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1、10申请公布号CN104244978A43申请公布日20141224CN104244978A21申请号201380020133922申请日2013041561/624,51920120416US61/759,46920130201USA61K39/395200601A61P31/1620060171申请人瑞泽恩制药公司地址美国纽约州72发明人LA珀塞尔恩嘉波74专利代理机构北京市中咨律师事务所11247代理人黄革生刘金辉54发明名称通过施用丝氨酸蛋白酶抑制剂治疗或预防流感病毒感染的方法57摘要本发明提供了用于治疗和预防流感病毒感染的方法。本发明方法包括给需要其的受试者施用包含II型跨膜丝氨酸蛋。
2、白酶TTSP的药物组合物。TTSP抑制剂优选地通过抑制流感血凝素HA0蛋白水解切割成有功能的亚基HA1和HA2来发挥作用。在某些实施方案中，TTSP抑制剂是跨膜蛋白酶丝氨酸S1成员2TMPRSS2的抑制剂，例如抗TMPRSS2抗体或其抗原结合片段。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014101586PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0365222013041587PCT国际申请的公布数据WO2013/158516EN2013102451INTCL权利要求书1页说明书12页附图16页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书12页附图16页10。
3、申请公布号CN104244978ACN104244978A1/1页21用于治疗或预防流感病毒感染的方法，所述方法包括将包含II型跨膜丝氨酸蛋白酶TTSP抑制剂的药物组合物施用于需要其的受试者。2用于预防或减少受试者的肺中流感感染的肺泡巨噬细胞、流感感染的嗜中性粒细胞和/或流感感染的上皮细胞的积累的方法，所述受试者已经暴露于流感病毒或受流感病毒攻击，所述方法包括将包含II型跨膜丝氨酸蛋白酶TTSP抑制剂的药物组合物施用于受试者。3包含II型跨膜丝氨酸蛋白酶TTSP抑制剂的药物组合物，用于在受试者中治疗或预防流感病毒感染。4包含II型跨膜丝氨酸蛋白酶TTSP抑制剂的药物组合物，用于预防或减少受试者。
4、的肺中流感的肺泡巨噬细胞、流感感染的嗜中性粒细胞和/或流感感染的上皮细胞的积累，所述受试者已经暴露于流感病毒或受流感病毒攻击。5权利要求3或4的药物组合物，其中所述TTSP抑制剂是跨膜蛋白酶丝氨酸S1成员2TMPRSS2抑制剂。6权利要求5的药物组合物，其中所述TMPRSS2抑制剂选自小分子蛋白酶抑制剂、肽抑制剂和基于核酸的抑制剂。7权利要求5的药物组合物，其中所述TMPRSS2抑制剂抑制TMPRSS2的蛋白酶活性，但基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性。8权利要求3或4的药物组合物，其中所述TTSP抑制剂是特异地结合TMPRSS2并抑制其蛋白水解活性的抗体或其抗原结合片段。9权利要求8的。
5、药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制TMPRSS2的蛋白酶活性，但基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性。10权利要求3至9中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物配制用于全身施用。11权利要求10的药物组合物，其中所述药物组合物配制用于皮下施用。12权利要求10的药物组合物，其中所述药物组合物配制用于静脉内施用。13权利要求3至12中任一项的药物组合物，其进一步包含第二治疗剂。14权利要求13的药物组合物，其中所述第二治疗剂是抗病毒剂。15权利要求14的药物组合物，其中所述抗病毒剂选自金刚烷胺、金刚乙胺、奥司他韦和扎那米韦。16权利要求13的药物组合物，其中所述第二治疗剂是流感病毒。
6、疫苗。17权利要求13的药物组合物，其中所述第二治疗剂是抗流感抗体。18权利要求17的药物组合物，其中所述抗流感抗体是特异地结合血凝素HA的抗体。权利要求书CN104244978A1/12页3通过施用丝氨酸蛋白酶抑制剂治疗或预防流感病毒感染的方法发明领域0001本发明涉及流感病毒感染的治疗和预防。更特别地，本发明涉及使用II型跨膜丝氨酸蛋白酶抑制剂TTSP，如抗TMPRSS2抗体在受试者中治疗或预防流感病毒感染。0002发明背景0003流感病毒感染过程从病毒颗粒病毒体附着到靶细胞开始，然后是病毒包膜与靶细胞膜融合。病毒附着和细胞融合通过病毒包膜蛋白血凝素HA介导。HA由两个亚基组成HA1介导附。
7、着步骤，而HA2介导融合步骤。HA最初合成为没有活性的前体HA0，其中HA1和HA2通过蛋白酶敏感的连接体序列连接。通过宿主细胞蛋白酶切割连接体产生了有功能的HA1和HA2亚基。因为HA的切割是必要的，所以认为流感病毒感染过程中的宿主介导步骤介导HA活化的宿主细胞蛋白酶是针对流感感染的治疗靶点参见例如，BOTTCHER等,2006JVIROL8098969898。0004涉及流感HA切割的宿主细胞蛋白酶包括TTSP如跨膜蛋白酶丝氨酸S1成员2TMPRSS2、TMPRSS4和人呼吸道胰岛素样蛋白酶HAT。参见例如，BAHGAT等,2011VIROLJ827，以及其中引用的参考文献。这些蛋白酶在人。
8、呼吸道上皮细胞中表达。参见BERTRAM等,2010REVMEDVIROL20298310。已经报道，使用在空间上阻断TMPRSS2CRNA的单链DNA样反义试剂PPMO在体外处理人呼吸道上皮细胞系CALU3造成了H1N1病毒滴度的降低。参见BOTTCHERFRIEBERTSHAUSER等人,2011JVIROL8515541562。然而，并没有直接显示动物模型中TTSP作用减弱例如TMPRSS2敲除的保护性作用。此外，并没有显示流感病毒感染的治疗和/或预防中靶向TTSP的蛋白水解活性的治疗剂例如，抗TMPRSS2抗体的用途。因此，在本领域存在针对流感的新的、高效的治疗方法的需求，所述方法利用。
9、了感染过程中宿主细胞蛋白酶的作用。发明概要0005本发明通过提供用于治疗或预防流感病毒感染的方法处理了本领域的前述需求。本发明方法包括给需要其的受试者施用包含II型跨膜丝氨酸蛋白酶TTSP抑制剂的药物组合物。在某些实施方案中，TTSP是TMPRSS2的抑制剂。可以在本发明的背景中使用的示例性TMPRSS2抑制剂包括例如，小分子蛋白酶抑制剂、肽抑制剂、基于核酸的抑制剂，以及特异地结合TMPRSS2的抗体或抗体的抗原结合片段。0006根据本发明的某些方面，将TMPRSS2抑制剂施用给需要其的受试者，其中TMPRSS2抑制剂特异性针对TMPRSS2和/或仅将TTSP抑制剂施用给受试者。例如，在某些实。
10、施方案中，将抗TMPRSS2抗体施用给受试者，其中抗TMPRSS2抗体仅抑制TMPRSS2的活性，并且不将其他TTSP抑制剂例如，TMPRSS4抑制剂、HAT抑制剂等施用给受试者。0007本发明还包括这样的实施方案，其中将第二治疗剂与TTSP抑制剂组合施用给受试者。例如，本发明包括这样的方法，其中将抗TMPRSS2抗体与一种或多种抗病毒剂组合和/或与抗流感抗体组合施用给受试者。说明书CN104244978A2/12页40008在阅读随后的详细说明后，本发明的其他实施方案是显而易见的。0009附图简述0010图14描述了4个不同试验分别为试验14的结果，其中用750PFU的H1N1流感病毒攻击野。
11、生型小鼠“WT”，闭合的正方形和TMPRSS2敲除小鼠“KO”闭合的圆形，并在感染后的几个时间点评估了体重改变百分数A图和存活百分数B图。0011图5显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，在野生型小鼠“WT”，空白条形和TMPRSS2敲除小鼠“KO”，阴影条形中观察到的体重改变百分数A图和肺病毒负荷B图。0012图6显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，用野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”观察到的体重改变百分数，以及用相应的未感染WT和未感染KO小鼠观察到的体重改变百分数。每一标记表示第5天各个小鼠的体重改变百分数。0013图7显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”。
12、和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的肺中CD45CD19图A和CD45CD3图B细胞的频率，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中CD45CD19和CD45CD3细胞的频率。每一标记表示第5天来自各个小鼠的指定细胞类型的频率。0014图8显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的肺中CD45CD4图A和CD45CD8图B细胞的频率，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中CD45CD4和CD45CD8细胞的频率。每一标记表示第5天来自各个小鼠的指定细胞类型的频率。0015图9显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2。
13、敲除小鼠“KO”的肺中树突细胞DC的频率，以及在相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中观察到的DC频率。每一标记表示第5天在来自各个小鼠的肺组织中的DC频率。0016图10显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的肺中嗜中性粒细胞图A、肺泡巨噬细胞图B和嗜酸性粒细胞图C的频率，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中嗜中性粒细胞、肺泡巨噬细胞和嗜酸性粒细胞的频率。每一标记表示第5天来自各个小鼠的指定细胞类型的频率。0017图11显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的肺中肺泡巨噬细胞图A和流感感染的。
14、肺泡巨噬细胞图B的频率，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中肺泡巨噬细胞和流感感染的肺泡巨噬细胞的频率。每一标记表示第5天来自各个小鼠的指定细胞类型的频率。0018图12显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的肺中嗜中性粒细胞图A和流感感染的嗜中性粒细胞图B的频率，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中嗜中性粒细胞和流感感染的嗜中性粒细胞的频率。每一标记表示第5天来自各个小鼠的指定细胞类型的频率。0019图13显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的肺中上皮细胞图A和流感感染的上皮细胞图B。
15、的频率，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中上皮细胞和流感感染的上皮细胞的频率。每一标记表示第5天来自各个小鼠的指定细胞类型的频率。0020图14显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除说明书CN104244978A3/12页5小鼠“KO”的肺中的累积病变得分，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的肺中的累积病变得分。每一标记表示第5天来自各个小鼠的肺中的累积病变得分。累积病变得分是5个参数的0至4的数值排序0无，1极小的，2轻微的，3中度的，4显著的，5个参数为1炎症支气管的和细支气管的出现炎性细胞嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞；上皮层丧失坏死以及管。
16、腔内细胞碎片累积；2炎症肺泡的肺泡层ALVEOLARLINING丧失、II型肺细胞增生、嗜中性粒细胞和组织炎性细胞、纤维蛋白、出血和/或细胞碎片沉积；3浸润血管周围的混合的细胞浸润淋巴细胞和嗜中性粒细胞，伴有内皮反应、多处炎性细胞着边和偶尔极少的细胞碎片；4EXEMA/渗出物血管周围和肺泡内，伴有纤维蛋白沉积和/或混合的细胞浸润；和5IHC在支气管上皮、肺泡被覆上皮和/或肺泡巨噬细胞中观察的。0021图15显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的血清中多种趋化性细胞因子KC/GRO图A；MIP1图B和MCP1/CCL2图C的水平，以及相应的未感染。
17、WT和未感染KO小鼠的血清中细胞因子的水平。每一标记表示第5天来自各个小鼠的血清中的细胞因子水平PG/ML。0022图16显示用H1N1流感病毒攻击后第5天，野生型小鼠“WT”和TMPRSS2敲除小鼠“KO”的血清中干扰素IFN的水平，以及相应的未感染WT和未感染KO小鼠的血清中干扰素的水平。每一标记表示第5天来自各个小鼠的血清中的干扰素水平PG/ML。0023发明详述0024在描述本发明之前，应当理解本发明并不限于所述的特定方法和实验条件，因为此类方法和条件是可以改变的。还应当理解，本文中所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制，因为本发明的范围仅受所附权利要求的限制。0025除。
18、非另外指明，本文中所用的全部技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义一样的含义。如本文中所用，术语“约”当用于指代具体列举的数值时，意为该值可以具有与所列举值的1以下的不同。例如，如本文中所用，表述“约100”包括99和101，以及之间的全部值例如，991、992、993、994等。0026尽管可以将与本文中所述的那些方法和材料类似的或者等同的任意方法和物质用于本发明的实践，但当前描述了优选的方法和材料。0027用于治疗或预防流感病毒感染的方法0028本发明提供了用于治疗或预防流感病毒感染的方法。如本文中所用，表述“治疗流感病毒感染”意为改善、降低或缓解哺乳动物中流感病毒。
19、感染的至少一种症状或生物学结果，和/或在暴露于流感病毒后降低或减少哺乳动物中流感病毒的滴度、载量、复制或增殖。表述“治疗流感病毒感染”还包括缩短流感病毒感染后受试者显示出流感病毒感染的至少一种症状或生物学结果的时间期限。根据本发明，用于治疗流感病毒感染的方法包括在受试者感染流感病毒感染后和/或在受试者显示出或者诊断为具有流感病毒感染的一种或多种症状或生物学结果后，将本发明药物组合物施用给受试者。0029如本文中所用，表述“预防流感病毒感染”意为在哺乳动物中预防流感病毒感染的至少一种症状或生物学结果，和/或抑制或减弱流感病毒能在动物身体的细胞内/之间进入、扩散和/或繁殖的程度。表述“预防流感病毒。
20、感染”还包括降低受试者对流感病毒感染说明书CN104244978A4/12页6的至少一种症状或生物学后果的易感性。用于预防流感病毒感染即，预防的方法包括在受试者感染流感病毒之前和/或受试者显示出流感病毒感染的一种或多种症状或生物学结果之前，将本发明的药物组合物施用给受试者。用于预防流感病毒感染的方法还可以包括在特定的时期或季节例如，在通常发现的经历流感病毒感染的个体数达到峰值之前12个月期间或者在受试者进入或者暴露于流感病毒感染高发的环境之前，和/或在受试者暴露于感染流感病毒的其他受试者之前，将本发明药物组合物施用给受试者。0030如本文中所用，表述“流感病毒感染的症状或生物学结果”包括以下的。
21、一种或多种鼻充血、鼻窦充血、流鼻涕、打喷嚏、身体肌肉疼痛、头疼、寒冷、发烧、咳嗽、咽喉痛、疲乏、耳痛或者流感病毒感染的诊断指标。流感病毒感染的诊断指标包括，例如通过病毒培养检测流感、血凝素凝集抑制HAI测定、免疫荧光或者使用合适样本例如，鼻拭子、鼻咽拭子、咽喉拭子、气管内吸出物、痰、支气管冲洗液等进行的基于核酸的检测例如RTPCR。因此，认为通过诊断测定测试出的流感病毒感染阳性受试者是显示出“流感病毒感染症状或生物学结果”的受试者。0031本文中所述的实验显示，动物并不表达有功能的II型跨膜丝氨酸蛋白酶例如，TMPRSS2，所述II型跨膜丝氨酸蛋白酶在流感病毒攻击后的肺中的某些流感感染的细胞类。
22、型中并不表现出显著的增加。特别地，用流感病毒攻击的TMPRSS2敲除小鼠的肺中并不显示出流感阳性肺泡巨噬细胞、嗜中性粒细胞或上皮细胞的增加，而这些流感感染细胞类型频率在流感病毒攻击后的野生型小鼠的肺中显著增加。TMPRSS2敲除小鼠在流感病毒攻击后还显示出完全存活以及体重增加/维持特征。因此，本发明还提供了这样的方法，其用于预防或减少已经暴露于流感病毒或者受流感病毒攻击的受试者的肺中流感感染的肺泡巨噬细胞、流感感染的嗜中性粒细胞和/或流感感染的上皮细胞的积累，其中该方法包括给受试者施用包含II型跨膜丝氨酸蛋白酶TTSP抑制剂的药物组合物。0032患者群体0033可将本发明方法用于任意受试者中来。
23、治疗或预防流感病毒感染，其中所述受试者将受益于该治疗或预防。受试者可以是人类或非人动物例如，马、犬、牛、猫科动物、绵羊、猪、禽鸟等。关于治疗方法，待治疗的受试者包括显示出至少一种流感病毒感染的症状或生物学结果已在本文中定义了该短语的任意个体。关于预防方法，受试者可以是处于暴露于流感病毒的风险或者可能与感染流感病毒的另一个体接触的任意个体。0034在“治疗”或者“预防”的情况下，本发明方法可以特别地用于患者群体中来治疗或者预防流感病毒感染，所述患者群体选自老年受试者、癌症患者例如，进行化疗、放射或其他抗癌症治疗方案的个体和无免疫能力的或者免疫受损的个体。例如，不能充分地应答流感疫苗接种或者其他抗。
24、病毒治疗或者不耐受常规治疗的受试者例如，具有蛋类过敏不能进行流感疫苗接种的个体是可以在治疗上或预防上受益于本发明方法的受试者。0035TTSP抑制剂0036本发明方法包括将包含II型跨膜丝氨酸蛋白酶TTSP抑制剂的药物组合物施用给受试者。示例性TTSP包括跨膜蛋白酶丝氨酸S1成员2TMPRSS2、跨膜蛋白酶丝氨酸S1成员4TMPRSS4和人呼吸道胰岛素样蛋白酶HAT。TTSP抑制剂可以是小分子蛋白酶抑制剂、基于核酸的抑制剂例如，SIRNA、核酶、反义构建体等、抗原结合蛋白质例如，抗体或其抗原结合片段或者阻断肽/肽抑制剂。TTSP抑制剂可以通过抑制或降低TTSP将说明书CN104244978A5。
25、/12页7血凝素前体蛋白HA0蛋白水解切割成HA1和HA2亚基的能力来发挥作用。0037在某些示例性实施方案中，TTSP抑制剂是TMPRSS2抑制剂例如特异地结合TMPRSS2并抑制TMPRSS2的蛋白水解活性的抗体或其抗原结合片段。例如，抗体或其抗原结合片段可以抑制或降低TMPRSS2蛋白水解切割血凝素前体蛋白HA0成HA1和HA2亚基的能力。当与TTSP混合时，相对于在相同或基本上相同的实验条件下测试的非抑制性对照分子，如果抗体使TTSP的蛋白水解活性降低至少25例如，30、40、50、60、70、80、90或100，那么认为抗体抑制TTSP例如TMPRSS2的蛋白酶活性。0038在本发明。
26、的某些实施方案中，TTSP抑制剂是抗TMPRSS2抗体或其抗原结合片段，其抑制TMPRSS2的蛋白酶活性，但基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性。对于本发明公开的目的，如果抗TMPRSS2抗体与TMPRSS4或HAT混合，相对于在相同或基本上相同的实验条件下测试的非抑制性对照分子，所述抗体对TMPRSS4或HAT的蛋白水解活性没有影响，或者导致TMPRSS4或HAT的蛋白水解活性不超过25例如，20、15、10、5或更低的下降，那么所述抗体“基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性”。0039在其中TTSP抑制剂是TMPRSS2抑制剂的某些实施方案中，TMPRSS2抑制剂是施用给受试者的唯。
27、一TTSP抑制剂。因此，在本发明此类实施方案的情况下，特别地排除了抗TMPRSS2抑制剂之外的任何其他TTSP抑制剂例如，TMPRSS4抑制剂或HAT抑制剂的施用。0040抗体和抗体的抗原结合片段0041如上所示，用于本发明方法中的TTSP抑制剂例如，TMPRSS2抑制剂可以是抗体或其抗原结合片段例如，特异地结合TMPRSS2的抗体或其抗原结合片段。如本文中所用，术语“抗体”意为包含至少一个互补决定区CDR的任一抗原结合分子或分子复合体，所述互补决定区与特定抗原例如TMPRSS2特异地结合或者相互作用。术语“抗体”包括免疫球蛋白分子，其包含四条多肽链、通过二硫键互相连接的两个重链H和两个轻链L。
28、，及其多聚体例如IGM。每一重链包含重链可变区在本文中简称为HCVR或VH和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每一轻链包含轻链可变区在本文中简称为LCVR或VL和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域CL1。VH和VL区可以进一步划分为高变区称为互补决定区CDR，其与更保守的区域称为构架区FR交替。每一VH和VL包含三个CDR和四个FR，从氨基端至羧基端按以下顺序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明不同的实施方案中，抗TMPRSS2抗体或其抗原结合部分的FR可以与人种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。可以基于两个或两个以上C。
29、DR的并行分析来定义氨基酸共有序列。0042如本文中所用，术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。如本文中所用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异地结合抗原形成复合体的任一天然存在的、酶促获得的、合成的或者基因工程多肽或糖蛋白。使用任意合适的标准技术如蛋白水解消化或涉及操作和表达编码抗体可变域和任选地恒定域的DNA的重组基因工程技术，抗体的抗原结合片段可以来源于例如完整抗体分子。该DNA是已知的和/或从例如商业来源、DNA文库包括例如，噬菌体抗体库容易得到的，或者可以是合成的。可以对DNA测序并使用化学方法或者通过使用例如分子生物学技术操作DNA，以使一个或多个。
30、可变域和/或恒定域排列成合适的构型，或者引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添说明书CN104244978A6/12页8加或缺失氨基酸等。0043抗原结合片段的非限制性实例包括IFAB片段；IIFAB2片段；IIIFD片段；IVFV片段；V单链FVSCFV分子；VIDAB片段；和VII由模拟抗体的高变区例如，分离的互补决定区CDR如CDR3肽的氨基酸残基组成的最小识别单位或者受限的FR3CDR3FR4肽。其他基因工程分子，例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、缺失结构域的抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双抗体、三抗体、四抗体、小型抗体、纳米抗体例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等、小型模块化免疫药。
31、物SMIP和鲨鱼可变IGNAR结构域也包含于如本文中所用的表述“抗原结合片段”中。0044抗体的抗原结合片段通常包含至少一个可变域。可变域可以是任意大小或任意的氨基酸组成，并且通常包含至少一个CDR，其与一个或多个构架序列邻近或者与一个或多个构架序列处在一个框架中。在具有VH结构域及VL结构域的抗原结合片段中，相对于彼此，VH和VL结构域可以位于任意合适的排列中。例如，可变区可以是二聚的，并含有VHVH,VHVL或VLVL二聚体。备选地，抗体的抗原结合片段可以含有单体VH或VL结构域。0045在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定域共价连接的至少一个可变域。可以在本发明抗体。
32、的抗原结合片段中发现的可变域和恒定域的非限制性示例性构型包括IVHCH1；IIVHCH2；IIIVHCH3；IVVHCH1CH2；VVHCH1CH2CH3；VIVHCH2CH3；VIIVHCL；VIIIVLCH1；IXVLCH2；XVLCH3；XIVLCH1CH2；XIIVLCH1CH2CH3；XIIIVLCH2CH3；和XIVVLCL。在可变域和恒定域的任意构型，包括上述任意示例性构型中，可变域和恒定域可以是相互直接连接或者可以是通过完整的或部分的铰链区或连接体区连接。铰链区由至少两个例如，5个、10个、15个、20个、40个、60个或更多个氨基酸组成，所述氨基酸导致单个多肽分子中相邻可变域。
33、和/或恒定域之间的弹性或半弹性连接。此外，本发明抗体的抗原结合片段可以包含上述任意可变域和恒定域构型的同型二聚体或异型二聚体或者其他多聚体，其通过上述任意可变域和恒定域构型彼此非共价结合和/或与一个或多个单体VH和VL结构域非共价结合例如，通过二硫键形成。0046如同完整抗体分子，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性的例如，双特异性。抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变域，其中每一可变域能特异地结合单独的抗原或者同一抗原上的不同表位。使用本领域可得到的常规技术，可将任意多特异性抗体形式，包括本文中所公开的示例性双特异性抗体形式适用于本发明抗体的抗原结合片段的背景中。0047如本。
34、文中所用，术语“人抗体”意在包括具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可以例如在CDR且特别地CDR3中包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基例如，通过体外随机诱变或位点特异性诱变或者通过体细胞突变引入突变。然而，如本文中所用的术语“人抗体”并不意图包含这样的抗体，其中已经将来源于另一哺乳动物物种例如小鼠的种系的CDR序列移植在人构架序列上。0048如本文中所用，术语“重组人抗体”意在包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的全部人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体进一步描述于下文、分离自重组的、组合的人抗体文库的抗体进一步描述于下文、分离。
35、自针对人免疫球蛋白基因转基因的动物例如小鼠的抗体参见例如，TAYLOR等,NUCLACIDS说明书CN104244978A7/12页9RES20628762951992或者通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接成其他DNA序列的任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，将此类重组人抗体进行体外诱变或者，当使用针对人IG序列转基因的动物时，进行体内体细胞诱变，因此该重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然来源于并且与人种系VH和VL序列相关，但并非天然存在于体内的人抗体种系库中。0049人抗体可以以与。
36、铰链异质性相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含大约150160KDA的稳定四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键结合。在第二种形式中，二聚体并不通过链间二硫键连接，而是形成约7580KDA的分子，其由共价偶联的轻链和重链半抗体组成。这些形式非常难分离，甚至是在亲和纯化后也难分离。0050在多种完整IGG同种型中第二种形式出现的频率归因于但不局限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IGG4铰链的铰链区中单个氨基酸取代可以将第二种形式的出现ANGAL等1993MOLECULARIMMUNOLOGY30105显著地降低至使用人IGG1铰链通常观察到的水平。本发明包括在铰链区，期。
37、望地在CH2或CH3区中具有一个或多个突变的抗体，以例如在生产中改善期望的抗体形式的产率。0051如本文中所用，“分离的抗体”意为从其天然环境的至少一个组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，从抗体天然存在或者天然产生的器官或组织或者细胞的至少一个组分中分离或回收的抗体是用于本发明目的的“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是已经进行了至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上是没有细胞物质和/或化学物质的抗体。0052药物组合物和施用方法0053本发明包括将TTSP抑制剂例如抗TMPRSS2抗体施用于受试者的方法，其中TTSP抑制剂包含于药。
38、物组合物中。本发明药物组合物与合适的载体、赋形剂以及提供合适的转移、递送、耐受等的其他试剂一起配制。许多合适的制剂可见于全部药剂师的已知的处方集REMINGTONSPHARMACEUTICALSCIENCES,MACKPUBLISHINGCOMPANY,EASTON,PA。这些制剂包括，例如粉剂、糊剂、软膏、凝胶剂、蜡、油剂、脂质、含小囊泡的脂质阳离子或阴离子如LIPOFECTINTM、DNA缀合物、无水的吸附性糊剂、水包油和油包水乳剂、乳剂碳蜡多种分子量的聚乙二醇、半固体凝胶以及含碳蜡的半固体混合物。还参见POWELL等人，“COMPENDIUMOFEXCIPIENTSFORPARENTER。
39、ALFORMULATIONS“PDA1998JPHARMSCITECHNOL52238311。0054已知多种递送系统，并可以将其用于施用本发明药物组合物，例如脂质体中的包囊、微粒、微胶囊、能表达突变病毒的重组细胞、受体介导的内吞作用参见例如，WU等,1987,JBIOLCHEM26244294432。施用的方法包括但不限于，真皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和经口途径。可以通过任何方便的途径，例如通过输注或弹丸注射、通过上皮层或皮肤粘膜层例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等吸收来施用组合物，并且可以与其他生物学活性试剂一起施用。0055使用标准的针头和注射器，可以皮下或静脉内递送本发。
40、明药物组合物。此外，关于皮下递送，已经将笔式递送装置PENDELIVERYDEVICE应用于递送本发明药物组合物。该笔式递送装置是可重复使用或者一次性的。可重复使用的笔式递送装置通常使用含药物组说明书CN104244978A8/12页10合物的可替换药筒。一旦施用了药筒内的全部药物组合物并且药筒已空，那么可以立即丢弃空药筒，并用含药物组合物的新药筒替换。然后可以重复使用笔式递送装置。在一次性的笔式递送装置中，没有可替换的药筒。相反，在一次性的笔式递送装置中，已经用药物组合物预装满了装置内的储存器。一旦储存器中没有了药物组合物，那么可以丢弃整个装置。0056在某些情况下，可以在控释系统中递送药物。
41、组合物。在一个实施方案中，可以使用泵参见LANGER,SUPRA；SEFTON,1987,CRCCRITREFBIOMEDENG14201。在另一个实施方案中，可以使用聚合物质；参见，MEDICALAPPLICATIONSOFCONTROLLEDRELEASE,LANGERANDWISEEDS,1974,CRCPRES,BOCARATON,FLORIDA。又在另一个实施方案中，可将控释系统放置在组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分参见例如，GOODSON,1984,INMEDICALAPPLICATIONSOFCONTROLLEDRELEASE,SUPRA,VOL2,PP115138。。
42、在LANGER,1990,SCIENCE24915271533的综述中讨论了其他控释系统。0057可注射的制剂可以包含用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、点滴注射等的剂量形式。可以通过已知的方法制备这些可注射的制剂。例如，可以例如通过在常规地用于注射的无菌的水介质或者油性介质中溶解、悬浮或乳化上述抗体或其盐，来制备可注射的制剂。对于用于注射的水介质，可以是例如生理盐水、含葡萄糖和其他辅助剂AUXILIARYAGENT的等渗溶液等，可以将其与合适的增溶剂如醇例如，乙醇、多元醇例如丙二醇、聚乙二醇、非离子表面活性剂例如，聚山梨酯80、HCO50氢化蓖麻油的聚氧乙烯50MOL加合物等组合使用。对于油性。
43、介质，可以使用例如芝麻油、大豆油等，可以将其与增溶剂如苯甲酸苄酯、苯甲醇等组合使用。因此，将制备的注射剂优选地装入合适的安瓿瓶中。0058有利地，将上述经口或肠胃外使用的药物组合物制备成单位剂量的剂量形式，所述单位剂量与一次剂量的活性成分相匹配。此类单位剂量的剂量形式包括例如，药片、药丸、胶囊、注射剂针剂、栓剂等。0059剂量0060根据本发明方法，施用给受试者的TTSP抑制剂例如，抗TMPRSS2抗体的量通常是治疗有效量。如本文中所用，短语“治疗有效量”意为TTSP抑制剂的剂量，其导致流感病毒感染的一个或多个症状或生物学结果可检测的改善，这正如该表述在本文中定义的那样。本领域普通技术人员应当。
44、理解，可以将多种动物模型用于证实特定量的候选TTSP抑制剂是否是治疗有效量。TTSP抑制剂的“治疗有效量”还包括这样的TTSP抑制剂例如，抗TMPRSS2抗体的量，相对于在相同的或基本上相同的实验条件下测试的非抑制性对照分子，所述量能使TTSP的蛋白水解活性例如，将HA0切割成HA1和HA2亚基的能力降低至少25。0061在抗TMPRSS2抗体的情况下，治疗有效量可以是以下量的抗TMPRSS2抗体约005MG至约600MG，例如，约005MG、约01MG、约10MG、约15MG、约20MG、约10MG、约20MG、约30MG、约40MG、约50MG、约60MG、约70MG、约80MG、约90M。
45、G、约100MG、约110MG、约120MG、约130MG、约140MG、约150MG、约160MG、约170MG、约180MG、约190MG、约200MG、约210MG、约220MG、约230MG、约240MG、约250MG、约260MG、约270MG、约280MG、约290MG、约300MG、约310MG、约320MG、约330MG、约340MG、约350MG、约360MG、约370MG、约380MG、约390MG、约400MG、约410MG、约420MG、约430MG、约440MG、约450MG、约460MG、约470MG、约说明书CN104244978A109/12页11480MG、约。
46、490MG、约500MG、约510MG、约520MG、约530MG、约540MG、约550MG、约560MG、约570MG、约580MG、约590MG或约600MG。0062各个剂量中含有的抗TMPRSS2抗体的量可以以每千克患者体重的抗体的毫克数即MG/KG的形式表示。例如，可以以每千克患者体重00001至约10MG的剂量，将抗TMPRSS2抗体施用给患者。0063组合治疗0064根据某些实施方案，本发明方法可以包括将包含TTSP抑制剂例如，抗TMPRSS2抗体的药物组合物与第二治疗剂组合施用给受试者。术语“与第二治疗剂组合”意为在将包含TTSP抑制剂的药物组合物施用于受试者之前例如，之前约。
47、1至72小时、之后例如，之后约1至72小时或同时例如，约1小时内，将第二治疗剂施用于受试者。0065第二治疗剂本身可以是用于治疗或预防流感病毒感染的任意治疗剂。可以与包含TTSP抑制剂的药物组合物组合施用的第二治疗剂的非限制性实例包括，例如金刚烷胺、金刚乙胺、奥司他韦、扎那米韦、抑肽酶、亮肽素、阳离子类固醇抗菌剂参见例如，US2007/0191322、流感疫苗例如，灭活的、活的、减毒的全病毒或亚单位疫苗或者针对流感病毒的抗体例如，抗血凝素抗体。0066施用方案0067根据本发明的某些实施方案，可以在确定的时程中将多个剂量的包含TTSP抑制剂例如，抗TMPRSS2抗体的药物组合物施用于受试者。根。
48、据本发明该方面的方法包括对受试者顺次施用多个剂量的TTSP抑制剂。如本文中所用，“顺次施用”意为在不同的时间点，例如在由预定间隔例如，小时、天、周或月分开的不同日期，将每一剂量的TTSP抑制剂施用给受试者。本发明包括这样的方法，其包括给患者顺次施用单一初始剂量的TTSP抑制剂，然后施用一个或多个第二剂量的TTSP抑制剂，任选地然后施用一个或多个第三剂量的TTSP抑制剂。0068术语“初始剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”指施用TTSP抑制剂的暂时顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量也称为“基线剂量”；“第二剂量”是初始剂量后施用的剂量；而“第三剂量”是在第二剂量之后施用的剂量。。
49、初始、第二和第三剂量可以含有相同量的TTSP抑制剂，但通常在施用的频率方面相互区别。然而，在某些实施方案中，在治疗期间，在初始剂量、第二剂量和/或第三剂量中含有的TTSP抑制剂的量可以相互不同例如，根据需要上调或下调。0069在本发明的一个示例性实施方案中，在立即的在前剂量之后1至30例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多天施用第二和/或第三剂量。如本文中所用，术语“立即的在前剂量”意为在多个施用的顺序中，施用于患者的TTSP抑制剂的剂量恰好在顺序中的下一计量的施用之前，并且没有间隔剂量。0070根据本发明该方面的方法可以包括给患者施用任意数量的第二和/或第三剂量的TTSP抑制剂。例如，在某些实施方案中，仅将单个第二剂量施用于患者。在其他实施方案中，将两个或两个以上例如，2、3、4、5、6、7、8或更多第二剂量施用于患者。同样地，在某些实施方案中，仅将单个第三剂量施用于患者。在其他实施方案中，将两个或两个以上例如，2、3、4、5、6、7、8或更多第三剂量施用于患者。说明书CN104244978A1110/12页120071在涉及多个第二剂量的实施方案中，可以以与其他第二剂量相同的。