一种高纯度美洛西林钠及其粉针生产方法.pdf

本发明提供一种制备高纯度美洛西林钠的方法，还提供一种制备美洛西林钠粉针剂的方法。方法包括如下步骤：(1)粗品美洛西林钠，或者由粗品美洛西林酸加碱性钠盐形成的美洛西林钠，用大孔树脂吸附后用纯化水进行洗脱，收集洗脱液；(2)对大孔树脂吸附分离后所得初级纯品用凝胶柱纯化，用一定浓度的盐溶液洗脱，得到美洛西林钠含量99％以上的精制品，再经活性炭脱色后用0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得高纯度美洛西林钠，经粉碎后无菌分装制得美洛西林钠粉针剂。

权利要求书
1、  一种制备高纯度美洛西林钠的方法，其特征在于美洛西林钠粗品通过包括以下步骤的方法制得纯度不低于99％的美洛西林钠精制品：
(1)美洛西林钠粗品用大孔树脂吸附(优选为D1300大孔树脂)分离；
(2)步骤(1)所得产品用凝胶柱(优选为交联葡聚糖凝胶柱)纯化，得到美洛西林钠精制品。

2、  一种制备美洛西林钠粉针剂的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)美洛西林钠粗品用大孔树脂吸附(优选为D1300大孔树脂)分离；
(2)步骤(1)所得产品用凝胶柱(优选为交联葡聚糖凝胶柱)纯化，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分；
(3)步骤(2)所得美洛西林钠精制品经活性炭脱色，用微孔滤膜过滤后，冷冻干燥，粉碎至50-200目、优选60-100目的细粉，然后在无菌室内100级条件下分装，制得美洛西林钠粉针剂。

3、  根据权利要求1-2所述的方法，其中步骤(1)中大孔树脂分离用纯净水或者蒸馏水作为洗脱剂进行洗脱。

4、  根据权利要求1-3所述的方法，其中步骤(2)中用交联葡聚糖凝胶柱(优选为SephadexC系列的凝胶柱，更优选为SephadexC15、SephadexC25或SephadexC50的柱)纯化，用0.05～0.2mol/L浓度的盐溶液作为洗脱剂，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分。

5、  根据权利要求4所述的方法，其中所述的盐溶液选自甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、丙酸铵溶液和乳酸铵溶液。

6、  根据权利要求4所述的方法，其中凝胶柱洗脱温度为4℃～35℃，优选20℃～30℃。

7、  根据权利要求1-6所述的方法，其中步骤(3)中用0.22μm微孔滤膜过滤。

8、  根据权利要求1-7所述的方法，其中步骤(1)中美洛西林钠粗品是由美洛西林酸粗品加氧化钠、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠后形成的。

9、  一种制备高纯度美洛西林钠的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)美洛西林酸粗品中加入氢氧化钠，形成美洛西林钠粗品；
(2)步骤(1)的美洛西林钠粗品用D1300大孔树脂吸附分离，用蒸馏水进行洗脱，收集美洛西林钠洗脱液；
(3)步骤(2)所得美洛西林钠洗脱液浓缩后进行凝胶柱层析，柱填料选用SephadexC系凝胶，用0.05～0.2mol/L浓度的甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、丙酸铵溶液或者乳酸铵溶液洗脱，洗脱温度4～30℃，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分。

10、  一种制备美洛西林钠粉针剂的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)美洛西林酸粗品中加入氢氧化钠，形成美洛西林钠粗品；
(2)步骤(1)的美洛西林钠粗品用D1300大孔树脂吸附分离，用蒸馏水进行洗脱，收集美洛西林钠洗脱液；
(3)步骤(2)所得美洛西林钠洗脱液浓缩后进行凝胶柱层析，柱填料选用SephadexC系凝胶，用0.05～0.2mol/L浓度的甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、丙酸铵溶液或者乳酸铵溶液洗脱，洗脱温度4～30℃，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分，得到美洛西林钠精制品；
(4)步骤(3)所得的美洛西林钠精制品经活性炭脱色，0.22um微孔滤膜过滤后，冷冻干燥，粉碎至60-100目的细粉，然后在无菌室内100级条件下分装成每瓶含美洛西林钠按美洛西林计算0.1～2.0克，制得美洛西林钠粉针剂。

说明书一种高纯度美洛西林钠及其粉针生产方法
技术领域
本发明涉及一种制备高纯度美洛西林钠的方法，还涉及一种制备美洛西林钠粉针剂的方法，属于医药技术领域。
背景技术：
美洛西林钠为半合成青霉素类抗生素，对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎杆菌、变形杆菌、肠杆菌属、枸橼酸杆菌、沙雷菌属、不动杆菌属以及对青霉素敏感的革兰阳性球菌均有抑菌作用，大剂量有杀菌作用。对大肠埃希菌、肠杆菌属、肺炎杆菌、枸橼酸杆菌、沙雷菌属以及不动杆菌属等的抗菌活性强于羧苄西林、氨苄西林；对吲哚阳性变形杆菌、铜绿假单胞菌的抗菌活性强于羧苄西林和磺苄西林；对革兰阳性菌如金黄色葡萄球菌的抗菌活性与羧苄西林相似，而对粪链球菌的抗菌活性比羧苄西林、磺苄西林优越。对脆弱拟杆菌等大多数厌氧菌具有较好抗菌作用。本品体外试验表明其对细菌所产生的(内酰胺酶不稳定。本品与庆大霉素、卡那霉素等氨基糖苷类抗生素联合应用有显著协同作用。
适用于大肠埃希菌、肠杆菌属、变形杆菌等革兰阴性杆菌中敏感菌株所致的呼吸系统、泌尿系统、消化系统、妇科和生殖器官等感染，如败血症、化脓性脑膜炎、腹膜炎、骨髓炎、皮肤及软组织感染及眼、耳、鼻、喉科感染。
注射用美洛西林钠粉针剂已广泛应用于临床，是目前应用最广泛的抗生素药物之一，其制剂都是由美洛西林钠原料经无菌分装制得。大多数美洛西林钠原料存在纯度不高，溶解后澄明度差，水溶液中稳定性差的问题，这也是所有抗生素类药物的共性问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备高纯度美洛西林钠的方法，同时还提供一种用所述方法制备美洛西林钠粉针剂的方法。
为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：
本发明提供一种制备高纯度美洛西林钠的方法，其特征在于美洛西林钠粗品通过包括以下步骤的方法制得纯度不低于99％的美洛西林钠精制品：
(1)美洛西林钠粗品用大孔树脂吸附(优选为D1300大孔树脂)分离；
(2)步骤(1)所得产品用凝胶柱(优选为交联葡聚糖凝胶柱)纯化，得到美洛西林钠精制品。
本发明还提供一种制备美洛西林钠粉针剂的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)美洛西林钠粗品用大孔树脂吸附(优选为D1300大孔树脂)分离；
(2)步骤(1)所得产品用凝胶柱(优选为交联葡聚糖凝胶柱)纯化，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分；
(3)步骤(2)所得美洛西林钠精制品经活性炭脱色，用微孔滤膜过滤后，冷冻干燥，粉碎至50-200目、优选60-100目的细粉，然后在无菌室内100级条件下分装，制得美洛西林钠粉针剂。
本发明上述所述的方法，其中步骤(1)中大孔树脂分离用纯净水或者蒸馏水作为洗脱剂进行洗脱。
其中，上述所述的方法，其中步骤(2)中用交联葡聚糖凝胶柱，优选为SephadexC系列的凝胶柱，更优选为SephadexC15、SephadexC25或SephadexC50的柱，进行纯化，用0.05～0.2mol/L浓度的盐溶液作为洗脱剂，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分。
上述所述的方法，其中所述的盐溶液选自甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、丙酸铵溶液和乳酸铵溶液。
上述所述的方法，其中凝胶柱洗脱温度为4℃～35℃，优选20℃～30℃。
上述所述的方法，其中步骤(3)中用0.22μm微孔滤膜过滤。
本发明上述所述的方法，其中步骤(1)中美洛西林钠粗品是由美洛西林酸粗品加氧化钠、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠后形成的。
作为本发明一具体实施方式，提供了一种制备高纯度美洛西林钠的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)美洛西林酸粗品中加入氢氧化钠，形成美洛西林钠粗品；
(2)步骤(1)的美洛西林钠粗品用D1300大孔树脂吸附分离，用蒸馏水进行洗脱，收集美洛西林钠洗脱液；
(3)步骤(2)所得美洛西林钠洗脱液浓缩后进行凝胶柱层析，柱填料选用Sephadex C系凝胶，用0.05～0.2mol/L浓度的甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、丙酸铵溶液或者乳酸铵溶液洗脱，洗脱温度4～30℃，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分。
作为本发明另一具体实施方式，提供了一种制备美洛西林钠粉针剂的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)美洛西林酸粗品中加入氢氧化钠，形成美洛西林钠粗品；
(2)步骤(1)的美洛西林钠粗品用D1300大孔树脂吸附分离，用蒸馏水进行洗脱，收集美洛西林钠洗脱液；
(3)步骤(2)所得美洛西林钠洗脱液浓缩后进行凝胶柱层析，柱填料选用Sephadex C系凝胶，用0.05～0.2mol/L浓度的甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、丙酸铵溶液或者乳酸铵溶液洗脱，洗脱温度4～30℃，收集美洛西林钠含量不低于99％的组分，得到美洛西林钠精制品；
(4)步骤(3)所得的美洛西林钠精制品经活性炭脱色，0.22um微孔滤膜过滤后，冷冻干燥，粉碎至60-100目的细粉，然后在无菌室内100级条件下分装成每瓶含美洛西林钠按美洛西林计算0.1～2.0克，制得美洛西林钠粉针剂。
本发明技术方法中，采用大孔树脂能起到吸附美洛西林钠的作用，而其它杂质将会直接流出大孔树脂，从而实现美洛西林钠的初步纯化。此外，大孔树脂还具有脱色作用，能去除溶液中的色素杂质。
本发明方法显然也适于由粗品美洛西林制备高纯度美洛西林钠以及美洛西林钠粉针剂。通过加碱将美洛西林酸转化成美洛西林钠。所用碱可以是氢氧化钠或氢氧化钠与含钠碱性物质的混合物，本发明所述的含钠碱性物质可以是氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠。本发明优选使用氢氧化钠，既可以使用氢氧化钠固体，也可以使用氢氧化钠溶液，作为进一步优选，使用5％-20％的氢氧化钠溶液。为了使美洛西林酸完全转化成美洛西林钠，同时有利于大孔树脂在适宜的pH条件下进行吸附，溶液pH应调节至不小于5。同时，如果pH过高，一则会消耗大量的碱，增加成本；二则会增加操作时的危险性，并对设备产生腐蚀作用，因此pH不宜过高，应不高于13。作为优选，碱化后溶液pH为6-10。用纯化水进行洗脱时，对纯化水用量有一定限制，应满足将大孔树脂上至少95％的美洛西林钠洗脱下来；但同时不能为了洗脱所剩余的极少量的美洛西林钠，而不断加入纯化水进行洗脱，这样会造成洗脱液体积过大，增加后续纯化步骤的处理负荷。本发明中，所述洗脱用的纯化水的体积为进样样品体积的5-30倍，优选为10-20倍。
本发明中可以对所得洗脱液进行浓缩，得到相对密度不小于1.05的浓缩液。本发明所用的浓缩方法为本领域常用的浓缩方法，可以选用薄膜蒸发浓缩、减压蒸发浓缩、常压蒸发浓缩和多效浓缩中的任意一种，也可以将其中的任意两种方法或多种方法结合起来使用，只要能达到浓缩洗脱液的目的即可。所得浓缩液的相对密度为1.05-1.50，这样可以有效减少洗脱液的体积，减轻后续纯化步骤的负担。
本发明方法将大孔吸附树脂分离所得初级纯化产物再用凝胶柱纯化，用一定浓度的盐溶液洗脱，收集美洛西林钠含量不小于99％的部分，即可得到美洛西林钠精制品。所得美洛西林钠精制品用0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得高纯度美洛西林钠，可以作为粉针剂的原料粉。用凝胶柱进行纯化的原理是利用不同物质的分子量的差异进行分离。由于所得浓缩液中美洛西林钠与其它杂质的分子量差异较大，因此可选用各种类型的凝胶柱进行分离均能得到高纯度的美洛西林钠。本发明所述的凝胶柱可以是聚丙烯酰胺凝胶柱、交联葡聚糖凝胶柱、琼脂糖凝胶柱或聚苯乙烯凝胶柱中的任意一种。作为优选，可以使用SephadexC系列的凝胶柱。Sephadex凝胶柱为交联葡聚糖凝胶柱，是使用范围最广的凝胶柱，有各种型号的市售产品。在SephadexC系列的凝胶柱中，本发明优选使用SephadexC15、SephadexC25或SephadexC50。在本发明中，为了缩短纯化周期、提高纯化能力和减少很少拖尾，采用梯度洗脱进行洗脱。本发明采用甲酸铵、乙酸铵、丙酸铵和乳酸铵这四种盐的溶液作为洗脱剂，优选溶液浓度为0.05～0.2mol/L。
在洗脱过程中，提高温度有利于快速建立液固相平衡，加快分离纯化速度。但是，温度过高会造成溶质在液体中扩散过快，导致分离效率降低，因此需要选择适宜的洗脱温度。在本发明中，所述梯度洗脱的洗脱温度为4℃-40℃，优选20℃-30℃。
采用上述方法制备的高纯度美洛西林钠可作为制备美洛西林钠粉针剂的原料。所述美洛西林钠粉针剂的制备工艺为本领域常用技术，将得到的美洛西林钠过50-200目筛粉碎，优选过60-100目筛，然后在无菌室内百级条件下分装即得美洛西林钠粉针剂。根据需要，每瓶分装的美洛西林钠，按美洛西林计，优选为0.1g-2.0g。
下面通过实验说明本发明所提供的技术方案的有益效果。对实施例1和实施例2所制备的美洛西林钠粉针剂进行质量检测。分别将制得的美洛西林钠粉针剂在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，所得数据如表1-3所示：
表1  影响因素结果

表2  高温40℃、相对湿度75％±5％条件下加速试验6个月


表3  高温25℃、相对湿度60％±10％条件下长期试验18个月

由以上数据结果可以看出，本发明制得的美洛西林粉针剂质量符合标准要求，且经过影响因素10天、加速6月和长期18月等实验后，各项质量指标无明显变化，均符合质量标准，说明了本发明的制备的样品质量稳定性很好。
与现有技术相比，本发明所提供的制备高纯度美洛西林钠的方法及美洛西林钠粉针剂有下述优点：
1、本发明采用层析柱纯化方法，使美洛西林钠的纯度得到很大的提高，达到99％以上。
2、纯化过程无污染，便于工业连续化生产。
3、去除了很多水不溶性杂质，提高了美洛西林钠水溶液的澄明度。
4、提高了美洛西林钠水溶液的稳定性。
具体实施方式
实施例1
取美洛西林酸搅拌溶解于纯化水中，加入2mol/L氢氧化钠溶液调节溶液pH至8.7后，用D1300大孔树脂吸附，用蒸馏水进行洗脱至洗脱液中几乎无美洛西林钠。收集洗脱液，采用减压蒸发浓缩洗脱液后，采用以SephadexC15为填料的交联葡聚糖凝胶柱进行柱层析，用0.05mol/L的甲酸铵水溶液洗脱，洗脱温度为15℃，收集HPLC检测积分面积比99％以上部分，加入溶液体积0.2％(g/ml)活性炭，室温条件下脱色30分钟，用0.22um微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得美洛西林钠，纯度为99.5％，得率为87.8％。
将上述美洛西林钠纯品冷冻干燥后，粉碎过60目筛，在无菌室内100级条件下分装，每瓶中含美洛西林钠按美洛西林计算0.1克，得到美洛西林钠粉针剂。
实施例2
取美洛西林酸搅拌溶解于纯化水中，加入10％的碳酸钠溶液调节溶液pH至9.0后，用D1300大孔树脂吸附，用蒸馏水进行洗脱至洗脱液中几乎无美洛西林钠。收集洗脱液，采用减压蒸发浓缩洗脱液后，采用以SephadexC25为填料的交联葡聚糖凝胶柱进行柱层析，用0.1mol/L的乙酸铵水溶液洗脱，洗脱温度为20℃，收集HPLC检测积分面积比99％以上部分，加入溶液体积0.2％(g/ml)活性炭，室温条件下脱色30分钟，用0.22um微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得美洛西林钠，纯度为99.6％，得率为88.2％。
将上述美洛西林钠纯品冷冻干燥后，粉碎过100目筛，在无菌室内100级条件下分装，每瓶中含美洛西林钠按美洛西林计算2.0克，得到美洛西林钠粉针剂。
已经根据优选实施例对本发明作了描述。应当理解的是前面的描述和实施例仅仅为了举例说明本发明而已。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。