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1、(10)授权公告号 CN 101249043 B (45)授权公告日 2013.02.27 CN 101249043 B *CN101249043B* (21)申请号 200810050569.3 (22)申请日 2008.04.03 A61K 8/64(2006.01) A61K 8/65(2006.01) A61K 8/73(2006.01) A61Q 19/00(2006.01) A61Q 19/06(2006.01) A61Q 19/08(2006.01) (73)专利权人 冯来坤 地址 130021 吉林省长春市西安大路 154 号 金色华尔兹 1 号楼 1 门 1102 (72)发。
2、明人 冯来坤 (74)专利代理机构 吉林长春新纪元专利代理有 限责任公司 22100 代理人 陈宏伟 (54) 发明名称 人生长激素和人表皮生长因子组合物在美容 中的应用 (57) 摘要 本发明公开了人生长激素和人表皮生长因子 组合物在美容中的应用， 同时还提供了其生产工 艺。 本发明利用生物技术美容， 将人生长激素用于 外用美容， 并与人表皮生长因子组合在一起应用 于美容。人生长激素和人表皮生长因子两种生物 活性成分联合应用， 各成分相互协同， 通过补充促 进表皮细胞代谢和增殖的生物活性因子， 从根本 上改善皮肤的生理状态， 促进表皮组织的修复和 代谢， 促进细胞外透明质酸、 糖蛋白等生物大。
3、分子 的合成 ； 可使皮肤异常细嫩年轻， 淡化色斑， 平复 皱纹， 减轻日晒对皮肤的损伤， 还具有显著抗衰老 作用， 嫩肤美容效果显著， 且安全可靠， 无副作用。 (51)Int.Cl. 审查员 丁伟 权利要求书 1 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 8 页 1/1 页 2 1. 一种含有人生长激素和人表皮生长因子的美容化妆品， 由以下物质制成的 ： 人表皮生长因子1030ug、 人生长激素4080ug、 甘露醇或右旋糖苷38g、 水溶性 胶原蛋白 1 6g、 透明质酸 1 6g、 纯化水加至 100ml。 2. 根据权利要。
4、求 1 所述美容化妆品的制备方法， 包括以下步骤 ： 称取人表皮生长因子 10 30ug、 人生长激素 40 80ug、 甘露醇或右旋糖苷 3 8g、 水溶性胶原蛋白 1 6g、 透 明质酸 1 6g、 纯化水加至 100ml， 将上述各成分溶解于纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 权 利 要 求 书 CN 101249043 B 2 1/8 页 3 人生长激素和人表皮生长因子组合物在美容中的应用 技术领域 0001 本发明涉及人生长激素和人表皮生长因子组合物在美容中的应用， 同时还提供了 其生产工艺， 属于生物美容制品技术领域。 背景技术 0002 人表皮生长因子 (Human Epider。
5、mal Growth Factor， 以下简称 ： hEGF)， 是人体内 分泌的一种重要的生长因子， 是由53个氨基酸组成的相对分子量为6222的短链多肽。 hEGF 作为一种强有力的细胞分裂因子， 具有很高的生物活性。极微量 hEGF 即能强烈促进皮肤细 胞的分裂和生长， 还能刺激细胞外一些大分子(如透明质酸和糖蛋白等)的合成和分泌， 具 有极强的促进表皮生长代谢的作用， 可使皮肤细嫩光滑， 美容效果显著。 0003 hEGF 可促进皮肤组织修复过程中的 DNA、 RNA 和羟脯氨酸的合成， 加速组织的生成 和上皮细胞的增殖， 从而缩短修复及愈合时间， 促进皮肤的代谢。 0004 hEGF。
6、的外用美容是一个重要的研究领域。 但在hEGF应用于美容领域时， 存在三个 严重的问题， 阻碍了其实际应用。即 ： 0005 (1)hEGF在常温下难以保持其生物学活性。 在常温下放置短时间后， 其即失去其生 物学活性， 其水溶液一般要置于-10以下保存。 故其生产、 运输、 保存都成为不可逾越的鸿 沟， 从而阻碍了其实际应用。 0006 (2)hEGF 易被蛋白酶降解而失去活性。hEGF 的化学本质为蛋白多肽类， 人皮肤表 面存在大量的蛋白酶， 在 hEGF 接触皮肤后， 会很快被皮肤表面的蛋白酶降解而失去活性。 0007 (3)hEGF 难以透皮吸收。hEGF 是一个分子量为 6222 的。
7、大分子生物活性物质， 在正 常情况下， 其难以透过皮肤进行吸收。 0008 人生长激素(Human Growgh Hormone， 以下简称 ： hGH)是由人脑垂体前叶含有嗜酸 性颗粒的生长激素 (GH) 分泌细胞所分泌。其为 191 个氨基酸构成的单链肽类激素， 分子内 有两对二硫键。分子式 ： C990H1528N262O300S7， 分子量为 22125。是人类出生后促进生长的最重 要的激素， 有种属特异性。 0009 hGH 应用研究均局限在医学临床上应用于各种疾病和大手术的治疗等， 其使用方 法均为注射。尚未见有人将 hGH 通过外用的方法应用于美容。 0010 但在 hGH 应用。
8、于美容时， 也存在三个严重的问题， 阻碍了其实际应用。即 ： 0011 (1)hGH 在常温下难以保持其生物学活性。在常温下放置短时间后， 其即失去其生 物学活性， 故其生产、 运输、 保存都成为不可逾越的鸿沟， 使其实际应用难以实现。 0012 (2)hGH 易被蛋白酶降解而失去活性。hGH 的化学本质为蛋白多肽类， 人皮肤表面 存在大量的蛋白酶， 在 hGH 接触皮肤后， 会很快被皮肤表面的蛋白酶降解而失去活性。 0013 (3)hEGF 难以透皮吸收。hEGF 是一个分子量为 22125 的特大分子生物活性物质， 在正常情况下， 其难以透过皮肤进行吸收。 0014 目前， 将 hGH 或。
9、 hEGF 和 hGH 组合在一起， 通过外用途径应用于人的美容， 尚未见文 献报道。 说 明 书 CN 101249043 B 3 2/8 页 4 发明内容 0015 本发明公开了人生长激素在制备美容化妆品中的应用。 0016 本发明还提供了一种含有人生长激素和人表皮生长因子组合物为主要活性成分 的美容化妆品 ： 0017 人表皮生长因子 10 30ug、 人生长激素 40 100ug、 活性稳定剂 4 8g、 活性促 进剂 0.3 3g、 蛋白酶抑制剂 0.1 0.6g、 透皮吸收促进剂 0.1 2g ； 0018 所用的蛋白酶抑制剂为硼酸亮氨酸、 硼酸缬氨酸、 硼酸丙氨酸、 N- 乙酰半。
10、胱氨酸中 的任意一种。 0019 所用的透皮吸收促进剂为月桂氮卓酮、 丙二醇、 巯基乙酸钙中的任意一种。 0020 所用的活性稳定剂为透明质酸、 甘露醇、 右旋糖苷的任意一种 ； 0021 所用的活性促进进剂为水溶性胶原蛋白 ； 0022 所述的美容化妆品的制备方法， 包括以下步骤 ： 在人生长激素或人生长激素和人 表皮生长因子中加入活性稳定剂、 活性促进剂、 蛋白酶抑制剂中及透皮吸收促进剂的任意 一种或多种， 用纯化水配制成水溶液， 再采用真空冷冻干燥工艺制成冻干粉。 0023 本发明的技术方案 0024 本组方中涉及以下成分 ： 0025 活性成分 ： 人表皮生长因子、 人生长激素 ； 0。
11、026 活性稳定剂 ： 透明质酸、 甘露醇、 右旋糖苷 ； 0027 活性促进进剂 ： 水溶性胶原蛋白 ； 0028 蛋白酶抑制剂 ： 硼酸亮氨酸、 硼酸缬氨酸、 硼酸丙氨酸、 N- 乙酰半胱氨酸 ； 0029 透皮吸收促进剂 ： 佐恩 ( 月桂氮卓酮， Azone)、 丙二醇、 巯基乙酸钙。 0030 在上述的活性成分中加入活性稳定剂、 活性促进剂、 蛋白酶抑制剂中的任意一种 或多种， 用低温纯化水配制成水溶液， 并置于冰浴中， 待分装。 将上述配制而得的水溶液， 分 装到西林瓶中， 置于真空冷冻干燥机中进行冻干后即得。 0031 专用溶媒的制造 0032 透皮吸收促进剂 0.1 2 份、 。
12、蛋白酶抑制剂 0.1 0.6 份、 活性稳定剂 4 8 份、 丙三醇 2 6 份、 PBS 溶液加至 100 份， 将透皮吸收促进剂 + 蛋白酶抑制剂 + 活性稳定剂， 用 PBS 溶液溶解， 加入丙三醇， 混匀， 分装， 加塞， 用流通蒸汽灭菌后即得。 0033 冻干粉的制剂制造 0034 将活性成分 + 活性稳定剂 + 活性促进剂和 / 或活性促进剂和 / 或蛋白酶抑制剂， 用低温纯化水配制成水溶液， 并置于冰浴中。 0035 将上述配制而得的水溶液， 分装到西林瓶中， 将胶塞半加塞， 置于真空冷冻干燥机 中进行冻干。 0036 冻干工艺及条件为 ： 开启真空冷冻干燥机， 对制品进行预冷，。
13、 将制品温度降 至 -60， 降温时间为 4-5 小时。启动真空泵， 将箱内真空度抽至 0.3Mbar。加温， 升华， 升 华时间为 12-15 小时。 0037 至制品中的水分升华完毕， 压塞， 箱内充入无菌气体， 开箱， 取出制品， 轧盖， 入库。 0038 剂型采用冻干粉加专用溶媒。冻干粉的配制及制造工艺为 ： 将活性成分 + 活性稳 说 明 书 CN 101249043 B 4 3/8 页 5 定剂和/或活性促进剂和/或蛋白酶抑制剂， 用配制成水溶液， 再采用真空冷冻干燥工艺制 成冻干粉。 0039 使用时需用专用溶媒作溶解剂， 专用溶媒配方为 ： 0040 将透皮吸收促进剂 + 蛋白。
14、酶抑制剂 + 活性稳定剂， 用 pH5.0 7.4PBS 溶液溶解， 加入丙三醇， 混匀， 分装， 加塞， 用 100流通蒸汽灭菌 30 分钟后即得。 0041 活性稳定剂可用其中的一种或几种， 但三种活性稳定剂及一种活性促进剂同时使 用效果最佳。透皮吸收促进剂及蛋白酶抑制剂在组方中每次一般只用其中的一种， 也可几 种合用， 其效果类似。 0042 本发明采用的真空冷冻干燥的制造工艺， 充分满足了生物活性因子hEGF和hGH和 生物学特性， 最大程度地保持了其生物学活性， 解决了hEGF和hGH的生产、 运输和保存时无 法保持活性的问题， 使 hEGF 和 hGH 的实际应用成为现实。 004。
15、3 本发明的有益效果 0044 本发明利用生物技术美容， 将 hGH 用于外用美容， 并首次与 hEGF 组合在一起应用 于美容。单独使用 hGH 即有较好的美容效果， hGH 与 hEGF 两种生物活性成分联合应用， 通 过补充促进表皮细胞代谢和增殖的生物活性因子， 从根本上改善皮肤的生理状态， 促进表 皮组织的修复和代谢， 促进细胞外某些生物大分子 ( 如透明质酸、 糖蛋白等 ) 的合成 ； 可使 皮肤异常细嫩年轻 ； 可淡化色斑， 平复皱纹 ； 可减轻日晒对皮肤的损伤 ； 还具有显著抗衰老 作用。故嫩肤美容效果显著， 且安全可靠， 无副作用。hEGF 与 hGH 联合应用， 其组方中各成。
16、 分可相互协同， 较单用 hEGF 或 hGH， 可显著促进人上皮组织的生成和增殖， 美容效果显著增 强。 0045 将透皮吸收促进剂应用于 hEGF 和 / 或 hGH 的美容组方中， 解决了 hEGF 和 hGH 难 以透皮吸收的问题， 显著地提高了其美容效果。 0046 将蛋白酶抑制剂应用于 hEGF 和 hGH 的美容组方中， 解决了 hEGF 和 hGH 易被蛋白 酶降解的问题， 显著地提高了其嫩肤美容的效果。保持了 hEGF 和 hGH 的活性， 促进了 hEGF 和 hGH 的吸收， 增强了 hEGF 和 hGH 的美容效果。 0047 将 hEGF 和 hGH 制成冻干粉制剂，。
17、 解决了其在常温下易失去活性的问题。该配方制 成的冻干粉剂， 可在常温下可保持活性 18 个月 ； 在 0 7冷库中， 可保持活性三年以上。 故可常温运输和保存， 如置于冷库或冰箱中保持， 效果更佳。 0048 其制造工艺合理， 适合于工业化大规模生产。 0049 材料 0050 活性成分 ： hEGF 和 hGH。 0051 活性稳定剂 ： 透明质酸、 甘露醇、 右旋糖苷。市售， 化学纯。 0052 活性促进剂 ： 水溶性胶原蛋白， 市售， 纯度大于 95。 0053 蛋白酶抑制剂 ： 硼酸亮氨酸、 硼酸缬氨酸、 硼酸丙氨酸、 N- 乙酰半胱氨酸， 市售， 化 学纯。 0054 透皮吸收促进。
18、剂 ： 佐恩 ( 月桂氮卓酮， Azone)、 丙二醇、 巯基乙酸钙 0055 蛋白酶 ： 胃蛋白酶、 胰蛋白酶， 市售， 化学纯。 0056 抗蛋白酶降解试验 0057 实验品 ： 将上述制造的冻干粉制剂用专用溶媒溶解， 制成水溶液， 并分别测定其两 说 明 书 CN 101249043 B 5 4/8 页 6 种活性成分的活性， 以此活性值作为 100。 0058 对照品 ： 除不含有蛋白酶抑制剂外， 其余同实验品。用纯化水制成水溶液， 并分别 测定其两种活性成分的活性， 以此活性值作为 100。 0059 蛋白酶溶液 ： 将胃蛋白酶及胰蛋白酶， 用纯化水配成含 1胃蛋白酶及 1的胰蛋 白。
19、酶的混合水溶液。 0060 分别取实验品及对照品各 20ml， 分别加入蛋白酶溶液 0.5ml， 混匀， 置 37水浴中 孵育， 分别于不同的时间取样， 进行活性测定。 0061 稳定性试验 0062 取上述制得的冻干粉制剂， 分别置于室温及 7冰箱中， 分别于放置不同的时间后 取样， 进行含量及活性测定。 0063 美容效果试验 0064 实验品 1 ： 含有 hEGF 及 hGH 的冻干制剂 0065 实验品 2 ： 只含有 hEGF 的冻干制剂 0066 实验品 3 ： 只含有 hGH 的冻干制剂 0067 空白对照品 ： 既不含 hEGF 也不含 hGH 的冻干制剂 0068 市售品对。
20、照品 ： 市售某品牌嫩肤美容产品 0069 实验品 1 3 及空白对照品， 在使用前均用专用溶媒溶解。 0070 嫩肤、 去皱试验 0071 选取 45 55 岁老年人 150 人， 男女各半。随机分为 5 组， 每组 30 人， 男女各半。 每组分别使用上述实验品或空白对照品， 连续 2 个月， 然后分别评价其嫩肤、 去皱的美容效 果。 0072 祛斑试验 0073 选取 20 35 岁面部有色斑的女性 120 人， 随机分为 4 组， 每组 30 人。每组分别 使用上述各实验品或空白对照品， 连续 2 个月， 然后分别评价其祛斑效果。 0074 祛痘试验 0075 选取 18 25 岁面部。
21、有青春痘的人 120 人， 男女各半， 随机分为 4 组， 每组 30 人， 男女各半。每组分别使用上述各实验品或空白对照品， 连续 2 个月， 然后分别评价其祛痘效 果。 0076 安全性试验 0077 在上述嫩肤去皱试验、 祛斑试验及祛痘试验中， 同时观察其对皮肤的刺激性、 过敏 性及其它不良反应。 0078 冻干粉制剂的制造结果 0079 经上述工艺制造出来的冻干粉制剂， 外观呈疏松的块状或粉状， 呈白色或类白色。 加水极易溶解， 溶解后呈澄清透明的溶液。经微生物学检测， 未检出活的微生物， 为无菌溶 液。超过国家有关化妆品的卫生标准。 0080 专用溶媒的制造结果 0081 经上述工艺。
22、制造出来的专用溶媒， 外观澄清透明。 经微生物学检测， 未检出活的微 生物， 为无菌溶液。超过国家有关化妆品的卫生标准。 0082 抗蛋白酶降解试验结果 说 明 书 CN 101249043 B 6 5/8 页 7 0083 表 1 抗蛋白酶降解试验结果 0084 0085 由上表可以看出， 实验组在 37温度下与胃蛋白酶及胰蛋白酶共同作用 1 小时 后， 其活性基本不下降， 作用 3 小时后， 其活性仍降低很少。而对照组在与蛋白酶共同作用 10分钟后， 其活性只剩原来的三分之一。 结果说明， 本发明之制品具有良好的抗蛋白酶降解 作用。而一般在进行美容护肤时， 制品在皮肤上的停留时间不超过 3。
23、0 分钟， 故本发明之制 品的抗蛋白酶降解作用的时间是足够的。 0086 稳定性试验结果 0087 表 2 稳定性试验结果 0088 0089 从上表可以看出， 本发明之制品， 在常温及 7下放置至 36 个月时， 其含量均未见 明显变化 ； 在常温下放置至18个月时， 其活性未见明显变化 ； 在7下放置至36个月时， 其 活性仍未见明显变化。结果表明， 本发明之制品， 可在常温下保存及 18 个月， 如置于 7以 下， 则保存时间更长， 可长达三年以上。 0090 美容效果试验结果 0091 嫩肤、 去皱试验结果 0092 表 3 嫩肤、 去皱试验结果 说 明 书 CN 101249043 。
24、B 7 6/8 页 8 0093 0094 由上表可以看出， hGH 单独使用即有较好的嫩肤去皱效果 ； hGH 与 hEGF 合用， 嫩肤 去皱的效果最佳 ； 不含有 hGH 和 hEGF 的空白对照组， 没有嫩肤去皱的效果 ； hGH 与 hEGF 组、 hEGF 组及 hEGF 组的美容效果均显著优于市售对照品组。 0095 祛斑试验结果 0096 表 4 祛斑试验结果 0097 0098 由上表可以看出， hEGF 和 hGH 组、 hEGF 组及 hGH 组均具有较好的祛斑效果， 其中， hEGF 和 hGH 组合使用， 祛斑效果最佳。 0099 祛痘试验结果 0100 表 5 祛痘。
25、试验结果 0101 0102 由上表可以看出， hEGF 和 hGH 组、 hEGF 组及 hGH 组均具有较好的祛痘效果， 其中， hEGF 和 hGH 合用， 祛痘效果最佳。 0103 安全性试验结果 说 明 书 CN 101249043 B 8 7/8 页 9 0104 表 6 安全性试验结果 0105 0106 经390人使用后， 未发现对皮肤有刺激性， 只发现2人面部局部潮红， 后经了解， 此 2 人均具有皮肤接触过敏性， 并非由产品所引起。 具体实施方式 0107 通过以下实施例进一步举例描述本发明， 并不以任何方式限制本发明， 在不背离 本发明的技术解决方案的前提下， 对本发明所。
26、作的本领域普通技术人员容易实现的任何改 动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。 0108 主要材料 ： 0109 活性成分 ： hEGF和hGH。 可自行制造， 也可外购购获得。 其主要工艺过程为 ： 将hEGF 或 hGH 工程菌在发酵罐内发酵， 离心取菌体， 用 PBS 液洗涤两次， 置抽提液中抽提。离心取 上清， 盐析。离心， 取沉淀。将沉淀复溶， 用层析法进行纯化， 收集 hEGF 或 hGH 峰， 置 -20 低温冰柜中冻存。取样进行纯度及活性测定。 0110 活性稳定剂 ： 透明质酸、 甘露醇、 右旋糖苷， 市售， 化学纯。 0111 活性促进剂 ： 水溶性胶原蛋白， 市售， 。
27、纯度大于 95。 0112 蛋白酶抑制剂 ： 硼酸亮氨酸、 硼酸缬氨酸、 硼酸丙氨酸、 N- 乙酰半胱氨酸， 市售， 化 学纯。 0113 透皮吸收促进剂 ： 佐恩 ( 月桂氮卓酮， Azone)、 丙二醇、 巯基乙酸钙、 0114 实施例 1 ： 0115 称取 hEGF 10 30ug、 hGH 40 80ug、 透明质酸 1 6g、 甘露醇 3 8g、 右旋糖苷 38g、 水溶性胶原蛋白16g、 纯化水加至100ml ； 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分 装， 冻干， 即得。 0116 实施例 2 ： 0117 称取 hGH 50 100ug、 透明质酸 1 6g、 甘露醇 3 8g。
28、、 右旋糖苷 3 88g、 水溶 性胶原蛋白 1 6g、 纯化水加至 100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即 得。 0118 实施例 3 ： 0119 称取 hEGF 10 30ug、 hGH 40 80ug、 甘露醇 3 8g、 右旋糖苷 3 8g、 水溶性 胶原蛋白16g、 纯化水加至100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0120 实施例 4 ： 0121 称取 hEGF 10 30ug、 hGH 40 80ug、 甘露醇 3 8g、 右旋糖苷 3 8g、 透明质 酸 1 6g、 纯化水加至 100ml， 将上述各成分溶解于低温。
29、纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0122 实施例 5 ： 0123 称取 hEGF 10 30ug、 hGH 40 80ug、 右旋糖苷 3 8g、 水溶性胶原蛋白 1 6g、 说 明 书 CN 101249043 B 9 8/8 页 10 透明质酸16g、 纯化水加至100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0124 实施例 6 ： 0125 称取 hEGF 10 30ug、 hGH 40 80ug、 甘露醇 3 8g、 水溶性胶原蛋白 1 6g、 透明质酸16g、 纯化水加至100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0126 。
30、实施例 7 ： 0127 称取 hEGF 10 30ug、 hGH 40 80ug、 甘露醇 3 8g、 透明质酸 1 6g、 纯化水 加至 100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0128 实施例 8 ： 0129 称取 hEGF 10 30ug、 hGH 40 80ug、 右旋糖苷 3 8g、 水溶性胶原蛋白 1 6g、 纯化水加至 100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0130 实施例 9 ： 0131 称取 hGH 50 100ug、 甘露醇 3 8g、 右旋糖苷 3 8g、 水溶性胶原蛋白 1 6g、 纯化水加至 10。
31、0ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0132 实施例 10 ： 0133 称取 hGH 50 100ug、 透明质酸 1 6g、 甘露醇 3 8g、 右旋糖苷 3 8g、 纯化水 加至 100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0134 实施例 11 ： 0135 称取 hGH 50 100ug、 透明质酸 1 6g、 右旋糖苷 3 8g、 水溶性胶原蛋白 1 6g、 纯化水加至 100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0136 实施例 12 ： 0137 称取 hGH 50 100ug、 透明质酸 1 6g、 甘露醇 3 8g、 水溶性胶原蛋白 1 6g、 纯化水加至 100ml， 将上述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 0138 实施例 13 ： 0139 称取 hGH 50 100ug、 甘露醇 3 8g、 右旋糖苷 3 8g、 纯化水加至 100ml， 将上 述各成分溶解于低温纯化水中， 分装， 冻干， 即得。 说 明 书 CN 101249043 B 10 。