包含乳球菌属菌株并且特别是在婴儿和儿童中减少过敏症状的营养组合物发明领域
本发明涉及益生菌，特别是乳球菌属菌株在制备用于减少暴露于变应
原时的过敏患者的过敏症状的营养组合物中的用途。
发明背景
变态反应是影响各年龄段患者的生活的最常见的健康问题。现今世界
卫生组织认定变态反应性疾病是流行病。在过去几十年中变态反应的流行
已经表现出增加。现代生活方式、特别是城市的生活方式与变态反应现象
的高度流行和更高的严重性相关。
由于已经表明“过敏表现型”或“特应性”的发展促进对其他变应原
的继发的致敏作用，儿童期、特别是幼童时期和特别是对于食物变应原的
变应性致敏是重要的并引起高度关注。因此，儿童期的变态反应能够是导
致今后生命中多种变态反应的过敏级联反应的第一步，通常将该过程称为
“特应性病程(The Atopic March)”。例如，在人类中已经证明在生命早期
具有持续的食物超敏反应的儿童在以后的儿童期中患过敏性鼻炎(花粉热)
或哮喘的风险显著增加(等人2008)。具有较轻微的食物超敏反应
的儿童患呼吸性变态反应的风险也增加，但在程度上比具有持续的食物超
敏反应的儿童更轻。因此，降低食物超敏反应的严重性对于延缓“特应性
病程”是至关重要的。
在此背景下，在儿童和婴儿期中处理过敏事件和预防变态反应是最重
要的。
在生命的最初几年中，婴儿的免疫系统一直活跃地发育。在该幼小的
患者中影响、预防、避免、处理、减少或调节变态反应能够影响其在今后
生命中短期和长期的变应性特征。
变态反应的预防能够在不同的水平上实现：
“一级预防”是阻止或减少患者对变应原致敏的风险的作用，其特征
在于没有变应原特异性IgE抗体或降低变应原特异性IgE抗体水平。阻止
或减少致敏将导致当暴露于同样的变应原时没有过敏症状或减少过敏症
状。通过调节患者对一种变应原或一组变应原过敏的方式(一级预防)，也
可以调节随后的变态反应。
“二级预防”是调节变态反应的症状的作用，即，已经对1种或若干种
变应原过敏的患者当再暴露于所述的变应原时变态反应的发生或强度。通
过调节过敏症状的发生或强度(二级预防)，使与变态反应有关的不适降至
最低。
考虑到变态反应预防的这些不同的概念，可以假设由于其内在的作用
机制，某些化合物可以在这些预防的特定水平之一或两者上单独发挥作用。
例如，某些化合物可以单独减少对特定变应原的过敏(一级预防)，而另外
的化合物可以单独仅对二级预防有效果并降低变态反应的严重性。其他的
化合物可以影响致敏和症状，因此其有效促进一级和二级预防。或者，对
变态反应的一种形式发挥减轻症状的有益作用的化合物，可以对由不同变
应原引起的不同变态反应起作用或者不起作用。
食物变应原是婴儿在其生命早期遭遇的第一变应原：通常，不只接受
母乳喂养的婴儿可能遇到牛乳蛋白质。乳蛋白质确实是婴儿食物过敏的最
常见的原因，随后是蛋类和小麦蛋白质。通常，婴儿和幼儿的食物过敏能
够通过皮肤症状(皮疹、湿疹等)和胃肠症状(腹部绞痛；疼痛、特别是腹部
疼痛；呕吐)来表现。当婴儿/幼儿暴露于新的食物(例如谷物、蔬菜、水果、
坚果或鱼)时，也能出现其他的致敏和变态反应事件。
呼吸系统变应原(所谓的“空气传播变应原”)是无处不在的。其可以是
季节性的(例如花粉)或常年的(房尘螨、蟑螂、宠物毛、霉菌和真菌)。它们
引发呼吸系统变态反应症状，其可以通过在儿童或者成人的鼻(流鼻水、瘙
痒、喷嚏、鼻塞)或眼睛症状(含泪眼、瘙痒、发红)来表现。
乳球菌(Lactococci)是常规的乳酪启动者的乳酸细菌。已经证明乳球菌
的特定菌株可以给予健康益处，且因此这些菌株可以在WHO的定义下被
认为是有益菌株。例如，抗变应性作用可以被归于乳球菌属(Lactococcus)
的特定菌株：Makoto Enomoto等人在GB2077101A(1981年12月16日出
版)中描述了抗变应性组合物，其包含“乳细菌属(lactobacterium)”，属于链
球菌属(Streptococcus)，这是乳球菌属以前的名称(即，乳链球菌
(Streptococcus lactis)现在称作乳乳球菌(Lactococcus lactis))。
此外还描述了益生菌的多种培养物或益生菌混合物在变应性免疫系统
中的作用：例如EP1858336(WO2006697949)，描述了可以减少由小麦粉
白蛋白和球蛋白引发的变态反应的风险的益生菌混合物。JP2006028050描
述了包含益生细菌例如乳杆菌属(Lactobacillus)和链球菌属的组合物的皮
肤变态反应抑制特性。
然而，仍然需要特异性地减少幼儿和婴儿人群中的变态反应和症状。
当考虑到在幼儿中经历的肠系统和免疫系统成熟，以及考虑到幼儿尤其是
断奶前后的幼儿暴露于众多新的变应原中时，这尤其重要。
婴儿和幼儿的特定的营养需求进一步使儿童期的食源性变态反应的问
题复杂化。热量摄入、热量密度、需要的营养素的种类、蛋白质含量和蛋
白质质量都是对于向婴儿和幼儿提供最合适的营养而言重要的因素。微量
营养素例如维生素和矿物质的存在也是重要的，特别是当由与目标患者的
年龄对应的具体推荐范围限定了其浓度的情况下。因此，对于幼儿和婴儿，
食物递送的基质本身是复杂的、但也是缺少变化的：例如，尽管有潜在的
变应性，通常婴儿仍需要奶源蛋白质的基质中的特定的蛋白质平衡。这种
多种营养素的存在能够增强食物变应原的作用。在这种复杂的基质中，不
能单独诱发过敏现象的低重要性的食物变应原能够在引发变态反应中变得
更强。类似地，在这种复杂的营养基质中，可以中和变应原或发挥变态反
应预防作用的化合物可观察到其作用降低或消失。特别地，在例如用于婴
儿或幼儿的营养组合物的复杂基质中，无法预见通常被认为具有变态反应
预防作用的化合物是否仍然有效和其有效程度。
需要减轻具有过敏史和/或处于过敏的婴儿和幼儿人群的食物过敏症
状。
需要提供全营养组合物，其不仅供给各种营养素、而且降低变态反应
的严重性。
需要提供营养组合物，其调节患有轻度到中度的变态反应的年幼患者
的变态反应，因为这些患者具有由其肠道和免疫系统的不完全成熟度所决
定的特定的需求。
也需要例如通过营养干预(例如将免疫系统的调节剂掺入到常规的营
养方案中)来调节不耐受严厉的药物分子的幼儿的变态反应。
需要提供在断奶时和断奶前后调节年幼患者的变态反应的营养组合
物，此时肠道经历实质性改变并且引入了新的固体食物，其潜在地包含新
的变应原性蛋白质，因此患者对食物变应原的致敏特别敏感。
需要提供帮助较好处理或减轻暴露于季节性(例如花粉)或常年的空气
传播变应原(例如房尘螨、蟑螂、宠物毛、霉菌和真菌)中的儿童和成人呼
吸系统变态反应(即空气变态反应)症状的营养组合物。
需要提供可以恢复变应性患者免疫系统平衡并因此在调节变态反应
(皮肤、食物、呼吸系统)的不同症状中有效的全营养组合物，尤其是对虚
弱的、免疫抑制的或老年的患者。
需要通过提供有效的组合物、或者可能通过减少暴露于完整变应原来
缓解变态反应的症状，即使组合物可能不直接降低对变应原的致敏作用。
需要这类组合物，其对变态反应的二级预防有积极作用、而又不必对
相同变态反应的一级预防有作用。
最终，需要最适合于年幼患者的组合物，其通过减少症状能够协助减
少“过敏表现型”，并因此能够在以后生命中降低对新的变应原的致敏。
需要减少特应性病程。
发明概述
在第一方面，本发明提供全营养组合物，其用于减少由具有由食物变
应原或其它变应原诱发的变态反应的患者、特别是年轻患者、小儿和婴儿
中特别是由食物所引起的变态反应的症状，特别在断奶时期有效。
在第二方面，本发明提供组合物，其显著地促进由食物变应原诱发的
变态反应的二级预防，任选地同时不影响针对相同变应原的一级预防。
在第三方面，本发明提供了包含益生菌，尤其是属于乳球菌属的益生
菌的组合物。
在本发明的另一方面，本发明的组合物在减轻儿童或成人对空气传播
变应原的变态反应症状中有效。
本发明还进一步提供了恢复过敏个体的免疫平衡，并因此能够对不同
变态反应类型有效的组合物。
本发明可以具有减少以后生活中的变态反应的特定益处。
附图说明
图1/表1：在与下述菌种共培养后的Th2-倾斜的(skewed)人PBMC的
细胞因子谱，所述菌种是由雀巢产品技术援助有限公司保藏的乳乳球菌
NCC 2287(SL131)，保藏号CNCM I-4154，乳乳球菌NCC 2180(SL60)
CNCM I-4199，或植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)NCC 1107(Lp8)
CNCM I-4227。人外周血单核细胞用IL-4和抗-CD40抗体进行Th2-倾斜3
天，然后加入细菌菌株。在第5天收集上清液，通过ELISA测定细胞因子。
图2/表2：在与乳乳球菌NCC 2287(SL131)共培养后的Th2-倾斜的人
PBMC的mRNA谱。人外周血单核细胞用IL-4和抗-CD40抗体进行Th2-
倾斜3天，然后加入乳乳球菌NCC 2287(SL131)。细胞在此后10小时和
24小时收集，用qRT-PCR测定mRNA表达水平。
图3：OVA食物过敏小鼠模型的图解描述。
图4：在致敏阶段(一级)期间或在变应原激发之前最后一周(二级)期间
接受了5x108CFU/ml的乳乳球菌NCC 2287(SL131)或植物乳杆菌NCC
1107(Lp8)的小鼠的食物过敏的症状减少。结果为两个独立的实验。
图5：在激发后4小时的血清中的小鼠肥大细胞蛋白酶1(MMCP-1)
的中位水平。
图6/表3：离体的再刺激的肠系膜LN淋巴细胞和脾细胞的细胞因子
产生。
图7/表4：在激发后4小时分离的回肠的基因表达水平。
图8：来自草花粉过敏的个体的外周血单核细胞(PBMC)在培养基中或
在草变应原花粉浸出物(ALK-Abello6grass)存在下的细胞因子产
生。在培养两天后，以107CFU/ml加入NCC 2287(SL131)。继续PBMC
培养3天，达到总培养时间为5天。
图9：来自草花粉过敏或者不过敏的个体的全血细胞在培养基中含有
或不含107CFU/ml的NCC 2287(SL131)下培养5天的细胞因子产生。
发明详述
定义：在本说明书中，下列的术语具有以下的含义：
“患者”是指包括人类和动物、特别是一般宠物例如猫和狗的哺乳动物。
术语患者包括婴儿、儿童、青少年、成人、虚弱的个体、免疫抑制的个体
和/或老年人或者在对应生命阶段的动物。
“全营养组合物”，出于本文的目的，全营养组合物是包含显著量的(通
常20％或更多)对于特定的年龄所建议的主要营养素的组合物。当使用足够
提供对于特定的年龄所建议的热量摄入量的量时，通常按量和比例提供该
主要营养素，例如到达对于特定的年龄所建议的特定营养素剂量的20％或
更多。全营养组合物通常包含符合对于特定的年龄的一般建议的均衡比例
的蛋白质源、脂质源、碳水化合物源。其通常也包括微量营养素(例如维生
素和矿物质)以及必需氨基酸源和必需脂肪酸源。然而可以理解，全营养组
合物可以不含有满足婴儿或幼儿的所有营养需求的所有特定的营养素、也
可以不含有所有的建议的量。全营养组合物不包括仅包含乳球菌属或主要
包含乳球菌属的组合物。
“变态反应的症状”通常包括由变应原诱发的症状。该症状包括皮肤
表现(皮肤发红、皮疹、搔痒、皮炎、湿疹)、眼部表现(眼睛的搔痒和流泪)、
肠胃表现(充血、腹痛、痉挛、呕吐腹泻)、呼吸系统表现(鼻子发痒、鼻充
血、鼻炎、哮喘)和严重情况下的全身表现(眩晕、精神错乱、过敏症)。
“变态反应的一级预防”是指为了避免或降低过敏的(免疫学的)致敏
性的全部措施，例如阻止或减少特异性IgE抗体。
“变态反应的二级预防”是指阻止或降低致敏的个体的变态反应性疾
病/过敏症状的发展。
“断奶期”是婴儿适应从纯液体营养到固体或半固体食物、适应从准
单一食物类型(通常是母乳或婴儿配方食品)到各种食物的时期。
“致敏”是指变应原特异性的IgE抗体的诱导/发展。
“免疫增强”可以通过升高主要为IFNγ的Th-1细胞因子(需要其对抗特
别在免疫抑制的个体中的有害微生物接触)，而不同时出现抑制性细胞因子
例如IL-10的升高来表征。
“益生菌”是指对宿主的健康或幸福有益的微生物细胞制剂或者微生物
细胞的成分。(Salminen S，Ouwehand A.Benno Y等人“Probiotics：how
should they be defined”Trends Food Sci.Technol.1999：10107-10)。益生菌
的定义是通常被认可的，且与WHO定义一致。所述益生菌可以包含唯一
一种微生物株、多种株系的混合物和/或多种细菌种和属的混合物。关于混
合物，单数术语“益生菌”仍可以用于指代益生菌混合物或制剂。为了本
发明的目的，乳球菌属的微生物可以被看作是益生菌。
“益生元”通常是指通过选择性的刺激宿主肠内存在的微生物的生长和
/或活性从而有益地作用于宿主并因此试图用于改善宿主健康的不能被消
化的食物成分。
“空气传播变态反应”和“空气传播变应原”是用作呼吸系统变态反应和
呼吸系统变应原的同义词。
“皮肤变态反应或皮肤变应原”是其症状影响皮肤或皮毛或者其作用模
式涉及皮肤或皮毛的变态反应。它们可包括发红、皮疹或皮肤刺激。
乳乳球菌(L.lactis)菌株NCC 2287(雀巢培养物收藏中心)是具有另一
名称SL131的乳乳球菌株系，国际鉴定参考号为CNCM-I-4154(法国巴斯
德研究所国立菌物保藏中心(Collection Nationale de Cultures de
Microorganismes at Institute Pasteur)，巴黎，法国)。乳乳球菌(L.lactis)菌
株NCC 2180(雀巢培养物收藏中心)是具有另一名称SL60的乳乳球菌株
系，国际鉴定参考号为CNCM-I-4199。植物乳杆菌NCC 1107(雀巢培养
物收藏中心)是具有另一名称Lp8的植物乳杆菌，国际鉴定参考号为CNCM
I-4227。CNCM鉴定是指法国巴斯德研究所国立菌物保藏中心(Collection
Nationale de Cultures de Microorganismes at Institut Pasteur)，22rue du
docteur Roux，75724Paris，法国。
发明人已经证明了当向致敏的年幼哺乳动物提供包含乳乳球菌NCC
2287(SL131)的全营养组合物时能够缓解变态反应和症状。这定义了对变态
反应的二级预防的正面作用。
令人惊讶地，该作用并不伴随年幼哺乳动物对变应原的致敏的降低
(即，证明没有变态反应的一级预防)。
组合物的作用：
本发明涉及乳球菌属的微生物，更特别是乳乳球菌的特定菌株，更具
体而言是菌株NCC 2287(SL131)在制备减少具有由食物或空气传播或皮
肤变应原诱发的变态反应的患者中的变态反应的症状的全营养组合物中的
用途。发明人已经证明，在接受含有所述乳球菌属菌株的营养组合物的小
鼠的组中通常食用乳球菌属且特别是乳乳球菌NCC 2287(SL131)导致食
物过敏的症状减轻。这在致敏后诱发变态反应(激发)时可以证明。当人(通
常是婴儿/幼儿)天然地对食物变应原致敏且进一步再次暴露在所述变应原
下时，该模型模拟人的食物过敏。因此，细菌株乳乳球菌NCC 2287(SL131)
表现出保护效应。
在本发明的一个实施方案中，组合物的作用是更特别地对变态反应的
二级预防的作用。如较低的变态反应临床评分所示，在小鼠模型中，变态
反应的症状确实被显著降低。通常，症状能够包括全部或选择的一部分公
认的变态反应症状。
在本发明的一个实施方案中，症状包括腹泻、皮肤刺激、肠道炎症、
皮疹、皮肤刺激、眼部或呼吸系统症状、或其组合。
在本发明的一个实施方案中，症状伴随着生化调节物，例如类胰蛋白
酶、糜蛋白酶、组胺、白三烯的释放。
但在本发明的一个实施方案中，组合物对患者对变应原的致敏没有作
用。实际上通过包含乳乳球菌NCC 2287(SL131)的组合物似乎不能实现一
级预防。个体仍然对食物变应原敏感，但是当再暴露于致敏变应原时发生
较少的变态反应的症状。不受理论限制下，认为作用没有降低天然免疫防
御(这对患者有积极作用)、而仅仅减少变态反应的症状的表达。
在本发明的一个实施方案中，组合物显著影响在暴露于空气传播变应
原后引发的免疫反应。在对乳乳球菌NCC 2287(SL131)的刺激的反应中，
草花粉过敏的个体的外周血单核细胞和全血细胞分泌的细胞因子(IFNγ和
IL-10)的量增加，所述细胞因子提示在过敏个体中免疫平衡的恢复。因此，
该组合物增加了对由多种变应原(食物、空气传播的、皮肤的)引发的不同
过敏疾病有效的价值。
在一个实施方案中，本发明的组合物包含乳乳球菌NCC 2287
(SL131)，并且具有对减少过敏症状的有效作用，尤其是在患有食物过敏、
皮肤过敏或空气传播变态反应的患者中。
在一个实施方案中，组合物减少在今后生命中对其他变应原的致敏。
认为组合物促进(或者至少不阻断)自然的免疫成熟过程，因此其能够对降
低对相同变应原或对不同变应原的致敏具有长期作用(在今后生命中致敏
的减少)。由于仅减少变态反应的症状(二级预防)，可假设本发明的组合物
能够允许发生自然的免疫成熟并且具有长期的有益效果。
在本发明的一个实施方案中，组合物抑制在不同哺乳动物物种中对变
态反应触发物的免疫反应。该组合物可用于减少已知出现变态反应的这些
物种例如猫和狗的症状。
在本发明的一个实施方案中，组合物抑制变应性免疫反应，并且同时
提高对抗有害微生物所需的免疫反应的水平。因此该组合物可有效用于增
强虚弱的、老年的和住院的个体的免疫功能。
本发明的组合物或用于本发明的组合物：
本发明的组合物可以是全营养组合物，例如婴儿配方食品，或者能够
提供完全膳食的主要部分。优选该组合物是全营养组合物，其作为单一营
养源使用时提供目标机体的全部或几乎全部营养需求。在另一个实施方案
中，例如婴儿食品，该组合物提供完全膳食的一部分，优选占50％或更多
或者20％或更多(在数量上和在质量上)。在一个实施方案中，该组合物包
括婴儿谷物。在一个实施方案中，该组合物可以是用于儿童的包含谷物的
液体组合物或婴儿食品。在一个实施方案中，组合物包括用于儿童和成人
的乳制品(粉末或液体)。在一个实施方案中，组合物包括用于家养宠物的
宠物护理/宠物营养(干和湿食品，局部用)产品。
所用的益生菌是乳球菌属。虽然发明人不能排除其它益生菌也许具有
类似的或相关的效果，但没有实验证据能够证明其它属或株系的益生菌同
样有效，除了对长双歧杆菌(B.longum)所观察到的以外，尤其是在相同发
明人的共同待决申请中描述的长双歧杆菌NCC 2705。
在本发明的一个实施方案中，益生菌是该株系：乳乳球菌NCC 2287
(SL131)。在本发明的一个实施方案中，所述株系是乳乳球菌NCC 2180
(SL60)。
在本发明的一个实施方案中，组合物包含每g干组合物为104到1011
个菌落形成单位(CFU)。当组合物是婴儿配方食品时，该婴儿配方食品中
的益生菌量可以是105-108CFU/g婴儿配方食品。在一个实施方案中，组合
物包含106到5x107CFU/g，其是已被证明具有生理学作用的剂量。在一个
实施方案中，已确认低剂量的益生菌可以具有有益的效果，特别是当组合
物还包含确定的有限量的益生元和蛋白质时。在此种实施方案中，益生菌
以103-105CFU/g的量存在于组合物中。益生元可以是寡糖类和/或蛋白质
可以以不超过4g/100千卡或低于2g/100千卡或低于1.8g/100千卡或低于
1.5g/100千卡组合物的量存在。
益生菌能够与本发明的干或湿组合物一起混合。能够应用处理或特定
方法来改善组合物中的益生菌的稳定性或活力。所述益生菌能够以干形式
或湿形式应用。在将益生菌与组合物混合后，混合物能够以不显著影响益
生菌活力的方式加工。在另一个实施方案中，益生菌在混合之前、期间或
之后是部分或全部灭活的。在一个实施方案中，益生菌在本发明组合物的
使用之前是被灭活的和/或不能复制的。例如，这可以通过热处理或其它所
描述的处理而实现。
在一个实施方案中，益生菌是死的或不能复制的或者已被灭活，例如
使其不能复制。术语益生菌还包括“益生细菌的部分或片段”的含义。
在本发明的一个实施方案中，组合物包含益生元。已知益生元包括碳
水化合物，更具体而言是寡糖类。此外，已知它们作为功能性食品成分具
有广泛的用途。它们抵抗人体消化道的酶水解，能够以未降解的形式到达
结肠并提供特别适合于双歧杆菌或其它益生菌生长的碳水化合物物质。寡
糖例如可以从葡萄糖、半乳糖、木糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、淀粉、木聚
糖、半纤维素、菊糖或其混合物制备。纯化的商业益生元产品例如寡聚果
糖包含超过约95％的以寡糖形式的固体。
优选地，组合物的实施方案是包含至少一种益生元的营养组合物。
优选地，益生元的实施方案包括从葡萄糖、半乳糖、木糖、麦芽糖、
蔗糖、乳糖、淀粉、木聚糖、半纤维素、菊糖或其混合物制备的寡糖。更
优选地，所述寡糖包括寡聚果糖。最优选地，益生元包括寡聚果糖和菊糖
的混合物。优选该混合物包含或可商购的和
的混合物。
优选地，组合物的益生元组分的实施方案包含约50％到约90％的寡聚
果糖。更优选地，其包含约60％到约80％寡聚果糖。最优选地，其包含约
70％寡聚果糖。优选地，益生元的实施方案包含约10％到约50％菊糖。更
优选地，其包含约20％到约40％菊糖。最优选地，其包含约30％菊糖。
在一个实施方案中，益生元组分可以占组合物的约0.1％到10％。
在一个实施方案中，本发明的组合物还包含含有多酚类的苹果提取物。
该苹果提取物能够帮助降低在具有由食物变应原引发的变态反应的患者中
由食物造成的过敏症状。因此该苹果提取物以协同的方式与益生菌乳球菌
属共同作用，以调节、减少或减弱具有食物变态反应的患者中的变态反应。
在一个实施方案中，所述组合物用于婴儿食品和/或婴儿谷物，其天然地代
表了用于该组合物的合适载体。在另一个实施方案中，所述婴儿食品或婴
儿谷物包含苹果提取物或来自苹果的物质。在本发明的一个实施方案中，
所述苹果提取物是Val de Vire Bioactives(Conde sur Vire，法国)的商品化
的蛋白提取物，商品名为“Pomactiv HFV”。在一个实施方案中，苹果提取
物类似于或衍生于所述的Pomactiv HFV并具有类似的作用。在一个实施
方案中，使用苹果提取物，尤其是与乳乳球菌一起使用，对于并非婴儿的
儿童、青少年、成人或在相应的年龄阶段的动物如猫和狗具有特别的价值。
假设的作用机制：
在最近几十年中，变态反应性疾病在稳定地增加，它们目前被WHO
视为流行病。按照通常的方式，变态反应被认为来自于免疫系统的Th1和
Th2反应的不平衡，导致强烈倾向于产生Th2介质。因此，在不受理论束
缚的条件下，猜测能够通过恢复免疫系统的Th1和Th2方面的适宜平衡而
减轻、下调或预防变态反应。这暗示了降低Th2反应或者增强(至少暂时增
强)Th1反应的必要性。前者可以通过降低Th2细胞因子例如IL-5的产生
来表征，后者可以通过增加Th1细胞因子例如IFNγ的产生来表征。
在本发明的一个实施方案中，组合物包含水解或部分水解的蛋白质。
基于(部分)水解的蛋白质的营养组合物特别适合于婴儿/幼儿的免疫系统和
胃肠道，因为水解的蛋白质更容易消化，并且与完整蛋白质相比具有降低
的变应原性。另外，在不受理论束缚的条件下，能够猜测水解的蛋白质与
完整蛋白质相比可能是益生菌和肠道细菌(尤其是那些表现出各种肽酶活
性的细菌)的优选底物，导致对益生菌菌株的改善的作用，并由此导致水解
的蛋白质与益生菌之间的协同作用。这代表了对于食物过敏的婴儿/幼儿的
免疫系统和胃肠道来说最合适的组合物。在这些例子中，乳乳球菌NCC
2287(SL131)与水解的蛋白质的组合是与本发明具有最高的相关性。
在一个实施方案中，水解的蛋白质是从乳清蛋白和/或酪蛋白水解的蛋
白质。在一个实施方案中，水解的蛋白质来自于胰蛋白酶和/或糜蛋白酶对
蛋白质(特别是乳清蛋白)的作用。在一个实施方案中，水解的蛋白质包含
大豆蛋白和/或卵蛋白。在一个实施方案中，水解的蛋白质来自于例如
和/或(Novozyme，丹麦)的蛋白酶的作用。在一
个实施方案中，组合物的蛋白质(优选水解的蛋白质)包含谷物蛋白或卵蛋
白。在一个实施方案中，水解的蛋白质来自于枯草杆菌蛋白酶(Alcalase)的
作用。本发明的组合物能够包含2种或多种所述的蛋白质源的混合物。
目标人群：
本发明的组合物适合于针对不同类型的患者：他们包括发生对食物变
应原的症状的相对年轻的患者和具有对空气传播或接触的变应原的过敏现
象的年轻患者和成人。对于类似变应原有反应的其他哺乳动物物种(尤其是
非人类的哺乳动物或家养宠物如猫、狗或马，以及还包括兔、荷兰猪、仓
鼠、小鼠、小猪、狮子、老虎或大鼠)也能够从该组合物获益。实际上对于
食物变应原优选患者足够年幼以致于仍然经历其免疫系统和其胃肠道的成
熟期。在这些患者中，组合物的效果能够更强或更快。在一个实施方案中，
组合物是婴儿配方食品、婴儿谷物和/或幼儿食品。优选地，该组合物是针
对年龄6岁以下的幼儿、刚出生到3岁的幼儿或者刚出生到断奶的幼儿。
在一个实施方案中，组合物是初始(starter)或后续(follow-up)婴儿配方食
品。优选地，营养组合物包含大量的喂养幼儿的主要必需营养素。
在一个实施方案中，营养组合物是用于1-4岁婴儿/幼儿的婴儿谷物组
合物。组合物能够更特别地在断奶期和/或之后达12个月使用。断奶期对
本发明确实重要，因为在断奶期婴儿接触各种食物、同时还经历其免疫系
统和其胃肠道的成熟和重组。因此，在这一时期变态反应的有效控制是特
别重要的。
关于本发明的组合物的应用，儿童、幼儿或婴儿可以是过敏的儿童。
过敏的儿童是已经经历过至少一次对食物变应原的(轻度、中度或重度)过
敏反应发作的那些儿童、幼儿或婴儿。在本发明的一个实施方案中，所述
儿童、幼儿或婴儿已经宣布对于食物变应原的严重过敏反应和/或经历过超
过一次的中度或重度食物过敏发作。过敏反应的症状可包括多种已知的症
状，例如皮肤刺激或发红、胃肠道症状或呼吸系统症状。
本发明包括的食物变应原可以包括天然存在的或经常在食物中存在的
所有类型的变应原，尤其是在用于幼年人群(例如，婴儿、幼儿、儿童)的
食物中存在的变应原。在另一个实施方案中，食物变应原是最经常在较大
的儿童、青少年和成人的食物中发现的。
在一个实施方案中，所述营养组合物是用于患有呼吸系统过敏症的儿
童和成人的组合物。本发明包括的呼吸系统变应原可以包括空气传播的、
可以是季节性的(例如花粉)或常年性(例如房尘螨、蟑螂、宠物毛皮屑、霉
菌和真菌)的所有类型的变应原。应当理解，幼儿可能对空气传播的变应原
特别敏感，由即发效应或在生命随后阶段出现的效应引起(通过免疫系统的
“训练”引起)。
在一个实施方案中，所述营养组合物是用于其它非人类哺乳动物物种
的组合物。所述动物可以包括猫、狗或马，以及还包括兔、荷兰猪、仓鼠、
小鼠、小猪、狮子、老虎或大鼠。这些动物可以发生不同现象的过敏症状。
在一个实施方案中，所述营养组合物是用于在具有降低的免疫状态的
虚弱的、住院的和老年的成人中提供免疫增强的组合物。
在一个实施方案中，本发明的组合物是用于成人、老年或虚弱患者的
营养组合物。优选地，在一项实施例中，该组合物是具有完整的氨基酸谱、
碳水化合物、脂类和微量营养物(例如维生素)的营养组合物，例如足够满
足虚弱患者的热量和定量需要。在一个实施方案中，组合物是对不能吸收
固体食物的患者进行管饲的肠内组合物。
实验结果，第1部分：
益生菌主要属于乳杆菌属和双歧杆菌属，已经在人类和动物试验中检
测了它们在致敏的个体中对变应性致敏或过敏症状的发展的干扰。此处我
们验证了是否乳球菌属的菌种具有减轻变应性致敏或过敏症状的潜在能
力。具体而言，我们对乳乳球菌NCC 2287(SL131)和乳乳球菌NCC 2180
(SL60)的特性和作用进行了检测。
在最初的步骤中，我们开发和使用了基于人血淋巴细胞的体外系统来
测定由乳球菌属诱导的细胞因子谱。我们假设所观察到的谱将作为用于由
该菌株在体内诱导的细胞因子产生以及由此用于所述菌株造成的生物学效
应的预测指标。
过敏的个体或倾向于发生过敏的个体的细胞的特征在于它们产生Th2
细胞因子的倾向。为了在体外部分地模拟该状态，我们开发了Th2-倾斜的
人外周血单核细胞(PBMC)的细胞培养模型作为使用过敏的供体的PBMC
的一种备选物。Th2-倾斜是通过如方法部分所详述的采用白介素(IL)-4加
上抗-CD40抗体来培养PBMC而诱导的。作为基础读数，细胞因子IFNγ、
IL-10和IL-5在用乳球菌属刺激的细胞上清中通过ELISA测定。
图1/表1显示乳乳球菌NCC 2287(SL131)强烈地诱导IFNγ和IL-10
的分泌，同时抑制IL-5分泌。类似地，乳乳球菌NCC 2180(SL60)诱导
IFNγ和IL-10的产生，并抑制IL-5分泌。作为对比，另一种候选的益生
菌菌株，即植物乳杆菌NCC1107(Lp8))，仅诱导低水平的IFNγ和IL-10，
但是是对IL-5产生的良好抑制剂。
图2/表2显示了乳乳球菌NCC 2287(SL131)在mRNA水平的这些结
果的验证。在开始Th2-倾斜的人PBMC与乳乳球菌NCC 2287(SL131)、
LPS或无刺激物的共同培养后10和24小时，分析了多种基因的表达水平。
Th2-倾斜的PBMC与乳乳球菌NCC 2287(SL131)的培养导致IFNγ
和IL-10mRNA的强力诱导(图2)。mRNA表达的峰值在与乳乳球菌NCC
2287(SL131)共同培养10小时后达到。在类似的表达谱之后，Tbet的
mRNA，一种Th1细胞因子的主要调节物转录因子，被乳乳球菌NCC 2287
(SL131)所诱导。LPS刺激诱导了中等到低水平的mRNA，而未刺激的培
养物(培养基)的转录水平仅有边际性的改变。在乳乳球菌NCC 2287(SL131)
刺激后，IL-5mRNA转录在培养开始后的主要阶段中增加，随后被强烈地
抑制并降低到低于未处理的Th2细胞(培养基)的水平。类似的mRNA表达
谱也出现于GATA-3，一种Th2细胞因子的主要调节物转录因子。总之，
这些发现证实了在蛋白水平(图1/表1)获得的结果。
乳乳球菌NCC 2287(SL131)的体内效果在小鼠食物过敏模型(OVA食
物过敏小鼠模型，在图3中举例说明)进行了检测。
BALB/c小鼠以每周的间隔用卵白蛋白(OVA)+霍乱毒素通过口服
途径经过7周进行致敏。在该模型中，在致敏期的末期用大剂量的OVA
进行口服激发，引起了临床症状，例如腹泻、瘙痒发作、竖起毛发、紫绀
和运动丧失。
在从第1天到第43或50天的致敏期间(一级预防)或在试验的最后一
周期间(第43-50天；二级预防)，将乳乳球菌NCC 2287(SL131)(5x108
CFU/ml；随意)通过饮用水给予小鼠。
图4显示了在两个单独的试验中观察到的临床症状。
在实验的最后一周(二级预防)中用乳乳球菌NCC 2287(SL131)处理的
小鼠的激发之后，出现了比致敏的未处理动物(阳性对照)严重程度低的临
床症状。在实验的致敏期间(一级预防)食用了乳乳球菌NCC 2287(SL131)
的小鼠未显示出症状减少。在实验1中，植物乳杆菌NCC 1107(Lp8)与乳
乳球菌NCC 2287(SL131)平行地进行了检验。该菌株无论是一级预防还是
二级预防都没有减少过敏症状，这符合我们在体外的假设。
如图5所示，除了临床评分外，测定了小鼠肥大细胞蛋白酶1(MMCP-1)
的血清水平，作为变应原激发的肠肥大细胞激活的量度。与未处理的对照
动物相比，在二级预防中食用乳乳球菌NCC 2287(SL131)降低了MMCP-1
的血清水平(图5)。在一级预防中用乳乳球菌NCC 2287(SL131)处理，不
影响MMCP-1的血清水平。
图6/表3显示了离体的再刺激的淋巴细胞的细胞因子产生。为了该目
的，在激发后收集来自肠系膜淋巴结(MLN)的淋巴细胞，用1mg/ml的OVA
再次刺激，并培养72小时。通过多路试验测定了IL-1、IL-2、
IL-4、KC、TNFα、IFN-γ、IL-5和IL-10的水平。乳乳球菌NCC 2287(SL131)
处理的小鼠的MLN淋巴细胞产生了与阳性对照相比更低的IL-4、TNFα、
IFNγ和IL-10(表3)。类似的，脾细胞分泌了降低水平的IL-2、IL-4、TNFα、
IFN-γ、IL-5和IL-10。
与变态反应有关的多种基因在肠内的表达水平通过定量实时PCR
(qRT-PCR，参见下面的方法)测定。基因表达的测定是在来自阳性对照组、
阴性对照组和在激发前最后一周(二级预防)接受了乳乳球菌NCC 2287
(SL131)的组的回肠的组织上进行。图7/表4例证了所获得的结果：接受了
乳乳球菌NCC 2287(SL131)的组显示出多种基因的表达降低，包括在回肠
的派伊尔淋巴集结中的细胞因子白介素(IL)-13、IL-10、干扰素(IFN)-γ和
趋化因子CCL11(嗜酸细胞活化趋化因子)，以及在回肠中的细胞因子
IL-13、IL-10、IL-12、IFN-γ、趋化因子CCL11(嗜酸细胞活化趋化因子)
和CCL17(TARC)。观察到趋化因子受体CCR3的显著增加。已被证实降
低表达的基因通常被认为是T辅助细胞2表型的标志物(IL-13，CCL11，
CCL17)，其已知可驱动变态反应的发展。因此，所述试验证明了当致敏的
动物接受乳乳球菌NCC 2287(SL131)(二级预防)时，通过降低相关基因的
表达而下调免疫应答。这被认为归因于所测试的乳球菌属的菌株在降低过
敏症状中的抗过敏作用(二级预防)。
实验结果，第2部分：
以前已经检验了不同的益生菌菌株在不同的过敏性疾病中的有益效
果。发挥对抗皮肤或食物过敏的益生作用的细菌菌株可以是或者可以不是
对降低由空气传播的变应原引发的过敏症状有效的(尤其参见：J.Nutr.
2010Mar；140(3)：713S-21S.电子出版2010年2月3日)。本实验验证了是
否乳乳球菌NCC 2287(SL131)除了其已经观察到的对食物过敏的有益作
用外还具有发挥对于由呼吸系统变应原引发的反应的益生作用。NCC 2287
(SL131)对呼吸系统变应原的作用在人的离体试验中进行了评价，其使用来
自草花粉过敏的个体的PBMC或全血细胞。
图8显示了NCC 2287(SL131)对分离自草花粉过敏的个体的PBMC
的作用。与以前所观察到的Th-2倾斜试验的结果相关，乳乳球菌NCC 2287
(SL131)诱导了来自过敏的PBMC的IFNγ和IL-10的较强生成。在用离体
的草变应原的混合物再次刺激后，乳乳球菌NCC 2287(SL131)显示发挥类
似的有益作用，其中它增加了IFNγ和IL-10并同时抑制IL-5水平。
在图9中，乳乳球菌NCC 2287(SL131)对草花粉过敏的和不过敏的个
体的作用通过使用人全血细胞试验进行了比较。图9显示乳乳球菌NCC
2287(SL131)在过敏和不过敏的个体中增加IFNγ的产生，但是仅在草花粉
过敏者中增加IL-10水平。这些结果表明乳乳球菌NCC 2287(SL131)除了
对食物变应原以外还具有对抗呼吸系统变应原的有益效果。此外，由于
IL10在不过敏的个体中不增加而IFNγ增加，NCC 2287也能够在免疫活
性较低的个体中增强免疫系统。
结论：数据显示致敏的动物食用乳乳球菌NCC 2287(SL131)导致在暴
露于敏感的变应原后减少过敏症状。该效果是特异性的，因为食用植物乳
杆菌NCC 1107(Lp8)并没有保护作用。症状的减少与MMCP-1的血清水
平降低和肠系膜淋巴结细胞和脾细胞分泌的细胞因子降低以及肠内与过敏
有关的关键基因的表达降低相伴，说明调节免疫系统的组分例如肥大细胞
和Th2细胞可产生保护作用。预期菌株SL60有类似的效果。
第二套数据评价乳乳球菌NCC 2287(SL131)对由空气传播的变应原
引发的免疫反应的效果，表明该菌株能够通过增加IFNγ和IL-10细胞因子
的产生以及抑制过敏个体中有害的免疫反应(降低IL-5)来发挥对抗呼吸系
统变应原的类似的益生作用。
分析方法：
试剂和细菌生物量：
通过在标准条件下在液体培养基中培养各菌种来产生细菌生物量。测
定各菌株的生长动力学并根据它在达到稳定期后3小时收获生物量。在该
时间点培养物在冷的PBS中洗涤两次，在PBS 20％甘油中在-80℃下以
50μl的等分试样冷冻。LPS(来自大肠杆菌)购自Sigma(Buchs，瑞士)。
分离和培养Th2-倾斜的人PBMC：
从得自“CHUV输血中心”的滤器分离人外周血单核细胞(PBMC)。埋
藏在滤器中的细胞用90ml Hanks平衡盐溶液(HBSS)(Sigma)冲回血液收
集袋中。细胞用HBSS 1∶2稀释，PBMC通过在Histopaque(Sigma)上密度
梯度离心进行分离。收集处于分裂间期的细胞，用HBSS洗涤两次。PBMC
重悬于Iscove改良的达尔贝科培养基(cIMDM)(Sigma)中，该培养基补加
了10％胎牛血清FBS(Bioconcept，法国巴黎)、1％L-谷氨酰胺(Sigma)、
1％青霉素/链霉素(Sigma)和0.1％庆大霉素(Sigma)。细胞在48孔板(Milian，
Meyrin，瑞士)中以1.5×106细胞/ml在cIMDM中的50ng/ml的
IL-4(Bioconcept)和1μg/ml的抗CD40抗体(R&D Systems，Abington，英国)
存在下进行培养，以诱导Th2细胞因子表现型。以1μg/ml使用LPS。培
养3天后，将乳乳球菌NCC 2287以107、106和105CFU/ml加入。加入所
述成分后，PBMC继续培养48小时，达到总培养时间为5天。
分离和培养来自草过敏的人类供体的PBMC：
在花粉季节开始时在第一次症状出现24-48小时后收集来自已确认对
草花粉过敏(过敏性鼻炎结膜炎或哮喘)的男性和女性成人(18-40岁)的肝素
化的静脉血(50ml)。如上所述分离PBMC。将细胞重悬在RPMI(Sigma)
培养基中，该培养基补充了8％的人血清AB(Blutspendedienst SRK，Bern，
瑞士)、1％L-谷氨酰胺、1％青霉素/链霉素、1％非必需氨基酸(Invitrogen，
Lucerne，瑞士)、1％丙酮酸钠(Invitrogen)和0.1％庆大霉素(Sigma)。细胞
在96孔板(Milian，Meyrin，瑞士)中以1×106细胞/ml在三种不同条件下培
养：1)在培养基中，2)在草变应原花粉提取物(ALK-Abello6grass，
Volketswil，瑞士)的存在下，3)在50ng/ml的IL-4和1μg/ml抗-CD40存
在下。培养2天后，将乳乳球菌NCC 2287以107CFU/ml加入。PBMC培
养物继续再培养3天，使总的培养时间达到5天。
来自草过敏和不过敏的人类供体的全血的培养
在花粉季节开始时和高峰期间收集来自已确认对草花粉过敏(过敏性
鼻炎结膜炎或哮喘)(有临床病史和阳性皮肤单刺试验)或不过敏(无临床病
史和阴性皮肤单刺试验)的男性和女性成人(18-50岁)的肝素化的静脉血(10
ml)。将全血细胞(100μL/孔)重悬在RPMI(400μL/孔)(Sigma)培养基中，该
培养基补充了1％L-谷氨酰胺、1％青霉素/链霉素、1％非必需氨基酸
(Invitrogen，Lucerne，瑞士)和0.1％庆大霉素(Sigma)。细胞在48孔板
(Milian，Meyrin，瑞士)中以107CFU/ml在含有或不含有乳乳球菌NCC
2287的条件下培养5天。
细胞因子ELISA：
根据生产商的说明书使用来自R&D系统的DuoSet试剂盒测定人
IFN-γ、人IL-5、人IL-10、小鼠IFN-γ、小鼠IL-13和小鼠IL-10细胞因
子。同样，根据生产商的说明书使用人Th1/Th210-plex多路试剂盒(Meso
Scale Discovery，Gaithersburg，USA)测定人IL-4、IL-5、IL-10、IFN-γ、
IL-1β、IL-2、IL-8、TNF-α、IL-12、IL-13。
ELISA结果的评价：
使用标准曲线将OD值转化为pg/ml。为了调节来自不同人类供体的
PBMC常观察到的较大的供体间差异，按照随意的内标对数据进行标准化。
通过用LPS刺激获得的每个供体的IFN-γ的pg/ml值被设为100％。为了
标准化IL-10值，用菌株乳双歧杆菌(B.lactis NCC 2818)(由Nestec SA以
CNCM-I3446保藏)诱导的IL-10的量被视为100％。最后，将在培养基中
仅有IL-4和抗-CD40(即，不存在益生菌)所诱导的IL-5的量设为100％。
通过实时PCR定量基因表达水平：
将PBMC(1.5×106细胞/ml)在cIMDM中在含有或不含IL-4(50ng/ml)
和抗-CD40(1μg/ml)下培养3天。随后将各成分加入PBMC，在10小时和
24小时收集细胞。按照生产商的说明书，用SV总RNA分离系统试剂盒
(Promega，Wallisellen，瑞士)从被刺激的PBMC中提取总RNA，包括DNA
酶处理。使用ribogreen RNA定量试剂盒(Molecular Probes，Basel，瑞士)
定量总RNA。在1μg的总RNA上进行反转录，使用Multiscribe反转录
酶试剂盒(Applied Biosystems，Foster City，CA，USA)。将总RNA与50μM
的随机六聚体、0.5mM的dNTPs、20U的RNase抑制剂(Applied
Biosystems)、62.5U的Multiscribe反转录酶、1X RT缓冲液和5.5mM
MgCl2混合，终体积为100μl。通过实时定量PCR(Applied Biosystems，ABI
PRISM 7900HT)，使用Taqman基因表达试验对人IFNγ、IL-10、IL-5、
Tbet、GATA3、FoxP3(Applied Biosystems)进行定量。用3个看家基因的
平均值对量化结果进行标准化：β-肌动蛋白、GAPDH和HPRT(Applied
Biosystems)。
基于所获得的循环阈值(Ct)，使用ΔCt对每个基因测定相对的和标准
化的mRNA表达。每个基因的Ct值用三个看家基因的Ct平均值进行校
正。结果使用公式2-ΔCt×K计算为相对表达。
OVA食物过敏小鼠模型：
在7周内，每周为间隔通过口服(用管饲针)20mg来自Fluka(Buchs，
瑞士)的卵白蛋白(OVA)+10μg/小鼠的来自LuBioscience(Lucerne，瑞士)
的霍乱毒素(用作佐剂)使6周龄的成年普通BALB/c小鼠过敏。在最后一
次致敏后一周，用100mg OVA进行口服激发。在实验的不同时期，用乳
乳球菌NCC 2287(SL131)(5x108CFU/ml，在饮用水中)进行营养干预；作
为致敏期间的一级预防或致敏期结束时开始的二级预防(图3)。在激发后
15分钟，分别观察小鼠30分钟。记录临床症状并如下进行量化(过敏评分)：
0：无症状，低于4次搔抓；1：4-10次在鼻和头周围搔抓，无腹泻；2：多
于10次搔抓或直立的毛发和不动或软便；3：腹泻或呼吸吃力或紫绀；4：
腹泻并且针刺后不动、直立的毛发、呼吸吃力或紫绀；5：过敏反应。在激
发后4个小时，处死小鼠(颈脱位法)，取血和采集最后一厘米的回肠和1
个位于相同区域的派尔集合淋巴结，冷冻在液氮中。
血清MMCP-1：
根据制造商的说明，通过购自Moredun Scientific(Midlothian，苏格兰)
的ELISA来定量小鼠血清中的鼠肥大细胞蛋白酶1(MMCP-1)。通过用多
项式标准曲线转化OD值为pg/ml来得到MMCP-1浓度。
分离和培养肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞：
用细胞滤过器(BD Falcon，Milian，Meyrin瑞士)的注射器活塞对
MLN匀浆。离心细胞，并在RPMI(Sigma)中洗涤两次，所述培养基补充
了10％胎牛血清FBS(Bioconcept，法国巴黎)、1％L-谷氨酰胺(Sigma)、
1％青霉素/链霉素(Sigma)和0.1％庆大霉素(Sigma)、0.1％β-巯基乙醇
(Sigma)。细胞在96孔平底板(Corning，Milian)中在存在或不存在OVA
1000μg/ml的条件下以3×106细胞/ml进行培养。培养72小时后，冷冻培
养基平板。
肠系膜淋巴结细胞和脾细胞培养物的上清中的细胞因子：
按照生产商的说明书，使用小鼠Th1/Th29-plex多路试剂盒(Meso
Scale Discovery，Gaithersburg，USA)，测定小鼠IL-4、IL-5、IL-10、IFN-γ、
IL-1β、IL-2、IL-8、TNF-α、IL-12。
肠内基因表达的低密度阵列分析：
RNA提取和定量：
使用购自Promega(Dübendorf，瑞士)的SV总RNA分离系统试剂盒，
根据制造商的方法，提取来自回肠和派尔集合淋巴结的总核糖核酸(RNA)。
使用Promega(Dübendorf，瑞士)提供的定量-IT Ribogreen试剂盒，
根据制造商的方法，定量RNA。
逆转录：
通过使用来自Applied Biosystems(Foster City USA)的Multiscribe逆
转录酶试剂盒，在1μg总RNA上进行逆转录。总RNA与50μl的终体积
中的50μM的随机六聚体、0.5mM的dNTPs、20U的RNase抑制剂(Applied
Biosystems)、62.5U的Multiscribe逆转录酶、1X RT缓冲剂和5.5mM的
MgCl2进行混合。用以下循环程序在T3PCR仪(Biometra，德
国)上进行逆转录：在25℃10分钟、在48℃30分钟、在95℃5分钟，在4
℃结束。
低密度分析(LDA)：
在Applied Biosytems网站(http://www3.appliedbiosystems.com/
index.htm)上在线设计低密度阵列分析。根据制造商的方法在定量
ABI-Prism 7900HT上进行加载、运行和分析。
用3个看家基因(β-肌动蛋白、GAPDH和HPRT)的平均值使定量结果
标准化。基于所获得的循环阈(Ct)值，用ΔCt测量每一个基因的相对的和
标准化的mRNA表达。通过3个看家基因的Ct平均值校正每一个基因的
Ct值。用公式2-ΔCt×K将结果计算为相对表达，K是106系数。倍数增加结
果表达标准化为以阴性组的表达水平为基准。
实施例1：
下面给出用于本发明的婴儿配方食品的组合物例子。该组合物仅以举
例的方式给出。蛋白质源是乳清蛋白和酪蛋白的常规混合物。
实施例2：
本发明的组合物的例子：用于儿童的调适奶粉。该组合物是本发明的
一个例证。
实施例3：
用于本发明的给予儿童和成人的优酸乳饮料的组合物的例子。该组合
物仅是一个例证。
实施例4：
用于本发明用途的用于成熟的宠物的宠物食品(猫或狗)组合物的例
子。该组合物仅是一个例证，可以包括以下所预见的营养物的组合：
组合物包括用于为动物提供必需的膳食需求的完全食品或食物补充
剂，例如动物辅食(treat)。
在多种实施方案中，食物组合物例如宠物食品组合物或宠物辅食组合
物包含约15％到约50％的粗蛋白。该粗蛋白可以包括植物蛋白，例如大豆
粉、浓缩大豆蛋白、玉米麸膳食、小麦蛋白、棉籽和花生膳食，或者动物
蛋白，例如酪蛋白、白蛋白和肉类蛋白。本文可用的肉类蛋白的例子包括
猪、羊、马、家禽、鱼及其混合物。
食物组合物还可以包括约5％到约40％的脂肪。合适的脂肪的例子包
括动物脂肪和植物脂肪。优选脂肪源为动物脂肪源，例如牛油。也可使用
植物油，例如玉米油、葵花油、红花油、油菜籽油、大豆油、橄榄油或其
他富含单不饱和与多不饱和脂肪酸的油。
食物组合物还可以包含约15％到约60％的碳水化合物。合适的碳水化
合物的例子包括谷物或谷类，例如大米、玉米、高粱、蜀黍、紫花苜蓿、
大麦、大豆、芸苔、燕麦、小麦及其混合物。组合物还可以任选地包含其
他物质例如干燥的乳清和其他乳酪副产品。
这些食物组合物的水分含量根据食物组合物的性质而变化。食物组合
物可以是干燥的组合物(例如粗粒食物)、半湿的组合物、湿组合物或其任
意混合物。在优选的实施方案中，组合物是完全的和营养平衡的宠物食品。
在该实施方案中，宠物食品可以是“湿食品”、“干食品”或“中等水分”
含量的食品。“湿食品”描述了通常以罐头或箔袋销售并且具有通常为约
70％-约90％的水分含量的宠物食品。“干食品”描述了与湿食品类似、但
是含有有限的水分含量的宠物食品，其水分含量通常为约5％到约15％或
20％(通常以小饼干样的粗粒食品形式)。在一个优选的实施方案中，组合
物具有约5％到约20％的水分含量。干食品包括各种水分含量的多种食品，
以便其在储存期间相对稳定并能抵抗微生物或真菌的变质或污染。还优选
作为挤压的食品的干食品组合物，例如用于人或伴侣动物的宠物食品或快
餐食品。
食物组合物也可含有一种或多种纤维来源。术语“纤维”包括食物中
“充填物(bulk)”的所有来源，无论是可消化的还是不能消化的、可溶的
或者不溶的、可发酵的或不可发酵的。优选的纤维来自植物来源，例如海
生植物，但也可使用微生物来源的纤维。正如本领域普通技术人员所知，
可以使用多种可溶的或者不溶的纤维。纤维来源可以是甜菜渣(来自甜菜)、
阿拉伯树胶、塔哈树胶(gum talha)、蚤草、米糠、角豆胶、柑橘果肉、果
胶、寡聚果糖、短链寡聚果糖、甘露寡聚果糖、大豆纤维、阿拉伯半乳聚
糖、半乳寡聚糖、阿拉伯木聚糖或其混合物。
或者，纤维来源可以是可发酵的纤维。可发酵的纤维以前已经描述过
对伴侣动物的免疫系统提供益处。可发酵的纤维或其他本领域技术人员已
知可提供益生元来增强肠内益生菌生长的成分也可掺入组合物，以帮助增
强本发明对动物的免疫系统提供的益处。
在一些实施方案中，食物组合物的灰分含量为从小于1％到约15％，
优选从约5％到约10％。
在优选的实施方案中，组合物是食物组合物，含有约15％到约50％的
蛋白质、约5％到约40％的脂肪、约5％到约10％的灰分含量，具有约5％
到约20％的水分含量。在其他实施方案中，食物组合物还包含本文所述的
益生元或益生菌。