鸟嘌呤衍生物 本发明涉及抗病毒化合物缬无环鸟苷盐酸盐的特殊结晶形式，并涉及制备这种结晶形式的方法。
化合物9-〔(2-羟乙氧基)甲基〕鸟嘌呤，现已知为无环鸟苷，具有有效的抗病毒活性，并广泛用于治疗和预防人病毒感染，特别是由疱疹病毒引起的感染(参见，例如，Schaeffer等，自然，272，583-585(1978)，UK专利No.1523865，US专利No.4199574)。但是口服时无环鸟苷不易从胃肠道吸收，这种低生物利用度意味着可能需要给与多次高剂量的口服药物以期实现并保持血浆中有效抗病毒水平，尤其是对于治疗不敏感病毒或感染。
无环鸟苷的L-缬氨酸酯，也就是L-缬氨酸(2-〔2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基酯(或者已知为缬无环鸟苷(Valaciclovir))显示出在保持无环鸟苷抗病毒性的同时具有较大提高的生物利用度。这种化合物的优选形式是其盐酸盐，或者已知为缬无环鸟苷盐酸盐。无环鸟苷的L-缬氨酸酯和其盐包括盐酸盐公开于美国专利No.4957924(特别参见实施例1B)，欧洲专利No.0308065(特别参见实施例IB)和Beauchamp等，抗病毒化学和化疗(AntiviralChemistry and Chemotherapy)，3(3)，157-164(1992)(特别参见第162页第1栏)。
我们现已发现缬无环鸟苷盐酸盐能以多种形式存在，而且我们已经发现一种无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐其出人意料地具有好的药学性质。它特别稳定并且几乎不吸湿。每批这种结晶形式能持续不断地制成高结晶形式纯度，即缬无环鸟苷盐酸盐其它非晶和结晶形式的比例是有限制的。而且这种无水结晶形式具有好的贮存性，且能容易配制成药物组合物如片剂和胶囊。
因此，本发明的第一方面提供了基本具有下面d间距图谱()的基本上无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐：10.20±0.08，8.10±0.06，7.27±0.06，6.08±0.05，5.83±0.03，5.37±0.02，5.23±0.02，4.89±0.02，4.42±0.02，4.06±0.02，3.71±0.02，3.39±0.02，3.32±0.02，2.91±0.02，2.77±0.02。
根据本发明，下文“无水结晶形式”指基本具有图1至3所示相同X-射线粉末衍射图谱，或者基本具有如上所定义的相同d间距图谱的结晶形式。
一种分子的任何特定结晶形式都具有其本身独特的d间距图谱，这种图谱能用Bragg等式从其粉末X-射线衍射图谱测定。
nλ＝2dsinθ
其中：n是衍射顺序(通常为1)；
λ是放射线波长；
d是d间距()；和
θ是放射线偏转角。
应该理解测定的d间距可根据粉末样品装载的程度而稍有变化。
本发明涉及纯化形式和与其它形式缬无环鸟苷盐酸盐如水合的结晶形式混合的无水结晶形式。例如在含有无水结晶缬无环鸟苷盐酸盐的任何批次中也可以有水合的结晶形式的该化合物。
缬无环鸟苷盐酸盐地任何药物批量中结晶形式纯度优选是至少70％ w/w，更优选至少80％ w/w，更优选至少90％ w/w，且最优选至少95％ w/w的无水结晶缬无环鸟苷盐酸盐(如上所定义的)。
在测定结晶形式纯度的另一种方法中，因为无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐基本上没有结合水，因此能通过每一批次中总的结合水含量来测定任何批次的化合物中水合形式的缬无环鸟苷盐酸盐的比例。
本发明的第二方面提供了结合水含量不多于3％重量(w/w)且主要具有图1至3的X-射线粉末衍射图谱，或者主要具有上文所示相同d间距图谱的缬无环鸟苷盐酸盐。
更优选的结合水含量不多于2％ w/w，更优选不多于1.5％ w/w，更优选不多于1％ w/w，且最优选不多于0.5％ w/w。
结合水含量通过本领域已知的Karl Fischer方法测定，该方法描述于1990年美国药典第1619～1621页，和欧洲药典，第二版(1992)，第二部，第十六分册，第3、5、6-1卷。
本发明另一方面提供了一种制备无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐的方法，包括用增溶剂处理缬无环鸟苷盐酸盐，将一定量缬无环鸟苷盐酸盐转化成所述具有本发明第一方面中上文所示d间距图谱的无水结晶形式，之后分离所述的无水结晶形式。
本发明也提供了一种制备具有上文所示d间距的无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐的方法，所述方法包括下面步骤：
a)在溶液中生成游离碱或盐形式的缬无环鸟苷；
b)将所述游离碱缬无环鸟苷或其盐(当不是盐酸盐的时候)转化为缬无环鸟苷盐酸盐；
c)从溶液中分离缬无环鸟苷盐酸盐，并可任选地去除背景(潮湿的，非溶剂化的)溶剂，得到基本干燥形式的缬无环鸟苷盐酸盐；
d)用增溶剂处理缬无环鸟苷盐酸盐，将一定量任选被干燥的来自步骤c)的缬无环鸟苷盐酸盐转化为无水结晶形式；和
e)分离所述的无水结晶形式。
可以用本领域已知的任何方法制备缬无环鸟苷，但优选通过上文提到的参考文献中描述的方法制备(美国专利no.4 957 924，欧洲专利no.0 308 065和Beauchamp等《(抗病毒化学和化疗》，303，157-164(1992)，美国专利no.4 957 924的公开内容在这里引入作为参考)。优选的是该方法自无环鸟苷开始，其合成描述于Schaeffer等，《自然》，272，583-585(1978)，UK专利no.1 523 865和美国专利no.4 199574。无环鸟苷首先酯化成其L-缬氨酸酯(缬无环鸟苷)，使用可任选被保护的L-缬氨酸例如苄氧羰基-L-缬氨酸(CBZ-L-缬氨酸)，在合适的溶剂中如在吡啶或DMF中，在偶联剂如N，N′-二环己基碳化二亚胺存在下，任选存在一种碱如4-二甲基氨基吡啶为催化剂下进行。保护基团可在酯化反应之后用已知方法去除(如通过在5％碳钯存在下用甲酸处理)。自由碱或另一种酸的盐(例如甲酸盐)形式的缬无环鸟苷可以用常规方法，例如通过用盐酸在一种溶剂中处理而转化成盐酸盐。
合成缬无环鸟苷盐酸盐一般导致在溶液中在反应混合物中生成该化合物，从混合物中可以分离并纯化出固体产物。然后缬无环鸟苷盐酸盐可任意地干燥，如通过溶于丙酮或淤浆液后干燥。很多因素影响结晶形式的固体产物，根据本发明调节分离的条件和/或顺序合成，以产生无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐。例如缬无环鸟苷盐酸盐的水合形式可以用合适的溶剂在合适的条件下被转化成无水结晶形式。
优选的合适溶剂是一种水溶性有机溶剂，它应该是足以增溶的，并以使部分增溶以促进转化和沉淀，例如从缬无环鸟苷盐酸盐的水合的结晶形式转化成所需的无水结晶形式的量使用。有利的是将溶剂通过真空干燥而完全去除。优选的有机溶剂是一种醇，有利的是一种含有1至4个碳原子的低级醇或一种低级酮(含有3至6个碳原子)。最优选的低级醇是乙醇或主要由乙醇组成的溶剂，例如变性酒精如SVM或工业甲基化醇的形式。最优选的还有含有水的低级酮，优选如具有大约6％至大约12％重量水含量的酮水溶液。优选的是将药物溶于低级酮成浆液。我们的早期研究还表明甲醇和异丙醇也应该是合适的低级醇。
根据本发明的一个特定的实施方案，缬无环鸟苷盐酸盐是在溶液中，例如在乙醇/水中生成，例如通过上文指出的一般方法获得，缬无环鸟苷盐酸盐通过蒸馏部分去除溶剂，接着例如通过加入丙酮而沉淀，而进行分离。缬无环鸟苷盐酸盐(如上面步骤c后被分离的)可以在此阶段通过过滤而以不稳定的溶剂化形式而被分离。然后任选干燥非所需形式的该产物，并如下所述处理成所需的无水结晶形式。
优选将第一次分离(如在上文步骤c中)后的湿润的缬无环鸟苷盐酸盐干燥；如通过溶于丙酮中成浆液后过滤，湿润的固体例如在大约30°至大约70℃下干燥，得到基本上干燥的缬无环鸟苷盐酸盐。在此时，所得到的缬无环鸟苷盐酸盐可以含有高比例的二水合形式，其理论结合水含量大约为9.8％。
根据生成无水结晶缬无环鸟苷盐酸盐的方法，基本上干燥的缬无环鸟苷盐酸盐(如上文所得到的)与一定量低级醇如乙醇或变性酒精优选以大约15％至40％ w/w，更优选大约17％至30％ w/w的量混合。之后该混合物例如由大约50℃被加热至70℃，加热几小时。最后产物在真空下干燥去除残留溶剂，例如在大约50℃至70℃下干燥。
本发明也提供了无水结晶形式缬无环鸟苷盐酸盐(下文称为“活性成分”)在药物治疗，例如在治疗动物，例如哺乳动物如人的病毒性疾病中的用途。该化合物特别适用于治疗由各种DNA病毒引起的疾病，如疱疹感染，例如单纯性疱疹1和2，水痘带状疱疹，巨细胞病毒，EB病毒或人疱疹病毒-6(HHV-6)以及由乙肝引起的疾病。该活性化合物也用于治疗乳头瘤或疣病毒感染，并且还可以与其它治疗剂一起给药，例如与齐多夫定一起治疗病毒后相关感染，特别是HIV感染。
除用于人的药物治疗外，该活性化合物可以对其它动物给药以治疗病毒性疾病，例如用于对其它哺乳动物给药。
本发明还提供一种治疗动物，例如哺乳动物如人的病毒感染，特别是疱疹病毒性疾病的方法，包括给与动物有效抗病毒量的该活性化合物。
本发明也提供了该活性化合物在制备治疗病毒感染的药物中的用途。
该活性化合物可以通过适于要治疗症状的任何途径给药，但优选的给药途径是口服。但是，应该理解，优选的途径可以根据例如受药者的症状而不同。
在上述应用和说明的每种情况下，所需活性成分(如上文所定义的)的量将取决于几种因素，包括要治疗症状的严重程度，受药者的个异性，并且归根到底要根据现场的医生或兽医自行处理的能力。但是一般情况下，对于每一种应用和情况下，合适的有效剂量将在每天每千克受药者体重1至150mg的范围内，优选在每天每千克体重5至120mg范围内(除另有说明，所有活性成分重量以游离碱缬无环鸟苷计算)。所需剂量优选在一天中以合适的时间间隔以一、二、三或四或更多亚剂量给药。这些亚剂量可以以单位剂量形式给药，例如每单位剂量形式含有大约50至2000mg，优选大约250、500、1000或2000mg活性成分。
给出下面剂量方案作为指导：
治疗单纯性疱疹病毒1型和2型感染：总日剂量大约为1或2g，一次500mg，一天两次，或者一天两次，一次1g给药，5至10天；抑制单纯性疱疹病毒1型和2型感染；总日剂量大约250mg至1g，用药大约1至10年(取决于患者)。
治疗水痘带状疱疹病毒感染(例如带状疱疹)：日剂量大约3g，一天三次，一次1g，用药7天；抑制巨细胞病毒感染：总日剂量大约8g，一天四次，一次2g给药。对于移植患者，在危险期给药该日剂量三至六个月；对于HIV阳性患者，按照通常指明的所述剂量给药例如两年或更长时间，以提高生活质量。
现在早期结果表明缬无环鸟苷可以以每日一次大约200mg至大约1000mg的剂量用药一段有效治疗期，用于有效抑制经常发生的生殖器疱疹。最可能的日剂量是250mg，500mg或1000mg。
尽管对于该活性成分可以单独给药，但优选其以一种药物制剂存在。该制剂含有上文定义的该活性成分，以及一种或几种其药学上可接受的赋形剂和任选的其它治疗成分。这些赋形剂一定是“可接受的”，与该制剂的其它成分是兼容的，且对其受药者无害。
这些制剂包括那些适于口服给药，并且可以合适地以单位剂量形式存在的制剂，所述单位剂量形式通过药学领域任何已知的方法制备。这些方法包括将该活性成分与提供一种或几种辅助成分的载体组合起来的步骤。一般情况下，该制剂通过均匀而完全地将该活性成分与液体载体或研细的固体载体或两者组合起来，之后，如果需要，将产品成型而制备。
适于口服给药的本发明制剂可以作为各含有预定量活性成分的个别单位存在，如胶囊、扁囊剂、颗粒囊剂或片剂(如吞服的，可溶散的或口嚼片剂)；作为粉末剂或颗粒剂；作为含水液体或无水液体的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂存在。该活性成分也可以作为巨丸剂，药糖剂或糊剂存在。
片剂可以在有或没有一种或几种辅助成分的情况下通过压制或模制而制备。压制的片剂可以通过在合适的机器中压制与任选一种粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、保鲜剂、表面活性剂或分散剂混合的自由流动状态如粉末或颗粒状态的活性成分而制备。模制片剂可以通过在合适的机器中将用惰性液体稀释剂湿润的粉末化的化合物的混合物成型而制备。片剂任选被包衣或刻痕，并且可以配制以提供其中活性成分的缓慢释放或控制释放。
优选的单位剂量制剂是含有日剂量或日单位亚剂量(如上文所详述的)或其合适部分活性成分的那些制剂。
应该理解除上面特别提到的成分外，本发明制剂可以根据所要求的制剂类型而含有本领域常用的其它试剂，例如适于口服给药的制剂可以含有调味剂或矫味剂。通过下面的实施例详细说明本发明：
实施例1A.2-〔(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-N-〔(苯氧基)羰基〕-L-缬氨酸酯
CBZ-L-缬氨酸(170g)溶解于二甲基甲酰胺(DMF)(750m1)中并冷却。加入N，N-二环己基-碳化二亚胺(DCC)(156.7g)的DMF(266ml)的冷溶液，并在冷却下搅拌。在保持冷却的同时一次加入无环鸟苷(10.1g)后加入4-(二甲基氨基吡啶)(9.4g)。混合物冷搅拌过夜，然后过滤去除白色沉淀副产物。真空蒸馏减少滤液体积，并用水(663ml)处理浓缩液后加热至70℃。将所得的悬浮液冷却至20℃，过滤，并用水洗涤得到的固体。
此后，湿润的粗产物通过重结晶从变性酒精(1.2升)中纯化出来，得湿润的白色结晶固体标题化合物(281.5g)。B.2-〔(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-L-缬氨酸酯盐酸盐
2-〔(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-N-〔(苄氧基)羰基〕-L-缬氨酸酯(175g)加入到变性酒精水溶液(335ml/795ml)中，并加热至回流。然后将溶液冷却至40℃。所得悬浮液用5％碳钯催化剂(35g湿重，50％重量的水)处理后在1小时的过程中加入甲酸(30.6ml，90％ w/w)。将反应混合物又搅拌了1小时后加入第二批甲酸(19.5ml)，过滤混合物，去除催化剂。滤饼用变性酒精洗涤，合并的滤液用浓盐酸(33.7ml)处理，所得混合物经真空蒸馏浓缩。
然后经15分钟加入丙酮(1295ml)，在滤出产物之前将悬浮液搅拌1小时。然后向所得固体中加入丙酮(大约530ml)成淤状物，再过滤，并在60℃真空下干燥，得标题化合物(1123g：81.6％)。
该物质的15g样品与变性酒精(大约7ml)混合至潮湿，在60℃下搅拌加热过夜，这一步骤在一封闭的烧瓶中进行，以避免醇的流失，并保持混合物的湿润。然后混合物在60℃真空中干燥，得所期形态形式的产物。物理数据：费歇尔值：0.9％ w/w水。
实施例1B产物的X-射线粉末衍射图谱示于附图的图1。
d间距和进一步的X-射线衍射数据见表1。表1峰号 角度 峰值 d间距图谱 d的误差 I/Imax
(度) (计数) () (±) (％)1 3.56 680 24.8 0.5 242 8.62 1151 10.25 0.08 393 9.42 87 9.38 0.07 34 10.86 1438 8.14 0.06 495 12.10 835 7.31 0.06 286 13.22 198 6.69 0.05 67 14.49 2172 6.11 0.05 758 15.12 455 5.85 0.03 159 15.90 352 5.57 0.02 1210 16.45 1969 5.38 0.02 6811 16.90 744 5.24 0.02 2512 17.33 119 5.11 0.02 413 18.12 1013 4.89 0.02 3514 22.71 1429 4.43 0.02 4915 20.55 256 4.32 0.02 816 21.21 370 4.19 0.02 1217 21.83 753 4.07 0.02 2618 22.71 95 3.91 0.02 319 23.95 2893 3.71 0.02 10020 25.10 171 3.54 0.02 521 26.21 1784 3.40 0.02 6122 26.89 428 3.31 0.02 1423 27.08 373 3.29 0.02 1224 28.02 158 3.18 0.02 525 28.27 161 3.15 0.02 526 28.91 391 3.09 0.02 1327 29.68 191 3.01 0.02 628 30.55 502 2.92 0.02 1729 31.34 110 2.85 0.02 3表1-续峰号 角度 峰值 d间距图谱 d的误差 I/Imax
(度) (计数) () (±) (％)30 31.58 98 2.83 0.02 331 32.13 597 2.78 0.02 2032 32.96 260 2.72 0.02 833 33.99 344 2.64 0.02 1134 34.38 374 2.61 0.02 1235 35.12 141 2.55 0.02 436 36.78 408 2.44 0.02 1437 38.71 101 2.32 0.02 3
I/Imax＝(峰高/最大峰高)×100
用来产生上面X-射线衍射数据的粉末样品用和制备用来产生表2X-射线衍射数据的粉末样品的相同方法制备(表2在下文中说明)，只是对于上述数据，用下面的制剂来制备该粉末样品。
样品通过在一塑料杯中用化学混合光谱研磨机(ChemplexSpectromill)用两个丙烯球将1g样品研磨5分钟而制备。然后将样品装回玻璃载片上，厚度2mm。
用Scintag PADV衍射仪，以每步0.02°且每步10秒计数的扫描模式，获得X-射线衍射扫描。在扫描过程中，持样器以每秒一圈旋转。其它条件如下所述。X-射线发生器： 45kv，40mA放射线： 铜Kα放射线固定的发散狭缝： 1mm入射散射狭缝： 2mm衍射散射狭缝： 0.5mm接收狭缝： 0.3mm晶体测角计半径： 235mm检测器： 带有石墨单色器的闪烁检测器
以峰尖的绝对数值记录峰强度。X-射线衍射图上的强度单位是数值/秒。绝对数值＝数值/秒×计数时间＝数值/秒×10秒。表中的峰强度已对背景和铜KαIIX-射线波长干扰进行了校正。
根据使用的具体的衍射仪和分析人员的样品制备技术的不同，d间距会有稍许变化。相对峰强度也会有更大的变化。对一种药物确切的结晶形式的鉴定应该主要以观察的d间距为基础，相对峰强度有较小的重要性。为了鉴别缬无环鸟苷盐酸盐的无水结晶形式，15个最强衍射峰是合理的特征。这些峰出现在：10.25±0.08、8.14±0.06、7.31±0.06、6.11±0.05、5.85±0.03、5.38±0.02、5.24±0.02、4.89±0.02、4.43±0.02、4.07±0.02、3.71±0.02、3.40±0.02、3.31±0.02、2.92±0.02和2.78±0.02。。测定d间距中的误差随着衍射扫描角度的增大或d间距的减小而减小。对于一种合理校准的衍射仪和合理制备的样品，10.25峰的误差可能大约是±0.08，2.78峰的误差可能大约是±0.01。
3.56度一行中列出的第一个峰是由于缬无环鸟苷盐酸盐水合结晶态，而不是由于无水结晶态。
在另一个无水结晶缬无环鸟苷盐酸盐的实施例中，获得下面的d间距：10.20、8.10、7.27、6.68、6.08、5.83、5.56、5.37、5.23、5.10、4.89、4.42、4.31、4.18、4.06、3.91、3.71、3.64、3.54、3.39、3.35、3.32、3.28、3.22、3.18、3.14、3.08、3.00、2.97、2.91、2.85、2.77、2.70、2.63、2.60、2.55、2.44、2.42、2.37、2.32、15个最强特征峰是10.20±0.08、8.10±0.05、7.27±0.04、6.08±0.03、5.83±0.03、5.37±0.02、5.23±0.02、4.89±0.02、4.42±0.02、4.06±0.01、3.71±0.01、3.39±0.01、3.32±0.01、2.9±0.01和2.77±0.01。实施例2A.2-〔(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-N-〔(苄氧基)羰基〕-L-缬氨酸酯
将CBZ-L-缬氨酸(167g)溶解于二甲基甲酰胺(DMF)(750ml)中并冷却。加入N，N-二环己基碳化二亚胺(DCC)(153.5g)的DMF(266ml)的冷溶液后一次加入无环鸟苷(111.7g)。然后加入4-(二甲氨基)吡啶(9.4g)。并将混合物冷搅拌过夜，然后过滤去除白色沉淀副产物。如前所述减少滤液体积得标题化合物(215.3g)。B.2-〔(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-L-缬氨酸酯盐酸盐
将2-〔(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-N-〔(苄氧基)羰基〕-L-缬氨酸酯(200g)加到变性酒精水溶液(382ml/908ml)中，并加热至回流以溶解固体。所得溶液冷却至40℃。该悬浮液用5％碳钯催化剂和水(40g)的50％ w/w浆状物处理后历经1小时加入甲酸(96％ w/w，32.8ml)。将反应混合物再搅拌1小时后加入第二批甲酸(20.88ml)，过滤混合物以去除催化剂。滤液用浓盐酸(38.56ml)处理，所得混合物在真空下蒸馏浓缩。
之后，历时15分钟加入丙酮(1480ml)，并在滤出产物之前将悬浮液搅拌1小时。然后所得固体与丙酮(大约500ml)混合成淤状物，再次过滤，并在60℃下真空干燥，得标题化合物(137.75g：87.6％)。
该物质的10g样品与变性酒精(3.5ml)混合，在60℃加热几小时后真空去除溶剂，得到所需晶态形式的产物。结论：
获得无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐，基本上无其它形式的缬无环鸟苷盐酸盐(即无水结晶形式纯度高于大约90％ w/w)。物理数据：
实施例2(B)产物的X-射线粉末衍射图案见附图的图2和3，其中：图2是线性制图X-射线衍射图谱；图3是平方根制图X-射线衍射图谱。d间距和进一步的X-射线衍射数据见表2。
表2
峰号 角度 峰值 d间距图谱 I/Imax
(度) (计数) () (％)
1 3.62 2673 24.40 35
2 7.21 119 12.26 2
3 8.64 1910 10.22 25
4 9.43 180 9.37 2
5 10.86 2652 8.14 35
6 12.12 734 7.30 10
表2-续
峰号 角度 峰值 d间距图谱 I/Imax
(度) (计数) () (％)
7 13.24 615 6.68 8
8 13.77 106 6.42 1
9 14.50 2333 6.11 31
10 15.14 635 5.85 8
11 15.89 511 5.57 7
12 16.44 2652 5.39 35
13 16.90 1267 5.24 17
14 17.33 475 5.11 6
15 18.13 1648 4.89 22
16 20.05 2172 4.43 28
17 20.56 640 4.32 8
18 21.20 1096 4.19 14
19 21.78 2034 4.08 27
20 21.90 1384 4.06 18
21 22.66 729 3.92 10
22 23.94 7621 3.71 100
23 24.39 1624 3.65 21
24 25.11 967 3.54 13
25 25.86 2460 3.44 32
26 26.21 5127 3.40 67
27 26.82 1892 3.32 25
28 26.89 1927 3.31 25
29 27.19 1429 3.28 19
30 27.99 1156 3.18 15
31 28.35 1076 3.15 14
32 28.87 1722 3.09 23
33 28.94 1529 3.08 20
34 29.62 1274 3.01 17
35 30.56 1673 2.92 22
表2-续
峰号 角度 峰值 d间距图谱 I/Imax
(度) (计数) () (％)
36 31.30 999 2.86 13
37 32.25 2570 2.77 34
38 33.04 1376 2.71 18
39 34.00 1806 2.63 24
40 34.45 1225 2.60 16
41 35.13 1149 2.55 15
42 36.77 1600 2.44 21
43 38.01 576 2.37 8
44 38.76 729 2.32 10
45 39.52 524 2.28 7
46 40.70 751 2.22 10
47 41.28 870 2.19 11
48 41.88 686 2.16 9
49 42.47 718 2.13 9
50 43.40 548 2.08 7
51 44.53 729 2.03 10
实施例2B产物的衍射图谱产生于Phillips PW 1800自动X-射线粉末衍射仪，自2至45 2θ扫描，每步间隔0.02度，积分时间为每步4秒。发生器置位：40kv，45mA，Cuα1，2个波长：1.54060，1.54439；步骤规格，样品测试时间：0.020度，4.00秒，0.005度/秒；是否使用单色仪：是；发散狭缝：自动的(辐射的样品长度：10.0mm)，峰角度范围：2.000-45.000度，D间距范围：44.1372-2.01289；峰位判据：平位数据的顶部值；结晶峰宽度范围：0.00-2.00度；最小峰信号：0.75最大强度：7621 cts，1905.3 cps。如下制备粉末样品
将1g缬无环鸟苷盐酸盐样品转移到含有2个丙烯球ref26-253的Retsch 10ml聚苯乙烯容器ref31-762中。然后用Retsch MM2钻头研磨机设备以每五分钟100％研成粉末的速度研磨成非常细的粉末。将磨细的样品回载到Phillips PW 1811/10持样器中，该持样器已经在非常平滑的表面上倒转过来(例如由玻璃板或高抛光金属片提供光滑平面)。然后将粉末装回到持样器中，并且再加入填入粉末，直至持样器满。然后用Phillips PW 1811 00底板固定住持样器，然后在向上方向移动玻璃/金属板之前将全部装置倒转，得到与持样器表面持平的平滑的样品表面。
如上所述，缬无环鸟苷盐酸盐结晶形式可以通过它们的X-射线粉末衍射图谱来表征。图1至3给出作为线性制图(图1和2)和平方根制图(图3)的缬无环鸟苷盐酸盐无水结晶形式的衍射图谱。在每一种情况下，该衍射图谱显示对衍射角2θ的数值比(衍射的峰强度)。线性制图使容易定量分配峰强，而平方根制图使小峰减小，从而强调衍射图谱中的主峰。实施例3无水结晶缬无环鸟苷盐酸盐吸湿性和稳定性测定吸湿性：使用一联合微平衡系统来测量平衡水吸着曲线(Model MB300G，VTI Corp.)，称量大约20mg缬无环鸟苷盐酸盐，并使用下面的条件：干燥参数：温度：65℃；加热速度：10℃/分钟；平衡标准：5μg；样品间隔：5分钟吸着参数：温度：25℃；平衡标准：5μg；样品间隔：5分钟。数据采集间隔：2分钟。图4所示水吸着/解吸是等温线。等温线表明只吸收少量水。该吸收作用实际上是因为样品中存在水合的结晶形式，这与Karl Fischer滴定测得的0.9％ w/w水相符合。
少量该水合物的效果通过与用几乎100％无水结晶形式产生的图5的等温线相比较，能更清楚地看到。
X-射线粉末衍射：最初的粉末图谱和在40℃，室温/60 RH(相对湿度)，和40℃/75 RH的条件下贮存了4星期的物质的图谱之间没有变化：水百分含量：最初： 0.940℃2星期： 0.840℃4星期： 0.8室温/60％ RH，2星期： 1.0室温/60％ RH，4星期： 0.940℃/75％ RH，2星期： 1.140℃/75％ RH，4星期： 1.1四星期化学物质稳定性数据： 以无水为基础％ w/w
初始 40℃ 室温/60％RH 40℃/75％RHL-缬氨酸： ND(＜0.1％) ND ND ND缬氨酸2-羟乙酸酯盐酸盐： ND(＜0.1％) ND ND ND无环鸟苷： 0.9 0.9 0.9 0.9鸟嘌呤： ND(＜0.1％) ND ND ND缬无环鸟苷D异构体： 1.1 1.2* 1.1 1.2*缬无环鸟苷盐酸盐： 97.3 97.8 98.2 97.5ND＝未检测到，数据接近1.1％ w/w左右* 缬氨酸2-羟乙酯盐酸盐无明显增加；最初样品和四星期时间点样品 之间实际值相互差0.03％之内(在实验误差之内)。实施例4
在30℃/75％ RH(12个月)和40℃/75％ RH(6个月)对几乎100％无水结晶形式进行进一步的吸湿性和稳定性研究。
分别在30℃/75％ RH和40℃/75％ RH贮存了12个月和6个月的样品在含湿量(Karl Fischer)或结晶度(根据X-射线粉末衍射测量的)方面没有明显变化。使用联合微平衡系统，在相对湿度高至90％下在25℃的吸收不多于0.5％ w/w水。而且，在25℃和75％ RH下贮存了2.5个月的另一样品证实了联合微平衡系统测定的含湿量是在75％RH下0.3％湿度。
这些结果表明无水结晶形式的缬无环鸟苷盐酸盐是化学和物理稳定的。
这些特征给予该无水结晶形式好的制剂和贮存性质，有助于以高度可重复制备的方法，以高度结晶形式纯度批量获得。实施例5：片剂
使用无水结晶缬无环鸟苷如下制备下面的制剂。 实施例 5每一批(kg)成分 mg/片 w/w缬无环鸟苷盐酸盐* 615 65.74 5.289乳糖 205 21.91 1.763微晶纤维素(Avicel PH101)(粒内) 75 8.02 0.6450聚乙烯吡咯酮 k30 18 1.92 0.1548交联聚乙烯吡咯酮 (粒内) 18 1.92 0.1548胶体二氧化硅(Aerosil 200) 0.9 0.10 0.002598硬脂酸镁 3.6 0.38 0.03096总重量 935.5 100
* 50次轻敲(taps)后堆积密度0.45g/cc(无水结晶形式)实施例6：片剂
使用无水结晶缬无环鸟苷如下制备下面的制剂。 实施例 5 每一批(kg)成分 mg/片 w/w缬无环鸟苷盐酸盐* 576.5 82.3 0.9973交联聚乙烯吡咯酮 (粒内) 14.0 2.0 0.02422聚乙烯吡咯酮 (粒内) 14.0 3.1 0.03806交联聚乙烯吡咯酮 (粒外) 14.0 2.0 0.11200微晶纤维素(Avicel PH101)(粒外) 70.0 10.0 0.05600胶体二氧化硅(CAB-O-SIL M-5)(粒外) 2.0 0.3 0.00160硬脂酸镁(粒外) 4.0 0.6 0.00320总重量 702.5 100.0 1.13158*50次轻敲后堆积密度0.60g/cc(无水结晶形式)；Karl Fischer水含量＝0.4实施例5片剂的制备步骤1 用所示手筛筛选所示下面成分：30目：
缬无环鸟苷盐酸盐
乳糖
微晶纤维素
聚乙烯吡咯酮 K30
交联聚乙烯吡咯酮60目
硬脂酸镁
胶体二氧化硅(CSD)步骤2：然后在一1立方英尺V-型掺和机中将除聚乙烯吡咯酮外的来自步骤1的30目筛选成分混合10分钟。步骤3：然后将1.540kg SD3A醇(5％甲醇变性的乙醇)与0.6600kg纯化的水混合，手动搅拌下将0.1548kg筛过的聚乙烯吡咯酮溶解于0.6192kg混合的溶剂中。步骤4：然后通过一边混合一边加入溶解的聚乙烯吡咯酮，在1立方英尺的Little ford Lodige混合机中将来自步骤2的混合3的粉末制成颗粒。再加入1.315kg混合的溶剂，如下所示，混合物共经7分钟制成丸块。梨片式 7分钟 切碎机 6.5分钟步骤5：然后将来自步骤4的颗粒在流化床干燥器(Glatt GPCG5)中干燥，入口气温50℃，干燥至大约1.0～3.0％ L.O.D.任何可接受含湿量。步骤6：然后把来自步骤5的颗粒用装有30目筛的M型Fitz研磨机筛选，刀口向前，以中等速度操作。步骤7：向来自步骤6的颗粒中加入来自步骤1的筛选过的硬脂酸镁，并用步骤2的掺和机掺和5分钟。步骤8：称重润滑过的颗粒2.650kg(来自步骤7)，加入来自步骤1的筛选出的CSD，然后用手分散，并将混合物在步骤2的掺和机中掺和5分钟。在装有椭圆形加工装置的Manesty Beta压制机上将混合物压制成片，19.1mm×10.2mm，压制重量为大约935.5mg。实施例6片剂的制备步骤1：核成分用一20目手筛过筛后在合适大小的V-型掺合机中混合10分钟。步骤2：将来自步骤1的混合好的粉末然后通过一边混合一边加入水而在10升高剪切混合机(SP1-型)中制造颗粒。之后，加入大约11-14％水，以核成分w/w计，将混合物制成片剂，进行3至41/2分钟。步骤3：将来自步骤2的颗粒放在盘架干燥器(实施例5、6和7)或真空干燥器(实施例3和4)(SP1-型)中在50℃温度下干燥至大约1.0至2.0％ L.O.D.可接受的含湿量。步骤4：剩余的成分通过20目筛子过筛，并加入到步骤3的核成分中，然后该混合物用装有0.062″筛的Comil 197AS型过筛。步骤5：然后将混合物在合适大小V-型掺和机中掺和5分钟。步骤6：将来自步骤5的掺和3的颗粒在装有胶囊成型设备的ManestyBeta压片机上压片，18.25mm×7.14mm，压制重量大约700mg，压制力大约14.5至18kN。步骤7：然后所得片剂可任意地用标准方法如用白色浓缩物、甲基羟基丙基纤维素、二氧化钛、聚乙二醇和多乙氧基醚包衣。