一种锝标记的美金刚胺二硫二氮衍生物药盒的制备方法.pdf

一种锝标记的美金刚胺二硫二氮衍生物药盒的制备方法，属于放射性药物标记技术领域。具体涉及一种99mTc-N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒，简称99mTc-NCAM药盒的制备方法，以N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺(NCAM)为原料，先与辅料葡庚糖酸钠、乙二胺四乙酸、SnF2等配制NCAM药盒，再加入新淋洗的50-1000MBq的Na99mTcO4溶液进行99mTc标记，制得99mTc-NCAM药盒。药盒中各组分含量在下列范围内：NCAM20-200μg、SnF25-200μg、乙二胺四乙酸0.2-4.0mg、葡庚糖酸钠2-20mg、pH值4.0-7.0。制备的药盒标记率＞90％，其稳定性较好。

权利要求书
1.  一种99mTc-N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒，简称99mTc-NCAM药盒，的制备方法，其特征是制备过程为：
(1)N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒的制备：
称取1.8g Na2HPO4·12H2O和0.2g KH2PO4溶于70mL水中，再加入0.20-2.0g葡庚糖酸钠和20-400mg乙二胺四乙酸，加入50.0-2000.0mg/L SnF2的0.1M的盐酸溶液10.0mL中，最后加入200.0-2000.0mg/L NCAM的70％浓度的甲醇溶液10.0mL，再补加蒸馏水到总体积100mL，混匀后无菌过滤，按1.00mL/瓶分装于10mL规格西林瓶中，冷冻干燥后即得NCAM药盒，每支药盒中含20-200μgNCAM、5-200μg SnF2·2H2O、0.2-4mg乙二胺四乙酸、2-20mg葡庚糖酸钠和pH在4.0-7.0磷酸盐缓冲液；
(2)99mTc标记药盒：冻干的NCAM药盒，加入淋洗的50-1000MBq的Na99mTcO4溶液1.0mL，置于沸水浴上加热30min后冷却，即为99mTc-N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒。

说明书一种锝标记的美金刚胺二硫二氮衍生物药盒的制备方法
技术领域
本发明涉及99mTc-N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒的制备方法，属于放射性药物标记技术领域。
背景技术
99mTc-N-acetyl-Amantadine(99mTc-NCAM)是我们通过设计在美金刚胺氨基位上连接二硫二氮配体，并用之与锝形成一种稳定的络合物(99mTc-NCAM)，该络合物在CA上无登记号，国内外也没有相关报道。
99mTc-NCAM呈电中性，logP1.8，(脂水分配系数P的大小决定其能否穿透血脑屏障BBB，logP＜0.5时，药物很难通过BBB，logP应在0.5～2之间才能较好地穿透BBB)，分子量413(药物的相对分子量决定其能否穿透BBB，分子量小于600才可能进脑)。实验结果从理论上说明99mTc-NCAM能够穿透血脑屏障。
99mTc-NCAM的小鼠体内动物分布试验结果显示在纹状体、海马处浓聚，在肝脏、肺、胰摄取较高。
目前国外文献报道的都是用18F、123I或11C标记NMDA受体拮抗剂用于研究精神类疾病受体的变化，还没有99mTc标记NMDA受体的报道。
根据王学斌等的99mTc放射性药物的分子设计原则，①设计的99mTc配合物应具有一定的生物分布性能，可浓集于特定的组织或靶器官。②设计的99mTc配合物的制备方法应简单快捷，可药盒化，质量容易控制。③设计的99mTc药物应安全性高，毒副作用小。我们设计的99mTc-NCAM符合这三大原则，是一种潜在的新型脑受体显像剂。
发明内容
本发明的目的是提供99mTc-N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒的制备方法，提供标记率高、稳定性好、标记方法简单的脑受体显像药盒。
本发明的技术方案：一种99mTc N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒，简称99mTc-NCAM药盒，的制备方法，制备过程为：
(1)N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒的制备：
称取1.8g Na2HPO4·12H2O和0.2g KH2PO4溶于70mL水中，再加0.20-2.0g葡庚糖酸钠(GH)和20-400mg乙二胺四乙酸(EDTA)，加入50.0-2000.0mg/L SnF2的0.1M的盐酸溶液10.0mL中，最后加入200.0-2000.0mg/L NCAM的70％浓度的甲醇溶液10.0mL，再补加蒸馏水到总体积100mL，混匀后无菌过滤，按1.00mL/瓶分装于10mL规格西林瓶中，冷冻干燥后即得NCAM药盒，每支药盒中含20-200μg NCAM、5-200μg SnF2·2H2O、0.2-4mg乙二胺四乙酸、2-20mg葡庚糖酸钠和pH 4.0-7.0磷酸盐缓冲液；
N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺(简称NCAM)，该化合物为本研究所自制合成，其制备工艺路线为：

其制备方法已另行申请专利，与本发明申请日为同一天。
(2)99mTc标记药盒：冻干的NCAM药盒，加入淋洗的50-1000MBq的Na99mTcO4溶液1.0mL，置于沸水浴上加热30min后冷却，即为99mTc-N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3，5-二甲基金刚烷氨基乙酰胺药盒。
标记率的测定
采用薄层色谱(TLC)法，固定相采用聚酰胺薄膜，展开剂为乙酸乙酯∶乙醇(体积比)＝1∶1。用不含NCAM的试剂盒按同样方法标记后进行TLC分析比较，确定标记溶液中各种组分的Rf值，99mTc-NCAM为0.8～1.0、99mTc-GH为0～0.2、99mTcO4-为0～0.2、99mTc胶体为0～0.2；各种条件下的标记率均测定3次以上再取平均值。
或采用HPLC法，柱子Lichrospher C18(4.6×250mm，5μm)，85％甲醇作流动相，流速0.8mL/min，99mTc胶体和不含NCAM的标记液保留时间在3min左右，络合物99mTc-NCAM的保留时间在11.27min，两种方法测定结果一致，标记率均大于95％。
本发明的有益效果：制备的药盒标记率＞90％，稳定性好。药盒中各组分含量在下列范围内标记率＞90％，NCAM 20-200μg、SnF2 5-200μg、EDTA 0.2-4.0mg、GH 2-20mg、pH值4.0-7.0。可成功制备标记率＞90％的药盒，其稳定性较好。
附图说明
图1 pH值对标记率的影响。
图2 葡庚糖酸钠对标记率的影响。
图3 EDTA对标记率的影响。
图4亚锡对标记率的影响。
图5 NCAM对标记率的影响。
图6 不含NCAM的标记液的HPLC色谱图。
图7 99mTc-NCAM HPLC色谱图。85％甲醇，Waters 1525 Binary HPLC pump，检测器：PerkinElmer Radiomatic 610 TR，柱子Lichrospher C18(4.6×250mm，5μm)，0.8ml/min。
具体实施方式
按每支药盒含NCAM 50μg、SnF220μg、EDTA 0.5mg、Na2HPO4.12H2O 17.6mg，KH2PO4 2.37mg和葡庚糖酸钠(GH)5mg制备药盒。
实施例1
pH值的变化对标记率的影响。取除缓冲剂(Na2HPO4和KH2PO4)外的各组分，加入新配制的不同pH值(1～12)缓冲溶液中，再加入Na99mTcO4，标记完成后按TLC法和HPLC法测定标记率。pH在4.0-7.0之间标记率稳定，且＞95％。见图1。
实施例2
药盒中各组分含量对标记率的影响。保持其他组分含量不变，分别改变药盒中NCAM、SnF2，、EDTA和GH的含量，标记后测定标记率。GH在2-20mg之间标记率大于95％；EDTA在0.2-4.0mg之间标记率大于95％；亚锡在5-200μg之间标记率大于95％；NCAM在20-200μg之间标记率大于95％。见图2-5。
实施例3
稳定性试验
将标记好的反应液室温放置1、2、3、4、5、6小时分别测定标记率，放置6小时后标记率仍大于90％。