牛膝多肽及生产方法和用途.pdf

本发明公开了一种牛膝多肽及生产方法和用途，采用多肽的提取、多肽的分离等步骤制得。牛膝多肽在制备治疗周围神经损伤和脑血管意外、缺血性脑损伤、脑创伤、视神经损伤、脊髓损伤、中枢神经损伤及抗衰老、防治神经退行性变疾病的药物和保健品中的应用。本发明涉及的提取物牛膝多肽(蛋白)经实验证明具有促进神经生长、防止神经元凋亡、促进损伤神经再生作用，其药材来源单一，制备方法先进，工艺合理，制剂成分明确，安全性高，药理作用显著。

权利要求书
1、  一种牛膝多肽，其特征是：采用下列方法制得：
A：多肽的提取：牛膝水溶液于4℃加硫酸铵至50％，15000rpm离心半小时，离心后的上清液继续于4℃加硫酸铵至80％，15000rpm离心半小时，将沉淀移至截留最小分子量为1000的透析袋中，纯水透析，透析后冷冻干燥；
B：多肽的分离：利用二乙基氨基乙基制备柱及四元线形梯度洗脱将上述蛋白进行分离，得到牛膝多肽；其中四元线性梯度洗脱所用的洗脱液依次为：(1)0.1MTris/HCl，pH6.0；(2)0.1M Tris/Base，pH10.0；(3)1MNaCl，pH7.0；(4)H2O，pH7.0；将上述多肽进行分离，得到牛膝多肽。

2、  根据权利要求1所述的牛膝多肽的生产方法，其特征是：包括下列步骤：
A：多肽的提取：牛膝水溶液于4℃加硫酸铵至50％，15000rpm离心半小时，离心后的上清液继续于4℃加硫酸铵至80％，15000rpm离心半小时，将沉淀移至截留最小分子量为1000的透析袋中，纯水透析，透析后冷冻干燥；
B：多肽的分离：利用二乙基氨基乙基制备柱及四元线形梯度洗脱将上述蛋白进行分离，得到牛膝多肽；其中四元线性梯度洗脱所用的洗脱液依次为：(1)0.1MTris/HCl，pH6.0；(2)0.1M Tris/Base，pH10.0；(3)1MNaCl，pH7.0；(4)H2O，pH7.0；将上述多肽进行分离，得到牛膝多肽。

3、  一种牛膝多肽在制备治疗周围神经损伤和脑血管意外、缺血性脑损伤、脑创伤、视神经损伤、脊髓损伤、中枢神经损伤及抗衰老、防治神经退行性变疾病的药物和保健品中的应用。

说明书牛膝多肽及生产方法和用途
技术领域：
本发明涉及一种从中药牛膝中提取的多肽(蛋白)及提取方法和用途。
背景技术：
随着现代社会的发展，交通事故、战争、自然灾害、人口老龄化等因素，使得神经损伤及神经系统退行性变疾病的发生率呈上升趋势，寻找促进损伤神经修复、预防和治疗神经系统退行性变的有效药物，是当今医药研究中引人关注的课题。
中药是祖国医药学的伟大宝库，具有疗效确切、毒副作用小的优点，不仅受到国内医药界也受到世界同行的重视，它确有着开发利用的广泛前景。中药治疗神经损伤、神经退行性疾病已积有许多经验，并有较多的临床报道，近年也相继从天然植物中提取出具有神经营养作用的有效成分。但迄今在临床上可有效促进神经再生、防治神经退行性变的中药新药却并不多见，尚不能满足临床患者的需要。
牛膝为苋科植物，药用其干燥根。牛膝含皂甙、多糖、糖肽、甾醇、甾酮、生物碱、香豆素等。牛膝具有补肝肾，强筋骨，逐瘀通经，引血下行之功效，可用腰膝酸痛、筋骨无力、经闭症瘕、肝阳眩晕等。我们先前已经发现牛膝中的甾酮、多糖具有促进神经生长的作用。我们最近又发现牛膝的蛋白提取物可有效促进神经生长、防止神经退行性变。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种从牛膝中提取的牛膝多肽及生产方法和用途。
本发明的技术解决方案是：
一种牛膝多肽，其特征是：采用下列方法制得：
A：多肽的提取：牛膝水溶液于4℃加硫酸铵至50％，15000rpm离心半小时，离心后的上清液继续于4℃加硫酸铵至80％，15000rpm离心半小时，将沉淀移至截留最小分子量为1000的透析袋中，纯水透析，透析后冷冻干燥；
B：多肽的分离：利用二乙基氨基乙基制备柱及四元线形梯度洗脱将上述蛋白进行分离，得到牛膝多肽；其中四元线性梯度洗脱所用的洗脱液依次为：(1)0.1MTris/HCl，pH6.0；(2)0.1M Tris/Base，pH10.0；(3)1MNaCl，pH7.0；(4)H2O，pH7.0；将上述多肽进行分离，得到牛膝多肽。
一种牛膝多肽的生产方法，其特征是：包括下列步骤：
A：多肽的提取：牛膝水溶液于4℃加硫酸铵至50％，15000rpm离心半小时，离心后的上清液继续于4℃加硫酸铵至80％，15000rpm离心半小时，将沉淀移至截留最小分子量为1000的透析袋中，纯水透析，透析后冷冻干燥；
B：多肽的分离：利用二乙基氨基乙基制备柱及四元线形梯度洗脱将上述蛋白进行分离，得到牛膝多肽；其中四元线性梯度洗脱所用的洗脱液依次为：(1)0.1MTris/HCl，pH6.0；(2)0.1M Tris/Base，pH10.0；(3)1MNaCl，pH7.0；(4)H2O，pH7.0；将上述多肽进行分离，得到牛膝多肽。
一种牛膝多肽在制备治疗周围神经损伤和脑血管意外、缺血性脑损伤、脑创伤、视神经损伤、脊髓损伤、中枢神经损伤及抗衰老、防治神经退行性变疾病的药物和保健品中的应用。
所述牛膝多肽包括牛膝蛋白。
本发明涉及的提取物牛膝多肽(蛋白)经实验证明具有促进神经生长、防止神经元凋亡、促进损伤神经再生作用，其药材来源单一，制备方法先进，工艺合理，制剂成分明确，安全性高，药理作用显著，可用于制备抗衰老、防治神经退行性变疾病及治疗周围神经损伤和脑血管意外(出血性中风)、缺血性脑损伤(缺血性中风)、脑创伤、视神经损伤、脊髓损伤等中枢神经损伤性疾病的药物和保健品。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式：
一种中药牛膝(蛋白)提取物，采用下列方法获得：将单味药材怀牛膝饮片，用水溶液提取3次，合并提取液得牛膝水溶液液。再采用下列方法从牛膝水溶液获得牛膝(蛋白)提取物：(1)多肽(蛋白)的提取：牛膝水溶液液于4℃加硫酸铵至50％，15000rpm离心半小时，离心后的上清液继续于4℃加硫酸铵至80％，15000rpm离心半小时，将沉淀移至截留最小分子量为1000的透析袋中，纯水透析，透析后冷冻干燥。(2)多肽(蛋白)的分离：利用二乙基氨基乙基(DEAE)制备柱及四元线形梯度洗脱；将上述多肽(蛋白)进行分离，得到牛膝多肽(蛋白)。其中四元线性梯度洗脱所用的洗脱液依次为：(1)0.1MTris/HCl，pH6.0；(2)0.1M Tris/Base，pH10.0；(3)1MNaCl，pH7.0；(4)H2O，pH7.0；将上述多肽(蛋白)进行分离，得到牛膝多肽(蛋白)。
上述得到的牛膝多肽(蛋白)提取物在制备抗衰老、防治神经退行性变疾病及治疗周围神经损伤和脑血管意外(出血性中风)、缺血性脑损伤(缺血性中风)、脑创伤、视神经损伤、脊髓损伤等中枢神经损伤性疾病的药物和保健品中的应用。