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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410657665.X (22)申请日 2014.11.18 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 罗翼 地址 545000 广西壮族自治区柳州市鱼峰区 羊角山镇阳和村六队 10 号 (72)发明人 罗翼 (74)专利代理机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 11246 代理人 龚燮英 (54) 发明名称 一种野棉花的组培繁殖方法 (57) 摘要 本发明公开了一种野棉花的组培繁殖方法， 主要通过对初代培养、 增殖培养、 生根培养以及炼 苗移栽的步骤， 达到了增殖速度快、 遗传性状稳 定、 繁殖系数高、 试管苗生长。
2、旺盛的优良效果， 野 棉花的愈伤组织的萌动率达到了 96， 增殖倍数 达到了7.3倍， 生根率达到了98， 最终的成活率 达到了 96。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 (10)申请公布号 CN 104396749 A (43)申请公布日 2015.03.11 CN 104396749 A 1/1 页 2 1. 一种野棉花的组培繁殖方法， 其特征在于该方法包括下列步骤 ： (1) 外植体的选择 ： 于 4 7 月采取生长健壮的野棉花幼嫩茎段作外植体 ； (2) 材料处理方法 ： 先用软毛刷将野棉花表面的灰尘轻轻刷去。
3、， 用流水冲洗 1 分钟后用 紫外灯照射25min， 转入超净工作台， 在超净工作台上先用75的乙醇浸泡20秒， 然后再转 入滴加了 2 3 滴土温 80 的 0.1的升汞溶液中浸泡 1min， 再用无菌水冲洗 2 3 次， 最 后在无菌条件下切割材料， 茎段切割成 0.6 0.8cm 长 ； (3) 初代培养 ： 在无菌的条件下将步骤 (2) 得到的外植体接种在初代培养基上， 该培 养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 1.6mg/L 的 6-BA、 0.6mg/L 的 NAA、 2.2mg/L 的 GA， PH 6.4， 培养温度为28， 光照周期13h/d， 光强度为2000-220。
4、0lux， 待新芽长至2.0cm左右时， 即开始下一个阶段 ； (4) 增殖培养 ： 将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上， 该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 1.6mg/L 的 6-BA、 0.6mg/L 的 NAA、 2.2mg/L 的 GA， PH 6.4， 培养 温度为28， 光照周期13h/d， 光强度为2000-2200lux， 待新芽长至2.0cm时， 即开始下一个 阶段 ； (5) 生根培养 ： 将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上， 该培养基是在 MS 常规培养基中添加了 2.6mg/L 的 IBA、 0.7mg/L 的 NAA， 1.8mg/L 。
5、的 KT， PH 6.6， 培养温度为 22， 光照周期 11h/d， 光强度为 1800lux， 待新苗长至 2.0cm 时， 即开始下一个阶段 ； (6) 炼苗移栽 ： 先将培养瓶移至温室， 自然条件下炼苗 7d， 然后解开封口膜， 炼苗 3d， 炼苗期间适当遮光， 使光照强度为自然光的 65， 炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培 养基， 移栽到经消毒的重量比砻糠灰沙子 ： 蛭石 2 1 ： 1 的混合基质中， 温度控制在 25， 前 5d 湿度控制在 80左右， 以后逐渐降低湿度， 直至将移栽苗置于自然条件下。 权 利 要 求 书 CN 104396749 A 2 1/2 页 3 一种野。
6、棉花的组培繁殖方法 技术领域 0001 本发明涉及的是一种适用于野棉花的组培繁殖方法。 背景技术 0002 野棉花 ( 学名 ： Anemone vitifolia Buch.-Ham.) 是草本植物， 植株高 60-100 厘 米。根状茎斜， 木质， 叶片心状卵形或心状宽卵形。花葶粗壮， 聚伞花序长 20-60 厘米， 苞片 3， 形状似基生叶， 萼片 5， 白色或带粉红色， 倒卵形， 花丝丝形 ； 心皮约 400， 聚合果球形， 瘦 果有细柄。7 月至 10 月开花。生山地草坡、 沟边或疏林中。分布于中国、 缅甸、 不丹、 锡金、 尼泊尔和印度。 0003 目前， 利用组培技术繁育野棉花的。
7、技术尚未有人研究， 组织培养体系尚未建立， 优 良品种的推广普及尚未完成， 苗木供求矛盾日益加剧， 严重影响了野棉花的园林应用和推 广。 发明内容 0004 本发明针对现有的不足提供了一种野棉花的组培繁殖方法。 0005 本发明通过以下方法实现上述目的。 0006 一种野棉花的组培繁殖方法， 包括下列步骤 ： 0007 (1) 外植体的选择 ： 于 4 7 月采取生长健壮的野棉花幼嫩茎段作外植体 ； 0008 (2) 材料处理方法 ： 先用软毛刷将野棉花表面的灰尘轻轻刷去， 用流水冲洗 1 分钟 后用紫外灯照射25min， 转入超净工作台， 在超净工作台上先用75的乙醇浸泡20秒， 然后 再转。
8、入滴加了23滴土温80的0.1的升汞溶液中浸泡1min， 再用无菌水冲洗23次， 最后在无菌条件下切割材料， 茎段切割成 0.6 0.8cm 长 ； 0009 (3) 初代培养 ： 在无菌的条件下将步骤 (2) 得到的外植体接种在初代培养基上， 该 培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 1.6mg/L 的 6-BA、 0.6mg/L 的 NAA、 2.2mg/L 的 GA， PH 6.4， 培养温度为28， 光照周期13h/d， 光强度为2000-2200lux， 待新芽长至2.0cm左右 时， 即开始下一个阶段 ； 0010 (4) 增殖培养 ： 将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培。
9、养基上， 该培养基是 在 1/2MS 常规培养基中添加了 1.6mg/L 的 6-BA、 0.6mg/L 的 NAA、 2.2mg/L 的 GA， PH 6.4， 培 养温度为28， 光照周期13h/d， 光强度为2000-2200lux， 待新芽长至2.0cm时， 即开始下一 个阶段 ； 0011 (5) 生根培养 ： 将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上， 该培养基是 在 MS 常规培养基中添加了 2.6mg/L 的 IBA、 0.7mg/L 的 NAA， 1.8mg/L 的 KT， PH 6.6， 培养温 度为 22， 光照周期 11h/d， 光强度为 1800lux， 待新苗长。
10、至 2.0cm 时， 即开始下一个阶段 ； 0012 (6) 炼苗移栽 ： 先将培养瓶移至温室， 自然条件下炼苗 7d， 然后解开封口膜， 炼苗 3d， 炼苗期间适当遮光， 使光照强度为自然光的 65， 炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的 培养基， 移栽到经消毒的重量比砻糠灰沙子 ： 蛭石 2 1 ： 1 的混合基质中， 温度控制在 说 明 书 CN 104396749 A 3 2/2 页 4 25， 前 5d 湿度控制在 80左右， 以后逐渐降低湿度， 直至将移栽苗置于自然条件下。 0013 有益效果 ： 本发明对野棉花采用组织培养技术， 以嫩茎段为外植体， 经外植体灭 菌、 初代培养、 增殖。
11、培养、 生根培养和炼苗移栽步骤， 研究培养过程中试管苗的营养需求、 激 素对苗木生长分化的调控， 解决野棉花的微体快速增殖、 诱导生根的重要技术问题， 建立了 完善的野棉花组织培养体系， 达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目 的， 并且保存了母体的全部优良性状， 遗传性状稳定。 这种方法可在短期内形成大量优良试 管苗， 进行规模化、 工厂化生产。 具体实施方式 0014 下面结合实施例对本发明作进一步的说明， 下述实施例仅用于说明本发明， 对本 发明并没有限制。 0015 一种野棉花的组培繁殖方法， 其特征在于该方法包括下列步骤 ： 0016 (1) 外植体的选择 ： 于 4 。
12、7 月采取生长健壮的野棉花幼嫩茎段作外植体 ； 0017 (2) 材料处理方法 ： 先用软毛刷将野棉花表面的灰尘轻轻刷去， 用流水冲洗 1 分钟 后用紫外灯照射25min， 转入超净工作台， 在超净工作台上先用75的乙醇浸泡20秒， 然后 再转入滴加了 3 滴土温 80 的 0.1的升汞溶液中浸泡 1min， 再用无菌水冲洗 3 次， 最后在 无菌条件下切割材料， 茎段切割成 0.7cm 长 ； 0018 (3) 初代培养 ： 在无菌的条件下将步骤 (2) 得到的外植体接种在初代培养基上， 该 培养基是在1/2MS常规培养基中添加了1.6mg/L的6-BA、 0.6mg/L的NAA、 2.2m。
13、g/L的GA， PH 6.4， 培养温度为 28， 光照周期 13h/d， 光强度为 2100lux， 待新芽长至 2.0cm 左右时， 即开 始下一个阶段 ； 0019 (4) 增殖培养 ： 将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上， 该培养基是 在 1/2MS 常规培养基中添加了 1.6mg/L 的 6-BA、 0.6mg/L 的 NAA、 2.2mg/L 的 GA， PH 6.4， 培 养温度为 28， 光照周期 13h/d， 光强度为 2100lux， 待新芽长至 2.0cm 时， 即开始下一个阶 段 ； 0020 (5) 生根培养 ： 将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上。
14、， 该培养基是 在 MS 常规培养基中添加了 2.6mg/L 的 IBA、 0.7mg/L 的 NAA， 1.8mg/L 的 KT， PH 6.6， 培养温 度为 22， 光照周期 11h/d， 光强度为 1800lux， 待新苗长至 2.0cm 时， 即开始下一个阶段 ； 0021 (6) 炼苗移栽 ： 先将培养瓶移至温室， 自然条件下炼苗 7d， 然后解开封口膜， 炼苗 3d， 炼苗期间适当遮光， 使光照强度为自然光的 65， 炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的 培养基， 移栽到经消毒的重量比砻糠灰沙子 ： 蛭石 2 1 ： 1 的混合基质中， 温度控制在 25， 前 5d 湿度控制在 80左右， 以后逐渐降低湿度， 直至将移栽苗置于自然条件下。 0022 经过上述步骤的培养， 野棉花的愈伤组织的萌动率达到了 96， 增殖倍数达到了 7.3 倍， 生根率达到了 98， 最终的成活率达到了 96。 说 明 书 CN 104396749 A 4 。