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1、(10)申请公布号 CN 104106466 A (43)申请公布日 2014.10.22 CN 104106466 A (21)申请号 201410262451.2 (22)申请日 2014.06.12 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 南京工业大学大丰海洋产业研究院 地址 224100 江苏省盐城市大丰市大丰港经 济区江苏海洋产业研究院大楼 (72)发明人 张本厚 胡燕花 陈集双 朱笑扣 (74)专利代理机构 无锡互维知识产权代理有限 公司 32236 代理人 王爱伟 (54) 发明名称 一种植物组织培养中外植体消毒的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种植物组织培养中。
2、外植体消 毒的方法， 使用洗洁精和青霉素对材料预处理， 然 后再采用消毒剂对材料进行处理。该方法杀菌 容易、 杀菌效果好， 毒性小， 不易损伤材料， 绿色环 保。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 104106466 A CN 104106466 A 1/1 页 2 1. 一种植物组织培养中外植体消毒的方法， 其特征在于 ： 使用洗洁精和青霉素对材料 预处理， 然后再采用消毒剂对材料进行处理。 2. 根据权利要求 1 所述的植物组织培养中外植体消毒的方法，。
3、 其特征在于 ： 所述消毒 液为酒精和次氯酸钠溶液。 3. 根据权利要求 2 所述的植物组织培养中外植体消毒的方法， 其特征在于 ： 其具体包括如下步骤 ： 步骤一 ： 采用0.10.5的洗洁精溶液浸泡材料515min， 自来水冲洗2040min ； 步骤二 ： 采用含有 1 5青霉素的自来水浸泡 4 8min， 自来水冲洗 5 10min ； 步骤三 ： 对步骤一和步骤二预处理后的材料采用7080的酒精浸泡1030s， 无菌 水清洗 2 4 次 ； 步骤四 ： 采用 5 10次氯酸钠浸泡 5 20min， 无菌水清洗 4 7 次。 4. 根据权利要求 3 所述的植物组织培养中外植体消毒的方法。
4、， 其特征在于 ： 所述步骤 一中， 采用 0.3的洗洁精溶液浸泡材料 10min。 5. 根据权利要求 3 所述的植物组织培养中外植体消毒的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 一中， 采用自来水冲洗 30min。 6. 根据权利要求 3 所述的植物组织培养中外植体消毒的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 二中， 采用含有 3青霉素的自来水浸泡 6min， 自来水冲洗 7min。 7.根据权利要求3所述的植物组织培养中外植体消毒的方法， 其特征在于 ： 步骤三 ： 采 用 75的酒精浸泡材料 10s， 无菌水清洗 3 次。 8.根据权利要求3所述的植物组织培养中外植体消毒的方法， 其特征在于 ： 。
5、采用7次 氯酸钠浸泡 10min， 无菌水清洗 6 次。 权 利 要 求 书 CN 104106466 A 2 1/3 页 3 一种植物组织培养中外植体消毒的方法 技术领域 0001 本发明涉及植物组织培养技术领域， 尤其涉及一种植物组织培养中外植体消毒的 方法。 背景技术 0002 植物组织培养用的外植体大部分取自田间， 表面上附着大量的微生物， 这是组织 培养的一大障碍。因此在材料接种培养前必须要消毒处理， 消毒一方面要求把材料表面上 的各种微生物杀灭， 同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。 因此， 外植体 的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。 0003 现有的消毒方法。
6、， 消毒效果不好， 材料上的微生物不能最大限度的被杀死， 并且， 现有的消毒方法， 外植体易受到损害， 大大降低了植物组织培养的成活率。 发明内容 0004 本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施 例。 在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部 分、 说明书摘要和发明名称的目的模糊， 而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。 0005 鉴于上述和 / 或现有植物组织培养中外植体消毒方法中存在的问题， 提出了本发 明。 0006 因此， 本发明其中目的是提供一种植物组织培养中外植体消毒的方法， 该消毒方 法， 其消毒容易、 消毒效。
7、果好， 毒性小， 不易损伤材料， 绿色环保。 0007 为解决上述技术问题， 根据本发明的一个方面， 本发明提供了如下技术方案 ： 一种 植物组织培养中外植体消毒的方法， 使用洗洁精和青霉素对材料预处理， 然后再采用消毒 剂对材料进行处理。 0008 作为本发明一个优选的实施例， 所述消毒液为酒精和次氯酸钠溶液。 0009 作为本发明一个优选的实施例， 其具体包括如下步骤 ： 0010 步骤一 ： 采用 0.1 0.5的洗洁精溶液浸泡材料 5 15min， 自来水冲洗 20 40min ； 0011 步骤二 ： 采用含有15青霉素的自来水浸泡48min， 自来水冲洗510min ； 0012 。
8、步骤三 ： 对步骤一和步骤二预处理后的材料采用7080的酒精浸泡1030s， 无菌水清洗 2 4 次 ； 0013 步骤四 ： 采用 5 10次氯酸钠浸泡 5 20min， 无菌水清洗 4 7 次。 0014 作为本发明一个优选的实施例， 所述步骤一中， 采用 0.3的洗洁精溶液浸泡材料 10min。 0015 作为本发明一个优选的实施例， 所述步骤一中， 采用自来水冲洗 30min。 0016 作为本发明一个优选的实施例， 所述步骤二中， 采用含有 3青霉素的自来水浸泡 6min， 自来水冲洗 7min。 说 明 书 CN 104106466 A 3 2/3 页 4 0017 作为本发明一个。
9、优选的实施例， 步骤三 ： 采用 75的酒精浸泡材料 10s， 无菌水清 洗 3 次。 0018 作为本发明一个优选的实施例， 采用 7次氯酸钠浸泡 10min， 无菌水清洗 6 次。 0019 本发明提供了一种植物组织培养中外植体消毒的方法， 其杀菌容易、 杀菌效果好， 毒性小， 不易损伤材料， 绿色环保。 具体实施方式 0020 为使本发明的上述目的、 特征和优点能够更加明显易懂， 下面对本发明的具体实 施方式做详细的说明。 0021 在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明， 但是本发明还可以 采用其他不同于在此描述的其它方式来实施， 本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的 。
10、情况下做类似推广， 因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。 0022 本发明提供了一种植物组织培养中外植体消毒的方法， 使用洗洁精和青霉素对材 料预处理， 然后再采用消毒剂对材料进行处理。 0023 以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式， 借此对本发明如何应用技术手段 来解决技术问题， 并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。 0024 实施例 1 0025 将外植体材料切成小段或小块或片状或丝状， 然后按以下步骤进行消毒 ： 0026 步骤一 ： 采用 0.1的洗洁精溶液浸泡材料 15min， 自来水冲洗 20min ； 0027 步骤二 ： 采用含有 1青霉素的自来水浸泡 8。
11、min， 自来水冲洗 5min， 完成预处理 ； 0028 步骤三 ： 对步骤一和步骤二预处理后的材料采用 70的酒精浸泡 30s， 无菌水清 洗 2 次 ； 0029 步骤四 ： 采用 5次氯酸钠浸泡 20min， 无菌水清洗 4 次， 完成消毒。 0030 实施例 2 0031 将外植体材料切成小段或小块或片状或丝状， 然后按以下步骤进行消毒 ： 0032 步骤一 ： 采用 0.2的洗洁精溶液浸泡材料 15min， 自来水冲洗 40min ； 0033 步骤二 ： 采用含有 2青霉素的自来水浸泡 8min， 自来水冲洗 10min ； 0034 步骤三 ： 对步骤一和步骤二预处理后的材料采。
12、用 70的酒精浸泡 30s， 无菌水清 洗 4 次 ； 0035 步骤四 ： 采用 6次氯酸钠浸泡 20min， 无菌水清洗 7 次， 完成消毒。 0036 实施例 3 0037 将外植体材料切成小段或小块或片状或丝状， 然后按以下步骤进行消毒 ： 0038 步骤一 ： 采用 0.3的洗洁精溶液浸泡材料 6min， 自来水冲洗 30min ； 0039 步骤二 ： 采用含有 3青霉素的自来水浸泡 6min， 自来水冲洗 7min ； 0040 步骤三 ： 对步骤一和步骤二预处理后的材料采用 75的酒精浸泡 10s， 无菌水清 洗 3 次 ； 0041 步骤四 ： 采用 7次氯酸钠浸泡 10mi。
13、n， 无菌水清洗 6 次， 完成消毒。 0042 实施例 4 0043 将外植体材料切成小段或小块或片状或丝状， 然后按以下步骤进行消毒 ： 说 明 书 CN 104106466 A 4 3/3 页 5 0044 步骤一 ： 采用 0.5的洗洁精溶液浸泡材料 5min， 自来水冲洗 40min ； 0045 步骤二 ： 采用含有 5青霉素的自来水浸泡 4min， 自来水冲洗 10min ； 0046 步骤三 ： 对步骤一和步骤二预处理后的材料采用 80的酒精浸泡 10s， 无菌水清 洗 4 ； 0047 步骤四 ： 采用 10次氯酸钠浸泡 5min， 无菌水清洗 7 次， 完成消毒。 0048。
14、 灭菌效果 0049 选用本发明实施例14的消毒方法和传统的灭菌方法对外植体进行组织培养实 验， 其无菌率对比表见表 1 ： 0050 表 1 本发明的消毒方法和传统的杀菌方法对细菌和真菌的杀灭效果 0051 序号杀菌难易程度无菌率 ( ) 实施例 1易98 实施例 2易99 实施例 3最易100 实施例 4最易100 传统杀菌方法不易20.1 0052 需要说明的是， 本发明对外植体的种类和部位不做限制。 0053 由此可见， 本发明的植物组织培养中外植体消毒的方法， 其杀菌容易、 杀菌效果 好， 毒性小， 不易损伤材料， 绿色环保。 0054 应说明的是， 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制， 尽管参照较佳 实施例对本发明进行了详细说明， 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技术 方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的精神和范围， 其均应涵盖在本发 明的权利要求范围当中。 说 明 书 CN 104106466 A 5 。