用于治疗慢性淋巴细胞性白血病的抗CD52单克隆抗体的重组生产方法.pdf

本发明涉及用于生产结合CD52的可溶形式单克隆抗体的重组方法。该方法描述从头合成编码抗CD52的核酸序列，将已构建的核酸序列转化到感受态细菌中，以及将该核酸序列亚克隆到哺乳动物表达载体中以表达所需要的蛋白质。本发明公开了包含与目标基因相关的调控元件的DNA构建体。为了允许在合适的哺乳动物宿主细胞中表达，已将目标核酸序列进行了密码子优化。

权利要求书
1.   一种制备有体内生物活性的抗CD52单克隆抗体的方法，该方法包括以下步骤：
■从头合成抗CD52单克隆抗体轻链和重链的步骤；
■构建全长抗CD52抗体κ轻链的步骤；
■构建全长抗CD52抗体IgG1重链的步骤；
■构建包含编码抗CD52分子轻多肽链和重多肽链的核酸序列的载体的步骤；
■将抗CD52抗体链亚克隆到在哺乳动物表达载体中以生产生物活性抗体分子的步骤。

2.   权利要求1的方法，其中编码抗CD52抗体轻链的核苷酸序列如SEQ ID 1所示。

3.   权利要求1的方法，其中编码抗CD52抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID 2所示。

4.   权利要求1的方法，其中抗CD52抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID 3所示。

5.   权利要求1的方法，其中抗CD52抗体重链的氨基酸序列如SEQ ID 4所示。

6.   权利要求1的方法，其中将包含编码抗CD52重链的核酸片段的载体进行定点诱变。

7.   权利要求1的方法，其中全长抗CD52重链和轻链已分别亚克隆到哺乳动物载体pCAIN和pCAID中。

8.   一种制备有体内生物活性的抗CD52单克隆抗体的方法，该方法包括以下步骤：用附图所示的载体构建体转化宿主细胞，从所述宿主细胞或其生长的培养基中分离出所述产品。

9.   一种药物组合物，该组合物包含治疗有效量的抗CD52抗体以及药学上可接受的稀释剂、辅剂或载体，其中所述抗体是从培养物生长的哺乳动物细胞中纯化出来的。

说明书用于治疗慢性淋巴细胞性白血病的抗CD52单克隆抗体的重组生产方法
发明领域
本发明涉及用于生产结合CD52的可溶形式单克隆抗体的重组方法。该方法描述从头合成编码抗CD52的核酸序列，将已构建的核酸序列转化到感受态细菌中，以及将该核酸序列亚克隆到哺乳动物表达载体中以表达所需要的蛋白质。本发明公开了包含与目标基因相关的调控元件的DNA构建体。为了允许在合适的哺乳动物宿主细胞中表达，已将目标核酸序列进行了密码子优化。
发明背景
抗体是我们免疫系统的一部分。当抗原(例如病菌中的外源蛋白)进入到机体时，机体就会产生天然抗体抵抗它。这些抗体附着并标记抗原从而被我们的免疫系统摧毁。抗体，即免疫球蛋白，包含2条通过二硫键连接在一起的重链和2条轻链，每条轻链通过二硫键与各自的重链相连接。每条重链的一端有一可变区(VH)，可变区与若干恒定区(CH1，CH2，CH3)连接。每条轻链的一端有一可变区(VL)，另一端有一恒定区(CL)，重链的轻链可变区(VH)和轻链恒定区一直与重链的第一恒定区结合。轻链和重链的恒定区(Fc)不直接参与抗体与抗原的结合。
每对轻链和重链的可变区(Fab)形成抗原结合位点。轻链和重链各区具有相同的通用结构，并且每个区都包含四个构架区，其序列相对保守、通过三个互补区(CDR)连接在一起。这四个构架区主要采用β-折叠构象，并且CDR形成环，该环与β-折叠结构连接，在某些情况下构成β-折叠结构部分。CDR通过构架区被紧密靠近约束，并且与来源于其它区的CDR一起影响抗原结合位点的形成。
当Kohler和Milstein在1975年报道了来自抗原免疫的小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤系的细胞的成功融合(Kohler和Milstein，Nature，1975，256，495-497)时，就向前迈进了一大步。所得杂交细胞，称为杂交瘤，具有源于脾细胞的抗体产生特性和源于骨髓瘤细胞的持续生长特性。每种杂交瘤都合成和分泌针对原始抗原特定决定簇的单一抗体。为确保培养物中的所有细胞都是相同的，也就是说，确保它们都含有合成独特抗体种类所必需的遗传信息，应当将从细胞融合得到的杂交瘤进行克隆或亚克隆。这样，克隆的杂交瘤就能产生同种抗体即单克隆抗体。细胞系的无限增殖性可确保得到均一、充分表征的抗体的无限供应，用于多种用途，具体地讲包括疾病的诊断和免疫治疗。令人遗撼的是，所开发的单克隆抗体由于其可能干扰治疗或者引起变态反应或免疫复合物过敏反应而无法用于临床，因此使人抗小鼠抗体的研发受到严重阻碍。
为产生足够量的抗体用于完全临床用途，最好是使用有效的重组表达系统。因为骨髓瘤细胞是一种专门用于产生和分泌抗体的天然宿主，所以来源于这些骨髓瘤细胞的细胞系一直用于重组抗体的表达。通常，需要基于免疫球蛋白基因调节元件的复合载体设计，但是最终的表达水平据报道变化非常大(Winter等，Nature，1988，332，323-327；Weidle等，Gene，1987，60，205-216；Nakatani等，Bio/Technology，1989，7，805-810；Gillies等，Bio/Technology，1989，7，799-804)。一种可选择的哺乳动物表达系统由使用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞提供。应用这些细胞已能产生数种大量的用于研究和临床的治疗蛋白(Kaufman等，Mol.Cell.Biol，1985，5，1750-1759；Zettlmeissl等，Bio/Technology，1987，5，720-725)。然而，几乎没有应用这些细胞表达抗体的实例，并且已报道的鼠抗体表达水平一直很低，约为0.01-0.1μ/ml(Weidle等，Gene，1987，51，21-29；Feys等，Int.J.Cancer，1988，2，26-27)。
事实上，CD52在所有人淋巴细胞和单核细胞中强表达，但不在其它血细胞(包括造血干细胞)中表达，该抗原在Hale等，Blood 1983，62，873-882中已有描述。已先后开发出抗CD52特异性小鼠单克隆抗体YTH66.9和抗CD52特异性大鼠单克隆抗体YTH 34.5HL。由于抗球蛋白反应，因此这些抗体在临床上的应用受到限制。
CD52在正常和恶性B淋巴细胞以及正常和恶性T淋巴细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞的表面表达，也在男性生殖系统组织中表达。本发明涉及一种方法，该方法中阐明了与CD25结合的抗体可用于治疗B细胞慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)。该抗体也可用于治疗已经过烷化剂治疗的患者和经氟达拉滨治疗无效的患者。本发明的抗体是IgGl κ，其具有人可变构架区和恒定区，以及源于鼠(大鼠)单克隆抗体的互补性决定区。该抗体的分子量大约为150千道尔顿。
本发明通过掺入包含编码具有抗CD52活性的多肽的核酸序列的重组载体，使得在哺乳动物表达系统中产生抗CD52抗体成为可能。
抗CD52抗体将用于治疗B细胞慢性淋巴细胞性白血病(简称B-CLL)。该抗体也将用于治疗已经接受和/或已对其它癌症化疗药物(例如烷化剂、氟达拉滨)无反应的患者。该抗体还可用于非霍奇金淋巴瘤、某些自身免疫性疾病的治疗、肾移植患者。
另一方面，抗CD52抗体将用于癌症病人、特别是淋巴瘤病人的治疗，或者用于免疫抑制目的。
附图说明
图1.编码抗CD52抗体轻链的DNA核苷酸序列的未优化形式和密码子优化形式的配对序列比对图。
图2.编码抗CD52抗体重链的DNA核苷酸序列的未优化形式和密码子优化形式的配对序列比对图。
图3.抗CD20抗体(利妥昔单抗(Rituximab))和抗CD52抗体(坎帕斯(Campath))的轻链恒定区的序列比对图。
图4.抗CD20抗体(利妥昔单抗(Rituximab))和抗CD52抗体(坎帕斯(Campath))的重链恒定区的序列比对图。
图5.用BglII BsiWI限制酶切消化pBSKII/ALZ-VLC克隆(第3泳道)和pBSKII/RTX-LC克隆(第1泳道)。第2泳道-1kb DNA梯。
图6.用BglII和EcoRI限制酶切消化pBSKII/ALZ-LC克隆，以鉴定含有插入片段的转化子。对于所有测试过的克隆，观察到结果片段与ALZ-LC抗体片段的大小相符。
图7.用BamHI限制酶切消化pBSKII/ALZ-LC克隆，以区别含有ALZ-LC插入片段的克隆和含有RTX-LC插入片段的克隆。
图8.限制酶切消化pBSKII/ALZ-VHC全长克隆，以确定插入片段的存在。
图9.抗CD20抗体重链(RTX-HC)克隆与进行了定点诱变的抗CD52抗体重链(ALZ-HC)克隆的序列比对图。CA变为TT用蓝色突出显示。
图10.用于连接反应的经限制酶切消化的和凝胶纯化的ALZ-LC和pCAIN。
图11.用BglII和EcoRI限制酶切消化pCAIN/ALZ-LC克隆，以鉴定含有插入片段的转化子。对于所有测试过的克隆，观察到结果片段与ALZ-LC抗体片段的大小相符(～700bp)。
图12.用于连接反应的经限制酶切消化的和凝胶纯化的ALZ-HC和pCAID。
图13.用BamHI和EcoRI限制酶切消化pCAID/ALZ-HC克隆，以鉴定含有插入片段的转化子。对于所有测试过的克隆，观察到结果片段与ALZ-HC抗体片段的大小相符(～1420bp)。
图14.通过DNA核苷酸测序证实了pCAID/ALZ-HC的b克隆。测序反应中使用了三种不同的引物(camp246，523和CHC845)。发现整个序列与模板序列(C2)匹配。
序列表
SEQ ID 1.抗CD52抗体轻链的核苷酸序列。
SEQ ID 2.抗CD52抗体重链的核苷酸序列。
SEQ ID 3.抗CD52抗体肽的氨基酸序列。
SEQ ID 4.抗CD52抗体肽的氨基酸序列。
SEQ ID 5.抗CD52抗体轻链的密码子优化序列。
SEQ ID 6.抗CD52抗体重链的密码子优化序列。
发明概述
本发明涉及将编码抗CD52多肽的核酸序列转化到感受态细菌中，以及将所述核酸序列亚克隆到哺乳动物表达载体中，更优选亚克隆到CHO细胞中，以稳定表达所述单克隆抗体。
本发明的一个方面，提供编码抗CD52分子重链和轻链的核酸序列。本发明的另一个方面，提供由所述核酸序列编码的相应氨基酸序列。
本发明的一个具体方面，涉及从头合成抗CD52分子重链和轻链的可变区。还公开了构建携带目标核酸序列的载体构建体，将所述载体构建体转化到感受态细菌中，以及将所述抗CD52链亚克隆到哺乳动物表达载体中。
发明详述
下文概述的方法适用于生产具有生物活性的可溶性重组抗CD52抗体。
实施例1
从头合成的抗CD52抗体cDNA将包括以下组件：
·Kozak共有序列(GCCACC)3，后接起始密码子(ATG)。
·三个“保护”核苷酸，位于cDNA的5’端和3’端。
·合适的限制酶切位点，位于cDNA的5’端和3’端，以克隆到表达载体中。
编码抗CD52抗体轻链的核苷酸序列如SEQ ID 1所示。
编码抗CD52抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID 2所示。
为确保重组蛋白在哺乳动物细胞系(例如CHO K1和HEK 293)中的最佳表达，抗CD52抗体重链编码DNA序列的密码子，已在密码子优化过程中被改变。相应的密码子优化序列如SEQ ID 4和SEQ ID 5所示。
实施例2
表达系统的选择
设计表达重组抗CD52抗体的哺乳动物表达载体，可基于一种市售载体(例如pcDNA或pIRES，分别得自Invitrogen或BD Biosciences公司)，修饰后包括下列特征：
·具有多克隆位点以插入编码抗CD52抗体轻链和重链的cDNA以及天然信号肽。将抗CD52抗体轻链和重链克隆到两个独立的、带有不同选择标记的质粒DNA载体中。
·设计的载体也可为所述轻链和重链两者都提供独立的(双顺反子)IRES介导的选择标记共表达。
·设计的表达载体也可为抗CD52抗体轻链和重链两者以及天然信号肽都提供独立的(双顺反子)IRES介导的共表达。
实施例3
抗CD52抗体可变区的从头合成
抗CD52抗体的轻链可变区和重链可变区交由美国Epoch实验室从头合成。抗CD52抗体链没有合成恒定区；而是从抗CD20抗体链中切下κ和IgG1恒定区，并将其与抗CD52抗体可变区连接，从而产生全长抗体链。
抗CD52抗体和抗CD20抗体两者的恒定区是非常相似的。虽然抗CD52抗体的κ恒定区与抗CD20抗体的κ恒定区有100％同源性，但两者的重链恒定区仍相差2个核苷酸。这两个核苷酸的变化导致第240位的缬氨酸变为丙氨酸。
实施例4
全长抗CD52抗体重链和轻链的构建
将从头合成的可变区克隆到包含全长抗CD20抗体重链和轻链的pBSK载体中。抗CD20抗体的可变区与抗CD52抗体的可变区交换后产生全长抗CD52抗体片段。
作为克隆到pBSKII中的片段得到抗CD52抗体的可变区，所得到的构建体称为pBSKII/ALZ-VLC。将该DNA转化到大肠杆菌DH10b中，再接种到含有氨苄青霉素的LB琼脂平板上。将平板上的一个菌落接种到液体培养基中，进行DNA小量制备。通过测序证实了这两个可变区的序列。
全长抗CD52抗体κ轻链的构建
pBSKII/ALZ-VLC和pBSKII/RTX-LC(表达抗CD20抗体轻链的构建体)克隆用限制性内切酶BglII和BsiWI消化(图5)。对来自前者的394bp大小的插入片段和来自后者的载体+κ恒定区进行凝胶纯化。载体和插入片段连接后产生全长抗CD52抗体κ轻链。将热激过的感受态细胞DH10转化获得的菌落接种到含有氨苄青霉素的LB培养基中，这样就完成了DNA小量制备。通过限制酶切消化鉴定克隆中存在的全长抗CD52抗体轻链(图6)。还通过测序证实了由限制酶切消化得到的阳性克隆。
pBSKII/ALZ-LC克隆也用限制性内切酶BamHI消化，以区别含有ALZ-LC插入片段的克隆和含有RTX-LC的克隆。实质上这是因为用pBSKII/RTX-LC作为载体主链，而且RTX-LC和ALZ-LC大小是一样的。两条轻链的限制性内切酶谱是不同的。当pBSKII/ALZ-LC克隆用BamHI消化时，将仅使pBSKII/RTX-LC克隆线性化，产生700bp的结果片段(图7)。第6、9和13号克隆是RTX-HC克隆。全长抗CD52抗体IgG1重链的构建
携带抗CD52抗体重链可变区的构建体pBSKII/ALZ-VHC克隆和携带抗CD20抗体重链的构建体pBSKII/RTX-HC克隆用限制性内切酶HindIII和NheI消化。对来自前者的426bp大小的插入片段和来自后者的载体+IgG1恒定区进行凝胶纯化。载体和插入片段连接后产生全长抗CD52抗体IgG1重链。将热激过的感受态细胞DH10转化获得的菌落接种到含有氨苄青霉素的LB培养基中，这样就完成了DNA小量制备。通过限制酶切消化鉴定克隆中存在的全长抗CD52抗体重链(图8)。还通过测序证实了由限制酶切消化得到的阳性克隆。pBSKII/ALZ-HC克隆的定点诱变
抗CD52抗体重链片段的恒定区与抗CD20抗体重链片段的恒定区有2个核苷酸不相同。在序列确证后，将含有抗CD52抗体的可变区及与之拼接的抗CD20抗体重链恒定区的克隆进行定点诱变。
材料与方法：
酶和试剂：
Pfu高保真性Taq聚合酶(Stratagene)
DpnI限制性内切酶(Stratagene)
DNA模板
pBSKII/ALZ-HC-克隆(a)
引物
所有要合成的寡核苷酸都交给SIGMA公司合成。所合成的寡核苷酸由Sigma公司用HPLC纯化两次，然后转给Avesthagen公司。PCR反应中所使用的寡核苷酸见下表。
  引物  序列  坎帕斯-突变-有义  5’AAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGT 3’  坎帕斯-突变-反义  5’ACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTGTCCACCTT 3’
突变链合成反应(热循环)：
下列成分/试剂按以下指定顺序加入到灭菌的0.2ml PCR管中。所有PCR反应的终体积都是50μl。

Quick Change定点诱变方法的循环参数：
步骤1(1个循环)           95℃/30秒
步骤2                    95℃/30秒
步骤3                    55℃/30秒
步骤4                    68℃/7分钟
步骤5转到步骤2并重复步骤2-4共16次。
扩增产物的Dpn I消化：
将1μl Dpn I(10U/μl)加入到扩增反应的反应混合物中。将所得混合物轻轻地充分混匀，离心，37℃保温1小时。
感受态细胞DH10b的转化：
按生产商(Stratagene)推荐的方法进行转化。用4μl PCR反应产物进行转化。
结果：
将已进行过定点诱变的抗CD20抗体重链(RTX-HC)克隆与抗CD52抗体重链(ALZ-HC)克隆进行序列比对。CA转变为TT用蓝色突出显示。
将已进行过定点诱变的抗CD20抗体重链(RTX-HC)克隆与抗CD52抗体重链(ALZ-HC)克隆进行序列比对。结果见图9。
抗CD52抗体链亚克隆到哺乳动物表达载体中
全长抗CD52抗体重链抗体轻链和重链分别克隆或亚克隆到哺乳动物表达载体pCAIN和pCAID中。
pBSKII/ALZ-LC克隆和pCAIN载体用BglII和EcoRI消化，所得构建体称为pCAIN/ALZ-LC。将来自前者的插入片段(700bp)和来自后者的载体主链进行凝胶纯化和连接(图10)。将连接混合物转化到热激过的感受态细胞DH10b中，再接种到含有氨苄青霉素作为选择抗生素的LB琼脂平板上。挑取少量转化子并进行DNA小量制备。通过限制酶切消化鉴定克隆(图11)。
pBSKII/ALZ-HC-SDM克隆(I.4)和pCAID载体用BamHI和EcoRI消化。所得构建体称为pCAID/ALZ-HC。将来自前者的插入片段(1429bp)和来自后者的载体主链进行凝胶纯化和连接(图12)。将连接混合物转化到热激过的感受态细胞DH10b，再接种到含有氨苄青霉素作为选择抗生素的LB琼脂平板上。挑取少量转化子并进行DNA小量制备。通过限制酶切消化鉴定克隆(图13)。
DNA测序和分析：
分别克隆到哺乳动物表达载体pCAID和pCAIN中的最终克隆ALZ-HC和ALZ-LC经测序，其序列正确性得到证实。参见序列分析的比对图。
通过DNA核苷酸测序，pCAID/ALZ-HC的b克隆获得证实。测序反应中使用了三种不同的引物(camp246、523和CHC845)。发现整个序列与模板序列(C2)匹配。
6.抗CD52抗体的纯化：
抗CD52抗体是一种人源化抗体，可分泌到细胞上清液中。按照管理机构对于过量表达所需重组蛋白的指导方针，后续确定无污染的细胞培养系统，可利用一系列步骤对抗CD52抗体蛋白进行纯化，包括透析-过滤和柱色谱法(包括亲和色谱法)。回收洗脱后的抗体以使体内活性最大化。
7.抗CD52抗体体外活性和体内活性的测定：
采用下列方法完成检测抗CD52抗体体外结合活性的生物测定：
·抗CD52抗体ELISA测定。
·补体介导的B细胞淋巴细胞性白血病细胞(Karpas 422细胞)溶胞作用。
·抗CD52抗体体内功效研究已基于当前数据，在那些先前已用烷化剂治疗和用氟达拉比滨治疗无效的B细胞慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)患者中进行。
纯化方法的最优化：
根据以上提及的受推荐的功能/结合测定，后续确定可重现的生物活性，将努力使所用纯化方法最佳化。纯化策略将针对产品的工艺过程经济学、上市速度、规模性、重复性和最高纯度，以及功能稳定性和结构整体性为主要目的。为实现这一目的，将探索由过滤(常规过滤和切向流过滤)和色谱两者组合的方法。所述方法的合格要求和接受标准研究将实施3批。
因此，本发明在纯化过程中拟定以下的步骤：
a.初步澄清，用COHC/A1HC/0.45μ深度滤器；
b.浓缩，用Pellicon XL Biomax滤器，临界值为50千道尔顿，基于切向流过滤；
c.色谱步骤I：亲和色谱，用Prosep VA Ultra(对基于血清(2％胎牛血清[FCS])的上清液)/Prosep VA(对无血清培养物上清液)；
d.色谱步骤II：强阳离子交换剂，例如SP Sepharose；
e.色谱步骤III：基于流通的强阴离子交换剂，例如Cellufine Q(一种基于纤维素的介质)，用于去除宿主细胞蛋白和核酸；
f.去除病毒，用大小排阻过滤和用硫酸Cellufine沥滤A蛋白；
g.过滤除菌；
h.去除内毒素，用Remtox或Cellufine ET色谱；
h.配制。
序列表
<110>阿维斯塔金格兰技术有限公司(Avestha Gengraine Technologies Pvt.Ltd)
Morawala Patell，Villoo
<120>用于治疗慢性淋巴细胞性白血病的抗CD52单克隆抗体的重组生产方法
<130>23-05-06
<150>625/CHE/2005
<151>2005-05-05
<160>6
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>702
<212>DNA
<213>人(homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(702)
<400>1
atg gga tgg agc tgt atc atc ctc ttc ttg gta gca aca gct aca ggt     48
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
gtc cac tcc gac atc cag atg acc cag agc cca agc agc ctg agc gcc     96
Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
            20                  25                  30
agc gtg ggt gac aga gtg acc atc acc tgt aaa gca agt cag aat att    144
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile
        35                  40                  45
gac aaa tac tta aac tgg tac cag cag aag cca ggt aag gct cca aag    192
Asp Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
    50                  55                  60
ctg ctg atc tac aat aca aac aat ttg caa acg ggt gtg cca agc aga    240
Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
ttc agc ggt agc ggt agc ggt acc gac ttc acc ttc acc atc agc agc    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
ctc cag cca gag gac atc gcc acc tac tac tgc ttg cag cat ata agt    336
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser
            100                 105                 110
agg ccg cgc acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cgt act    384
Arg Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
gtg gct gca cca tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg    432
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
    130                 135                 140
aaa tct gga act gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc    480
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
aga gag gcc aaa gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt    528
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
                165                 170                 175
aac tcc cag gag agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac    576
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
agc ctc agc agc acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac    624
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
        195                 200                 205
aaa gtc tac gcc tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc    672
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
    210                 215                 220
aca aag agc ttc aac agg gga gag tgt tag                            702
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210>2
<211>1413
<212>DNA
<213>人(homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1413)
<400>2
atg gga tgg agc tgt atc atc ctc ttc ttg gta gca aca gct aca ggt     48
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
gtc cac tcc cag gtc caa ctg cag gag agc ggt cca ggt ctt gtg aga     96
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg
            20                  25                  30
cct agc cag acc ctg agc ctg acc tgc acc gtg tct ggc ttc acc ttc    144
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
acc gat ttc tac atg aac tgg gtg aga cag cca cct gga cga ggt ctt    192
Thr Asp Phe Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu
    50                  55                  60
gag tgg att gga ttt att aga gac aaa gct aaa ggt tac aca aca gag    240
Glu Trp Ile Gly Phe Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr Glu
65                  70                  75                  80
tac aat cca tct gtg aag ggg aga gtg aca atg ctg gta gac acc agc    288
Tyr Asn Pro Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser
                85                  90                  95
aag aac cag ttc agc ctg aga ctc agc agc gtg aca gcc gcc gac acc    336
Lys Asn Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr
            100                 105                 110
gcg gtc tat tat tgt gca aga gag ggc cac act gct gct cct ttt gat    384
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp
        115                 120                 125
tac tgg ggt caa ggc agc ctc gtc aca gtc tcc tca gcc tcc acc aag    432
Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
    130                 135                 140
ggc cca tcg gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggg    480
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145                 150                 155                 160
ggc aca gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg    528
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
                165                 170                 175
gtg acg gtg tcg tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc    576
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
            180                 185                 190
ttc ccg gct gtc cta cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg    624
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
        195                 200                 205
gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac    672
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
    210                 215                 220
gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aaa gtt gag ccc     720
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225                 230                 235                 240
aaa tct  tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa    768
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
                245                 250                 255
ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac     816
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
            260                 265                 270
acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac     864
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
        275                 280                 285
gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc     912
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
    290                 295                 300
gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac     960
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305                 310                 315                 320
agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg    1008
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
                325                 330                 335
ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca    1056
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
            340                 345                 350
gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa    1104
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
        355                 360                 365
cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac    1152
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
    370                 375                 380
cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc    1200
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385                 390                 395                 400
gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc    1248
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
                405                 410                 415
acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag    1296
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
            420                 425                 430
ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc    1344
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
        435                 440                 445
tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc    1392
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
    450                 455                 460
tcc ctg tct ccg ggt aaa tga                                        1413
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470
<210>3
<211>470
<212>PRT
<213>人(homo sapiens)
<400>3
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg
            20                  25                  30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
Thr Asp Phe Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Ile Gly Phe Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr Glu
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Pro Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser
                85                  90                  95
Lys Asn Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
    130                 135                 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
                165                 170                 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
            180                 185                 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
        195                 200                 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
    210                 215                 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225                 230                 235                 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
                245                 250                 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
            260                 265                 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
        275                 280                 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
    290                 295                 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305                 310                 315                 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
                325                 330                 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
            340                 345                 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
        355                 360                 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
    370                 375                 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385                 390                 395                 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
                405                 410                 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
            420                 425                 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
        435                 440                 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450                     455                 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470
<210>4
<211>233
<212>PRT
<213>人(homo sapiens)
<220>
<221>肽
<222>(1)..(233)
<400>4
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
            20                  25                  30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile
        35                  40                  45
Asp Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75              80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser
            100                 105                 110
Arg Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
    130                 135                 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
                165                 170                 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
    210                 215                 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210>5
<211>702
<212>DNA
<213>人(homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(702)
<400>5
atg ggc tgg tcc tgc atc ata ctg ttc ctg gtg gct acg gct acg ggc     48
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
gtg cat tcc gac atc caa atg acc caa agc ccc tcg tcc ctg tcc gcg     96
Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
            20                  25                  30
tcc gtc ggc gac agg gtt aca atc acg tgc aaa gcg agc cag aac ata    144
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile
        35                  40                  45
gac aag tac ctg aac tgg tac cag cag aag ccg ggg aag gcc ccc aag    192
Asp Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
    50                  55                  60
ctg ctg ata tac aat act aat aac ctc cag acc ggc gtc ccc agc cgg    240
Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
ttc tcc ggg tcc ggt tcg ggc acc gac ttc acc ttc aca atc agt tct    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
ctg caa ccg gag gac atc gcc acg tac tat tgc ctg caa cat atc agt    336
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser
            100                 105                 110
cgg ccc cga acc ttc ggc cag ggc acc aag gtg gaa atc aaa agg acc    384
Arg Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
gta gct gcc cct tcc gtg ttc atc ttc ccc ccc tcc gac gaa cag ctg    432
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
    130                 135                 140
aag tcg ggc aca gcg tcc gtg gtg tgc ctc ctg aac aac ttc tac cct    480
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
cgg gag gcc aaa gtg cag tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tct ggc    528
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
                165                 170                 175
aac tct cag gag tcg gtg acc gag caa gac agt aag gat agc acc tat    576
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
tcc cta tcc tcg acc ctg acc ctg tcg aag gcg gac tac gag aag cac    624
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
        195                 200                 205
aaa gta tac gcc tgc gag gtg acc cat cag ggc ctc tca tcg cct gtg    672
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
    210                 215                 220
acc aaa agt ttc aac cgc ggc gag tgc tag    702
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210>6
<211>1413
<212>DNA
<213>人(homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1413)
<400>6
atg gga tgg tct tgc att atc ctt ttt ctg gtg gca acg gcc acc ggg     48
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
gtt cac tcg caa gtc cag ctc cag gag tcc ggc cca ggc ctg gtg agg     96
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg
            20                  25                  30
ccg tcc cag acc ctg agt ctg acc tgc acc gtt tcc ggg ttc acc ttc    144
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
acc gat ttc tat atg aac tgg gta cgg cag ccc cca ggg cgc ggt ctg    192
Thr Asp Phe Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu
    50                  55                  60
gag tgg atc ggt ttc att cgc gat aag gcc aaa ggc tac aca aca gaa    240
Glu Trp Ile Gly Phe Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr Glu
65                  70                  75                  80
tac aat ccc agc gtc aag ggg agg gtg acg atg ctg gta gac acg agt    288
Tyr Asn Pro Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser
                85                  90                  95
aag aac cag ttc agt tta aga ctc tcc agt gtg acc gcc gct gac acc    336
Lys Asn Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr
            100                 105                 110
gcc gtc tat tac tgc gct cgc gaa ggc cac acc gcc gca ccg ttc gac    384
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp
        115                 120                 125
tac tgg ggc cag ggc tcg ctg gtg acc gtt tcc agt gcc tcc aca aag    432
Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
    130                 135                 140
ggt cct tcc gtc ttt ccc ctg gcg cct tcg agt aag agt acc agc ggc    480
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145                 150                 155                 160
ggc aca gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc cca gag ccg    528
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
                165                 170                 175
gtc acg gtg tcc tgg aat tcc ggc gcc ctg acc tcc ggg gtg cac aca     576
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
            180                 185                 190
ttc cca gcg gtc ctc cag tcc tcc ggt ctg tac tcc ctg tcc tcg gtg     624
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
        195                 200                 205
gtg aca gtg ccc tcc agt agc ctc ggc acc cag aca tac att tgc aac     672
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
    210                 215                 220
gtg aac cat aag ccc tcc aat acg aag gtg gat aag aag gtg gag ccc     720
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225                 230                 235                 240
aag tcc tgt gat aag acg cac acc tgc ccc cct tgc ccc gcc cca gag     768
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
                245                 250                 255
ctg ctg gga ggg cct agt gtg ttc ctt ttc ccc ccg aag ccc aag gac     816
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
            260                 265                 270
acc ctg atg att tcc cgc acc cct gaa gtc acg tgt gtc gtg gtg gac     864
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
        275                 280                 285
gtt tcc cat gag gac cct gag gtg aag ttt aat tgg tat gtc gat ggg     912
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
    290                 295                 300
gtg gag gtt cac aat gcg aag acg aag ccc agg gag gag caa tac aac     960
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305                 310                 315                 320
tct acc tac cgc gtc gtg tca gtc ctg act gtc ctg cac cag gac tgg    1008
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
                325                 330                 335
ctg aac ggg aag gag tac aag tgc aag gtg tcg aac aag gct ctg ccc    1056
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
            340                 345                 350
gcc ccg atc gag aag acc atc agc aag gcc aag ggc cag cct cga gag    1104
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
        355                 360                 365
ccc cag gtg tac aca ctg ccc ccg tcc agg gac gaa cta acc aag aac    1152
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
    370                 375                 380
cag gtg tcc ctg acc tgc ctg gtt aaa gga ttc tac cca tcc gac atc    1200
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385                 390                 395                 400
gca gtc gag tgg gag tcc aac ggc cag cca gaa aac aat tat aaa acg    1248
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
                405                 410                 415
act cct ccc gtc ctg gac agc gac ggc tca ttc ttt ctg tac tcg aag    1296
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
            420                 425                 430
ctg aca gtg gac aag agc cgc tgg cag cag ggg aac gtg ttc tcc tgc    1344
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
        435                 440                 445
agt gtc atg cac gag gcc ctg cat aac cac tac aca cag aag tcc ctg    1392
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
    450                 455                 460
agc ctg tcg ccc gga aag tga                                        1413
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470