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1、(10)申请公布号 CN 102659582 A (43)申请公布日 2012.09.12 CN 102659582 A *CN102659582A* (21)申请号 201210118961.3 (22)申请日 2012.04.23 C07C 69/21(2006.01) C07C 67/48(2006.01) (71)申请人 南京泽朗医药科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边 108 号 05 幢 6 楼 (72)发明人 刘东锋 郭琴 (54) 发明名称 一种梫木毒素 IV 的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种梫木毒素 IV 的制备方法， 具体是涉及一。
2、种采用超临界 CO2萃取技术对梫木 毒素 IV 进行提取、 纯化的方法， 步骤包括 ： 取木 藜芦叶原料粉碎， 采用超临界 CO2萃取， 丙酮为夹 带剂， 收集萃取液， 回收丙酮后用乙醚萃取， 将乙 醚萃取液浓缩所得乙醚浸膏进行氧化镁短程柱层 析， 正己烷 - 二氯甲烷梯度洗脱， 结晶。本发明方 法条件温和， 避免了传统方法局部高温对产品活 性的不利影响， 工艺合理， 可实现快速提取、 分离 纯化， 易于工业化。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种。
3、梫木毒素 IV 的制备方法， 其特征在于包括以下步骤 ： A. 超临界萃取 ： 取木藜芦叶， 经粉碎处理， 加入超临界萃取釜中， 用丙酮作为夹带剂， 进行萃取， 得到萃取液 ； B. 溶剂萃取 ： 将萃取液浓缩， 回收丙酮， 用乙醚萃取多次， 合并乙醚萃取液， 浓缩得乙 醚浸膏 ； C. 氧化镁柱层析 ： 将乙醚浸膏与氧化镁混合烘干， 上氧化镁短程柱层析， 正己烷 - 二氯 甲烷梯度洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至小体积， 得粗晶 ； D. 重结晶 ： 用乙酸乙酯 - 丙酮混合溶剂重结晶， 得到纯度达 95% 以上的梫木毒素 IV 产 品。 2. 如权利要求 1 所述的一种梫木毒素 IV 的制备方。
4、法， 其特征在于步骤 A 所述超临界 CO2萃取条件为 ： 萃取釜压力为 18-35MPa， 萃取釜温度为 33-55， 萃取时间为 2-5h， 采用上 述参数进行萃取， 再经解析得到萃取液。 3.如权利要求1所述的一种梫木毒素IV的制备方法， 其特征在于步骤C所述氧化镁短 程柱柱径高比为1:3-5， 所述梯度洗脱顺序为按正己烷-二氯甲烷体积比2:1、 1:1、 1:3、 1:5 进行梯度洗脱。 权 利 要 求 书 CN 102659582 A 2 1/3 页 3 一种梫木毒素 IV 的制备方法 技术领域 0001 本发明属于中药有效部位的提取分离技术领域， 具体地说， 涉及一种从木藜芦叶 中。
5、提取制备梫木毒素 IV 的方法。 背景技术 0002 梫木毒素 IV（Grayanotoxin IV） 是一种二萜类化合物， 分子式为 C22H34O6， 分子 量为 394.51， 为白色针晶， mp.167-168， CAS 号 ： 30272-17-4。主要存在于杜鹃花科多 种植物中， 如卡罗利纳狭叶山月桂Kalmia angustifolia var.caroliniana 的叶、 木藜芦 Leucothoe grayana Maxim. 叶、 头花杜鹃Rhododendron capitatum Maxim. 和大坂山杜鹃 Rhododendron dabanshanense Fan。
6、g et Wang叶。 其中以木藜芦叶的收率最高， 达到0.09%。 0003 现代药理研究表明， 梫木毒素 IV 具有降压作用。目前对梫木毒素 IV 的研究较少， 因此提供一种简便且易于工业化生产梫木毒素 IV 的方法具有重要的意义， 为梫木毒素 IV 的开发研究奠定了基础。 发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是提供一种梫木毒素 IV 的制备方法， 该方法快速、 简 便、 产品含量高。 0005 为了解决上述技术问题， 本发明的技术方案如下 ： 一种梫木毒素 IV 的制备方法， 其特征在于包括以下步骤 ： A. 超临界萃取 ： 取木藜芦叶， 经粉碎处理， 加入超临界萃取釜中， 用丙酮。
7、作为夹带剂， 进行萃取， 得到萃取液 ； B. 溶剂萃取 ： 将萃取液浓缩， 回收丙酮， 用乙醚萃取多次， 合并乙醚萃取液， 浓缩得乙 醚浸膏 ； C. 氧化镁柱层析 ： 将乙醚浸膏与氧化镁混合烘干， 上氧化镁短程柱层析， 正己烷 - 二氯 甲烷梯度洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至小体积， 得粗晶 ； D. 重结晶 ： 用乙酸乙酯 - 丙酮混合溶剂重结晶， 得到纯度达 95% 以上的梫木毒素 IV 产 品。 0006 步骤 A 所述超临界 CO2萃取条件为 ： 萃取釜压力为 18-35MPa， 萃取釜温度为 33-55， 萃取时间为 2-5h， 采用上述参数进行萃取， 再经解析得到萃取液。 000。
8、7 步骤C所述氧化镁短程柱柱径高比为1:3-5， 所述梯度洗脱顺序为按正己烷-二氯 甲烷体积比 2:1、 1:1、 1:3、 1:5 进行梯度洗脱。 0008 本发明的积极效果在于 ： 1、 采用超临界 CO2萃取， 环保无污染， 效率高， 能耗较低 ； 2、 柱层析前采用溶剂萃取， 降低了非目标物质的浓度和含量， 从而减少了后续柱层析 的分离纯化的负担， 降低了生产成本 ； 3、 氧化镁短程柱处理量大， 再通过重结晶从而获得 95% 以上纯度的梫木毒素 IV。 说 明 书 CN 102659582 A 3 2/3 页 4 0009 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明， 但本发明要求保护的。
9、范围并不局限 于下列实施方式。 具体实施方式 0010 实施例 1 ： 取木藜芦叶 2kg 粉碎处理， 加入超临界 CO2萃取釜中， 萃取温度为 38， 萃取压力为 19MPa， CO2流量为 4ml/g 生药 /min， 保持釜压、 温度不变， 通入 200ml 丙酮作为夹带剂， 萃 取时间为 4h， 分离釜温度为 35， 压力为 6MPa， 收集解析萃取物， 减压回收丙酮， 用相当于 丙酮浸膏 2 倍量的乙醚萃取 4 次， 收集合并乙醚萃取液， 减压浓缩得乙醚浸膏 ； 将乙醚浸 膏与氧化镁按质量比 1:1.5 混合烘干， 再取新氧化镁装柱， 将拌样氧化镁装于其上， 用正己 烷 - 二氯甲烷。
10、混合溶剂依次按体积比 2:1、 1:1、 1:3、 1:5 进行洗脱， 收集梫木毒素 IV 洗脱 液， 回收试剂， 浓缩至小体积， 静置析晶， 滤出粗晶， 再用乙酸乙酯 - 丙酮混合溶剂重结晶 5 次， 得产品 1.32g， 含量 97.4%。 0011 实施例 2 ： 取木藜芦叶 2kg 粉碎处理， 加入超临界 CO2萃取釜中， 萃取温度为 53， 萃取压力为 27MPa， CO2流量为 3ml/g 生药 /min， 保持釜压、 温度不变， 通入 150ml 丙酮作为夹带剂， 萃取 时间为 2h， 分离釜温度为 42， 压力为 4MPa， 收集解析萃取物， 减压回收丙酮， 用相当于丙 酮浸膏。
11、 3 倍量的乙醚萃取 2 次， 收集合并乙醚萃取液， 减压浓缩得乙醚浸膏 ； 将乙醚浸膏与 氧化镁按质量比 1:2 混合烘干， 再取新氧化镁装柱， 将拌样氧化镁装于其上， 用正己烷 - 二 氯甲烷混合溶剂依次按体积比 2:1、 1:1、 1:3、 1:5 进行洗脱， 收集梫木毒素 IV 洗脱液， 回收 试剂， 浓缩至小体积， 静置析晶， 滤出粗晶， 再用乙酸乙酯 - 丙酮混合溶剂重结晶 3 次， 得产 品 1.36g， 含量 96.1%。 0012 实施例 3 ： 取木藜芦叶 2kg 粉碎处理， 加入超临界 CO2萃取釜中， 萃取温度为 46， 萃取压力为 32MPa， CO2流量为 4ml/。
12、g 生药 /min， 保持釜压、 温度不变， 通入 160ml 丙酮作为夹带剂， 萃 取时间为 5h， 分离釜温度为 40， 压力为 7MPa， 收集解析萃取物， 减压回收丙酮， 用相当于 丙酮浸膏 4 倍量的乙醚萃取 3 次， 收集合并乙醚萃取液， 减压浓缩得乙醚浸膏 ； 将乙醚浸 膏与氧化镁按质量比 1:1.5 混合烘干， 再取新氧化镁装柱， 将拌样氧化镁装于其上， 用正己 烷 - 二氯甲烷混合溶剂依次按体积比 2:1、 1:1、 1:3、 1:5 进行洗脱， 收集梫木毒素 IV 洗脱 液， 回收试剂， 浓缩至小体积， 静置析晶， 滤出粗晶， 再用乙酸乙酯 - 丙酮混合溶剂重结晶 4 次，。
13、 得产品 1.38g， 含量 96.8%。 0013 实施例 4 ： 取木藜芦叶 2kg 粉碎处理， 加入超临界 CO2萃取釜中， 萃取温度为 33， 萃取压力为 24MPa， CO2流量为 2ml/g 生药 /min， 保持釜压、 温度不变， 通入 180ml 丙酮作为夹带剂， 萃取 时间为 3h， 分离釜温度为 30， 压力为 5MPa， 收集解析萃取物， 减压回收丙酮， 用相当于丙 酮浸膏 3 倍量的乙醚萃取 4 次， 收集合并乙醚萃取液， 减压浓缩得乙醚浸膏 ； 将乙醚浸膏与 氧化镁按质量比 1:1 混合烘干， 再取新氧化镁装柱， 将拌样氧化镁装于其上， 用正己烷 - 二 氯甲烷混合溶剂依次按体积比 2:1、 1:1、 1:3、 1:5 进行洗脱， 收集梫木毒素 IV 洗脱液， 回收 试剂， 浓缩至小体积， 静置析晶， 滤出粗晶， 再用乙酸乙酯 - 丙酮混合溶剂重结晶 2 次， 得产 说 明 书 CN 102659582 A 4 3/3 页 5 品 1.40g， 含量 95.7%。 说 明 书 CN 102659582 A 5 。