一种超声波辅助提取银杏叶中总黄酮的方法.pdf

本发明涉及中药有效成分提取新技术，具体涉及利用超声波辅助从银杏叶中高效提取总黄酮的新方法。该方法是采用正交实验设计方案，通过筛选萃取过程中超声波发生方式、超声强度、作用时间、作用方式、溶剂类型、体系温度和搅拌方式等技术参数的基础上，得到以新鲜的银杏叶片，经60℃烘干24h，粉碎，过筛(0.45μm)为材料。装入超声萃取釜中加入60％乙醇，料液比(Kg∶L)1∶15-17，混合。超声发生方式：它激式超声发声装置，径向振动柱状换能器；超声波功率：100W；超声频率：33kHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间25min；提取温度：55℃；搅拌方式：气升式搅拌；依上述方法，银杏叶中总黄酮提取率可达97.35％。

权利要求书
1.  超声波辅助提取银杏叶中总黄酮的方法具有提取效率高，溶剂用量少，快速和稳定的特点。其原理是利用超声波振动增加溶剂进入植物细胞的渗透性，强化被提取物在植物细胞与提取介质间的传质速率。另外，超声波振动产生空化气泡形成剪切力，气泡崩溃时形成局部冲击波和高速射流能使植物细胞破裂，加速细胞内容物的释放。本发明中通过正交实验设计方案，选择和优化超声波强度、发生方式、作用时间、溶剂类型与组成、体系温度和搅拌方式等萃取参数，提高了目标化合物提取效率和选择性。本方法操作步骤是：以新鲜的银杏叶片，经60℃烘干24h，粉碎，过筛(0.45μm)为材料。装入超声萃取釜中(超声波中药提取仪：中国宁波振国制药设备制造有限公司，型号：TCLX200)，加入60％乙醇，料液比(Kg∶L)1∶15-17，混合。超声发生方式：它激式超声发声装置，径向振动柱状换能器；超声波功率：100W；超声频率：33kHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间25min；提取温度：55℃；搅拌方式：气升式搅拌；采用Al3+-芦丁二元络合物荧光光度法(荧光分光光度计：日本岛津，型号：RF5000)分析提取液中总黄酮含量。激发光谱带宽3nm，激发波长λex＝436nm；发射光谱带宽5nm，λem＝483nm；芦丁标准溶液荧光强度对相应浓度作图。依上述方法，银杏叶中总黄酮提取率可达97.35％。

2.  根据权利要求1所述的超声波辅助提取银杏叶中总黄酮的方法，其超声发生方式条件特征为它激式超声发声装置，径向振动柱状换能器。

3.  根据权利要求1所述的超声波辅助提取银杏叶中总黄酮的方法，其提取材料条件特征为新鲜银杏叶片，经60℃烘干24h，粉碎，过筛(0.45μm)。

4.  根据权利要求1所述的超声波辅助提取银杏叶中总黄酮的方法，其提取方法条件特征为超声波功率：100W；超声频率：33kHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间25min；提取温度：55℃；搅拌方式：气升式搅拌。

5.  根据权利要求1所述的超声波辅助提取银杏叶中总黄酮的方法，其提取效率特征为银杏叶中总黄酮提取率可达97.35％。

说明书一种超声波辅助提取银杏叶中总黄酮的方法
一、技术领域
本发明涉及中药有效成分提取新技术，具体涉及利用超声波辅助从银杏叶中高效提取总黄酮的新方法。
二、背景技术
提取的化学意义是用适宜的溶剂和适当的方法，将所需要的组分尽可能完全的从样品材料中溶浸出来，避免或减少有害组分或其他杂质的提出。从植物中提取化学成分作为药用，在祖国传统医药学中已有近5000年的历史。传统提取方法按照提取过程对能量需求方式的不同可以分为两大类。一类是加热提取法，主要有煎煮提取法、回流提取法和索氏提取法等不同方式；另一类是浸泡提取法，主要有浸渍提取法和渗漉提取法两种。传统提取方法存在着提取时间长、工艺繁复、效率低、工业污染大和对目标化合物提取无选择性等缺陷。
超声波萃取技术是利用超声振动增加溶剂进入植物细胞的渗透性，强化被提取物在两相介质之间的传质速率。超声波振动还能产生空化气泡，气泡剧烈运动对细胞形成强大的剪切力，特别是气泡崩溃时形成局部冲击波和高速射流作用，能使植物细胞破裂，加速细胞内容物的释放。超声波萃取可在较低温度范围内进行(20-60℃)，能有效防止植物中目的成分降解，对萃取物具有高的选择性，提取时间短，萃取物纯度和萃取率均较高。规模化工业生产过程从传统提取工艺向超声提取工艺改造设备投资较少。超声波萃取将会成为中药提取过程中最重要的核心技术手段。
银杏叶提取物(Extraction Ginkgo biloga，EGB)作为治疗应用已有几个世纪，在德国和法国已成为医生最常开的处方药品之一。黄酮类化合物是银杏的主要有效成分，有多种生物活性，具有抗氧化、清除体内过剩自由基、提高人体免疫力等功效。银杏中黄酮类化合物含量的高低是判断银杏生药及其相关产品质量的重要指标。本专利中提取物中黄酮类化合物的含量检测是根据黄酮类化合物能与铝离子形成稳定的荧光络合物，以芦丁标准溶液为标示物采用荧光光度法进行定量分析。
目前，从银杏叶中提取银杏黄酮类物质的方法基本上有三大类，它们分别是传统化学溶剂浸提法、超临界流体提取法和微波提取法。然而，这几类提取工艺应用中都存在着一些缺陷。具体而言，化学溶剂浸提法的缺点有能源、原材料消耗量大，提取效率低，工业污染排放量大等(例如，CN1129218A方法所述)。超临界流体提取法虽然在提取效率上得到了改进，但是该类方法要求的设备复杂，超临界溶剂选择范围窄，产品稳定性差，不利于大规模生产等(例如，CN1172669A方法所述)。微波萃取法克服了上述两种方法中的一些缺陷，但提取过程中微波的热效应会导致提取物中某些热敏性组分降解，严重影响提取物的生物活性，也限制了该方法的广泛应用(例如，CN1281856A)。本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，通过利用超声波萃取的特点，提供从银杏中快速、高效地提取银杏黄酮类物质的新方法。即，提供一种可以取代上述工艺过程的简单易行、高效、快速、成本低，废液排放量少的新方法。
三、发明内容
本发明是采用正交实验设计方案，通过筛选超声波萃取过程的超声波强度、超声发生方式、作用时间、作用方式、溶剂类型、体系温度和搅拌方式等技术参数，获得快速、准确、高效、经济的从银杏叶中提取银杏黄酮类物质的方法。
本发明采用的超声波辅助提取技术从银杏叶中提取银杏黄酮类物质的方法与已有提取技术相比，具有以下优点和卓著的效果：
①不需高温，能耗低：超声波提取中药材的最佳温度为20□-60□，对遇热不稳定、易水解或氧化的药材中有效成分具有保护作用，不会破坏热敏性药物的生理活性。同时，可大大降低能耗。
②缩短提取时间：超声波强化中药提取通常在20-40min即可获得最佳提取率，提取时间较传统方法可缩短8-10倍以上，提高了设备处理量和效率。
③适应性广：超声波提取中药材不受药材有效成分极性、分子量大小等的限制，适用于很多种类中药材有效成分的提取。
④提取药液杂质少，有效成分易于分离、纯化。
⑤操作简单易行，设备维护保养方便。规模化工业生产过程从传统提取工艺向超声提取工艺改造设备投资较少。
四、具体实施方式
获得的最佳技术方案为：
以新鲜的银杏叶片，经60℃烘干24h，粉碎，过筛(0.45μm)为材料。装入超声萃取釜中加入60％乙醇，料液比(Kg∶L)1∶15-17，混合。超声发生方式：它激式超声发声装置，径向振动柱状换能器；超声波功率：100W；超声频率：33kHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间25min；提取温度：55℃；搅拌方式：气升式搅拌；依上述方法，银杏叶中总黄酮提取率可达97.35％。