E、硒和锌。还可施用抗氧化剂辅酶Q10。
一实施方式中，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂是减少白细胞的数目、增殖和/或产生的试剂，和/或抑制白细胞产生细胞因子的试剂。
减轻男性生殖道炎症的试剂，如抑制白细胞产生细胞因子的试剂，的例子包括：
大蒜(描述于霍奇(Hodge)等，(2002)Cytometry 48：209-215)，或由其衍生的油、提取物或活性化合物。
绿茶或由其衍生的提取物或活性化合物。
N-3脂肪酸(描述于韦斯(Weiss)等，(2002)British Journal of Nutrition 87(增刊 1)：S89-94)。
二十二碳六烯酸(描述于凯利(Kelley)等，(1999)Lipids 34(4)：317-24)，或其盐或药学上可接受的衍生物。
姜及其衍生物(例如，球姜酮)(描述于姆拉凯米(Murakami)等，(2002)Carcinogenesis 23(5)：795-802)，或由其衍生的提取物或活性化合物。
减少白细胞产生TNFα的试剂有，例如，己酮可可碱(pentoxyphylline)(描述于梅纳(Meiners)等，(2004)J Neural Transm 111(3)：441-447)。
一旦TNFα产生时阻断其作用的试剂有，例如，英夫利昔单抗(infliximab)。
从海洋软体动物(Lyprinol-Blackmores)提取的脂质，5-脂肪氧化酶抑制剂(描述于杜比(Dugas B)(2000).Allerg Immunol(Paris)32(7)：284-9)。
一实施方式中，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂还能抑制白细胞增殖。这种试剂的例子是大蒜(或由其衍生的油、提取物或活性化合物)或姜(或由其衍生的提取物、衍生物或活性化合物)。
在本发明各种实施方式中，提高睾丸内睾酮浓度的试剂的例子包括：
大蒜(描述于欧(Oi)等，(2001)J.Nutr.131(8)：2150-2156)，或由其衍生的油、提取物或活性化合物。
锌(描述于弗斯(Fuse)等，(1999)Int.Urol.Nephrol.31(3)：401-408。
乙酰肉碱。
蒺藜(tribulus terrestris)，或由其衍生的提取物或活性化合物。
减少巨噬细胞内诱导型氧化氮合酶(iNOS)的试剂有，例如蒜素或阿焦烯(ajoene)，它们是衍生自大蒜的活性化合物。
减少氧化氮(NO)产生的试剂。
一实施方式中，本发明所述的提高睾酮浓度的试剂还能抑制白细胞增殖。
确定某试剂是否能够提高睾丸内睾酮浓度的合适方法是测定精液浆内的睾酮浓度，例如，如卢(Luboshitzky)等，(2002)Int.J.Androl.25(6)：345所述。
一实施方式中，本发明所述的减轻男性生殖道内炎症的试剂和提高睾丸睾酮浓度的试剂是同时具有这些活性的试剂。这种试剂的例子是大蒜和锌。
对于减轻男性生殖道内炎症的试剂的有效量和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。
一实施方式中，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂是大蒜，大蒜油，大蒜提取物，或衍生自大蒜的活性组分，如蒜素和/或阿焦烯。可取新鲜大蒜去皮并碾碎，然后通过一系列滤器过滤碾碎的提取物，从而制得合适的大蒜提取物。
对于大蒜油而言，与抗氧化剂组合施用的有效量是500mg以上，尤其是501-10,000mg。一实施方式中，所施用的大蒜油的量为1000mg或大约此量。
在本发明各种实施方式中，抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂可单独地或按照合适的施药方案组合施用于对象。
因此，施药可连续或同时进行，这通常意味着药物组合物将以规定的时间间隔出现在对象体内。通常，如果在第一种试剂的半衰期内给予某试剂，则这两种试剂被认为是同时施用的。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种包含以下组分的组合产品：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分以对男性对象单独施药的形式或以对男性对象共施用一种或多种组分的形式存在。
如本文所述，可将组合产品用于本发明的各种应用。
一实施方式中，如本文所述，该组合产品被用于提高妊娠率、改善妊娠结局、或减轻对男性对象所产生精子的自由基损伤。
本发明各种组合产品内的抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂可采取多剂量或单位剂量形式单独包装在诸如安瓿、药瓶或小瓶等适当灭菌的容器内。该容器在填装之后通常被气密密封。或者，可将各种组分包装在一起以便一起共施用一种或多种。包装各种组分的方法是本领域已知的。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
如本文所述，可将该组合物用于本发明的各种应用。
一实施方式中，如本文所述，所述组合物被施用于男性对象以提高妊娠率、改善妊娠结局、或减轻对男性对象所产生的精子的自由基损伤。
如本文之前的讨论，一实施方式中，所述减轻男性生殖道内炎症的试剂还能抑制白细胞增殖。
另一实施方式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在药物制备中的应用，所述药物被用于这里所述的本发明的各种应用，如提高妊娠率、改善妊娠结局、减轻对男性对象所产生的精子的自由基损伤。
合适的组合物(称为OSMI制剂)如下：
维生素E(醋酸d-α-生育酚)，400I.U.；
维生素C(抗坏血酸或其盐)100mg；
番茄红素 6mg；
辅酶Q10 40mg；
硒 26μg；
锌 25mg；和
大蒜油 1000mg，或大约上述量的各种组分的组合物。
上述制剂(营养素)可以，例如，胶囊的形式口服递送给对象。
给对象施用如本发明各种实施方式所述的组合物或组合产品也可包括单独施用或共施用其他试剂。例如，也可给对象施用增强精子功能的试剂和/或参与细胞DNA合成的试剂以减轻对男性对象精子的自由基损伤程度。能改善精子功能并在细胞DNA合成中扮演重要作用的试剂的例子是叶酸盐。能提升精子功能的试剂的例子是L-肉碱。
包含叶酸盐的合适制剂(称为门尼维特(Menevit)制剂)如下：
维生素E(醋酸d-α-生育酚)，400I.U.
维生素C(抗坏血酸或其盐)100mg
番茄红素 6mg
叶酸盐 500μg
硒 26μg
锌 25mg
大蒜油 1000mg，或大约上述量的各种组分的组合物。
上述制剂(营养素)可以，例如，胶囊的形式口服递送给对象。上述制剂也可包含40mg辅酶Q10。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包含：
维生素E；
维生素C，或其盐；
番茄红素；
硒；
锌；和
500mg以上大蒜，或其提取物或油；该组合物任选还包含叶酸，或其盐，和/或辅酶Q10；或任何上述组分的药学上可接受的衍生物。
在本发明各种实施方式中，给对象施用抗氧化剂以及施用减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂将以适当形式进行，以产生所需结果，如提高妊娠率或妊娠结局、或减轻对精子的自由基损伤。对施用的各抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要其用量和形式通常能实现所需效果或治疗效果即可。
在这点上，可根据例如要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率以及其他活性剂的存在情况来适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量。
一实施方式中，抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施药频率是每日施药。
一实施方式中，施药方案的持续时间为6周或更长。另一实施方式中，施药方案的持续时间为10周或更长。在进一步的实施方式中，施药方案的持续时间为12周或更长。
在这点上，以下制剂之一的合适施药方案是每天施用一次以下制剂之一，为期12周：
OSMI制剂：
维生素E(醋酸d-α-生育酚)，400I.U.
维生素C(抗坏血酸或其盐)100mg
番茄红素 6mg
辅酶Q10 40mg
硒 26μg
锌 25mg
大蒜油 1000mg
门尼维特制剂：
维生素E(醋酸d-α-生育酚)，400I.U.
维生素C(抗坏血酸或其盐)100mg
番茄红素 6mg
叶酸盐 500μg
硒 26μg
锌 25mg
大蒜油 1000mg
然而，应理解，在本发明各种实施方式中，抗氧化剂和其他试剂的施用可在任何适合产生所需效果的时间和频率内进行。所述抗氧化剂和其他试剂可通过口服、肠胃外、局部或任何其他合适方法施用。
本发明所述试剂的配方以及它们的施用可通过本领域已知的合适方法实现。
例如，在本发明各种实施方式中，施用抗氧化剂和其他试剂还包括采用一种或多种药学上可接受的添加物，包括药学上可接受的盐、氨基酸、多肽、聚合物、溶剂、缓冲剂、赋形剂和填充剂，需要考虑要施用的各种试剂的特定物理和化学特性。
例如，可将抗氧化剂和其他试剂单独地或混合地制备成例如水性溶液、油性制品、脂肪性乳剂、乳剂、凝胶等形式的各种药物组合物，且这些制品可作为肌内或皮下注射液，或作为器官(包括心脏)注射液，或作为埋入制品、或作为通过鼻腔、直肠、肺等的透粘膜制品施用。
如本文之前的讨论，本发明各种实施方式中的试剂可以口服制品(例如固体制品，如片剂、胶囊剂、颗粒剂或粉末剂；液体制品如糖浆剂、乳剂或悬浮剂)的形式联合或单独施用。在本发明各种实施方式中，单独地或混合地含有抗氧化剂和其他试剂的组合物还可含有防腐剂、稳定剂、分散剂、pH控制剂或等渗剂。在本发明各种实施方式中，合适的防腐剂的例子是甘油、聚丙二醇、苯酚或苄基醇。在本发明各种实施方式中，合适的稳定剂的例子是葡聚糖、明胶、a-醋酸生育酚或α-硫甘油。在本发明各种实施方式中，合适的分散剂的例子包括聚氧乙烯(20)、失水山梨糖醇单油酸酯(吐温80)、失水山梨醇倍半油酸酯(司盘30)、聚氧乙烯(160)、聚氧丙烯(30)、乙二醇(普流罗尼(Pluronic)F68)或聚氧乙烯氢化蓖麻油60。在本发明各种实施方式中，合适的pH控制剂的例子包括盐酸、氢氧化钠等。合适的等渗剂的例子是葡萄糖、D-山梨糖醇或D-甘露醇。
在本发明各种实施方式中，还可以含有药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、悬浮剂、润滑剂、佐剂、运载体、递送系统、乳化剂、崩解剂、吸附剂、防腐剂、表面活性剂、着色剂、调味剂或甜味剂的组合物的形式单独地或混合地施用抗氧化剂和其他试剂，需要考虑要施用的抗氧化剂和其他试剂的物理和化学特性。
出于这些目的，这些试剂可以含有常规的无毒药物载体的剂量形式或通过任何其他方便的剂型经可植入的储存器口服、肠胃外、通过吸入喷雾、吸附、吸收、局部、直肠、经鼻、含服施用。术语肠胃外在这里包括皮下、静脉内、肌内、腹膜内、鞘内、胸骨内以及颅内注射或灌输技术。
当肠胃外施用时，单独地或混合地施用抗氧化剂和其他试剂将通常采取单位剂量的无菌可注射形式(溶液、悬浮液或乳剂)，并一般用药学上可接受的载体使其与受者的血液等渗。这种无菌可注射形式的例子是无菌可注射的水性或油性悬浮液。可按照本领域熟知的技术采用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来制造这些悬浮液。所述无菌可注射形式也可以是用肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂配制的无菌可注射溶液或悬浮液，例如用1，3-丁二醇配制的溶液。在本发明各种实施方式中，可采用的可接受的运载体和溶剂包括水、盐水、林格(Ringer’s)溶液、葡萄糖溶液、等渗氯化钠溶液和汉克斯(Hanks’)液。此外，通常采用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。出于该目的，可采用任何温和的混合油，其中包括合成的甘油单酯或甘油二酯、玉米油、棉籽油、花生油和芝麻油。脂肪酸如油酸乙酯、肉豆蔻酯异丙酯、和油酸及其甘油酯衍生物，包括橄榄油和蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙烯化形式，可用于制备注射剂。这些油性溶液或悬浮液还可含有长链醇稀释剂或分散剂。
在本发明各种实施方式中，所述载体可含有少量添加物，如提高溶解度、等渗性和化学稳定性的物质，例如缓冲剂和防腐剂。
当口服施用时，将通常采用本领域已知的常规设备和技术将抗氧化剂和/或其他试剂制成单位剂型，如片剂、扁囊剂、粉末剂、颗粒剂、珠、可咀嚼的锭剂、胶囊剂、液体、水性悬浮液或溶液、或类似剂型。这种制剂通常包含固体、半固体或液体载体。载体的例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、矿物油、可可脂、可可油、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、羰基、甲基纤维素、聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯、羟苯甲酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁等。
可通过压缩或模压抗氧化剂和/或其他试剂以及任选的一种或多种附加成分来制造片剂。可在合适的机器内压缩任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合的自由流动形式如粉末或颗粒形式的活性成分来制造压缩片。可在合适的机器内模压粉末状活性成分和用惰性液体稀释剂润湿的合适的载体来制造模压片。
在本发明各种实施方式中，抗氧化剂和/或其他试剂的施用也可采用控释技术。也可将抗氧化剂和/或其他试剂作为持续释放药物施用。为进一步提高持续释放效力，可将抗氧化剂和/或其他试剂与额外组分配制在一起，所述额外组分如植物油(例如大豆油、芝麻油、山茶油、蓖麻油、花生油、菜籽油)；中性脂肪酸甘油三酯；脂肪酸酯如油酸乙酯；聚硅氧烷衍生物；或者是水溶性高分子量化合物如透明质酸或其盐(重均分子量：约80,000-2,000,000)、羧甲基纤维素钠(重均分子量：约20,000-400,000)、羟丙基纤维素(2％水溶液中的粘度为：3-4,000cps)、蛋白质充填剂(重均分子量：约300,000)、聚乙二醇(重均分子量：约400-20,000)、聚氧化乙烯(重均分子量：约100,000-9,000,000)、羟丙甲基纤维素(1％水溶液中的粘度为：4-100,000cSt)、甲基纤维素(2％水溶液中的粘度为：15-8,000cSt)、聚乙烯醇(粘度：2-100cSt)、聚乙烯吡咯烷酮(重均分子量：25,000-1,200,000)。
或者，在本发明各种实施方式中，抗氧化剂和其他试剂可单独地或混合地掺入疏水聚合物中以在一段时间内控制释放。然后可将所述抗氧化剂和/或其他试剂模压成固体植入物或外用贴剂，它们适合在较长时间内提供有效浓度的抗氧化剂或其他试剂或这两种试剂而无需频繁地重复给药。这种控释薄膜是本领域熟知的。可使用的通常用于该目的的聚合物的其他例子包括不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物，后者可外敷或内服。某些水凝胶如聚(异丁烯酸羟乙酯)或聚(乙烯基醇)也是有用的，但只适用于释放周期比例如上述那些其他聚合物释放系统短的情况。
在本发明各种实施方式中，所述载体还可以是生物可降解的固体聚合物或者是具有适当时间释放特性和释放动力学的生物可降解聚合物的混合物。然后可将该抗氧化剂和/或其他试剂模压成固体植入物，它适合在较长时间内提供有效浓度的抗氧化剂和/或其他试剂而无需频繁地重复给药。所述抗氧化剂和/或其他试剂可采用本领域的一般技术人员已知的任何合适方式将其掺入生物可降解的聚合物或聚合物混合物，并可与生物可降解的聚合物形成均匀基质，或者可采取一定的方式包裹入聚合物，或者可被模压成固体植入物。
应理解，在本发明各种实施方式中，还包括其他递送所述抗氧化剂和/或其他试剂的方法。例如，如果该抗氧化剂和/或其他试剂属于蛋白质类型，则可通过能够在合适的靶细胞内表达的核酸或载体来单独地或混合地递送它们。例如，可通过能够在男性生殖道内的靶细胞中表达的病毒载体来递送它们。酶类抗氧化剂的例子包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶。
如本文之前的讨论，本发明还适用于减少男性生殖道和/或精液内自由基的产生。
在这点上，男性生殖道将被理解为包括附睾、阳茎、前列腺、精囊、睾丸、输精管和精液。
测定男性生殖道内自由基水平的方法是本领域已知的。例如，精子或精液白细胞的自由基产量可采用化学发光试验直接测定(描述于科巴雅诗(Kobayashi)等，(2001)JAndrol 22(4)：568-74)。或者，可采用测量精子脂膜自由基相关损伤的试验。例如，可采用TBARS试验(涉及测量作为精子膜氧化标记的丙醛)或LPO-586分光光度试验。这些方法描述于格蒙滋(Gomez)等，(1998)International Journal of Andrology21(2)：81-96和艾肯(Aitken)等，(1993)Molecular Reproduction and Development 35：302-315。
一实施方式中，所述自由基是由男性生殖道和/或精液中存在的白细胞和/或精子产生的。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。抑制白细胞细胞因子产生的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂的有效量，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的量，没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。这些试剂的合适浓度如本文之前的描述。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如，要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减少男性对象生殖道和/或精子内自由基产生的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减少男性生殖道和/或精液内自由基产生的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
另一实施方式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于减少男性对象生殖道和/或精子内自由基产生的药物中的应用。
合适的组合物如本文之前的描述，即OSMI和门尼维特(Menevit)制剂。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
如之前的描述，本发明还适用于降低男性对象生殖道内的白细胞活性和/或浓度。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种降低男性对象生殖道和/或精子内的白细胞活性和/或浓度的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
测定男性生殖道内白细胞的活性和/或浓度水平的方法是本领域已知的。例如，可采用过氧化物酶染色精液细胞载玻片或采用抗白细胞表面抗原如CD45的单克隆抗体(描述于汉科(Henkel)等，(2003)Andrologia 35(5)：309-314)。或者，可测量与精液内的氧化应激和白细胞活性相关的精液细胞因子如IL-6(描述于奈勒拉(Nallella)等，(2004)Urology 64(5)：1010-3)。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂以及提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。这些试剂的合适浓度如之前的描述。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如，要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种降低男性对象生殖道和/或精子内的白细胞活性和/或浓度的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种降低男性对象生殖道和/或精子内的白细胞活性和/或浓度的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
另一实施方式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于降低男性对象生殖道内白细胞的活性和/或浓度的药物中的应用。
合适的组合物如本文之前的描述，即OSMI和门尼维特制剂。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于降低生殖道内炎性介质的水平和/或产生，如降低男性对象生殖道内炎性细胞因子的水平和/或产生。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种降低男性对象生殖道和/或精子内炎性细胞因子的水平和/或产生的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
一实施方式中，所述炎性细胞因子是IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α和干扰素-γ中的一种或多种。
测定男性生殖道内炎性细胞因子水平的方法是本领域已知的，这种用于测定促炎性细胞因子如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α和干扰素-γ的ELISA试验描述于迪普德(Depuydt)等，(1996)J Andrology 17(6)：699-707，美加瓦(Maegawa)等，(2002).J ReprodImmunology 54：33-42，和奈勒拉(Nallella)等，(2004)Urology 64(5)：1010-3。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道白细胞内炎症的试剂和提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如本文之前的描述。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如，要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减少男性对象生殖道和/或精子内的炎性细胞因子产生的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减少男性对象生殖道和/或精子内的炎性细胞因子产生的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
另一实施方式中，本发明还提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于减少男性对象生殖道内炎性细胞因子产生的药物中的应用。
合适的组合物如本文之前的描述，即OSMI和门尼维特制剂。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于改善男性对象精子功能。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种改善男性对象精子功能的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
在这点上，术语“精子功能”是精子生理学的任何关键组成部分，包括朝卵母细胞的游动活力(运动性)、经历获能以穿透卵母细胞外层(透明带)以及与卵母细胞膜融合的能力、以及维持精子DNA完整性以在配子配合时形成有功能的精原核。
测定精子水平的方法是本领域已知的。例如，合适的方法详细描述于世界卫生组织(WHO)关于人类精液和精子-子宫颈粘液相互作用的实验室检查手册，第四版，剑桥大学出版社，1999。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂和提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如本文之前的描述。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如，要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种改善男性对象精子功能的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种改善男性对象精子功能的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
另一实施方式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于改善男性对象精子功能的药物中的应用。
合适的组合物如本文之前的描述，即OSMI和门尼维特制剂。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于提高男性对象精子活动力。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种提高男性对象精子活动力的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
测定精子活动力的方法是本领域已知的。例如，合适的方法详细描述于世界卫生组织(WHO)关于人类精液和精子-子宫颈粘液相互作用的实验室检查手册，第四版，剑桥大学出版社，1999。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂和提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂的有效量和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于施用的试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如本文之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如，要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种提高男性对象精子活动力的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种提高男性对象精子活动力的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
另一实施方式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于提高男性对象精子活动力的药物中的应用。
合适的组合物如本文之前的描述，即OSMI和门尼维特制剂。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于减轻对男性对象的精子携带的DNA的自由基损伤。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
测定对精子DNA活动力的损伤的方法是本领域已知的。例如，精子染色质结构试验(SCSA)、彗星和隧道试验(Comet and the Tunel assay)都可用来测定对精子DNA的损伤，这些试验描述于伊凡森(Evenson)等，(2002)J Andrology 23(1)：25-43和申(Shen)等，(2000)Free Radical Biol Med 28(4)：529-36。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂以及提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
一实施方式中，本发明的这种形式不包括施用提高睾丸浓度的试剂。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如，要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
一实施方式中，所述组合物不包含提高睾丸浓度的试剂。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂。
另一实施方式中，本发明还提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于减轻对男性对象精子DNA的自由基损伤的药物中的应用。
合适的组合物如本文之前的描述，即OSMI和门尼维特制剂。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于提高男性对象精子产量。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种提高男性对象精子产量的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
测定精子产量的方法是本领域已知的。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂和提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的有效量没有特殊限制，只要达到所需效果或治疗效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如本文之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如，要治疗的生育力降低的类型和程度、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种提高男性对象精子产量的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一种形式中，本发明提供了一种提高男性对象精子产量的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
在另一种形式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于提高男性对象精子产量的药物中的应用。
合适的组合物如之前所述，即OSMI和门尼维特制剂。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于提高通过用来自按照本发明处理的男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎的胚胎质量。
因此，在另一种形式中，本发明提供了一种提高通过用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的胚胎质量的方法，所述方法包括给对象施用以下制剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
在这点上，术语“胚胎质量”将被理解为是胚胎形成可存活妊娠的潜能的度量。胚胎形态学通常被认为是其质量的最佳指标。在胚胎形成的第2-3天，诸如胚胎内卵裂球的数目、它们之间的相对大小、胞质断裂程度以及细胞核形态等形态学特征都被认为是妊娠潜能的较佳指标(描述于瑞滋(Rienzi)等，(2005)Reproductive BiomedicineOnline 10(5)：669)。此外，从卵裂期(2-3天)发展到胚泡(第5天的胚胎)的能力也被认为是胚胎质量良好的指标(描述于伯瑞尼(Borini)等，(2005)Reproductive BiomedicineOnline 10(5)：653-658。
所述胚胎可以是通过自然受孕产生的胚胎或是通过诸如人工受精、体外受精、配子输卵管内移植(GIFT)、子宫内授精(IUI)、精子卵浆内注射技术(ICSI)、睾丸精子提取(TESE)和经皮附睾支精子抽取术(PESA)等辅助生殖技术产生的胚胎。产生胚胎的方法是本领域已知的。
本发明还提供了通过该方法产生的分离的胚胎以及由该胚胎得到的非人动物。
如此产生的具有提高的质量的胚胎还可能较好地抵抗冷冻和融解的影响。因此，本发明还可延伸至一种改善胚胎的深低温保藏的方法，所述胚胎是用分离自用有效量的抗氧化剂以及有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂处理的男性对象的精子受精卵母细胞而得到的。
胚胎可以是人类胚胎，或哺乳动物胚胎，如来自灵长类动物、家畜(例如马、母牛、绵羊、猪、羊)、伴侣动物(例如狗、猫)或实验室动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠)的胚胎。一实施方式中，所述胚胎是人类胚胎。
因此，应理解，本发明的这一形式可用于人类和动物以提高胚胎质量以便用于自然受孕目的和辅助生殖目的。
测定胚胎质量的方法是本领域已知的，并如之前的描述。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂以及提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要它具有所需的提高胚胎质量的效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种施用于男性对象以提高通过用该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎质量的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一种形式中，本发明提供了一种施用于男性对象以提高通过用该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎质量的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
在另一种形式中，本发明还提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在药物制备中的应用，将该药物施用于男性对象可提高通过用该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎的质量。
合适的组合物如之前所述，即OSMI和门尼维特制剂。
抗氧化剂的施用，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于改善通过用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的胚胎的发育。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种改善通过用来自男性对象的精子受精卵母细胞产生的胚胎的发育的方法，所述方法包括给对象施用以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
所述胚胎可以是通过自然受孕产生的胚胎或是通过诸如人工受精、体外受精、配子输卵管内移植(GIFT)、子宫内授精(IUI)、精子卵浆内注射技术(ICSI)、睾丸精子提取(TESE)和经皮附睾支精子抽取术(PESA)等辅助生殖技术产生的胚胎。通过辅助生殖技术产生胚胎的方法是本领域已知的。
本发明还提供了一种按照本发明的这一形式产生的分离的胚胎。
胚胎可以是人类胚胎，或哺乳动物胚胎，如来自灵长类动物、家畜(例如马、母牛、绵羊、猪、羊)、伴侣动物(例如狗、猫)或实验室动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠)的胚胎。一实施方式中，所述胚胎是人类胚胎。
因此，应理解，本发明的这一形式可用于人类和动物以改善胚胎发育以便用于自然受孕目的和辅助生殖目的。
评价胚胎发育的方法是本领域已知的，并如之前在胚胎质量相关内容中的讨论。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂以及提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要它具有所需的改善胚胎发育的效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一种形式中，本发明提供了一种施用于男性对象以改善通过用该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎的发育的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一种形式中，本发明提供了一种施用于男性对象以改善通过用该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎的发育的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
合适的组合物如之前所述，即OSMI和门尼维特制剂。
在另一种形式中，本发明还提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在药物制备中的应用，将该药物施用于男性对象可改善通过用该男性对象的精子受精卵母细胞而产生的胚胎的发育。
抗氧化剂的施用，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于降低对象中由于对该对象父亲精子DNA的自由基损伤而造成的DNA损伤的程度。
因此，在另一种形式中，本发明提供了一种降低对象中继承自该对象父亲的DNA损伤的程度的方法，所述DNA损伤是由于对该对象父亲精子DNA的自由基损伤造成的，该方法包括在所述对象受孕前给予该父亲以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明的这一形式可用于减轻男性对象后代的DNA损伤。所述后代可以是通过自然生殖或诸如人工受精、体外受精、配子输卵管内移植(GIFT)、子宫内授精(IUI)、精子卵浆内注射技术(ICSI)、睾丸精子提取(TESE)和经皮附睾支精子抽取术(PESA)等辅助生殖技术产生的。
应理解，本发明的这一形式可用于人类和动物以减轻后代的DNA损伤，其方法为在后代受孕前给对象施用各种试剂。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种降低男性对象后代的DNA损伤程度的方法，所述后代的DNA损伤是由于对该男性对象精子DNA的自由基损伤遗传造成的，该方法包括在后代受孕前给予男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
评价DNA损伤程度的方法是本领域已知的。例如，精子染色质结构试验(SCSA)、彗星和隧道试验都可用来测定对精子DNA的损伤，这些试验描述于伊凡森(Evenson)等，(2002)J Andrology 23(1)：25-43和申(Shen)等，(2000)Free Radical Biol Med 28(4)：529-36。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂以及提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要它具有所需效果即可，并将取决于所施用的试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如之前的描述。
对于减轻男性生殖道内炎症的试剂的有效量和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的有效量没有特殊限制，只要它具有所需效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
一实施方式中，本发明的这一形式不包括施用提高睾丸浓度的试剂。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种施用于男性对象以减轻该男性对象后代中由于对该男性对象精子DNA的自由基损伤而造成的DNA损伤的程度的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种施用于男性对象以减轻该男性对象后代中由于对该男性对象精子DNA的自由基损伤而造成的DNA损伤的程度的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
合适的组合物如之前所述，即OSMI和门尼维特制剂。
另一实施方式中，本发明还提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在的药物制备中的应用，将该药物施用于男性对象可减轻该男性对象后代中由于对该男性对象精子DNA的自由基损伤而造成的DNA损伤的程度。
抗氧化剂的施用以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或施用提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于预防在对象中发生的与该对象父亲的精子DNA自由基损伤相关的疾病或症状。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种预防对象的疾病或症状的方法，所述疾病或症状与继承自该对象父亲的由于对精子DNA的自由基损伤造成的DNA损伤有关，该方法包括在所述对象受孕前给予该对象的父亲以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
本发明的这一实施方式可用于预防男性对象后代中的疾病或症状。对父亲精子的DNA损伤可能被后代继承，这种DNA损伤(前合子遗传损伤)可能最终导致后代中发生疾病或症状，或者至少对疾病或症状的发生有贡献。因此需要在后代受孕前对父亲进行治疗。
应理解，本发明的这一实施方式还可用于预防人类或动物的疾病。与对对象父亲精子DNA的自由基损伤相关的疾病和症状的例子包括各种类型的癌症，如急性淋巴细胞型白血病。
一实施方式中，所述疾病或症状是幼年期癌症，如在15岁之前发作的幼年期癌症。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂和提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要它具有所需效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种施用于男性对象以预防该男性对象后代中发生的疾病或症状的组合产品，所述后代中的疾病或症状与对该男性对象精子DNA的自由基损伤相关，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种施用于对象的父亲以预防该对象的疾病或症状的组合物，所述疾病或症状与继承自该对象父亲的由于对精子DNA的自由基损伤而造成的DNA损伤相关，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
合适的组合物如之前所述，即OSMI和门尼维特制剂。
另一实施方式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在的药物制备中的应用，将该药物施用于男性对象可预防该男性对象后代中发生的疾病或症状，所述疾病或症状与对该男性对象精子DNA的自由基损伤相关。
抗氧化剂的施用，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
本发明还适用于提高男性对象生育力。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种提高男性对象生育力的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
应理解，该方法还可用于治疗男性对象的不育症。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种治疗男性对象不育的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
应理解，该实施方式可用于人类和动物以提高生育力。此外，生育力的改善涉及在体外或体内受精卵母细胞的改进。
评价男性生育力的方法是本领域已知的。常规IVF(非ICSI)是一种评价精子在体外受精卵母细胞的能力的极好试验。正常受精率为60-70％，该比例较低说明精子或卵母细胞功能有问题。其他检测精子-卵母细胞受精能力的体外试验包括精子-透明带(ZP)接合试验和ZP-诱导的顶体反应试验(刘(Liu de)等，(2004)Fert Steril 82(5)：1251-630)。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂以及提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要它具有所需效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，在另一种形式中，本发明提供了一种施用于男性对象以提高生育力的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
应理解，该组合产品也可用于治疗男性对象的不育症。
一实施方式中，所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂被作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种提高男性对象生育力的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
应理解，该组合物也可用于治疗男性对象的不育症。
因此，在另一实施方式中，本发明提供了一种治疗男性对象不育的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
合适的组合物如之前所述，即OSMI和门尼维特制剂。
另一实施方式中，本发明提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于提高生育力和/或治疗男性对象不育的药物中的应用。
抗氧化剂的施用，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
已知施用抗氧化剂以及施用减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂可能适用于提高男性对象的睾酮水平。
因此，本发明还提供了一种提高男性对象睾酮浓度的方法，该方法包括给予该男性对象以下试剂的步骤：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
合适的抗氧化剂的例子如本文之前的描述。减轻男性生殖道内炎症的试剂以及提高睾丸睾酮浓度的试剂的例子如本文之前的描述。
对于抗氧化剂和其他试剂的有效量没有特殊限制，只要它具有所需效果即可，并将取决于所施用的特定试剂。抗氧化剂和其他试剂的合适浓度如之前的描述。
所述抗氧化剂，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂，可单独地或组合地施用于对象。
可适当选择抗氧化剂和其他试剂的有效量，这取决于，例如、对象的年龄和体重、施药频率、以及其他活性剂的存在情况。
因此，本发明还提供了一种施用于男性对象以提高该男性对象睾酮浓度的组合产品，该组合产品包含以下组分：
抗氧化剂；和
减轻男性生殖道内炎症的试剂；和/或
提高睾丸睾酮浓度的试剂；
其中，所述组合产品的组分是不相同的，且所述组分为给对象单独施用的形式，或为给对象共施用一种或多种组分的形式。
所述抗氧化剂和减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂可作为单一制剂形式的组合物施用于对象。
因此，本发明还提供了一种施用于男性对象以提高该男性对象睾酮浓度的组合物，该组合物包含：
(i)有效量的抗氧化剂；和
(ii)有效量的减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或有效量的提高睾丸睾酮浓度的试剂。
适合提高睾酮浓度的组合物如之前所述，即OSMI和门尼维特制剂。
本发明还提供了抗氧化剂与减轻男性生殖道内炎症和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的组合在制备用于施用于男性对象以提高该男性对象睾酮浓度的药物中的应用。
抗氧化剂的施用，以及减轻男性生殖道内炎症的试剂和/或提高睾丸睾酮浓度的试剂的施用如本文之前的描述。
优选实施方式的描述
现在将描述具体描述上述本发明一般原则的实验。然而，应理解，以下描述并非要限制以上描述的通用性。
实施例1
在一组已知有自由基损伤的男性对象中检验OSMI营养素的试验
进行一次小规模(n＝17)的试点研究以检验OSMI营养素在一组已知有自由基损伤的男性中的功效。采用TBARS试验筛选不育男性以得到自由基损伤患者，该试验描述于格蒙滋(Gomez)等，(1998)International Journal of Andrology 21(2)：81-96)。发现丙二醛(MDA)水平显著升高的那些男性被招入该试验，丙二醛水平是精子膜氧化的标记。所有患者接受活性OSMI药物(即，没有安慰剂)为期12周。
OSMI制剂如下：
维生素E(醋酸d-α-生育酚)，400I.U.
维生素C(抗坏血酸或其盐)100mg
番茄红素 6mg
辅酶Q10 40mg
硒 26μg
锌 25mg
大蒜油 1000mg
该制剂以胶囊提供，每日口服1颗。
在试验期间分析了精子数、运动性、膜完整性和DNA损伤的变化(给药时、6周、12周)。此外，还监测了MDA水平的改变以检测作为自由基损伤结果的精子膜脂过氧化反应的任何改变。
采用常规实验室技术进行评估以评价精子数和活动力，这些技术详细描述于世界卫生组织(WHO)关于人类精液和精子-子宫颈粘液相互作用的实验室检查手册，第四版，剑桥大学出版社，1999。
精子活力(膜完整性)通过HOST试验评估，该试验测量具有完整精子膜的精子的比例，其详细描述于世界卫生组织(WHO)关于人类精液和精子-子宫颈粘液相互作用的实验室检查手册，第四版，剑桥大学出版社，1999。
采用原位细胞死亡检测试剂盒(In-Situ Cell Death Detection Kit)，Fluorescien(罗氏诊断试剂有限公司(Roche Diagnostics))，通过DNA断裂(TUNEL)试验来评估对精子DNA的损伤，如拉巧德(Lauchaud)等，2004，Hum Reprod 19(3)：607-10所述。简言之，将用90％的珀可(Percoll)分级并洗涤的精子涂在显微镜载玻片上，用4％的低聚甲醛固定，渗透(0.1％triton X，0.1％柠檬酸钠)，并在TUNEL孵育缓冲液和TdT酶末端转移酶中于37℃孵育1小时，用PBS充分洗涤，并用10μg/ml核溴化丙啶复染。
然后用尼康(Nikon)TE2000E落射荧光显微镜处理载玻片，并用罗珀(Roper)CSCCD照相机成像，该照相机上装有465-495nm FITC激发滤片、515-555nm屏障滤片、505nm分色镜(以检测凋亡通道荧光)，以及540-625nmPI激发滤片、605-655nm屏障滤片和565nm分色镜。
随机分析了总共约200个以上的细胞，捕获了多幅图像，将TUNEL绿色凋亡核荧光与红色核PI荧光绘制在一张图上，用Scanalytics IP实验室软件分别量化重叠位置的评分。计算并报道了DNA断裂群体中精子的最终平均比例，该值被称为TUNEL％，生成的平均内部试验SEM＜3。
通过TBARS试验评估精子脂质过氧化反应，该试验描述于格蒙滋(Gomez)等，(1998)International Journal of Andrology 21(2)：81-96)。
经过12周的标记，该研究的结果如下：
1.活动精子数翻番(25.6百万到53.6百万)，如图1所示。
2.如HOST试验所评估的，精子活力显著提高(58％对比67％)。自由基损伤水平越高则HOST比例越低。数据示于图2。
3.精子DNA损伤显著降低(28.8％到19.8％)，如图3所示。
4.MDA降低，这反映了自由基对精子膜脂过氧化反应的损伤减轻，如图4所示。
值得注意的是，在试验中点(6周)阶段精子参数只有轻微改善，需要12周才显示出全部的有益效果。
实施例2
OSMI营养素对妊娠和IVF胚胎质量的影响
妊娠和IVF胚胎质量不是初步OSMI试验的主要目的。然而，一些患者无法自发地或在IVF帮助下怀孕。之前已经接受过IVF以及正在接受OSMI治疗的那些患者提供了OSMI营养素如何影响胚胎质量的测量值。
组A之前已经接受过多轮IVF，但胚胎质量较差(在前-OSMI IVF循环中8个胚胎中没有一个形成胚泡)。然而，当采用OSMI营养素时9个胚胎中有3个发展成胚泡，且女性伴侣随后怀孕。胚胎存活3天以上要求有良好的胚胎DNA质量，这使得胚泡发育称为精子DNA健康的良好指标。
实施例3
随机对照试验研究了IVF治疗期间抗氧化剂药物(门尼维特(Menevit))对精子功能和妊娠结局的影响
精子功能受损占所有不育事件中的一半。预计每20名男性中有1名精子功能受损，预计美国目前有120万男性正经受男性相关的不育症。传统的男性不育症治疗不试图改善不育的根本原因，而只是采用“医学”技术如子宫内授精或IVF-ICSI来绕开精子功能的缺陷。尽管这两种技术在大部分患者中是成功的，但在其他伴侣中它们根本无效或者功效非常有效。可能在多数情况下，尽管进行了ART治疗，精子DNA断裂仍旧会造成妊娠结局差。能够预防精子DNA断裂的治疗有可能提高自然妊娠率和ART相关妊娠率。
还未充分阐明精子DNA损伤的来源。为提供减少精子断裂的药学理论途径，开发了门尼维特营养素。门尼维特的组分列于表1。设计了目前预期的随机安慰剂-对照试验来测试该假说。
表1.
                                          
研究的胶囊组分
                                           
1.门尼维特活性版囊
番茄红素 6mg
维生素E 400I.U.
维生素C 100mg
锌 25mg
硒 26μgm
叶酸盐 0.5mg
大蒜 1000mg
棕榈油(运载体)
2.安慰剂胶囊
棕榈油
                                   
材料和方法
从在瑞普姆德(Repromed)的阿德莱德大学生殖医学院(The University of Adelaide’sReproductive Medicine Unit)接受IVF治疗的那些伴侣中募集该研究的参与者。合格的参与男性必需具有可能与氧化相关的精子损伤，这可通过活动力弱(艾肯(Aitken)等，1993)或他们的起始精液样品的HOST试验结果差来显示，是吸烟者(萨拉哈(Saleh)等，2002)或者患有精索静脉曲张(帕斯科落托(Pasqualotto)等，2000)和显著的精子DNA断裂(在TUNEL试验中＞25％的精子DNA断裂)。此外，这些男性的伴侣已经在募集的3个月内接受一轮受激IVF并具有正常的卵巢储量。我们不希望女性因素如卵巢储量差来影响试验结果，因此我们排除了所有40岁或以上的女性，这些女性的预先IVF反应差(＜5个卵母细胞)或滤泡早期FSH结果升高(＞10iu/l)。募集活动开始于2004年12月，而该试验直到2006年4月才结束。在开始之前，该研究得到了妇女和儿童医院研究伦理学委员会的许可。
收集所有患者的人口统计学、生育力和妊娠史、以及预先IVF治疗结果的信息并列于表2。
将合格的登记者以2∶1的比例随机分成两组以接受活性门尼维特营养素或安慰剂。这种不平均的分配被认为是必要的，因为预试验的患者测量结果显示，如果参与者有50％的机会接受活性抗氧化剂治疗，则许多人将自发服用过量反抗氧化剂(counter anti-oxidant)。如果活性剂与安慰剂的比例为2∶1则认为这一比例将降低。随机化过程由澳大利亚拜尔消费者护理公司(Bayer Consumer Care Australia)通过计算机分6批产生，并将适当编号的胶囊药瓶运送到临床地点，任何临床参与者都不知道治疗顺序。在患者符合参与条件之后给他们分配下一个治疗包编号(1-60)。活性门尼维特和安慰剂的外观和味道是相同的。
让男性参与者每天在饭后服用1颗胶囊，3个月后对他们的伴侣进行IVF卵母细胞回收。如果IVF循环延迟则为所有参与者提供为期4个月的药物治疗。然后让男性在第6和12周时提供精液样品，做好标记以监测精子功能的改变。这些样品是在节欲3-5天后通过手淫产生的并按照WHO的指导方针分析其精子数、运动性和形态学。此外，按照WHO精液分析手册中列出的方法进行低渗溶胀试验(HOST)来测量精子膜完整性。不添加冷冻保护剂，将剩余样品冷冻以供随后分析精子DNA断裂和氧化损伤。
采用显微TUNEL试验(卢普斯(Lopes)等，(1998)Hum Reprod.13(4)：896-900)评价精子DNA断裂。精子是采用密度梯度离心(2000rpm，20分钟)通过45％/90％珀可密度梯度获得的，在聚赖氨酸载玻片上涂片，空气干燥并用4％低聚甲醛的PBS溶液固定。然后用0.5％Triton X-100对精子进行渗透，用PBS洗涤，然后按照制造商的说明(德国曼海罗氏公司(Roche，Mannhein，Germany))与末端脱氧核糖核苷酸转移酶-连接的dUTP切口末端标记(TUNEL)一起孵育。再次洗涤涂片并用碘化丙锭染色精子核，然后进行荧光显微评估。对精液样品的密度梯度离心是除去精液碎片的关键步骤，精液碎片具有自发荧光活性因而会使显微TUNEL评价发生错误。采用图像分析软件评价每个平板上总共200个精子，根据TUNEL阳性核(绿色)数目占精子核(红色)总数的比例计算精子DNA断裂的百分比。将精子与3iu DNA酶一起孵育然后与TUNEL混合物一起孵育作为阳性对照，作为阴性对照时反应中省略了末端转移酶。
按照格蒙滋(Gomez)等，(1998)Int J Androl.21(2)：81-94的方法并用购自法国生物技术公司(Bioxytech SA，Bonneuil sur Marne，France)的试剂进行LPO-586试验以了解精子脂质过氧化反应的。LPO-586试验是基于显色试剂(N-甲基-2-苯基吲哚(phenytindole)与脂质过氧化反应副产物丙醛和4-羟烯(4-hydroxyalkenal)反应可生成在560nm有最大吸收的稳定的生色团。许多精子样品具有低的基线脂质过氧化反应水平，用0.04M硫酸铁离子型促进剂可提高试验的灵敏度。将精子浓度标准化成1×106/ml，但净样品内的精子数小于1×106/ml时除外。这里采用数学换算来计算每毫升1×106个精子的脂质过氧化反应水平。
IVF过程包括一个在前一周期的黄体中期开始的用GnRH激动剂(醋酸纳弗瑞林(naferilin acetate)或醋酸亮丙瑞林)进行长期下调的典型过程。从受激循环的第2天开始给予妇女150-300iu rFSH(沃干诺公司(Organon)的普瑞跟(Puregon)或丝罗诺公司(Serono)的枸诺弗(Gonal-F))，剂量取决于她们的年龄和之前的IVF反应。通过盆骨超声和血清雌二醇记录卵巢反应，当至少两个滤泡的大小＞18mm并有合适的雌二醇反应时给予5000IU hCG(沃干诺公司的绒膜激素(Pregnyl))。给予hCG 36小时后在镇静状态下进行经阴道卵母细胞回收，然后进行标准IVF或ICSI受精过程。根据传统的形态标准(卵裂球形状、断裂的数目和百分比)将分裂期的胚胎分级，并在收集卵母细胞后的第2或3天在超声制导下了解返回子宫的情况。在第3天将剩余的质量良好的胚胎冷冻，将所有质量差的胚胎培养至第6天，然后决定是否丢弃。少数患者在该试验中采用选择性胚泡培养和移植。用科林酮(Crinone)8％阴道孕酮(丝罗诺公司)并在回收卵母细胞后的第6天注射一次500IU的hCG以对所有患者进行黄体支持。回收卵母细胞16天后，在不存在月经期的情况下进行血清妊娠检测。在怀孕8周时用7.5MHz的东芝经阴道扫描仪进行孕早期妊娠扫描。
通过问卷评价对象的顺应性和副作用监测，该问卷由男性伴侣在卵母细胞回收单日做出。所有参与者被问及，如果有的话，他们错过药物治疗的频率以及他们在治疗过程中是否发现任何副作用。基于“治疗意图”进行数据熟悉，不考虑男性药物治疗的顺应性。
该试验的主要结果为每轮IVF产生的质量良好胚胎的数目，这是妊娠可能性的合理替代标志。之前在我们实验室得到的观察结果说明，具有高DNA损伤的男性的卵裂期的胚胎质量下降。在我们的IVF单元中平均而言，40岁或40岁以下的女性每个IVF周期产生3.6个质量良好的胚胎。小规模观察说明，具有高DNA断裂水平的男性仅产生2个质量良好的胚胎。然后进行幂分析(Power analysis)以检测每开始一个IVF循环最少增加一个质量良好胚胎的情况(从2个到3个质量良好的胚胎)。包含60轮IVF的试验将能检测组间的显著差异，假设幂为80％，以5％的显著性水平进行双边测试(two sided testing)，IVF遗漏率(drop-out rate)为10％。次要结果包括精子功能(数量、运动性、形态、HOST结果、精子DNA断裂、精子脂质过氧化反应)和IVF结果(受精率、胚胎质量、妊娠率)。
用市售软件(社会科学统计软件包(Statistical Package for the Social sciences)11.5.1；SPSS，芝加哥，伊利诺伊州)进行数据分析。用非配对连续变量t检验和分类变量χ方检验分析各组之间的基线人口统计学和生育力相关变量。通过配对t检验分析试验期间患者精子功能的差异。通过χ方检验分析胚胎质量和妊娠结局的差异。p值＜0.05被认为是显著的。
结果
总共筛选出82名男性参加该试验，排除的22人是由于精子DNA损伤水平低或无氧化应激证据。6名研究参与者由于决定从IVF治疗中退出而未完成该试验(2名活性物质，4名安慰剂)。在这些退出者中有5对的男性继续服用他们的试验药物，并产生精液样品供研究分析。活性药物分支的1名参与者由于ICSI时卵母细胞直接溶胞而无胚胎存活供转移因此无法进行胚胎转移。该妇女在IVF治疗时正采取严格的热量限制饮食。由于她在结束这种饮食后在下一轮中怀孕(期间她的丈夫仍旧服用抗氧化剂，但被排除在试验之外)，严格限制饮食造成的代谢变化而非抗氧化剂治疗造成了卵母细胞溶胞。另一个活性药物分支的参与者由于严重的卵巢过度刺激而无法提供新鲜的胚胎供转移。没有参与者由于在试验结束前自发受孕而退出研究。然而，活性门尼维特药物分支的2名参与者在试验结束后的1个月内确实自发怀孕(数据未包括在研究分析中)。
试验参与者的基线特征列于表2。
表2.参与者的人口统计学和基线IVF特征


注意：数值表示为平均值±SD。
就诸如母亲/父亲年龄、既往生殖史和不育病因学等重要的基线预后特征而言，活性组和安慰剂组之间没有任何显著差异。此外，当考虑预先IVF循环数、预先IVF循环中收集的卵母细胞数和所得胚胎质量时，各组的预先IVF经历无显著差异(表2)。这说明随机化过程成功地将重要的混淆变量在两组之间平均分配。
活性物质(门尼维特)治疗组的妊娠结局明显好于安慰剂组(表3)。
表3.研究组的妊娠结局

a.植入率，即在孕早期扫描发现临床妊娠(胎囊)时得到的转移的胚胎的百分比
b.存活，即在孕早期扫描发现存活胎心时得到的转移的胚胎的百分比。
门尼维特植入率几乎是安慰剂的两倍(46.2％和24％，p＝0.06)，怀孕13周时存活胎心的差异(38.5％和16％)也是统计学显著的。在瑞普姆德(Repromed)，38岁以下妇女的基线植入率(2005，n＝709次转移过程)为35％，仅7％具有两个或多个胎囊。这种低的多妊娠率是由于在IVF的前2轮中对36岁以下女性几乎普遍采用单胚胎移植的原则。在我们的研究中，植入率明显高于一般IVF群体，在孕早期扫描中发现门尼维特组有4名女性具有双胞胎囊(25个胎囊中有8个胚胎，比例为32％)。这种高的双胞胎囊率并非是由于每轮中转移的平均胚胎数较多。在活性门尼维特组中转移的胚胎平均数仅为1.39，这与每次给38岁以下女性转移1.3个胚胎的瑞普姆德(Repromed)平均数没有显著差异。因此，与该研究安慰剂分支的胚胎或常规的非试验IVF群体相比，活性门尼维特组中转移的胚胎可能具有较高的植入潜能。
还不确定为什么与安慰剂组相比门尼维特组的胚胎具有较高的植入潜能，因为他们在卵裂期胚胎质量上没有可分辨的差异(表4)。如果持续培养到胚泡便可检测到胚胎质量的差异。但这种分析是不可能的，因为胚泡培养仅用于小比例的试验患者。
表4.研究组的IVF循环结果

注意：数据为平均值±SD
分析门尼维特营养素对常规精子参数的影响显示它对精子浓度、运动性或形态无显著影响(表5)。此外，检测脂质过氧化反应损伤的LPO-586试验或精子膜完整性试验(HOST)都无法检测出对精子膜的自由基损伤在两个研究组之间有任何显著差异。安慰剂组和门尼维特组的HOST结果都显示出非常小但统计学上显著的随时间的改进。这些差异在两个研究组之间是相等的，且绝对值都非常小。由于低HOST结果通常被用作是包含物(精子自由基损伤的证据)的标准，因此HOST评分的这种小的改进似乎反映了统计学上“对平均值的回归”而非证实的生物效应。
试验期间精子DNA断裂的变化列于表5和6。
表5.门尼维特组的精子参数

注意：数据为平均值±SD
a基线值与治疗后值比较的p≤0.05(成对t检验)
表6.安慰剂组的精子参数

注意：数据为平均值±SD
a基线值与治疗后值比较的p≤0.05(成对t检验)
有趣的是，注意到活性门尼维特组和安慰剂组的精子DNA损伤都降低了，且这两组之间没有显著差异。这两组中精子DNA断裂都降低说明，精子DNA的任何改进都是由于统计学上对平均值的回归而非证实的生物反应。
总共59名男性完成了最少12周“药物治疗”，并有55人完成了副作用问卷(回收率为93％)。整个试验期间服药的顺应性极好，有96％的参与者每周少服的胶囊数小于1。没有1名服用安慰剂的男性观察到任何副作用。在门尼维特组中，37名男性中有3人(8％)返回的问卷中提到有温和的副作用。其中2人报告的副作用为温和的胃食管回流，其他人为便秘。没有参与者觉得副作用足够显著而决定退出试验。
讨论
就我们所知，该研究是首次显示了抗氧化剂制品能提到IVF治疗期间的妊娠率的随机对照试验(RCT)。
该试验中妊娠率提高的幅度远超过我们的预期。当设计该研究时我们未选择妊娠作为主要结果，因为幂计算提示它需要进行非常大规模的研究，通常最少为25％临床改进。相反，卵裂期的胚胎质量被用作妊娠潜能改善的标志。卵裂期的胚胎质量与妊娠潜能相关，前期研究已显示精子DNA损伤程度高的男性会使卵裂期的胚胎形态学不如DNA损伤水平低的那些男性。我们的研究无法检测抗氧化剂药物治疗对于卵裂期的胚胎质量有任何显著影响，这可以帮助解释观察到的妊娠率的改善。相比卵裂期评价，胚泡培养物可能是精子DNA完整性的较佳指标。不幸的是，在我们的试验中我们无法分析胚泡发育率，因为对40岁以下女性进行长期培养不是我们研究院的常规临床实践。
门尼维特抗氧化剂治疗对精子数、运动性或形态没有显著影响。本研究也未证实与安慰剂相比抗氧化剂具有减轻精子DNA损伤的能力。
当补充抗氧化剂后造成的妊娠结局的改进显然与精子DNA断裂的改善无关时，我们分析了12周的DNA断裂结果和妊娠结局之间的相关性。我们吃惊地发现，整个12周的TUNEL结果和妊娠结局(可存活妊娠＝36％+10％DNA断裂，不可存活妊娠＝31％+13％)之间绝对没有关联。这是未曾料到的，因为在我们的实验室进行的分析用于受精卵母细胞的精液样品中精子DNA断裂的前期工作显示，TUNEL结果和妊娠结局之间有显著的负相关。在该研究中，我们未对用于受精的精液样品进行精子DNA断裂研究，因为我们觉得该研究试验将耗费大量样品，仅留下少量供临床使用。因为在产生供IVF使用的精液样品之前平均有3周的抗氧化剂治疗，因此在这种后期临床精子样品中精子DNA可能得到改善，从而解释了妊娠率的提高。
当试图解释精子DNA断裂水平和妊娠结局时，最后的两个问题是密度梯度“标准化”和IVF-ICSI“冰山现象”(麦克罗夫(Makhlouf)和涅德伯格(Niederberger)(2006)JAndrol.27(3)：316-23)。该研究中的所有患者的受精用精子都采用密度梯度离心制备。这种类型的精子加工过程有“标准化效应”，因为用于受精的最高密度层中的精子质量通常非常好，但在梯度离心前整个常规精子群体的质量则不一定。两项研究显示，密度梯度离心能使TUNEL分析中精子DNA的完整性提高2-4倍(托姆林森(Tomlinson)等，(2001)Hum Reprod.16(10)：2160-5)；莫莱尔(Morrell)等，(2004)J AssistReprod Genet.21(6)：217-22)。因此有可能抗氧化剂治疗确实提高了净样品的精子DNA质量，但在采用密度梯度离心“标准化”之后这种差异就不再出现了。最后，在ICSI治疗期间，仅一小部分质量最好的精子被用于受精，而剩余的数百万精子都被遗弃了(“冰山现象”)。因此有可能抗氧化剂治疗可能提高了这些基线损伤程度最低的质量最好的精子的DNA质量，但由于对剩余99.9％的未用于受精的精子的DNA损伤没有显著影响，因此这种改进在整体分析中丢失了。
该研究是首次双盲安慰剂对照随机研究，它显示抗氧化剂营养素(门尼维特)能够提高IVF治疗期间的妊娠率。其作用机制目前还不清楚。然而，我们认为在之前讨论的诸多可能原因中，最有可能是由对精子DNA损伤的改善引起的，尽管我们无法检测这种改善。采用更加灵敏的试验来检测门尼维特营养素功效的进一步的研究将有希望揭示妊娠率提高的机制。我们也承认，我们对60名患者进行的研究只是一种相对小规模的研究，且观察到的妊娠率的提高可能是“统计侥幸行为(statisticalfluke)”(1类统计误差)。然而，在我们的接受抗氧化剂治疗的长期IVF患者中出现的一些“奇迹”妊娠说明，所观察到的妊娠率的显著提高是真实的生物现象而非统计异常。
应通过三个原则性标准来评价任何新的药物：临床功效、费用和副作用情况。该研究显示，门尼维特营养素可有效提高IVF治疗期间的妊娠率且未改变基本的精子参数。最后，门尼维特营养素无任何严重副作用，只有小部分患者出现轻微的肠胃道副作用。
最后，应理解，本发明所述方法和组合物的各种修饰和变化对于精通本领域的技术人员而言将是显而易见的且不背离本发明的范围和精神。尽管已经联系具体的优选实施方式描述了本发明，但应理解如权利要求所要求的本发明不应过分局限于这些具体的实施方式。实际上，对所述执行本发明的模式的各种修饰对于精通本领域的技术人员是显而易见的且包括在本发明的范围之内。