一种银杏内酯类化合物制备方法 【技术领域】
本发明属于医药领域，具体涉及一种银杏内酯类化合物的制备方法。
技术背景
银杏内酯类化合物是银杏叶和银杏叶提取物(EGB761、CP2000、CP2005)中的主要活性成分，包括银杏内酯和白果内酯，其中银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、J、M和K单体，据文献报道银杏内酯是特异性血小板活化因子(PAF)受体阻断剂，均可剂量依赖性的消除PAF所引起的血小板聚集作用，从而防止血栓的形成，最新药理研究表明银杏内酯类化合物具有抗过敏、抗炎症、抗休克作用，对缺血损伤及器官移植的排斥反应也有保护作用。白果内酯对治疗神经系统疾病则疗效独特，为提高治疗效果降低毒副作用必须制备出高纯度地单体化合物。但银杏内酯类化合物结构较为相似，性质差异较小，使目前化学合成方法制备较为困难，成本过高，而从银杏叶中分离各单体也比较困难，只有少数研究者研究出了方法，专利号为CN1680392A的专利中公开了一种银杏内酯单体的分离纯化方法，它是采用超临界CO2精制纯化组合工艺，生产条件要求较高，相应成本较高。专利号为CN101134758A的专利公开了一种乙醇提取银杏叶后经过两次柱层析再加上多步组合试验，并以蒸发光散射检测器在线检测定位，然后通过结晶纯化步骤，最终分离到银杏内酯各成分。该方法虽然相对以往技术有了提高，整体提取效率提高了10％，但工业化依然较为困难，成本依然较高，难以产业化。专利号为CN101054384A的专利公开了一种内酯B的纯化方法，工艺中需要经过两次柱层析，而且其中银杏内酯B成分转移率还不到2％，成本比较高。专利号为CN101302222A的专利公开了银杏内酯B成分转移率达到15％，虽然有很大提高但依该工艺生产成本依然过高。综合来看目前得到银杏内酯类化合物提取率或者转移率都在15％以下，生产要求相对偏高，生产成本也相对较高，工业化生产困难。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种生产成本低、工艺简单且便于工业化生产的银杏内酯类化合物制备方法。
一种银杏内酯类化合物，其特征在于该银杏内酯类化合物是通过以下方法制备而成：取银杏叶或银杏叶提取物，在水溶液中提取，提取液过滤后采用有机溶剂萃取，得到的萃取液浓缩后添加200目-1000目硅胶混合干燥，并以200目-1000目硅胶作为柱层析填料，采用硅胶柱层析法收集富含银杏内酯类化合物的洗脱液，经结晶分别得到银杏内酯A、B、C、J、M、K原料；含量分别为50％-110％，精制为90％-110％。
上述制备方法中加入水量为银杏叶或银杏叶提取物质量的1至100倍，优选为5-20倍；
上述制备方法中水液PH值为1-10，优选为2-8，可加各类酸、碱性化合物及其盐如醋酸钠、柠檬酸、碳酸氢钠等配置而成；
上述制备方法中水液用量是指加入水量或提取后水浓缩液量；
上述制备方法中银杏叶或银杏叶提取物在水中提取时间5min-360min，优选为30-60min；
上述制备方法中所述的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、正戊烷、正己烷、环己烷中的一种或几种，用量为水液重量的1-10倍，优选为2-5倍；
上述制备方法中所用硅胶为常用硅胶，包括硅胶G或硅胶H。
上述制备方法中所用硅胶为200-1000目，优选为200目-400目，进一步优选为200-300目，硅胶用量与银杏叶或银杏叶提取物重量比为1∶0.1-1∶100，优选为1∶0.3-1∶10；
上述制备方法中所用硅胶柱洗脱溶剂为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、正戊烷、正己烷、环己烷、丙酮中的一种或几种；
本发明最终所得银杏内酯A、B、C、J、M、K含量可达到90％-110％。
本发明所制备银杏内酯A、B、C、J、M、K可作为药品、保健品中的原料。
本发明中采用200目-1000目的细硅胶具有以下优势：
目数大于200目硅胶分离效果较差，因而损失较多，导致成分转移率较低，本发明采用硅胶目数更小，颗粒更细，分离度更高，柱高为5cm时就具有很好的分离度，且损失小转移率高，本发明所得银杏内酯A、B、C、J、M、K转移率均达到50％以上，而目数小于1000目硅胶，洗脱时柱压过高，生产设备要求过高，生产效率较低。
【具体实施方式】
以下通过部分实施例，对本发明进一步说明，制备方法不限于实施例中所述：
实施例1
称取银杏叶10kg，加入水提取30min，过滤，得到提取液300L，用3000L石油醚萃取，将萃取液浓缩到适量，加入适量200-300目硅胶，混匀烘干，上硅胶柱，以石油醚∶乙酸乙酯为1∶1的比例配制流动相进行洗脱，收集含银杏内酯A 50L流出液，浓缩干得到11g干膏，加110ml 95％乙醇结晶，得到3.45g银杏内酯A，其中，银杏内酯A含量为92.9％。
实施例2
称取银杏叶10kg，加入柠檬酸调节水液pH为4.5，提取60min，过滤，得到提取液500L，用2000L正丁醇萃取，将萃取液浓缩到适量，加入适量300-400目硅胶，混匀烘干，上硅胶柱，以正丁醇∶丙酮为6∶4的比例配制流动相进行洗脱，收集含银杏内酯B 40L流出液，浓缩干得到9g干膏，加150ml95％乙醇结晶，得到2.28g银杏内酯B，其中，银杏内酯B含量为102.1％。
实施例3
称取银杏叶10kg，加入醋酸钠调节水液pH为8.5，提取40min，过滤，得到提取液200L，用2500L正己烷萃取，将萃取液浓缩到适量，加入适量200-300目硅胶，混匀烘干，上硅胶柱，以乙酸乙酯进行洗脱，收集含银杏内酯C 60L流出液，浓缩干得到14g干膏，加150ml95％乙醇结晶，得到2.92g银杏内酯C，其中，银杏内酯C含量为95.9％。
实施例4
称取银杏叶提取物(符合EGB761要求)1kg，加入pH为7.5碱水溶液，过滤，得到滤液10L，用20L乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩到适量，加入适量300-400目硅胶，混匀烘干，上硅胶柱，以正己烷∶石油醚为7∶3的比例配制流动相，收集45L流出液，浓缩至干得到6g干膏，加120ml95％乙醇结晶，得到2.37g银杏内酯J，其中，银杏内酯J含量为98.7％。
实施例5
称取银杏叶提取物(符合CP2000要求)1kg，加入pH为3.5酸水溶液，过滤，得到滤液15L，用40L环己烷萃取，将萃取液浓缩到适量，加入适量200-240目硅胶，混匀烘干，上硅胶柱，以石油醚∶乙酸乙酯为4∶6的比例配制流动相，收集40L流出液，浓缩至干得到5g干膏，加150ml95％甲醇结晶，得到2.14g银杏内酯M，其中，银杏内酯M含量为100.7％。
实施例6
称取银杏叶提取物(符合CP2005要求)1kg，加入水溶液，过滤，得到滤液10L，用30L正丁醇萃取，将萃取液浓缩到适量，加入适量240-280目硅胶，混匀烘干，上硅胶柱，以正丁醇∶乙酸乙酯为3∶7的比例配制流动相，收集40L流出液，浓缩至干得到4g干膏，加100ml95％甲醇结晶，得到2.04g银杏内酯K，其中，银杏内酯K含量为101.8％。
实施例7
称取银杏叶提取物(符合CP2000要求)1kg，加入柠檬酸调节水液pH为3.5，提取40min，过滤，得到提取液10L，用25L乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩到适量，加入适量200-300目硅胶，混匀烘干，上硅胶柱，以环己烷∶乙酸乙酯为9∶1-1∶9进行梯度洗脱，收集含银杏内酯A40L流出液，含银杏内酯B 40L流出液，含银杏内酯C 40L流出液，分别浓缩干得到14g，13g，14g干膏，分别加150ml95％乙醇结晶，得到2.92g银杏内酯A，2.58g银杏内酯B，1.58g银杏内酯C，其中，银杏内酯A含量为95.9％，银杏内酯B含量98.2％，银杏内酯C含量为93.1％。