7叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱的制剂.pdf

本发明涉及活性剂是拓扑异构酶I抑制剂的纳米粒组合物和用于治疗和预防包括癌症的增殖性疾病的包含纳米粒组合物的药物组合物。

权利要求书
1.  组合物，其包含：
(a)7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的纳米粒；
(b)至少一种表面稳定剂，其中的纳米粒具有小于约4000nm的有效平均粒径；且
(c)在个体中与未配制的药物相比显示至少1.5倍的更高的生物利用度。

2.  权利要求1的组合物，其中的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱是游离的或可药用盐形式，其可能的对映异构体、非对映异构体及相关混合物、多晶形、无定型、部分无定型、溶剂合物、其活性代谢物和前药任何组合的形式。

3.  权利要求1的组合物，其中与游离形式的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱相比，所述的组合物显示至少1.5倍的更高的生物利用度。

4.  权利要求1的组合物，其中所述的纳米粒粒子的有效平均粒径选自小于约3000nm，小于约2000nm，小于约1000nm，小于约500nm。

5.  权利要求1的组合物，其中所述的组合物还包含一种或多种可药用的赋形剂、表面稳定剂或其组合。

6.  权利要求1的组合物，其中7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱存在的量选自从约99.5％至约0.001％，从约95％至约0.1％，从约90％至约0.5％，基于7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和至少一种表面稳定剂的总的合并重量的重量比，不包括其他赋形剂。

7.  权利要求1的组合物，其中至少一种表面稳定剂存在的量选自从约0.5％至约99.999％，从约5.0％至95％、和从约10％至约99.5％，基于7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和至少一种表面稳定剂的总的合并干重的重量比，不包括其他赋形剂。

8.  权利要求1的组合物，其中至少一种表面稳定剂选自羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物、月桂醇硫酸钠、磺基琥珀酸二辛酯、泊洛沙姆、明胶、酪蛋白、卵磷脂、右旋糖酐、阿拉伯胶、胆固醇、西黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八醇十六醇混合物、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯；聚乙二醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物、poloxamine；Tetronic1508、烷基芳基聚醚磺酸盐；硬脂酸蔗糖酯和二硬脂酸蔗糖酯的混合物；对-异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)、C18H37CH2(CON(CH3)--CH2(CHOH)4(CH2OH)2；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-癸基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-癸基-β-D-吡喃麦芽糖苷；正-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-十二烷基-β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-庚基-β-D-葡糖硫苷；正-己基-β-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-壬基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷；PEG-磷脂、PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、PEG-维生素A、PEG-维生素E、溶菌酶、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物。

9.  权利要求1的组合物，其中的组合物为液体口服剂型。

10.  权利要求1的组合物，其中的组合物为固体口服剂型。

11.  权利要求1的组合物，其中的制剂为注射剂型。

12.  制备纳米粒组合物的方法，其包括将7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱和至少一种表面稳定剂接触一定时间并且在充分的条件下以提供具有有效平均粒度小于约4000nm的纳米粒组合物。

13.  权利要求12的方法，其中所述的接触包括研磨。

14.  权利要求13的方法，其中所述的研磨包括湿法研磨。

15.  权利要求12的方法，其中所述的接触包括均化。

16.  权利要求12的方法，其中所述的接触包括沉淀。

17.  权利要求12的方法，其中所述的纳米粒颗粒的有效平均粒径选自小于约3000nm，小于约2000nm，小于约1000nm，小于约500nm。

18.  权利要求12的方法，其中至少一种表面稳定剂选自羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物、月桂醇硫酸钠、磺基琥珀酸二辛酯、泊洛沙姆、明胶、酪蛋白、卵磷脂、右旋糖酐、阿拉伯胶、胆固醇、西黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八醇十六醇混合物、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯；聚乙二醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物、poloxamine；Tetronic1508、烷基芳基聚醚磺酸盐；硬脂酸蔗糖酯和二硬脂酸蔗糖酯的混合物；对-异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)、C18H37CH2(CON(CH3)--CH2(CHOH)4(CH2OH)2；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-癸基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-癸基-β-D-吡喃麦芽糖苷；正-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-十二烷基-β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-庚基-β-D-葡糖硫苷；正-己基-β-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-壬基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷；PEG-磷脂、PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、PEG-维生素A、PEG-维生素E、溶菌酶、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物。

19.  治疗增殖性疾病的方法，其包括给需要其的患者施用包含7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱和至少一种表面稳定剂的纳米粒的制剂，其中所述的纳米粒具有低于约4000nm的有效平均粒径。

20.  权利要求19的方法，其中的增殖性疾病为乳腺癌、肺癌、包括食道、胃、小肠、大肠和直肠癌的胃肠癌、胶质瘤、肉瘤诸如涉及骨、软骨、软组织、肌肉、血液和淋巴管的那些、卵巢癌、骨髓瘤、女性子宫颈癌、子宫内膜癌、头颈癌、间皮瘤、肾癌、输尿管、膀胱和尿道癌、前列腺癌、皮肤癌和黑色素瘤。特别地，本发明的组合物特别用于治疗：
(i)乳腺癌；肺癌例如非小细胞肺部肿瘤；胃肠肿瘤例如结直肠肿瘤；或泌尿生殖系统肿瘤例如前列腺肿瘤；
(ii)用其他化疗药治疗难治的增殖性疾病；或
(iii)由于多药耐药性用其他化疗药难治疗的肿瘤。
在本发明更广的意义上，增殖性疾病此外可是过度增殖性病症，诸如白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤。

21.  权利要求19的方法，其中的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱存在的量选自从约99.5％至约0.001％，从约95％至约0.1％，从约90％至约0.5％，基于喜树碱衍生物和至少一种表面稳定剂的总的合并重量的重量比，不包括其他赋形剂。

22.  权利要求19的方法，其中至少一种表面稳定剂存在的量选自从约0.5％至约99.999％，从约5.0％至95％、和从约10％至约99.5％，基于7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和至少一种表面稳定剂的总的合并干重的重量比，不包括其他赋形剂。

23.  权利要求19的方法，其中至少一种表面稳定剂选自羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物、月桂醇硫酸钠、磺基琥珀酸二辛酯、泊洛沙姆、明胶、酪蛋白、卵磷脂、右旋糖酐、阿拉伯胶、胆固醇、西黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八醇十六醇混合物、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯；聚乙二醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物、poloxamine；Tetronic1508、烷基芳基聚醚磺酸盐；硬脂酸蔗糖酯和二硬脂酸蔗糖酯的混合物；对-异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)、C18H37CH2(CON(CH3)--CH2(CHOH)4(CH2OH)2；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-癸基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-癸基-β-D-吡喃麦芽糖苷；正-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-十二烷基-β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-庚基-β-D-葡糖硫苷；正-己基-β-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-壬基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷；PEG-磷脂、PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、PEG-维生素A、PEG-维生素E、溶菌酶、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物。

24.  权利要求19的方法，其中所述的制剂为液体口服剂型。

25.  权利要求19的方法，其中所述的制剂为固体口服剂型。

26.  权利要求19的方法，其中所述的制剂为注射剂型。

27.  包含0.001-100mg重量的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的剂型。

28.  权利要求27的剂型，其包含0.01-25mg重量的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱。

29.  权利要求27的剂型，其包含0.05-10mg重量的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱。

说明书7-(叔丁氧基)亚氨基甲基喜树碱的制剂
技术领域
本发明涉及活性剂是拓扑异构酶I抑制剂的纳米粒组合物和用于治疗和预防包括癌症的增殖性疾病的包含纳米粒组合物的药物组合物。
背景技术
喜树碱衍生物是描述于美国专利号6,242,457的一类化合物，并且一般在施用方面呈现十分特有的困难，且盖伦组合物特别地包括特别的药物生物利用度问题，因为这些衍生物有非常差的溶解度。
纳米粒组合物是由吸附在表面稳定剂的表面的难溶性治疗剂组成的粒子。制备纳米粒组合物的方法在例如美国专利5,518,187和5,862,999中有所描述，两者是“研磨药物物质的方法”，美国专利5,718,388是“研磨药物物质的持续方法”，美国专利5,510,118是“制备含纳米粒的治疗组合物的方法”。
发明概述
本发明涉及含拓扑异构酶I抑制剂，特别是7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱作为活性剂和至少一种表面稳定剂的纳米粒组合物。
本发明亦涉及制备本发明纳米粒组合物的方法。这些方法包括7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱和至少一种表面稳定剂接触一定时间并且在充分提供纳米粒组合物的条件下。一种或多种表面稳定剂可在7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱粒度降低之前、期间或之后与7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱接触。
本发明亦涉及包含本发明的纳米粒组合物和可药用载体以及任意可药用赋形剂的药物组合物。
本发明亦涉及使用本发明的药物组合物治疗诸如增殖性疾病或与难治性血管发生相关联或由之激发的疾病的方法。
附图说明
图1说明了实施例1中描述的纳米混悬液和纯药物物质的体外溶出速率图。图例：试验1至6的纳米混悬液和未研磨药物。
图2说明了实施例2中描述的纳米混悬液的狗体内生物利用度。
图3说明了实施例2中描述的纯药物物质的狗体内生物利用度。
发明详述
本发明的纳米粒组合物包含具有小于约4微米的有效平均粒度的7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱和优选的至少一种表面稳定剂。
本发明的纳米粒组合物的另外的特色是组合物重分散以使重分散的7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱粒子的有效平均粒度小于约2-4微米。显然地，如果纳米粒施用后，存在于本发明组合物中的7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱不能重分散成基本上小的粒度，则剂型可能失去将7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱制成纳米粒粒度大小的好处。
优选地，本发明重分散的粒子当用光散射法、显微镜法或其他适当的方法测定时，具有重量分布的有效平均粒度，小于约4000nm，优选地小于2000nm，更优选地小于约1000nm，且最优选地小于约500nm。
本文使用的“活性剂”，包括有以下结构的7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱即化合物A：

优选的活性剂可以是游离的或可药用盐形式，其可能的对映异构体、非对映异构体及相关混合物、多晶形、无定型、部分无定型、溶剂合物、其活性代谢物和前药的形式。
按照本发明活性剂可存在的量以重量计从本组合物的0.001％至约30％。活性剂优选的存在的量以重量计约为组合物的0.01％至约5％。
本文使用的“水难溶”意思是在20℃的水中溶解度小于1％，例如0.01％重量/体积，即：Remington：药学的科学与实践(The Science andPractice of Pharmacy)，第19版，A.R.Gennaro编辑，Mack PublishingCompany，美国，第1卷，第195页(1995)中描述的“略溶至非常难溶药物”。
“有效平均粒度小于约4000nm”意思是当用常规技术测定时，纳米粒活性剂粒子以重量计至少50％具有小于约4000nm的粒度。优选地，至少约70％、约90％、约95％或约99％的纳米粒活性剂粒子具有小于有效均值的粒度，即小于约4000nm、小于约3000nm、小于约2000nm等。本文使用的粒度，是以重量平均粒度为基础使用本领域技术人员熟知的传统粒度测定技术测定的。这些技术包括，例如沉降场流分离技术、质子相关光谱、光散射和盘式离心。
本文提供的术语纳米粒制剂的“有效量”或“药物有效量”是指如下文定义的以个体足以有效治疗的量提供所需响应和相应的治疗效果的无毒但有效的纳米粒制剂的量。下文将指出的是，需要的准确的量将随个体的不同根据人种、年龄、个体的一般病症、要治疗的病症的严重程度、施用方式等而变化。对任意个体病例的适当的“有效”量可使用常规试验由本领域普通技术人员确定。
术语“可药用”或“药理学上可接受的”意指在生物学上或在其他方面不是令人不快的物质，即可以给个体随纳米粒制剂一同施用的而不引起任何令人不快的生物学效应或以有害的方式与组合物中包含的任何成分相互作用的物质。
I.表面稳定剂
多于一种表面稳定剂的组合可用于本发明。优选的主要表面稳定剂包括但不限于，羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物或其组合。优选的次要表面稳定剂包括但不限于泊洛沙姆、月桂醇硫酸钠和磺基琥珀酸二辛酯。
本发明可使用的其他表面稳定剂包括但不限于，已知有机的和无机的药用赋形剂。这类赋形剂包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物和表面活性剂。表面稳定剂包括非离子、阳离子、离子和两性离子型表面活性剂。
表面稳定剂的代表性实施例包括明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、右旋糖酐、阿拉伯胶、胆固醇、西黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八醇十六醇混合物、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、聚氧乙烯烷基醚(例如，聚乙二醇醚，诸如聚乙二醇1000单鲸蜡基醚)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如，可商购得到的吐温诸如吐温20和吐温(ICI Specialty Chemicals))；聚乙二醇(例如，Carbowaxs 3550和934(Union Carbide))、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物(亦称作四丁酚醛、superione和triton)、泊洛沙姆(例如，PluronicsF68和F108，是环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物)；poloxamine(例如，Tetronic 908，亦称作Poloxamine 908，是由环氧丙烷和环氧乙烷顺序加入至乙二胺衍化得到的四官能嵌段共聚物(BASF Wyandotte Corporation，Parsippany，新泽西))；Tetronic 1508(T-1508)(BASF WyandotteCorporation)，Tritons X-200，其是烷基芳基聚醚磺酸盐(Rohm andHass)；Crodestas F-100，其是硬脂酸蔗糖酯和二硬脂酸蔗糖酯的混合物(Croda Inc.)；对-异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)，亦称作Olin-10G或表面活性剂10-G(Olin Chemicals，Stamford，CN)；CrodestasSL-40(Croda，Inc.)；和SA9OHCO，其是C18H37CH2(CON(CH3)--CH2(CHOH)4(CH2OH)2(Eastman Kodak Co.)；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-癸基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-癸基-β-D-吡喃麦芽糖苷；正-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-十二烷基-β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正-庚基-β-D-葡糖硫苷；正-己基-β-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-壬基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷；PEG-磷脂、PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、PEG-维生素A、PEG-维生素E、溶菌酶、乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的无规共聚物等。
有用的阳离子表面稳定剂的实例包括但不限于：聚合物、生物聚合物、多糖、纤维素制品、海藻酸盐、磷脂、和非聚合物化合物诸如两性离子稳定剂、聚-正-甲基吡啶、蒽基吡啶氯化物、阳离子磷脂、脱乙酰壳多糖、多聚赖氨酸、聚乙烯咪唑、聚凝胺、聚甲基丙烯酸甲酯三甲基溴化铵溴化物(PMMTMABr)、己基二苯乙酮基三甲基溴化铵(HDMAB)、和聚乙烯吡咯烷酮-2-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯二甲基硫酸酯。
这些阳离子表面稳定剂和其他有用的阳离子表面稳定剂的范例描述于J.Cross和E.Singer，阳离子表面活性剂：分析和生物学评价，MarcelDekker(1994)；P.和D.Rubingh，Ed.阳离子表面活性剂：物理化学，Marcel Dekker(1991)；和J.Richmond，阳离子表面活性剂：有机化学，Marcel Dekker(1990)中。
这些表面活性剂的大多数是已知的药物赋形剂并在由美国药学会和大不列颠药学会联合出版的药物赋形剂手册(The Pharmaceutical Press，2000)中有详细描述，特别加入作为参考。表面稳定剂是可商购获得和/或由本领域已知技术制备的。
至少一种表面稳定剂的浓度可从约0.5％改变至99.999％，从约5％至99.9％、或从约10％至99.5％，基于活性剂和至少一种表面稳定剂的总的合并干重的重量比，不包括其他赋形剂。
如果两种或多种表面稳定剂的组合用于本组合物中，至少一种主要表面稳定剂的浓度可从约0.01％至约99.5％、从约0.1％至约95％、或从约0.5％至约90％，基于活性剂总的合并干重的重量比，不包括其他赋形剂。
II.纳米粒组合物的制备方法
本发明纳米粒组合物可使用例如研磨、均化或沉淀技术制备。
研磨活性剂以获得纳米粒分散体包括分散活性剂颗粒在活性剂难溶于其中的液体分散介质中，接着在研磨介质存在时应用机械手段以降低活性剂的粒度获得所需的有效平均粒度。分散介质可以是例如水、乙醇、叔丁醇、甘油、聚乙二醇(PEG)、己烷或乙二醇。
在一个实施方案中，活性剂的水性纳米研磨是在亲水稳定剂存在下进行的。
活性剂粒子可在至少一种表面稳定剂的存在下降低粒度。或者，活性剂粒子在研磨后可与一种或多种表面稳定剂接触。其他化合物诸如稀释剂，可在粒度降低之前、期间或之后加至活性剂/表面稳定剂组合物中。分散体可连续或以批的方式生产。
在另一个实施方案中，纳米粒组合物可通过微沉淀法制备。这是在一种或多种表面稳定剂和一种或多种无任何痕量毒性溶剂或溶剂化重金属杂质的胶体稳定性改善表面活性剂存在下制备难溶性活性剂的稳定分散体的方法。这些方法包括，例如：
(1)溶解活性剂在适当的溶剂中；
(2)步骤(1)制剂加至含至少一种表面稳定剂的溶液中；和
(3)使用适当的非溶剂使步骤(2)的制剂沉淀。
该方法可在任何形成的盐除去之后，如果存在盐，通过渗析或透滤和通过传统方法的分散体的浓缩除去。
在另一个实施方案中，纳米粒组合物通过匀化法制备。这一方法包括分散活性剂粒子在液体分散介质中，接着通过将分散体进行匀化以降低活性剂的粒度至所需的有效平均粒度。活性剂粒子可在至少一种表面稳定剂存在下被降低粒度。或者，活性剂粒子可在研磨之前或之后与一种或多种表面稳定剂接触。其他化合物，诸如稀释剂，可在粒度降低过程之前、期间或之后加至活性剂/表面稳定剂组合物中。分散体可连续或以批的方式生产。
III.药物组合物和治疗方法
本发明的药物组合物亦包括一种或多种生理可接受的载体、辅剂或基质，可统指载体。组合物可制成制剂用于以固体、或液体形式等口服施用。
根据本发明的药物组合物亦可包括一种或多种粘合剂、填充剂、润滑剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、缓冲剂、润湿剂、崩解剂、泡腾剂和其他赋形剂。这些赋形剂是本领域已知的。填充剂的实例是乳糖一水合物、无水乳糖、微晶纤维素诸如AvicelPH101和AvicelPH102、微晶纤维素和硅化的微晶纤维素(ProSolv SMCC)和各种淀粉；粘合剂的实例是各种纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮。适合的润滑剂包括对被压制的粉末流动性起作用的成分，是胶态二氧化硅诸如Aerosil200、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和硅胶。甜味剂的实例是任何天然或人工甜味剂诸如蔗糖、木糖醇、糖精钠、环己氨磺酸盐、阿司帕坦、sucralose、麦芽糖醇和乙酰舒泛。矫味剂的实例是Magnasweet(MAFCO的商标)、泡泡糖香料、和水果香料等。防腐剂的实例是山梨酸钾、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯甲酸及其盐、对羟基苯甲酸的其他酯诸如尼泊金丁酯；醇类诸如乙醇或苯甲醇。适当的稀释剂包括可药用惰性填充剂，诸如微晶纤维素、乳糖、磷酸氢钙、糖类和/或上述任意混合物。稀释剂的实例包括微晶纤维素诸如AvicelPH101和AvicelPH102；乳糖诸如乳糖一水合物、无水乳糖、和PharmatoseDCL21；磷酸氢钙诸如Emcompress；甘露醇；淀粉；山梨醇；蔗糖；和葡萄糖。适当的崩解剂包括轻度交联聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉、马铃薯淀粉、玉米淀粉、和改性淀粉、交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮、淀粉羟乙酸钠及其混合物。泡腾剂的实例是泡腾对诸如有机酸和碳酸盐或碳酸氢盐。适当的有机酸包括，例如枸橼酸、酒石酸、苹果酸、反丁烯二酸、己二酸、琥珀酸和海藻酸及酸酐和酸盐。适当的碳酸盐和碳酸氢盐包括例如，碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸镁、甘氨酸钠碳酸盐、L-赖氨酸碳酸盐和精氨酸碳酸盐。或者，可仅存在泡腾对中的碳酸氢钠成分。
本发明的纳米粒组合物可通过任何传统方法包括口服和注射施用给个体。如本文使用的术语“个体”意思是动物、优选地是哺乳动物、包括人类和非人类。术语患者和个体可互换使用。
用于口服施用的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在这些固体剂型中，活性剂与以下至少一种混合：
(a)一种或多种惰性赋形剂(或载体)、诸如枸橼酸钠或磷酸二钙；
(b)填充剂或膨胀剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；
(c)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；
(d)保湿剂，诸如甘油；
(e)崩解剂，诸如交联淀粉、聚乙烯吡咯烷酮XL、琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；
(f)溶出阻滞剂，诸如石蜡；
(g)吸收促进剂，诸如季铵盐化合物；
(h)润湿剂，诸如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；
(i)吸附剂，诸如高岭土和膨润土；和
(j)润滑剂，诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂醇硫酸钠或其混合物。
对于胶囊、片剂和丸剂，剂型亦可包含缓冲剂。
用于口服施用的液体纳米粒剂型包括可药用乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性剂外，液体剂型可包含本领域常用的惰性稀释剂诸如水或其他溶剂、共溶剂、增溶剂和乳化剂。溶剂和共溶剂的非限制性实例包括乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油诸如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油、和芝麻油、甘油、四氢呋喃甲醇和二甲基异山梨醇酯、聚乙二醇、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物亦可包含辅剂诸如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂和加香剂。
剂量单位组合物可包含这些约数的其可使用的量构成其每日剂量。应当理解，但是任何个别患者的具体剂量水平将依赖各种因素：要实现的细胞或生理响应的类型和程度；使用的特定成分或组合物的活性；使用的特定成分或组合物；年龄、体重、一般健康、患者的性别和饮食；施用时间、施用途径和成分的消除速率；治疗的持续时间；合并使用的或偶然与特定成分一同使用的药物；和医学领域中熟知的相似因素。
本发明的药物组合物是用于治疗增殖性疾病或与难治性血管发生相关或触发的疾病。增殖性疾主要是肿瘤疾病(或癌症)(和/或任何转移)。本发明的组合物是特别用于治疗乳腺癌、肺癌、包括食道、胃、小肠、大肠和直肠癌的胃肠癌、胶质瘤、肉瘤、诸如涉及骨、软骨、软组织、肌肉、血液和淋巴管的那些、卵巢癌、骨髓瘤、女性子宫颈癌、子宫内膜癌、头颈癌、间皮瘤、肾癌、输尿管、膀胱和尿道癌、前列腺癌、皮肤癌和黑色素瘤的肿瘤。特别地，本发明的组合物特别用于治疗：
(i)乳腺癌；肺癌例如非小细胞肺部肿瘤；胃肠癌例如结直肠癌；或泌尿生殖系统肿瘤例如前列腺肿瘤；
(ii)用其他化疗药治疗难治的增殖性疾病；或
(iii)由于多药耐药性用其他化疗药难治疗的肿瘤。
在本发明更广的意义上，增殖性疾病此外可是过度增殖性病症，诸如白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤。
给出以下实施例用以阐释本发明，应理解，本发明不是被限制于这些实施例中的特定条件或所述细节。
实施例1
表1显示了接受纳米研磨的水混悬液的组成。
表1：水性纳米研磨：研磨前水混悬液的组合物
  试验  药物[％]*  稳定剂  稳定剂[％]*  研磨时间  1  1  Povidone K-30  0.2  7小时  2  1  HPMC 3cps  0.2  3.5小时  3  1  HPMC 3cps  0.2  7小时  4  1  HPMC 3cps  0.2  24小时  5  1  HPC，低粘度  0.2  7小时  6  1  Poloxamer 188  0.2  7小时
*在水混悬液中的％(w/w)
水性纳米研磨是在球蘑机中用钇-氧化锆小球(为0.5-0.6mm)进行。对于所有试验批量大小约为70g。在研磨前小球用1％稳定剂溶液以1200rpm(最低速度，80mL溶液处理160mL小球)处理24小时，用去离子水清洗直至电导率读数与水的相同，置于150-200℃烘箱直至干燥并在用前冷却至室温。在3200rpm进行研磨并且使用表1中列出的研磨时间。在研磨前和研磨后，水混悬液就粒度分布、外观(显微照片和激光散射)、和溶出速率和分析/降解方面进行表征。
溶出速率试验使用USP2仪器、桨法、50rpm、37℃、0.3％SDS的1000mL水中进行，n＝3。对于溶出速率试验，水混悬液用水以1∶5的比例稀释并填入管形瓶中(0.5mg药物物质/瓶)。
体外表征包括溶出速率试验的结果在表2中给出。
表2：水性纳米混悬液的体外表征结果
  试验  PSD(研磨后  光散射)  PsD，外观光学显微镜  溶出速率：％释放，均值  (n＝3，之后)  研磨前  研磨后  15  min  30  min  60  min  120  min  1  x10＝=0.2μm  x50＝=0.5μm  x90＝=1.9μm  圆柱形粒子，长度  ＜5-约100μm  细粒子(不可见)  97  101  102  103  2  x10＝0.3μm  x50＝0.8μm  x90＝2.6μm  圆柱形粒子，长度  ＜5-约100pm  细粒子(不可见)  86  90  93  93  3  x10＝0.2μm  x50＝0.9μm  x90＝13.7μm  圆柱形粒子，长度  ＜5-约100μm  细粒子(不可见)  86  90  92  92  4  x10＝0.2gμm  x50＝3.7μm  x90＝27.4gμm  圆柱形粒子，长度  ＜5-约100μm  细粒子(不可见)  100  105  107  107  5  x10＝9.0μm  x50＝37.7μm  x90＝92.41μm  圆柱形粒子．长度  ＜5-约30μm  细粒子(不可见)  79  81  88  88  6  x10＝0.4μm  x50＝1.5μm  x90＝6.1μm  圆柱形粒子，长度  ＜5-约100μm  细粒子(不可见)  91  95  96  96  未研磨  药物  x10＝2μm  x50＝91μm  x90＝351μm  未测定  不适用  3  5  15  31
PSD＝粒度分布
如表2中标明的所有水性纳米混悬液与未研磨的药物物质相比显示非常高的溶出速率。几乎100％药物物质在15分钟内释放。在各变量间未观察到显著差异。
光学显微镜的分析显示混悬液中的活性剂的粒度通过研磨显著降低。粒度从高达约100μm的粒子变化到肉眼不可见的粒子。通过激光散射测定的粒度分布表明变体1和2可得到x90＜3μm的粒子。3和6观察到略大的粒子，同时含泊洛沙姆188作为稳定剂的变体5见到聚集体的形成。
宏观上看，研磨的混悬液是略黄的且是不透明的。用水以1∶5稀释混悬液后观察到相同的外观。
上文总结的结果表明水性纳米研磨对活性剂是可行的。粒度上的显著降低可通过研磨实现。所有变体与未研磨的药物物质相比显示改善的溶出性能(在15分钟几乎100％释放)。
实施例2
在未研磨药物物质以干粉制剂(硬胶囊)和根据本发明的组合物(液体形式)施用后测定，比较7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱的生物利用度。
施用形式：每只狗0.5mg的7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱。
根据本发明的组合物相应于实施例1中的试验2。
方法
六(6)只狗完成了研究。每只狗接受两种制剂。采集给药前、和给药后10分钟、30分钟、45分钟、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时、3小时、4小时、6小时、10小时和24小时的血样用于血浆中7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱的测定。肝素化血浆中的7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱的每个浓度通过液相色谱/串联质谱电喷雾正离子模式(正ESI-LC/MS-MS)测定。通过液-液萃取和上清液挥干再用进样介质重溶制备肝素化血浆样品用于分析。定量限为0.1ng/mL。
结果(亦参见图2和3)
  PK参数  制剂：实施例1试验2  均值(CV％)  制剂：纯药物物质装在胶囊中  均值(CV％)  实际剂量[mg/kg]  0.0369(5)  0.0443(15)  AUC(0-24h)[(ng/mL)·h]  AUC(0-24h)/剂量  [(ng/mL)·h/(mg/kg)]中间值  55.0(41)  1489(40)  1343  0.86(155)  AUC(0-∞)[(ng/mL)·h]  AUC(0-∞)/剂量[(ng/mL)·h/(mg/kg)]  中间值  83.4(56)  1489(40)  1343  Cmax[ng/mL]  Cmax/剂量[(ng/mL)/(mg/kg)]  中间值  11.0(28)  296(25)  285  0.37(70)  8.2(68)
PK参数    制剂：实施例1试验2    均值(CV％)制剂：纯药物物质装在胶囊中均值(CV％)tmax[h]tmax[h]范围t1/2 [h]    1.50(52)    1至2.5    7至18    1.2(27)