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1、(10)申请公布号 CN 102659893 A (43)申请公布日 2012.09.12 CN 102659893 A *CN102659893A* (21)申请号 201210118932.7 (22)申请日 2012.04.23 C07J 17/00(2006.01) (71)申请人 南京泽朗医药科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边 108 号 05 幢 6 楼 (72)发明人 刘东锋 郭琴 (54) 发明名称 一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种制备高纯度多足蕨苷 A 的 方法， 以多足蕨和甜根多足蕨的根茎为原料， 经水 。
2、提取酶解大孔吸附树脂富集浓缩干燥硅 胶 - 氧化铝混合柱层析结晶干燥获得多足蕨 苷 A。本发明方法适合工业化生产、 产品纯度高。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法， 其特征在于包括以下步骤 ： （1） 提取 ： 取原料加水提取 2-3 次， 每次加水量为原料质量的 5-8 倍， 提取时间为 1-2 小时 ； 将提取液浓缩至原体积的 1/3-1/8， 将浓缩液用酸调 pH 至 3-4， 加入果胶酶或纤维素 酶， 加入量。
3、为原料质量的 2-5， 灭酶， 过滤得上柱液 ； （2） 大孔树脂富集 ： 将上柱液进大孔吸附树脂柱， 先用水洗脱至流出液无色透明， 再依 次用 20%、 50% 和 75% 乙醇洗脱， 将 75% 乙醇洗脱液浓缩至浸膏， 干燥得总皂苷提取物 ； （3） 混和柱层析 ： 将总皂苷提取物用无水乙醇溶解， 与适量硅胶混合， 再取新硅胶和酸 性氧化铝混合装柱， 拌样硅胶置于其上， 先用氯仿 - 甲醇 - 水 （9:1:0.05） 混合溶剂除杂， 再 用氯仿 - 甲醇 - 水 （7:3:0.15） 的混合溶剂洗脱， 收集洗脱液 ； （4） 结晶 ： 将上述洗脱液浓缩至干， 50-80% 甲醇重结晶即得。
4、纯品。 2. 如权利要求 1 所述的一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中大 孔树脂柱层析为 D101 型或 D4020 型。 3. 如权利要求 1 所述的一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中硅 胶和酸性氧化铝混合柱层析中， 硅胶与酸性氧化铝的用量比为 8:2， 柱径高比为 1:5-20。 权 利 要 求 书 CN 102659893 A 2 1/3 页 3 一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法 技术领域 0001 本发明属于天然物质的提取技术领域， 涉及一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法。 背景技术 0002 多足蕨苷 A（Poly。
5、podoside A） 分子式为 C45H72O17， 分子量为 885.05， CAS 登录号为 119784-25-7， 是从水龙骨科 （Polypodiaceae） 植物甜根多足蕨Polypodium glycyrrhiza DC.Eaton 根茎及多足蕨Polypodium vulgare L. 根茎中分离得到的一种甾体皂苷， 可作为 甜味剂， 其甜度为 6%（w/v） 蔗糖溶液的 600 倍。具有安全无毒、 低热、 性能稳定等特点， 作 为食品可避免人体摄取过多高热量的蔗糖等糖类甜味剂产生肥胖症、 糖尿病等不良后果。 0003 经检索， 尚未发现有关多足蕨苷 A 的提取工艺报道。 发。
6、明内容 0004 本发明的目的是提供一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法。 0005 为了实现上述目的， 本发明采用以下技术方案 ： 一种制备高纯度多足蕨苷 A 的方法， 其特征在于包括以下步骤 ： （1） 提取 ： 取原料加水提取 2-3 次， 每次加水量为原料质量的 5-8 倍， 提取时间为 1-2 小时 ； 将提取液浓缩至原体积的 1/3-1/8， 将浓缩液用酸调 pH 至 3-4， 加入果胶酶或纤维素 酶， 加入量为原料质量的 2-5， 灭酶， 过滤得上柱液 ； （2） 大孔树脂富集 ： 将上柱液进大孔吸附树脂柱， 先用水洗脱至流出液无色透明， 再依 次用 20%、 50% 和 75% 。
7、乙醇洗脱， 将 75% 乙醇洗脱液浓缩至浸膏， 干燥得总皂苷提取物 ； （3） 混和柱层析 ： 将总皂苷提取物用无水乙醇溶解， 与适量硅胶混合， 再取新硅胶和酸 性氧化铝混合装柱， 拌样硅胶置于其上， 先用氯仿 - 甲醇 - 水 （9:1:0.05） 混合溶剂除杂， 再 用氯仿 - 甲醇 - 水 （7:3:0.15） 的混合溶剂洗脱， 收集洗脱液 ； （4） 结晶 ： 将上述洗脱液浓缩至干， 50-80% 甲醇重结晶即得纯品。 0006 步骤 （2） 中大孔树脂柱层析为 D101 型或 D4020 型。 0007 步骤 （3） 中硅胶和酸性氧化铝混合柱层析中， 硅胶与酸性氧化铝的用量比为 8:。
8、2， 柱径高比为 1:5-20。 0008 本发明的优点在于 ： 采用酶解法除去影响过滤的杂质， 解决了难过滤、 易堵塞的问 题， 纯化了进大孔吸附树脂的料液 ； 用硅胶和酸性氧化铝混合柱层析， 分离效率高， 可提高 产品纯度。 0009 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明， 但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。 具体实施方式 0010 实施例 1 ： 将多足蕨原料粉碎称取 2kg 投入提取罐中， 用水于微沸状态提取 2 次， 每次加水 10L， 说 明 书 CN 102659893 A 3 2/3 页 4 提取时间分别为 2h、 1h， 过滤， 浓缩至 3.5L， 将浓缩液冷。
9、却至 40-45， 开通蒸汽保持温度在 此范围内， 加入酒石酸调节pH3.1， 再加入原料质量3的纤维素酶， 酶解1h， 升温至95灭 酶， 再降温至 40-45， 抽滤， 得滤液即上柱液。将上柱液通过 D4020 大孔吸附树脂柱， 吸附 结束后， 先用去离子水洗脱至流出液无色透明， 再依次用 20%、 50% 和 75% 乙醇洗脱， 将 75% 乙醇洗脱液浓缩至浸膏， 干燥得总皂苷提取物。提取物用无水乙醇溶解， 与其 2 倍质量的硅 胶混合拌匀， 再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比 8:2 混合装柱， 拌样硅胶装于其上， 先用氯 仿 - 甲醇 - 水 （9:1:0.05） 混合溶剂除杂， 再用氯。
10、仿 - 甲醇 - 水 （7:3:0.15） 的混合溶剂洗 脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 80% 甲醇重结晶， 真空干燥得多足蕨苷 A， 收率为 57.6%， 纯度达 98.2%。 0011 实施例 2 ： 将甜根多足蕨原料粉碎称取 2kg 投入提取罐中， 用水于微沸状态提取 3 次， 每次加水 14L， 提取时间分别为 2h、 1.5h、 1h， 过滤， 浓缩至 7L， 将浓缩液冷却至 40-45， 开通蒸汽保 持温度在此范围内， 加入酒石酸调节 pH3.7， 再加入原料质量 5的果胶酶， 酶解 1h， 升温至 95灭酶， 再降温至40-45， 抽滤， 得滤液即上柱液。 将上柱液通过D101。
11、大孔吸附树脂柱， 吸附结束后， 先用去离子水洗脱至流出液无色透明， 再依次用 20%、 50% 和 75% 乙醇洗脱， 将 75% 乙醇洗脱液浓缩至浸膏， 干燥得总皂苷提取物。提取物用无水乙醇溶解， 与其 2 倍质量 的硅胶混合拌匀， 再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比 8:2 混合装柱， 拌样硅胶装于其上， 先 用氯仿 - 甲醇 - 水 （9:1:0.05） 混合溶剂除杂， 再用氯仿 - 甲醇 - 水 （7:3:0.15） 的混合溶剂 洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 70% 甲醇重结晶， 真空干燥得多足蕨苷 A， 收率为 54.7%， 纯度 达 98.6%。 0012 实施例 3 ： 将多足蕨。
12、原料粉碎称取2kg投入提取罐中， 用水于微沸状态提取3次， 每次加水16L， 提 取时间分别为 1.5h、 1h、 1h， 过滤， 浓缩至 6L， 将浓缩液冷却至 40-45， 开通蒸汽保持温度 在此范围内， 加入酒石酸调节pH4.0， 再加入原料质量2的纤维素酶， 酶解1h， 升温至95 灭酶， 再降温至 40-45， 抽滤， 得滤液即上柱液。将上柱液通过 D4020 大孔吸附树脂柱， 吸 附结束后， 先用去离子水洗脱至流出液无色透明， 再依次用20%、 50%和75%乙醇洗脱， 将75% 乙醇洗脱液浓缩至浸膏， 干燥得总皂苷提取物。提取物用无水乙醇溶解， 与其 2 倍质量的硅 胶混合拌匀，。
13、 再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比 8:2 混合装柱， 拌样硅胶装于其上， 先用氯 仿 - 甲醇 - 水 （9:1:0.05） 混合溶剂除杂， 再用氯仿 - 甲醇 - 水 （7:3:0.15） 的混合溶剂洗 脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 50% 甲醇重结晶， 真空干燥得多足蕨苷 A， 收率为 51.8%， 纯度达 99.2%。 0013 实施例 4 ： 将甜根多足蕨原料粉碎称取 2kg 投入提取罐中， 用水于微沸状态提取 2 次， 每次加水 12L， 提取时间分别为 1.5h、 1h， 过滤， 浓缩至 8L， 将浓缩液冷却至 40-45， 开通蒸汽保持温 度在此范围内， 加入酒石酸调节pH3.。
14、8， 再加入原料质量4的果胶酶， 酶解1h， 升温至95 灭酶， 再降温至40-45， 抽滤， 得滤液即上柱液。 将上柱液通过D101大孔吸附树脂柱， 吸附 结束后， 先用去离子水洗脱至流出液无色透明， 再依次用 20%、 50% 和 75% 乙醇洗脱， 将 75% 乙醇洗脱液浓缩至浸膏， 干燥得总皂苷提取物。提取物用无水乙醇溶解， 与其 2 倍质量的硅 胶混合拌匀， 再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比 8:2 混合装柱， 拌样硅胶装于其上， 先用氯 说 明 书 CN 102659893 A 4 3/3 页 5 仿 - 甲醇 - 水 （9:1:0.05） 混合溶剂除杂， 再用氯仿 - 甲醇 - 水 （7:3:0.15） 的混合溶剂洗 脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 60% 甲醇重结晶， 真空干燥得多足蕨苷 A， 收率为 52.6%， 纯度达 98.4%。 说 明 书 CN 102659893 A 5 。