一种连翘酯苷A制备方法.pdf

一种连翘酯苷A制备方法，采用连翘壳为原料，用去离子水或含水醇作为提取溶剂，依次通过初步分离柱和精制柱，用去离子水和含水醇作为洗脱剂，冷冻干燥得连翘酯苷A，含量可达85％～99％。本发明所用材料便宜，溶剂安全无毒，工艺简单；对连翘的利用率高，提取率为0.5％～2％；成本低，适合工业化生产。

权利要求书
1.  一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)提取：取干燥连翘壳或叶，用是原材料量20～40倍0～70％的乙醇水溶液提取两次，每次提取30～90min，提取温度60～90℃，将两次所得提取液合并，过滤，滤液60℃减压浓缩至比重为1.05～1.10的水提液；
(2)分离：上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1∶1～5，先用水淋洗2～4个柱体积至淋洗呈棕黄色，再用20％～60％乙醇淋洗3～5个柱体积，收集醇淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15得初步分离浓缩液；
(3)精制：将上述初步分离浓缩液用反相层析材料柱层析，上样量为0.5～2∶1，先用0％～10％乙醇淋洗2～4个柱体积至淋洗呈淡黄色，再用20％～50％乙醇淋洗2～5个柱体积，收集醇淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.2得精制浓缩液；
(4)冷冻干燥：上述精制浓缩液经冷冻干燥得连翘酯苷A产品。

2.  如权利要求1所述的一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于步骤(2)中所述大孔吸附树脂是AB-8或H101。

3.  如权利要求1所述的一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于步骤(2)中所述氢键键合型柱层析材料是聚酰胺。

4.  如权利要求1所述的一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于步骤(3)中所述柱材料是反相层析材料MDS。

说明书一种连翘酯苷A制备方法
技术领域：
本发明涉及从药用植物中提取有效成分的方法，具体是一种连翘酯苷A的制备方法。
背景技术：
连翘为木犀科连翘落叶灌木，果实入药，具有清热解毒、散结消肿、抗菌及抑制真菌等功能。连翘酯苷A为其主要成分，它不仅对金黄色葡萄球菌等十一种致病菌有极强的抑制作用，而且具有抑制磷酸二酯酶及抑制真菌作用。最近我们研究又发现它对活性氧具有很强的抑制作用。鉴于它具有多种多样的生物活性功能，连翘酯苷A在医药和食品领域作为天然药物、天然防腐剂及天然抗氧化剂有广泛的应用前景。至目前为止，尚未见有关从药用植物连翘中大量提取高纯度连翘酯苷A的报道，基于以上原因，本发明对连翘酯苷A的提取工艺进行了详细研究。
当前，连翘酯苷A的提取分离方法，国内外均有文献报道，采用的方法为：直接用水提取或水提物再用有机溶剂提取，提取物经硅胶制备薄层析或柱层析分离得到产物。如日本学者Sansel(Chem.Pharm.Bull，1982，32(12)，4548-4553)从连翘中提取连翘酯苷A采用的方法是首先用水提取连翘，水提物再用甲醇提取，甲醇提取物用硅胶柱层析分离，以不同比例的甲醇、氯仿进行反复梯度淋洗，分离得连翘酯苷A产物。梁文藻等(药物分析杂志，1986，6(5)，263-266)从连翘中提取连翘酯苷A产物是采用化学分离方法，然后用制备性薄层板进行纯化，最后得到纯品。上述提取方法效率低、大量使用了有毒有机溶剂，并且所用分离材料也不易再生重复使用，因而不能移植放大为工业化生产。2006年我国学者连续申请了“从连翘提取物中纯化连翘酯苷A”的三项中国专利(200610027024.1、200610027036.4、200610027037.9)，该方法适用于小量样品的制备，使用的分离材料昂贵。2004年本研究小组获得了有关利用大孔吸附树脂分离、纯化连翘酯苷的专利(ZL 01122779.6)，该专利适合于工业化大量制备连翘酯苷，但所得产物中连翘酯苷的含量仅可达60％左右。因此，在原有专利的研究基础上，本发明采用两次不同柱层析填料的柱层析，冷冻干燥，获得了纯度为85％～99％的连翘酯苷A产品。
发明内容
本发明的目的是提供一种材料便宜，工艺简单，回收率高，纯度高，适合工业化生产的连翘酯苷A的制备方法。
本发明提供的一种连翘酯苷A的制备方法，包括如下步骤：
(1)提取：取干燥连翘壳或叶，用是原材料量20～40倍0～70％的乙醇水溶液提取两次，每次提取30～90min，提取温度60～90℃，将两次所得提取液合并，过滤，滤液60℃减压浓缩至比重为1.05～1.10的水提液；
(2)分离：上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1∶1～5，先用水淋洗2～4个柱体积至淋洗呈棕黄色，再用20％～60％乙醇淋洗3～5个柱体积，收集醇淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15得初步分离浓缩液；
(3)精制：将上述初步分离浓缩液用反相层析材料柱层析，上样量为0.5～2∶1，先用0％～10％乙醇淋洗2～4个柱体积至淋洗呈淡黄色，再用20％～50％乙醇淋洗2～5个柱体积，收集醇淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.2得精制浓缩液；
(4)冷冻干燥：上述精制浓缩液经冷冻干燥得连翘酯苷A产品。
用HPLC测定所得产品的连翘酯苷A的含量，连翘酯苷A含量可达85％～99％。
步骤(2)中所述柱材料选用的大孔吸附树脂可以是AB-8或H101；氢键键合型柱层析材料可以是聚酰胺。初步分离可有效去除大量杂质，为下一步柱层析得到高纯度产品奠定基础。
步骤(3)中所述柱材料可选用反相层析材料MDS；MDS可再生重复利用，如用95％乙醇淋洗柱体即可使材料再生。
步骤(4)中采用冷冻干燥可防止连翘酯苷A受热变化。
含量测定方法用HPLC测定(按外标法测定)。HPLC色谱条件为：色谱柱为ODS柱；流动相为甲醇(含1％四氢呋喃)∶水(含0.01mol/L磷酸二氢钾，用磷酸调pH至3.2)＝36.5∶63.5；流速：1ml/min；检测波长：332nm；柱温：25℃。
本发明具有如下优点：
(1)本发明精制工艺简单，提取效率高。按连翘酯苷A不同用途对纯度的要求，纯度可达85％～99％，提取率可达0.5％～2％。
(2)本发明使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染；
(3)本发明使用分离精制材料便宜，且易于洗脱再生，可多次利用；
总之，本发明连翘酯苷A的制备方法，不仅生产成本低、工艺简单、无污染，而且所得连翘酯苷A的收率高、纯度高，适合工业化生产。
具体实施方式：
实施例1
取400g干燥连翘壳，用8Kg 50％的乙醇溶液提取两次，提取温度60℃，提取时间60min，合并提取液，过滤，滤液60℃减压浓缩至约比重为1.08的水提液；水提液上聚酰胺柱分离(径高比为1∶15)，上样量为1∶5。先用去离子水淋洗至流出液为棕黄色时，改用30％乙醇淋洗3倍柱体积，收集30％乙醇淋洗液，减压浓缩至比重为1.08得初步分离浓缩液；初步分离浓缩液上MDS柱精制(径高比为1∶15)，先用去离子水淋洗至淋洗液呈淡黄色时，再用20％乙醇淋洗4个柱体积，收集20％乙醇的淋洗液。薄层层析检测(展开剂为丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯＝4∶3∶1∶1∶2的上层液)，合并含有单一斑点的淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.10，冷冻干燥即得浅黄色连翘酯苷A产物。以连翘酯苷A为对照品，利用HPLC测定连翘酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为99％，收率为0.5％。
实施例2
取400g干燥连翘壳，用15Kg去离子水提取两次，提取温度80℃，提取时间45min，合并提取液，过滤，滤液60℃减压浓缩至约比重为1.05的水提液；水提液上D101柱分离(径高比为1∶15)，上样量为1∶4。先用去离子水淋洗至流出液为棕黄色时，改用20％乙醇淋洗4倍柱体积，收集20％乙醇淋洗液，减压浓缩至比重为1.05得初步分离浓缩液；初步分离浓缩液上MDS柱精制(径高比为1∶12)，先用去离子水淋洗至淋洗液呈淡黄色时，再用30％乙醇淋洗4个柱体积，收集30％乙醇的淋洗液。薄层层析检测(展开剂为丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯＝4∶3∶1∶1∶2的上层液)，合并含有连翘酯苷A斑点的淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.15，冷冻干燥即得浅黄色连翘酯苷A产物。以连翘酯苷A为对照品，利用HPLC测定连翘酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为90.6％，收率为1.5％。
实施例3
取1Kg干燥连翘壳，用35Kg 40％的乙醇溶液提取两次，提取温度80℃，提取时间80min，合并提取液，过滤，滤液60℃减压浓缩至约比重为1.10的水提液；水提液上AB-8柱分离(径高比为1∶15)，上样量为1∶4。先用去离子水淋洗至流出液为棕黄色时，改用30％乙醇淋洗4倍柱体积，收集30％乙醇淋洗液，减压浓缩至比重为1.06得初步分离浓缩液；初步分离浓缩液上MDS柱精制(径高比为1∶12)，先用去离子水淋洗至淋洗液呈淡黄色时，再用30％乙醇淋洗4个柱体积，收集30％乙醇的淋洗液。薄层层析检测(展开剂为丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯＝4∶3∶1∶1∶2的上层液)，合并含有连翘酯苷A斑点的淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.18，冷冻干燥即得浅黄色连翘酯苷A产物。以连翘酯苷A为对照品，利用HPLC测定连翘酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为87.1％，收率为1.8％。