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1、(10)申请公布号 CN 102649806 A (43)申请公布日 2012.08.29 CN 102649806 A *CN102649806A* (21)申请号 201110045150.0 (22)申请日 2011.02.25 C07J 63/00(2006.01) (71)申请人 苏州宝泽堂医药科技有限公司 地址 215125 江苏省苏州市工业园区星湖街 218 号纳米科技园 A2 栋 101 室 (72)发明人 李法庆 刘东锋 (54) 发明名称 一种长梗冬青苷的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种长梗冬青苷的制备方法， 该方法按顺序包括如下步骤 ： 1) 取四季青粉碎， 加。
2、入萃取釜中， 采用超临界 CO2萃取， 收集长梗冬 青苷萃取物 ； 2) 用热水溶解萃取物， 过滤， 滤液 加入大孔树脂柱吸附， 用水洗脱除去杂质， 再用 30-50乙醇溶液洗脱， 减压浓缩洗脱液， 低温静 置， 离心， 得沉淀物 ； 3) 将沉淀物用乙醇重结晶即 得长梗冬青苷。 本发明的制备方法简单， 适合工业 化大生产， 且能耗低、 污染小， 是一种环保型生产 工艺。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种长梗冬青苷的制备方法， 其特征在于包括以下。
3、步骤 ： 1)取四季青药材， 粉碎成粗粉， 加入萃取釜中， 采用超临界CO2萃取， 收集长梗冬青苷萃 取物 ； 2) 用热水溶解长梗冬青苷萃取物， 过滤， 滤液加入大孔树脂柱吸附， 先用水洗脱除去杂 质， 再用 30-50乙醇溶液洗脱， 减压浓缩洗脱液， 低温静置， 离心， 得沉淀物 ； 3) 将上述沉淀物用乙醇重结晶， 干燥即得长梗冬青苷产品。 2. 如权利要求 1 所述一种长梗冬青苷的制备方法， 其特征在于步骤 1) 所述 CO2超 临界萃取的压力为 18-35MPa， 温度为 22-55， CO2流量为 15-28L/h， 萃取后分离压力为 4-10MPa， 温度为 30-45。 3.如。
4、权利要求1所述一种长梗冬青苷的制备方法， 其特征在于步骤2)所述大孔树脂为 非极性或弱极性大孔树脂， 可选 XAD-1、 AB-8、 NKA、 XSD-3、 SP825、 LD140 中的一种。 4.如权利要求1所述一种长梗冬青苷的制备方法， 其特征在于步骤2)所述洗脱条件为 先用 4-6BV 水洗脱， 再用 30-50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液。 权 利 要 求 书 CN 102649806 A 2 1/3 页 3 一种长梗冬青苷的制备方法 技术领域 ： 0001 本发明属于医药领域， 具体而言是涉及一种长梗冬青苷的制备方法。 背景技术 ： 0002 四季青是我国常用中药材， 为冬青属植物冬。
5、青 Ilex purpurea Hassk. 的干燥叶。 秋、 冬二季采收， 晒干。四季青具有清热解毒、 消肿祛瘀的功效。临床上用于急慢性支气管 炎、 肺炎、 急性咽喉炎、 胆道感染、 尿路感染、 痢疾、 烧伤等。 四季青在长江以南各省区均有广 泛分布， 药用资源十分丰富。民间用四季青水煎液治疗烧烫伤， 效果尤佳。现代研究表明， 四季青具有广谱抗菌作用， 对心血管系统也有显著的药理作用， 以其为原料生产的注射剂、 片剂及与化学药的合剂， 用来治疗病毒性角膜炎、 冠心病心绞痛， 均有显著效果。四季青含 有酚酸类、 三萜类、 挥发油等成分， 其中三萜类及其皂苷含量较高， 解军波等采用 HPLC-E。
6、LSD 法测定四季青中 3 种三萜及其皂苷的含量， 包括长梗冬青苷、 地榆皂苷 I 和救必应酸， 总量 约为 5。1972 年长谷纲男等从日本产四季青中分离得到主要的皂苷长梗冬青苷。 0003 长梗冬青苷 (Pedunculoside)， 又名具栖冬青苷， 分子式 C36H58O10， 分子量 ： 650， mp.212-214。结构式为 0004 0005 长梗冬青苷 (Pedunculoside) 0006 庞小雄等报道的具栖冬青苷的提取分离方法是以救必应为原料， 用 95乙醇回流 提取 3 次， 提取液浓缩， 加入等量蒸馏水， 静置过夜， 离心， 沉淀物用适量水洗， 干燥得粗品， 粗品用。
7、氯仿回流除去脂溶性成分， 残渣用 50乙醇加热处理， 滤除不溶物， 滤液放置， 过滤， 所得结晶经过硅胶柱层析， 氯仿 - 甲醇 - 水 (7 2 1) 下层洗脱， - 薄层层析检查， 合并 相同组分后， 用50乙醇重结晶得具栖冬青苷。 该方法采用剧毒的氯仿脱脂， 硅胶柱层析分 离产量小、 生产周期长、 成本高， 无法适应工业化生产需要。 发明内容 ： 0007 本发明要解决的技术问题是 ： 提供一种适合大批量工业化生产的长梗冬青苷的制 备方法， 该方法能耗低、 污染小、 操作简单、 安全、 快速。 0008 一种长梗冬青苷的制备方法， 其特征在于包括以下步骤 ： 0009 1)取四季青药材，。
8、 粉碎成粗粉， 加入萃取釜中， 采用超临界CO2萃取， 收集长梗冬青 说 明 书 CN 102649806 A 3 2/3 页 4 苷萃取物 ； 0010 2) 用热水溶解长梗冬青苷萃取物， 过滤， 滤液加入大孔树脂柱吸附， 先用水洗脱除 去杂质， 再用 30-50乙醇溶液洗脱， 减压浓缩洗脱液， 低温静置， 离心， 得沉淀物 ； 0011 3) 将上述沉淀物用乙醇重结晶， 干燥即得长梗冬青苷产品。 0012 步骤 1) 所述 CO2超临界萃取的压力为 18-35MPa， 温度为 22-55， CO2流量为 15-28L/h， 萃取后分离压力为 4-10MPa， 温度为 30-45。 0013。
9、 步骤 2) 所述大孔树脂为非极性或弱极性大孔树脂， 可选 XAD-1、 AB-8、 NKA、 XSD-3、 SP825、 LD140 中的一种。 0014 步骤2)所述洗脱条件为先用4-6BV水洗脱， 再用30-50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱 液。 0015 本发明的有益效果在于 ： 采用超临界CO2萃取长梗冬青苷， 节能明显、 污染小， 操作 简单、 安全、 快速， 整个工艺均采用无毒试剂， 所得产品可用于医药、 保健品、 化妆品等领域。 0016 下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明， 但本发明要求保护的范围并不局 限于下列实施方式。 具体实施方式 ： 0017 实施例 1 ： 001。
10、8 取四季青药材 1kg， 粉碎成过 20-40 目的粗粉， 加入萃取釜中， 设定萃取温度为 40， 压力为 35MPa， CO2流量为 22L/h， 分离压力 9MPa， 分离温度 45 ； 待系统达到设定温 度后， 打开CO2钢瓶阀门， 使CO2进入萃取釜， 待系统压力平衡后开始萃取， 萃取4小时， 萃取 完毕后收集萃取物。将萃取物用热水溶解， 过滤， 滤液加入 XDA-1 大孔吸附树脂柱， 流速为 1BV/h， 上完药液后先用 4BV 去离子水洗脱， 然后用 50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓 缩至总体积的 1/5， 置 4下放置 10 小时， 离心 (10000r/min)， 沉。
11、淀用 80乙醇重结晶， 干 燥得长梗冬青苷 22.72g， 含量为 89.2。 0019 实施例 2 ： 0020 取四季青药材 1kg， 粉碎成过 20-40 目的粗粉， 加入萃取釜中， 设定萃取温度为 55， 压力为 33MPa， CO2流量为 28L/h， 分离压力 5MPa， 分离温度 42 ； 待系统达到设定温 度后， 打开 CO2钢瓶阀门， 使 CO2进入萃取釜， 待系统压力平衡后开始萃取， 萃取 3 小时， 萃 取完毕后收集萃取物。将萃取物用热水溶解， 过滤， 滤液加入 AB-8 大孔吸附树脂柱， 流速为 1.5BV/h， 上完药液后先用 6BV 去离子水洗脱， 然后用 50乙醇。
12、溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压 浓缩至总体积的 1/4， 置 5下放置 8 小时， 离心 (10000r/min)， 沉淀用 80乙醇重结晶， 干 燥得长梗冬青苷 17.76g， 含量为 88.1。 0021 实施例 3 ： 0022 取四季青药材 1kg， 粉碎成过 20-40 目的粗粉， 加入萃取釜中， 设定萃取温度为 47， 压力为 21MPa， CO2流量为 18L/h， 分离压力 7MPa， 分离温度 43 ； 待系统达到设定温 度后， 打开 CO2钢瓶阀门， 使 CO2进入萃取釜， 待系统压力平衡后开始萃取， 萃取 3 小时， 萃 取完毕后收集萃取物。将萃取物用热水溶解， 过滤， 。
13、滤液加入 AB-8 大孔吸附树脂柱， 流速为 1.5BV/h， 上完药液后先用 5BV 去离子水洗脱， 然后用 50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压 浓缩至总体积的 1/4， 置 5下放置 8 小时， 离心 (10000r/min)， 沉淀用 80乙醇重结晶， 干 说 明 书 CN 102649806 A 4 3/3 页 5 燥得长梗冬青苷 17.76g， 含量为 87.5。 0023 实施例 4 ： 0024 取四季青药材 2kg， 粉碎成过 20-40 目的粗粉， 加入萃取釜中， 设定萃取温度为 43， 压力为 18MPa， CO2流量为 23L/h， 分离压力 4MPa， 分离温度 3。
14、9 ； 待系统达到设定温 度后， 打开CO2钢瓶阀门， 使CO2进入萃取釜， 待系统压力平衡后开始萃取， 萃取3小时， 萃取 完毕后收集萃取物。将萃取物用热水溶解， 过滤， 滤液加入 XSD-3 大孔吸附树脂柱， 流速为 1.2BV/h， 上完药液后先用 4BV 去离子水洗脱， 然后用 50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压 浓缩至总体积的 1/5， 置 0下放置 10 小时， 离心 (12000r/min)， 沉淀用 90乙醇重结晶， 干燥得长梗冬青苷 37.44g， 含量为 85.4。 0025 实施例 5 ： 0026 取四季青药材 2kg， 粉碎成过 20-40 目的粗粉， 加入萃取釜。
15、中， 设定萃取温度为 22， 压力为 24MPa， CO2流量为 15L/h， 分离压力 6MPa， 分离温度 35 ； 待系统达到设定温 度后， 打开CO2钢瓶阀门， 使CO2进入萃取釜， 待系统压力平衡后开始萃取， 萃取4小时， 萃取 完毕后收集萃取物。将萃取物用热水溶解， 过滤， 滤液加入 XSD-3 大孔吸附树脂柱， 流速为 1.2BV/h， 上完药液后先用 5BV 去离子水洗脱， 然后用 50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压 浓缩至总体积的 1/5， 置 0下放置 10 小时， 离心 (12000r/min)， 沉淀用 90乙醇重结晶， 干燥得长梗冬青苷 37.44g， 含量为 8。
16、8.0。 0027 实施例 6 ： 0028 取四季青药材 10kg， 粉碎成过 20-40 目的粗粉， 加入萃取釜中， 设定萃取温度为 35， 压力为 29MPa， CO2流量为 20L/h， 分离压力 7MPa， 分离温度 30 ； 待系统达到设定温 度后， 打开CO2钢瓶阀门， 使CO2进入萃取釜， 待系统压力平衡后开始萃取， 萃取4小时， 萃取 完毕后收集萃取物。将萃取物用热水溶解， 过滤， 滤液加入 LD140 大孔吸附树脂柱， 流速为 1.5BV/h， 上完药液后先用 6BV 去离子水洗脱， 然后用 50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压 浓缩至总体积的 1/4， 置 -2下放置 8 小时， 离心 (12000r/min)， 沉淀用 95乙醇重结晶， 干燥得长梗冬青苷 200.6g， 含量为 88.3。 说 明 书 CN 102649806 A 5 。