连翘酯苷注射制剂及其制备方法.pdf

本发明属于医药技术领域，具体公开了一种连翘的有效成分连翘酯苷制成的注射制剂。该注射制剂主要由连翘酯苷和药用辅料制备而成，连翘酯苷与药用辅料的重量比为1∶(0-5)。本发明用于临床解热和抗炎，对多种细菌病毒有效，具有优良的治疗效果。本发明还公开了该连翘酯苷注射制剂的制备方法。

权利要求书
1.  一种连翘酯苷注射制剂，其特征是，主要由连翘酯苷和药用辅料制备而成，连翘酯苷与药用辅料的重量比为1∶(0-5)。

2.  根据权利要求1所述的连翘酯苷注射制剂，其特征是，连翘酯苷与药用辅料的重量比为1∶(0-3)。

3.  根据权利要求1或2所述的连翘酯苷注射制剂，其特征是，注射制剂为冻干粉针剂、水针剂或输液制剂。

4.  根据权利要求3所述的连翘酯苷注射制剂，其特征是，冻干粉针剂所用药用辅料是甘露醇、葡萄糖、山梨醇中的一种或任意两种混合物。

5.  根据权利要求4所述的连翘酯苷注射制剂，其特征是，连翘酯苷与药用辅料的重量比为1∶0。

6.  权利要求4或5所述的连翘酯苷注射制剂的制备方法，其特征是，将连翘酯苷与药用辅料按重量比混合，加注射用水至连翘酯苷重量的10-50倍溶解，调节pH为3.0-6.0，精滤、超滤后灌装，按如下冻干曲线冷冻干燥即得。
    温度(℃)    时间(h)    0--40    2    -40    4    -40--25    3    -25    5    -25-30    2    -30    9

7.  根据权利要求3所述的连翘酯苷注射制剂，其特征是，水针剂所用药用辅料是乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钠钙、乙二胺四乙酸钙、维生素C、焦亚硫酸中的一种或几种。

8.  权利要求7所述的连翘酯苷注射制剂的制备方法，其特征是，该方法包括如下步骤：
向注射用水中加入重量相当于连翘酯苷0-5倍的药用辅料搅拌，至完全溶解；
加入全量0.5-0.05％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；
加入连翘酯苷使之完全溶解，调节pH值至3.0-6.0；
加入全量0.2-0.02％的活性炭，室温搅拌，滤过脱炭；
向滤液中补加注射用水至全量，测定pH值、活性成分含量，合格后，反复滤过至澄明，灌装、灭菌、包装。

9.  根据权利要求3所述的连翘酯苷注射制剂，其特征是，输液制剂所用药用辅料是乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钠钙、乙二胺四乙酸钙、维生素C、焦亚硫酸中的一种或几种。

10.  权利要求9所述的连翘酯苷注射制剂的制备方法，其特征是，该方法包括如下步骤：
向注射用水中加入氯化钠或葡萄糖，与重量相当于连翘酯苷0-5倍的药用辅料搅拌，至完全溶解；
加入全量0.5-0.05％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；
加入连翘酯苷，搅拌使之溶解完全，调节pH值至3.0-6.0；
加入全量0.2-0.02％的活性炭，混匀，室温搅拌，滤过脱炭；
向滤液中补加注射用水至全量，测定pH值、活性成分含量，合格后，反复滤过至澄明，灌装、灭菌、包装。

说明书连翘酯苷注射制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体的说是一种连翘的有效成分连翘酯苷制成的注射制剂。本发明还涉及该连翘酯苷注射制剂的制备方法。
背景技术
连翘酯苷(Forsythoside A)是从木犀科连翘属植物连翘(Fructus Forsythiae)中提取的有效成分。以前是以连翘苷作为考察连翘提取工艺的指标，近年来随着连翘有效成分研究的深入，发现连翘苷无抗菌活性，发挥抗菌活性的是连翘酯苷。而连翘酯苷中连翘酯苷A含量很高，且发挥抗菌作用的几乎全部是连翘酯苷A，但是连翘酯苷A又很难单独稳定存在，因此在习惯上，常把含有连翘酯苷A的连翘酯苷类有效成分称作连翘酯苷。连翘酯苷(A)的结构式如下：

文献中提到连翘酯苷为咖啡酸的衍生物，分子结构中具有酯键和糖苷键，在酸、碱和高温条件下容易分解，而分解后产生的咖啡酸、D-葡萄糖、L-鼠李糖和一次级苷的抗菌活性大大减弱。由于以前未能注意到此问题，所以银翘解毒丸、银翘解毒片等成药只检出咖啡酸，而连翘酯苷(A)可能在加工过程中已发生了水解。
发明人经过反复研究，认为如果能够把连翘酯苷最大程度分离出来，得到高纯度的连翘酯苷有效成分，再制备成注射制剂，必将补充现有的临床用药。在以往的技术研究中，发明人已经获得了提取高纯度连翘酯苷的工艺方法。但是现有技术未提供选择什么种类的辅料、以及辅料的剂量等相关连翘酯苷注射制剂的药学技术，同时现有技术已知的连翘酯苷具有不稳定特性，也使得连翘酯苷做成注射剂具有很大困难，而现有技术中也没有任何能够解决这一问题的启示。但是考虑到连翘酯苷的优良药效，本专利的发明人还是经过了大量的科学研究，对连翘酯苷制成注射制剂方面进行了有益的探索，并获得了意想不到的效果。
发明内容
针对现有技术的上述不足，本发明所要解决的技术问题之一是提供一种连翘酯苷的注射制剂。
本发明所要解决的技术问题之二是提出该连翘酯苷注射制剂的制备方法。
本发明是通过如下技术方案才得以实现的：
本发明提出连翘酯苷注射制剂，主要由连翘酯苷和药用辅料制备而成，其中，连翘酯苷与药用辅料的重量比为1∶(0-5)，最好为1∶(0-3)。
本发明连翘酯苷注射制剂是指冻干粉针剂、水针剂、输液制剂。
本发明所提到的连翘酯苷是纯度不低于90％的连翘酯苷或适于注射用的连翘酯苷，其来源可以从连翘属植物中提取得到，也可以购买或合成得到。
本发明连翘酯苷冻干粉针剂所用药用辅料被称作骨架剂，是甘露醇、葡萄糖、山梨醇中的一种或任意两种混合物。最优选技术方案是连翘酯苷冻干粉针注射制剂中，不加入骨架剂，即连翘酯苷与骨架剂的重量比为1∶0。
本发明连翘酯苷冻干粉针剂是通过以下方法制备得到的：将连翘酯苷与骨架剂按重量比混合，加注射用水至连翘酯苷重量的10-50倍溶解，调节pH为3.0-6.0，精滤、超滤后灌装，按如表1所示的冻干曲线冷冻干燥即得。
表1.连翘酯苷冻干粉针剂的冻干曲线
    温度(℃)    时间(h)    0--40    2    -40    4    -40--25    3
    -25    5    -25-30    2    -30    9
本发明连翘酯苷水针剂所用药用辅料被称作稳定剂，是乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钠钙、乙二胺四乙酸钙、维生素C、焦亚硫酸中的一种或几种。
本发明连翘酯苷水针剂是通过以下方法制备得到的：向注射用水中加入重量相当于连翘酯苷0-5倍的稳定剂搅拌，完全溶解；加入全量0.5-0.05％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入连翘酯苷使之完全溶解，调节pH值至3.0-6.0，加入全量0.2-0.02％的活性炭，室温搅拌，滤过脱炭，向滤液中补加注射用水至全量，测定pH值、活性成分含量，合格后，反复滤过至澄明，灌装、灭菌、包装。
本发明连翘酯苷输液制剂所用药用辅料被称作稳定剂，是乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钠钙、乙二胺四乙酸钙、维生素C、焦亚硫酸中的一种或几种。
本发明的连翘酯苷输液制剂是通过以下方法制备得到的：向注射用水中加入氯化钠或葡萄糖与重量相当于连翘酯苷0-5倍的稳定剂搅拌，完全溶解；加入全量0.5-0.05％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入连翘酯苷，搅拌使之溶解完全；调节pH值至3.0-6.0；加入全量0.2-0.02％的活性炭，混匀，室温搅拌，滤过脱炭；向滤液中补加注射用水至全量，测定pH值、活性成分含量，合格后，反复滤过至澄明，灌装、灭菌、包装。
本发明所述水针剂和输液制剂的制备中，加入的活性炭重量是与全量体积百分比值。
本发明采用上述技术方案具有如下优点：
1、本发明将连翘酯苷用作注射剂的活性成分，为首创。连翘酯苷的研究热点是它的抗菌抗病毒作用，并且被认为可能做为药物成分的检测指标，而这一点尚未实现。现有技术未有将其用于注射剂活性成分的报道，未提供选择什么种类的辅料、以及辅料的剂量等相关连翘酯苷注射制剂的药学技术，也未做出连翘酯苷做活性成分的注射剂的相关启示。本发明经过严格的实验筛选，从而确定了药用辅料的种类和剂量，以及冻干粉针剂的冻干工艺。
本发明还克服了技术偏见，即常规的冻干粉针的制备往往需要加入一定量的保护剂辅料才能成形，但是本发明表明连翘酯苷冻干粉针直接冻干即可得到较好外形，并比较容易冻干，毋须加入辅料也可。连翘酯苷冻干粉针剂不加入任何药用辅料也能够达到注射剂的要求，也是一种意外的技术效果。既实现了工艺上的简单，节约了成本，又可以避免辅料带来的安全性问题。
本发明完全根据连翘酯苷的特性而创造，由于连翘酯苷对热的不稳定性，整个工艺都采用冷冻或低温，以避免对连翘酯苷活性成分的破坏。冻干粉针剂产品质地疏松，加水后复溶效果好；输液剂和水针剂也能够在辅料的作用下，保持较好的稳定性。
2、本发明可实现工业化生产。同时本发明药物具有优良的治疗效果，在解热抗炎方面效果尤其显著，并对多种细菌病毒有效，具有很好的市场前景和社会效益。因此本发明具有实用性。
附图说明
图1是本发明连翘酯苷冻干粉针剂的冻干工艺曲线图。
图2是本发明连翘酯苷标准对照品液相色谱图。
图3是本发明连翘酯苷冻干粉针剂的样品液相色谱图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的内容作进一步说明。实施例1-9是关于冻干粉针剂；实施例10-14是关于水针剂；实施例15-18是关于输液制剂。
实施例1
取连翘酯苷75g，加注射用水1200ml，搅拌使溶解，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用8000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成1000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。连翘酯苷标准对照品的液相色谱如图2所示；本实施例制备获得的连翘酯苷冻干粉针剂的液相色谱如图3所示。
冻干曲线如下，为表1：
    温度(℃)    时间(h)    0--40    2    -40    4    -40--25    3
    -25    5    -25-30    2    -30    9
实施例2
取连翘酯苷75g，甘露醇75g混合，加注射用水2000ml，搅拌使溶解，醋酸-醋酸钠缓冲盐调节pH为5.5，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用6000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成1000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例3
取连翘酯苷50g，葡萄糖100g混合，加注射用水1000ml，搅拌使溶解，枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐调节pH为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用8000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成1000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例4
取连翘酯苷100g，甘露醇75g与葡萄糖75g混合，加注射用水2500ml，搅拌使溶解，醋酸盐缓冲盐调节pH为3.0，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用8000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成2000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例5
取连翘酯苷100g，甘露醇100g、山梨醇100g混合，加注射用水3000ml，搅拌使溶解，枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲盐调节pH为6.0，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用8000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成2000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例6
取连翘酯苷150g，葡萄糖150g混合，加注射用水5000ml，搅拌使溶解，醋酸-醋酸钠缓冲盐调节pH为4.5，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用8000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成1000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例7
取连翘酯苷150g，葡萄糖150g、山梨醇150g混合，加注射用水6000ml，搅拌使溶解，枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲盐调节pH为5.5，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用8000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成1000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例8
取连翘酯苷200g，山梨醇600g混合，加注射用水8000ml，搅拌使溶解，枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲盐调节pH为6.0，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用6000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成4000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例9
取连翘酯苷75g，甘露醇200g、葡萄糖175g混合，加注射用水3750ml，搅拌使溶解，枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲盐调节pH为6.0，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，再用8000道尔顿超滤膜除热原；经中间体检验合格后，用注射用水补足体积，分装成1000支，置冷冻箱，按冻干曲线冻干即得。冻干曲线同实施例1。
实施例10
向注射用水中加入2.5g乙二胺四乙酸钠钙搅拌，完全溶解；加入全量为2L的0.05％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入75g连翘酯苷使之完全溶解，加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0，加入全量为2L的0.02％的活性炭，室温搅拌搅拌，滤过脱炭，向滤液中补加注射用水至全量2L，测定pH值，含量合格后，反复滤过至澄明，分装为1000支，灭菌、包装。
实施例11
向注射用水中加入2.5g焦亚硫酸搅拌，完全溶解；加入全量为5L的0.5％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入150g连翘酯苷使之完全溶解，加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0，加入全量为5L的0.2％的活性炭，室温搅拌搅拌，滤过脱炭，向滤液中补加注射用水至全量5L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为1000支，灭菌、包装。
实施例12
向注射用水中加入2.5g乙二胺四乙酸二钠搅拌，完全溶解；加入全量为10L的0.1％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入150g连翘酯苷使之完全溶解，加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0，加入全量为10L的0.1％的活性炭，室温搅拌搅拌，滤过脱炭，向滤液中补加注射用水至全量10L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为1000支，灭菌、包装。
实施例13
向注射用水中加入225g维生素C搅拌，完全溶解；加入全量为5L的0.4％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入75g连翘酯苷使之完全溶解，加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0，加入全量为5L的0.05％的活性炭，室温搅拌搅拌，滤过脱炭，向滤液中补加注射用水至全量5L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为1000支，灭菌、包装。
实施例14
向注射用水中加入375g维生素C搅拌，完全溶解；加入全量为10L的0.1％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入75g连翘酯苷使之完全溶解，加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0，加入全量为10L的0.2％的活性炭，室温搅拌搅拌，滤过脱炭，向滤液中补加注射用水至全量10L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为1000支，灭菌、包装。
实施例15
向注射用水中加入9.0g氯化钠与0.1g乙二胺四乙酸钠钙搅拌，完全溶解；加入全量为1L的0.05％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入0.6g连翘酯苷，搅拌使之溶解完全；加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0；加入全量为1L的0.02％的活性炭，混匀，室温搅拌，滤过脱炭；向滤液中补加注射用水至全量1L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为4瓶，灭菌、包装。
实施例16
向注射用水中加入9.0g氯化钠与0.1g焦亚硫酸搅拌，完全溶解；加入全量为lL的0.3％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入0.3g连翘酯苷，搅拌使之溶解完全；加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0；加入全量为1L的0.05％的活性炭，混匀，室温搅拌，滤过脱炭；向滤液中补加注射用水至全量1L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为4瓶，灭菌、包装。
实施例17
向注射用水中加入50g葡萄糖与0.9g维生素C搅拌，完全溶解；加入全量为2L的0.05％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入0.3g连翘酯苷，搅拌使之溶解完全；加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0；加入全量为2L的0.1％的活性炭，混匀，室温搅拌，滤过脱炭；向滤液中补加注射用水至全量2L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为4瓶，灭菌、包装。
实施例18
向注射用水中加入100g葡萄糖与1.5g维生素C搅拌，完全溶解；加入全量为1L的0.5％的活性炭，搅拌，过滤、脱炭；加入0.3g连翘酯苷，搅拌使之溶解完全；加入枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲盐溶液调节pH值至3.0-6.0；加入全量为1L的0.1％的活性炭，混匀，室温搅拌，滤过脱炭；向滤液中补加注射用水至全量1L，测定pH值、连翘酯苷含量，合格后，反复滤过至澄明，分装为4瓶，灭菌、包装。
以下结合药效学实验具体说明本发明连翘酯苷注射制剂对解热和抗炎具有优良的治疗效果。连翘酯苷输液剂的药效学结果参见连翘酯苷水针剂结果。
1.1解热药效学实验(2，4-二硝基苯酚致热大鼠解热试验)。
取SD大鼠48只，随机分4组，即NS组、双黄连对照组、实施例1-9中任一实施例制备获得的连翘酯苷冻干粉针组，实施例10-14中任一实施例制备获得的连翘酯苷水针剂。试验前每只动物测2次体温，取其均值作为基础体温。按相当于临床日用量的6倍，10ml/(kg·d)尾静脉注射给药后，立即背部皮下注射临时配制的1.5mg/ml 2，4-二硝基苯酚1ml/kg，测量并记录0.5、1、1.5、2、3、4h动物体温。
实验结果显示，给药后0.5h，连翘酯苷冻干粉针组与NS对照组比较即出现显著性差异(P＜0.05)，给药后1h-2h，连翘酯苷水针剂、连翘酯苷冻干粉针组与NS对照组比较均出现不同程度显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)；双黄连对照组在给药后0.5h-3h与NS对照组比较出现差异(P＜0.01，P＜0.05)，给药4h后与NS对照组比较出现差异未见差异。结果见表2。
表2：2，4-二硝基苯酚致热大鼠解热试验给药后各时相体温变化(℃)
  组别  药前2次  体温均值    给药后各时相体温差值    0.5h 1h    1.5h    2h  3h  4h  NS组  双黄连对照组  连翘酯苷水针  剂  连翘酯苷冻干  粉针剂  38.19±0.25  38.18±0.28  38.19±0.14   38.15±0.25    0.77±0.13    0.51±0.26*    0.55±0.11     0.56±0.22* 1.47±0.26 0.81±0.28** 1.05±0.12**  1.02±0.23**    1.45±0.26    0.84±0.28**    1.22±0.24*     0.82±0.28**    1.37±0.22    0.64±0.32**    1.13±0.26*     0.78±0.28**  1.12±0.23  0.59±0.21**  1.05±0.27   0.56±0.30**  0.68±0.25  0.47±0.20  0.67±0.22   0.46±0.28
注：与Ns组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
1.2抗炎药效学试验。
1.2.1连翘酯苷注射制剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的作用。
取小鼠48只，随机分4组，分组同上述解热药效学试验，按相当于临床日用量的10倍，10ml/(kg·d)注射给药4天，末次给药后30min每只小鼠左耳涂二甲苯50ul，右耳作空白对照，致炎15min后将小鼠处死，剪下两耳，用打孔器(直径7mm)分别在两耳同一部位打下耳片，称重，计算肿胀度和肿胀抑制率。
公式：
肿胀度＝左耳片重量-右耳片重量

实验结果显示，NS组小鼠左耳红肿，耳肿胀度高达0.0145±0.0037g，而连翘酯苷各注射制剂组小鼠及双黄连对照组的耳肿胀度均小于NS对照组，且与NS组比较有不同的显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。结果见表3。
表3：连翘酯苷注射制剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
                                                                         
组别                  只数  肿胀度(g)  肿胀抑制率％
                                                                         
NS组                  12    0.0145±0.0037     -
双黄连对照组          12    0.0099±0.0033**   31.7
连翘酯苷水针剂        12    0.0109±0.0028*    25.8
连翘酯苷冻干粉针剂    12    0.0087±0.0039*    40.0
                                                                          
注：与NS组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
1.2.2连翘酯苷注射制剂对血管通透性影响的实验。
取体重18-22g小鼠(♀♂各半)48只，随机分4组，分组同上述解热药效学试验。小鼠给药后1h尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g体重，随即腹腔注射0.6％醋酸0.20ml/只，20min后脱颈椎处死，剪开腹部皮肤肌肉，用6ml生理盐水分3次洗涤腹腔，吸管吸出洗涤液、合并后加入生理盐水至10ml，3000rpm离心15min；取上清液与590nm比色测定，记录OD值进行统计分析。
实验结果显示，连翘酯苷水针剂和冻干粉针与NS组比较有显著性差异(P＜0.05)，双黄连对照组与NS组比较有显著性差异(P＜0.05)。结果见表4。
表4：连翘酯苷注射制剂对腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛细管通透性增高的影响
  组别    n      体重      0D值  NS组  双黄连对照组  连翘酯苷水针剂  连翘酯苷冻干粉针    10    10    10    10    21.98±1.14    22.05±1.07    22.03±1.20    22.14±0.96  0.0883±0.0208  0.0667±0.0155*  0.0690±0.0140*  0.0685±0.0131*
注：与NS组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
以下以冻干粉针剂为例具体说明药用辅料的选择、制备方法中PH的选择和冻干曲线的选择，并通过加速实验具体说明连翘酯苷冻干粉针剂的稳定性。
2.1.骨架剂的选择。
冻干粉针常用的骨架剂有甘露醇、葡萄糖、山梨醇等，设计实验选择合适的骨架剂种类，试验结果如表5：
表5：连翘酯苷冻干粉针骨架剂选择试验
骨架剂种类    灌装体积    复溶性    成品外观    溶解性不加骨架剂不加骨架剂10％甘露醇20％甘露醇30％甘露醇50％甘露醇5％葡萄糖10％葡萄糖5％山梨醇    2ml    1.5ml    1.5ml    1.5ml    1.5ml    1.5ml    1.5ml    1.5ml    1.5ml    良好    良好    良好    良好    良好    良好    良好    良好    良好    淡黄块状，较疏松    淡黄块状，疏松    淡黄色块状，略紧    淡黄色块状，较紧实    乳白色紧实块    乳白色紧实块    萎缩    萎缩    乳白色紧实块    良    良    良    良    良    良    良    良    良
表6：连翘酯苷冻干粉针骨架剂用量试验
    连翘酯苷  加骨架剂(％)  不加    50    100    200    300400500    成型性  一般    一般    良    良    良一般较差    溶解性  良    良    良    良    良一般一般    澄明度  良    良    良    一般    一般较差较差
骨架剂用量研究表明，连翘酯苷与支撑剂的重量比为1∶(0-5)时，冻干粉都能够成型，但是其重量比在1∶0-3时冻干粉的成型性、溶解性、复溶后的澄明度更佳。本发明不加支撑剂，直接冻干也可得到较好的外形，溶解性、澄明度均佳，且比较容易冻干。
2.2.PH选择。
取连翘酯苷适量，加水溶解，调节PH值至3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0，用HPLC测定连翘酯苷峰面积值，以考察PH值对连翘酯苷含量的影响。
从试验结果可以看出，pH值为4.5时，连翘酯苷的含量最高，且在3.0-6.0这个pH值范围内连翘酯苷含量变化不明显，见表7。因此，本发明冻干粉针剂确定pH值控制在3.0-6.0之间。
表7：pH值选择试验结果
  pH值    3.0    3.5    4.0    4.5    5.0    5.5    6.0  峰面积    1410.0    1499.0    1519.8    1523.1    1494.5    1480.6    1423.5
2.3.冻干工艺曲线选择。
2.3.1预冻温度
一般搁板温度低于制品共熔点5℃-15℃。按以上测定结果，该制品的共熔点为-20℃，因此预冻温度应该定在-35℃以下，经选择定为-40℃。
2.3.2预冻时间
本发明冻干粉针剂的分装量是1.5ml，经试验，本发明冻干粉针剂在-40℃以下各部分完全冻结约需4小时。
2.3.3升华速率和干燥时间
试验表明，在-25℃条件下，第一阶段的干燥时间约需5小时，第二阶段的干燥温度不超过30℃，时间9小时，即能满足本发明冻干粉针剂的水分要求。
按以上筛选的最佳工艺配制冻干粉针剂3批，每支分装1.5ml进行冻干，初步筛选出冻干工艺曲线见图1。
由上冻干曲线冻干成品10批，对与冻干有关的水分等数据进行检验，检验结果见表8。结果表明，冻干粉针剂符合要求，证明该曲线可行。
表8成品冻干结果考察
    产品批号    性状    水分(％)    连翘酯苷含量(％)    2006060601    2006060602    2006060603    2006060801    2006060802    符合要求    符合要求    符合要求    符合要求    符合要求    3.24    3.68    3.71    3.15    3.57    92.00    92.05    91.89    91.93    92.08
    2006060803    2006060804    2006061101    2006061102    2006061103    符合要求    符合要求    符合要求    符合要求    符合要求    3.81    3.09    3.60    3.25    2.91    91.92    92.31    91.71    92.15    92.07
2.4.加速试验：
通过加速药物的化学或物理变化，探讨药物制剂的稳定性，为处方设计、工艺改进、质量研究、包装改进、运输、贮存提供必要的资料。考察条件如下：
包装：拟市售包装(西林瓶+丁基胶塞)
温度：40℃±2℃
湿度：75％±5％
表9加速试验结果
  剂型  加速试验  0天  15天  1个月  2个月  3个月  冻干粉针  剂  性状  淡黄色  固体粉末  淡黄色  固体粉末  淡黄色  固体粉末  淡黄色  固体粉末  淡黄色  固体粉末  含量(％)  93.0  92.9  92.8  92.5  92.1
加速试验结果如表9所示，从试验结果可以看出，连翘酯苷冻干粉针剂在冻干粉状态下能够保持稳定，性状及含量都无明显变化，可以达到注射制剂的要求。
以下以水针、输液为例具体说明药用辅料的选择、制备方法中PH的选择，并通过加速实验具体说明连翘酯苷冻干粉针剂的稳定性。
2.5.稳定剂的选择。
水针、输液常用的稳定剂有乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钠钙、乙二胺四乙酸钙、维生素C、焦亚硫酸等，设计实验选择合适的稳定剂种类及用量，试验结果如表10：
表10连翘酯苷水针、输液稳定剂选择试验
  稳定剂种类用量(主药∶稳定剂)    成品外观    稳定性
乙二胺四乙酸二钠 乙二胺四乙酸钠钙 乙二胺四乙酸钙 维生素C 焦亚硫酸    1∶0.2    1∶0.5    1∶0.5    1∶1    1∶0.3    1∶0.5    1∶2    1∶5    1∶1    1∶3    淡黄色澄明液体    浅黄色澄明液体    淡黄色澄明液体    淡黄色澄明液体    淡黄色澄明液体    淡黄色澄明液体    淡黄色澄明液体    浅黄色澄明液体    淡黄色澄明液体    淡黄色澄明液体    良    好    良    良    良    良    好    良    良    好
研究结果表明，连翘酯苷与稳定剂的重量比为1∶0-5时，水针、输液都能够保证稳定性；重量比在1∶0-3时能够保持较好的稳定性。
2.6.PH选择。
同冻干粉针剂的PH选择，本发明冻干粉针剂确定pH值控制在3.0-6.0之间。
2.7.加速试验：
通过加速药物的化学或物理变化，探讨药物制剂的稳定性，为处方设计、工艺改进、质量研究、包装改进、运输、贮存提供必要的资料。考察条件如下：
包装：拟市售包装(安瓶或输液瓶)
温度：40℃±2℃
湿度：75％±5％
表11：加速试验结果
    剂型    加速试验    0天  15天  1个月  2个月  3个月    水针  性状    淡黄色    澄明液体  淡黄色  澄明液体  淡黄色  澄明液体  淡黄色  澄明液体  淡黄色  澄明液体  含量(％)    92.6  92.1  92.0  92.2  91.8    输液  性状    淡黄色    澄明液体  淡黄色  澄明液体  淡黄色  澄明液体  淡黄色  澄明液体  淡黄色  澄明液体  含量(％)    92.2  92.0  91.9  92.0  91.5
加速试验结果如表11所示，试验结果可以看出，连翘酯苷水针在水针剂输液状态下能够保持稳定，性状及含量都无明显变化，可以达到注射制剂的要求。