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测定结肠癌
    背景技术

    本申请要求2002年3月29日递交的美国临时申请No.60/368,687的利益。

    本发明涉及基于生物样品的基因表达方案的结肠癌的诊断和预后。

    结肠癌是一种异源疾病，包括被认为通过3个主要的分子机制发生的肿瘤：1)腺瘤结肠息肉病(APC)基因，或β-连环蛋白基因中与染色体的不稳定性相关的突变，2)在DNA错配修复基因如MLH1、MSH2、PMS1、PMS2和MSH6中的与微卫星不稳定性相关的突变，和含有短的重复序列的基因中的突变，和3)肿瘤阻遏基因的启动子区中的超甲基化诱导的基因沉默。个别的结肠癌的遗传互补似乎是包括遗传不稳定性、特异地突变和基因沉默的不同的结合。通常染色体的不稳定性(CIN)是癌症的共同特征。暗示了一个非整倍体表现型，其中整个的染色体或大部分的染色体丢失或重新获得了。微体的不稳定性(MIN)是在二倍体肿瘤中发现的，在短的重复序列中突变的速度有增加。遗传的不稳定性的两种形式是结肠癌中共同的。

    所以，结肠癌具有复杂的起源，并且包括在许多不同的生物途径中的许多相互的作用。在组织学中，用于辅助提供诊断、预后或治疗检测决定的血清标记、组织学和细胞学检测经常不具有需要的可靠性。同样，当利用单个遗传标记(例如，提高特定基因的表达)可能是有用的，而由于癌症的多样性更可能的是，遗传标记组合体(portfolio)是最好的途径。

    发明概述

    本发明是评估结肠癌的存在与否，或确信有结肠癌的人的可能的症状的方法。在本方法中，对病人样品的基因表达的方案据分析可以确定是否病人具有结肠癌，是否病人不患有结肠癌，是否病人可能会患有结肠癌，或对待治疗结肠癌的病人的治疗的应答。

    用于实施本方法的材料(article)也是本发明的一个方面。这样的材料包括基因表达的分布图，或它们固定于机器可读介质如计算机可读介质中的表示。

    用于鉴定基因表达分布图(profile)的材料也可以包括底物或表面，如微阵列，以捕获和/或指明基因表达的存在、缺乏或程度。

    发明详述

    在组织样品中存在很少或没有特定核酸序列只有很少被发现具有诊断或预后价值。关于各种蛋白质、肽或mRNA的表达的信息在另一方面渐渐地被重视。在基因组本身中具有表达蛋白质、肽或mRNA(如称为“基因”的这样的序列)的很少存在的核酸序列是不能确定是否给定的细胞中表达了蛋白质、肽或mRNA。能够表达蛋白质、肽或mRNA的给定的基因是否是这样的，并且表达进行到何种程度，是由各种复杂的因子确定的。不考虑理解和评估这些因子的困难，测定基因表达可以提供关于重要的事件的出现如肿瘤的发生、转移、程序死亡和其它临床相关现象的有用的信息。可以在基因表达的分布图中发现基因是有活性或无活性的程度的相关指示。本发明的基因表达分布图可用于诊断和治疗结肠癌患者。

    样品的制备需要收集患者的样品。用于本发明的方法的患者的样品是怀疑含有疾病细胞(如从结肠样品或外科手术范围获取的上皮细胞)的那些。获得可疑的样品的一个有用的技术是激光捕获显微解剖术(LCM)。LCM技术提供了选择待研究的细胞的方法，使细胞类型异质性引起的可变性最小。结果，可以容易地检测正常和癌性细胞之间的基因表达中的适度的或小的变化。在优选的方法中，这些样品中含有从周边血液提取的循环的上皮细胞。这些可以根据许多方法来获得，但最优选的方法是授予Immunivest公司的美国专利6,136,182中所述的磁性分离技术，该专利引入本文作为参考。一旦已经得到含有需要的细胞的样品，对于适当的方式中的基因，优选地通过微阵列提取和扩增RNA，得到了基因表达方案。

    确定基因表达方式的优选方法包括确定可以编码蛋白质或肽的基因产生的RNA的量。这是通过逆转录酶PCR(RT-PCR)，竞争性RT-PCR，实时RT-PCR，差示RT-PCR，Northern印迹分析和其它相关的测试完成的。当利用单独PCR反应实施这些技术是可能的时，扩增从mRNA产生的互补DNA(cDNA)或互补RNA(cRNA)并且通过微阵列分析是最好的。许多不同的阵列构型和他们的生产方法是本领域技术人员已知的，并且在下面的美国专利中有叙述：5,445,934；5,532,128；5,556,752；5,242,974；5,384,261；5,405,783；5,412,087；5,424,186；5,429,807；5,436,327；5,472,672；5,527,681；5,529,756；5,545,531；5,554,501；5,561,071；5,571,639；5,593,839；5,599,695；5,624,711；5,658,734和5,700,637；这些文献引入本文作为参考。

    微阵列技术允许同时测量几千个基因的稳定态mRNA水平，因此是一个用于鉴定如未控制的细胞增殖的启动、捕获或调节等效果的有效工具。两个微阵列技术是目前广泛使用的。第一个是cDNA阵列，第二个是寡聚核苷酸阵列。虽然在这些芯片的构建中存在差异，基本上，所有下游的数据分析和结果是相同。这些分析的产物通常是对标记探针发出的信号的强度的测量，用于检测在微阵列的已知位置与核酸序列杂交的样品的cDNA序列。通常，信号的强度与cDNA，和由此在样品细胞中表达的mRNA的量成比例。许多这样的技术是可得的和有用的。优选的检测基因表达的方法可以在下面的专利中找到，如授予Linsley等人的美国专利6,271,002；授予Friend等人的6,218,122；授予Peck等人的6,218,114；和授予Wang.，等人的6,004,755，这些公开物引入本文作为参考。

    通过比较这样的强度对表达水平进行分析。这最好通过产生一个测试样品和对照样品中的基因的表达强度的比例矩阵来进行。例如，来自疾病组织的基因表达强度可以与相同类型的正常组织产生的表达强度比较(例如，有病的结肠组织样品与正常的结肠组织样品比较)。这些表达强度的比例表明了在测试样品和对照样品之间的基因表达成倍地变化。

    基因表达方式也可以许多方法表示。最常见的方法是粗(raw)荧光强度或比例矩阵排成树状图谱，其中的纵列表示测试样品，横行表示基因。这样安排数据使具有相似的表达方式的基因相互邻近。每个基因的表达比例是表示成一个颜色。例如，小于1的比例(表示下调)可以表示在图谱的蓝色部分，而大于1的比例(表示上调)可以表示成图谱的红色部分的颜色。商业可得的计算机软件程序可用于表示这样的数据，包括“GENESPRINT”，来自Silicon Genetics，Inc.，和“DISCOVERY”和“INFER”，来自Partek，Inc.的软件。

    用于本发明的方法的调节基因表示在表1中。表达有差异的基因表示为在有病细胞中上调或下调。上调和下调是相对的术语，指在一些基线相关的基因的表达的量中发现了可检测的不同(在用于测量它的系统中的噪音的分布之)。在这种情况中，基线是正常细胞的已测量的基因表达。然后利用相同的实验方法，在有病的细胞中的需要的基因对照基线水平上调或下调。在本文中，有病是指打断或打乱，或具有打乱身体功能的适当效能的身体的状态的变化，如细胞的未受控制的增殖所发生的。当人的基因型或表现型与疾病的存在一致时，一些人被诊断有病。但是，进行诊断或预后的行为包括确定疾病/状态组织如治疗性检测。在治疗性检测中，通过比较一个时段的基因的表达确定是否基因表达方式改变或正在改变成与正常组织更一致的方式对给定的治疗方法进行临床判断。

    优选地，根据杂交的微阵列探针的强度测量的成倍的变化可以区别上调和下调的水平。产生这样的差别或小于.05的p值，2.0倍的差异是优选的。所以，在说有病和正常细胞中基因的表达不同之前，发现疾病细胞比正常细胞至少产生了2倍多，或2倍以下的强度。差异倍数越大，利用该基因作为诊断越优选。选择本发明的基因表达的方式的基因具有的表达水平能导致产生将正常的或非调节基因区分开的信号，其量可用临床实验仪器可检测的超过背景值。

    统计数值可以用于区别调节的和非调节的基因和噪音。统计实验发现，在不同的样品组之间基因的差别最明显。Student的t-实验是有说服力的统计测试的例子，可以用于发现两个组之间的明显的差异。P-值越低，基因在展示不同组之间的差异的证据更加可信。然而，因为微阵列测量一次有一个以上的基因，一次可以进行上万个统计实验。因为这样，似乎偶然看到小的p-值，并且可以进行Sidak校正实验以及任意化/变换实验来调整。T-测试的p值小于0.05是该基因明显不同的证据。更不得不相信的证据是在Sidak校正实验后，p值小于0.05。在每个组的大量样品，在随机化/变换测试后，小于0.05的p-值是最值得相信的差异明显的证据。

    可以用于选择产生信号的基因的另一个参数大于非调节基因或噪声，是利用绝对信号的差异的测量方法。优选地，已调节的基因表达产生的信号至少比正常或非调节的基因的有20％的不同(在绝对值的基础上)。甚至更优选地，这样的基因产生的表达方式与正常或非调节基因的至少有30％的不同。

    基因可以分成小组，使该组中得到的基因系列的信息提供了进行临床相关判断如诊断，预后或治疗选择的正确基础。这些系列的基因组成了本发明的模式。在这种情况中，该模式支持的判断包括结肠癌。基因表达方式的组合体可以组成实施例3中叙述的基因的组合。如大多数诊断标记，利用足以进行准确的医学判断的最少数目的标记通常通常是令人满意的。这防止了治疗的进一步的分析的延误以及对时间和资源的不恰当的利用。在这种情况中，这样的最小组合体可以组成实施例4的基因的组合。

    优选地，建立组合体使组合体中的基因的组合与个体的基因或随机选择的基因的组合相比，具有的敏感性和特异性提高。在本发明中，组合体的敏感性可以反映在疾病状态和正常状态中基因表达显示的成倍的差异。特异性可以反映在基因表达的信号与感兴趣的症状的相关性的统计测量中。例如，标准偏差可以用于这样的测定。在考虑组合体中包括的一个基因组时，在表达测量中的一个小标准的偏差与更大的特异性相关。也可以利用其它的变化程度的测定如相关系数。

    确定基因表达组合体的最优选的方法是通过最佳化算式的利用，如广泛用于建立的储存组合体中的平均变化算式。该方法在相同日期的Tim Jatkoe等人的题目为“组合体选择”的在审专利申请中有详细叙述。基本上，该方法要求建立一系列的输入(在财务应用中存储，表达为本文的强度的测量值)，将使能接受的输出量最佳(例如，产生的信号)，在输出量的变化最小时接收以便利用。许多商业软件程序可以获得用于进行这样的操作。“Wagner相关平均变化最佳应用”指本申请说明书的“Wagner软件″是优选的。这一软件利用了来自“Wagner相关平均变化最佳文库”的功能确定有效的前沿，在Markowitz意义中的最佳组合体是优选的。

    这一类型的软件的利用需要待转化的微阵列数据，使它可以存储输出量的方式处理为输入数据，当软件用于它打算应用的财务分析目的时，利用了危险测量。例如，当将Wagner软件与微阵列强度测量结合利用时，可以利用下面的数据转化方法。

    基因首先是通过鉴定那些基因来预选的，这些基因的表达显示至少有一些最小水平的差异。如下进行优选的预选方法。选择一个基准类别。通常，这将包括来自不具有感兴趣的病症的群体的基因。例如，如果一个人有兴趣选择一个诊断乳腺癌的基因的组合体，来自没有乳腺癌的患者的样品可以用作基准类别。一旦选择了基准类别，计算基准类别样品的每个基因的基因表达的指示剂的算术平均值和标准偏差。这一指示剂通常是微阵列读数的荧光强度。然后，将计算的统计数据用于计算每个基因的基准值(X*标准偏差+平均值)。这是该基因的基准读数，由此比较所有其它样品。X是配制组合体的人选择的可变的严格度。X的值越高，严格度越高。优选地，X在0.5到3的范围，更优选地2到3，3是最优选的。

    然后计算每个实验样品(具有感兴趣的病症的那些)与基准读数之间的比例。然后，为了容易用软件操作数据，将比例转化成基准10的对数值。根据Markman平均变化算法，利用Wagner软件，这样可以使下调基因具有最佳化需要的负值。

    具有这些转化比例的预处理数据可以用作输入值，取代通常用于财务分析目的的Wagner软件的财产输出值。

    一旦形成有效的前沿，就选择对应于前沿点的给定的输入水平(输出量)或变化的最佳组合体。这些输入或变化是制作组合体的人设定的预定标准。换句话说，寻找最佳的组合体的人确定可接受的输入水平(指示了敏感度)或给定水平的变化(指示了特异性)并且选择了位于对应于输入水平或变化的有效前沿的基因。当选择输入水平或变化时，Wagner软件可以选择这样的基因。为了在存储组合体中存储，也可以在组合体中对每个基因指定一个重量。

    通过比较患者样品的组合体中基因的表达与用于建立组合体的不同表达的基因的计算值可以确定是否样品具有组合体诊断的病症。优选地，通过在组合体选择过程中指定该基因的重量，统计组合体中的每个基因的强度值的倍数首先产生了组合体值。然后，根据(Y*标准偏差+基准组的组合体值的平均值)计算边界值，其中Y是具有与上述X相同的平均值的严格度值。然后，将具有比基准类别的组合体值更大的组合体值的样品划分为具有该症状。如果需要，这一方法可以根据已知的统计方法重复进行，用于提高可信水平。

    或者，可以重复这一方法直到达到预定的准确率。

    组合体的选择的方法和一个未知的鉴定概括如下：

    1.选择基准类别

    2.计算基准类别样品的每个基因的平均值，和标准偏差

    3.计算每个基因的(X*标准偏差+平均)。这是将比较的所有其它样品的基准读数。X是可变的严格度，X值越高，严格度越高。

    4.在步骤3中计算每个实验样品和计算的基准读数之间的比例。

    5.转化比例，使这些比例小于1，是负数(例如，利用对数基准10)。

    (负调节的基因现在正确地具有MV最佳化所需要的负值)

    6.这些转化比例用作输入，取代通常用于软件应用的财产输出值。

    7.该软件将划出有效的前沿，并且沿着有效前沿在任何点输出一个最佳的组合体。

    8.在有效前沿上选择需要的输出值或方差。

    9.通过组合体选择算式统计产生的每个基因的强度值(以重量表示)的倍数计算每个样品的组合体值。

    10.在Y的倍数和基准组合体值的标准偏差上增加基准组的平均组合体值计算边界值。比这一边界值大的值应该划分为实验类别。

    11.选择性地可以重复这一过程直到获得最好的预测准确度。

    或者，首先，通过鉴定那些表达显示一些最小分化水平的基因来预选择基因。在备选的方法中的预选择优选地是基于1≤|(μt-μn)(σt+σn)|]]>给出的阈值，其中μt是已知具有疾病或症状的亚系的平均值，μn是正常的样品的亚系的平均值，δt+δn代表合并的标准偏差。根据例如0.5≤|(μt-MAXn)(σt+σn)|]]>的关系预选择数据也可以利用噪声截断的信号。这保证了根据不同调节预选择的基因是以临床意义的方式区别的。那是在适于测量诊断参数的任务的仪器的噪声水平以上的。对于根据这些规则预选择的每个标记，确定基数，其中纵列代表样品，横行代表标记，每个元素是一个标准化的强度测量值，用于根据|(μt-I)μt|]]>的关系式表达标记，其中I是强度测量值。

    设置其它边界条件定义最佳组合体也是可能的。例如，组合体大小可以限制于固定的范围或标记的数目。这可以通过制定更严格的数据预选择规则(例如,8≤|(μt-MAXn)(σt+σn)|]]>而不是0.5≤|(μt-MAXn)(σt+σn)|]]>或利用程序特征如限制组合体大小来进行。例如，一个人可以设置边缘条件，从最适合的10个基因中选择有效的前沿。也可以利用所有预选择的基因，以确定有效前沿，然后限制选择的基因的数目(例如，不超过10个)。

    选择组合体的方法也可以包括应用启发式规则。优选地，这样的规则是根据生物学和对用于产生临床结果的技术的理解来制定的。更优选地，它们应用于来自最佳化方法的结果。例如，组合体选择的平均变化方法可以用于许多在患有乳腺癌的患者中不同地表达的基因的微阵列数据。来自该方法的结果将是可以包括在周边血液以及有病的乳腺组织中表达的一些基因的最佳的基因系列。如果用于该测试方法的样品是从周边血液中得到的，在乳腺癌情况中不同地表达的一些基因也可以在周边血液中不同地表达，然后，可以利用推断规则，其中从有效前沿选择在周边血液中不同表达的以外的组合体。当然，该规则可以在形成有效前沿以前，例如通过在数据预选择过程中应用该规则来应用。

    也可以应用其它推断规则，但不必定与所讨论的生物学相关。例如，可以应用此规则，仅有给定百分数的组合体可以特定的基因或许多基因为代表。购买到的软件如Wagner软件容易装备这些类型的直观推断。例如，当除了准确度和准确性以外的因素(例如，预算的许可费)对参与的一个或多个基因的满意度有影响时，这也是可用的。

    本发明的一个方法包括比较各种基因的基因表达方案(或组合体)进行如上所述的诊断。包括每个基因的基因表达方式的组合体是固定于介质中的，如计算机可读介质中。这可以采取许多形式。例如，可以确定一个表格，其中输入疾病的信号指示的范围(例如，强度测量值)。然后，在表格中可以比较真正的病人资料和这些值确定是否病人的样品是正常的或有病的。在更复杂的实施方案中，表达信号的方式(例如，荧光强度)用数据或图谱来记录。然后，将与病人样品结合利用的基因组合体产生的基因表达方式与这些表达方式比较。然后，将方式比较软件用于确定是否病人的样品具有表示所讨论的疾病的方式。当然，这些比较也可以用于确定是否病人的结果是正常。然后，将样品的表达方式与正常或对照细胞的组合体比较。如果，该样品表达方式与结肠癌的表达方式一致(在没有补偿医学考虑的情况下)，那么病人被诊断为结肠癌阳性。如果样品的表达方式与来自正常或对照细胞的表达方式一致，那么病人被诊断为结肠癌阴性。

    可以利用许多已知的识别方式的方法。下面的参考提供了一些例子：

    重量表决：

    Golub，TR.，Slonim，DK.，Tamaya，P.，Huard，C.，Gaasenbeek，M.，Mesirov，JP，Coller，H.，Loh，L，Downing，JR.，Caligiuri，MA.，Bloomfield，CD.，Lander，ES.，癌症的分子分类：基因表达检测的类别发现和类别预测。科学286：531-537，1999。

    支持载体机器：

    Su，AI.，Welsh，JB.，Sapinoso，LM.，Kern，SG.，Dimitrov，P.，Lapp，H.，Schultz，PG.，Powell，SM.，Moskaluk，CA.，Frierson，HF.Jr，Hampton，GM.利用基因表达特征对人癌症进行分子分类，癌症研究61：7388-93，2001。

    Ramaswamy，S.，Tamayo，P.，Rifkin，R.，Mukherjee，S.，Yeang，CH.，Angelo，M.，Ladd，C.，Reich，M.，Latulippe，E.，Mesirov，JP.，Poggio，T.，Gerald，W.，Loda，M.，Lander，ES.，Gould，TR.利用肿瘤基因表达分类进行多类别的癌症诊断，Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 98：15 149-15154，2001。

    K-最近的邻居：

    Ramaswamy，S.，Tamayo，P.，Rifkin，R.，Mukherjee，S.，Yeang，CH.，Angelo，M.，Ladd，C.，Reich，M.，Latulippe，E.，Mesirov，JP.，Poggio，T，Gerald，W，Loda，M.，Lander，ES.，Gould，TR.利用肿瘤基因表达特征进行多类别的癌症诊断，Proceedings of the National Academy of Sciences ofthe USA 98：15149-15154，2001

    相关系数：

    van’t Veer LJ，Dai H，van de Vijver MJ，He YD，Hart AA，Mao M，Peterse HL，van der Kooy K，Marton MJ，Witteveen AT，Schreiber GJ，Kerkhoven RM，Roberts C，Linsley PS，Bernards R，Friend SH.基因表达方式预测乳腺癌的临床结果，Nature，2002年1月31日，415(6871)：531-6。

    本发明的基因表达方案也可以与用于癌症诊断，预后，或治疗检测的其它非遗传诊断的方法结合使用。例如，在一些情况中，将如上所述的基于基因表达的方法的诊断效力和来自常规标记如血清蛋白质标记(例如，癌性胚胎抗原)的数据结合是有益的。存在这样的标记的范围包括下面的分析值，如CA19-9，CA125，CK-BB和Guanylyl环化酶C。在一个这样的方法中，血液是周期性地取自己治疗的病人，并且然后进行一个如上所述的血清标记的酶免疫测试。当标记的浓度表示了肿瘤的恢复或治疗的失败，获取样品源进行基因表达分析。当存在一个可疑的质量时，用细微的针吸，然后如上所述分析从该质量取的细胞的基因表达方式。或者，可以从已经移取肿瘤的组织的邻近区域取组织样品。在其它测试方法不明确时这一途径特别有用。

    当其它诊断的可靠性有疑问的时候，使用遗传标记和其它诊断结合最优选。例如，已知，CEA的血清水平可能基本上受病人的癌症状态不相关的因子的影响。在治疗结肠癌后监测到的患者显示了更高水平的常规CEA实验，进行基因表达/CEA测试是有益的。

    本发明的材料包括用于治疗，诊断，预后和其它评估疾病的基因表达方式的代表。这些组合体代表减少到了可以自动通过机器如计算机可读介质(磁性的，光学的等等)来阅读。材料也可以包括用于评估这样的介质中的基因表达组合体的使用说明。例如，这些材料可以包括具有计算机说明的CD ROM，用于比较如上所述的基因的组合体的基因表达方式。材料也可以具有其中数字阅读的基因表达方式，使它们可以与来自患者样品的基因表达数据比较。或者，表达方式可以在不同代表的格式下记录。图象记录是一个这样的格式。成簇的算式如在上面提到的“GENSPRING”和“DISCOVER”计算机程序中掺入的那些可以最好地辅助这些数据的观察。

    本发明的不同类型的生产材料是用于发现基因表达方式的介质或格式化测试。例如，这些可以包括微阵列，其中序列补体或探针固定于基质上，指示感兴趣的基因的序列合并产生了它们的存在的可读决定簇。或者，本发明的材料可以做成试剂盒形式，进行杂交，扩增，和指示感兴趣的基因的表达水平的信号的产生，用于检测结肠癌。

    根据本发明制成的试剂盒包括确定基因表达方式的格式化测试。这些可以包括进行测试需要的所有或一些物质例如试剂和指示。

    本发明另外是通过下面的非限制性例子说明的。

    实施例：参考基因库数据库中的Gene ID数目鉴定了本发明分析的基因。这些通常与编码蛋白质或肽的产生的全长核酸序列相关。本领域普通技术人员能认识到，鉴定全长的序列不是观察到的分析点所需要的。即，部分序列或EST可以根据已知的原则来选择，将探针设计成评估对应的基因的基因表达的。

    实施例1：样品处理和LCM

    从已经做了结肠肿瘤外科手术的患者中收集27个新鲜的冷冻组织样品。19个样品是结肠恶性样本，其中8个样品是正常的结肠粘膜。在液氮中冷冻组织一小会儿，在20-30分钟内收集，然后储存在-80℃。对于激光捕获，切割样品(6um)，在玻璃片上计数一个切片，在薄膜上(P.A.L.M)上计数第二个，第二个已经固定在玻璃片上(Micro Slides Colorfrost，VWR Scientific，Media，PA)。然后，将在玻璃片上计数的切片固定在冷的丙酮中，用Mayer Haematoxylin染色(Sigma，St.Louis，MO)。病理学家分析样品用于诊断和分级。从附带的外科病理学和临床报告，利用Dukes分类估计临床阶段。在薄膜上固定切片，然后在100％的乙醇中固定5分钟，在曙红/100％乙醇中染色1分钟(100ml的脱水乙醇中100ug的曙红)，再次在100％的乙醇中快速浸渍一次，除去游离的颜色，空气干燥10分钟。

    结肠腺癌中的两个是1级的，10个是2级的，5个是3级的。一个恶性样品是盲肠的类癌肿瘤，一个是转移的黑素瘤病灶。两个腺癌样品代表了粘膜亚型，一个是指细胞亚型。腺癌的Dukes分期如下：Dukes A：2，Dukes B：5，Dukes C：7，Dukes D：3。腺癌的6个已经预先辐射治疗。

    在LCM中使用之前，将膜(LPC-MEMBRANE PEN FOIL 1.35um No 8100，P.A.L.M.GmbH Mikrolaser技术公司，Bernried，德国)和薄片预处理去除RNA酶，并且加强了组织样品在薄膜上的附着作用。简要地说，在DEP水中洗涤玻片，然后在Rnase AWAY中洗涤薄膜(分子生物产品公司，San Diego，CA)，并且在DEP水中漂洗。在将薄膜附着于玻璃片上后，在+120℃，烘干8小时，用TI-SAD处理(诊断产品公司，Los Angeles，CA，1∶50洛于DEP水中，通过脱脂棉过滤)，并且在+37℃温育30分钟。在使用之前立即在薄膜上喷洒10ul的Rnase抑制剂溶液(Rnasin抑制剂2500U＝33U/uIN211A，Promega GmbH，Mannheim，德国，于400ul的冷冻溶液中0.5ul，溶液含有0.15mol NaCl，10mmolTris pH8.0，0.25mmol二硫苏糖醇)，其中对组织样品进行计数。

    将在薄膜上计数的组织切片用于LCM。利用与Zeiss Axiovert 135显微镜(Carl Zeiss Jena GmbH，Jena，德国)结合的PALM Robot-Microbeam(P.A.L.M.Mikrolaser Technologie，Carl Zeiss，Inc.，Thomwood，NY)技术捕获大约2000个上皮细胞/样品。还包括在正常粘膜中的周围的基质和在癌症样品中偶然的干扰基质成分。将捕获的细胞放置于100％的乙醇的试管中，保存于-80℃。

    实施例2：RNA提取和扩增

    将Zymo-Spin柱(Zymo Reserch，Orange，CA 92867)用于从LCM捕获的样品提取总RNA。在10ul的水中再悬浮约2ng的总RNA，进行2轮基于T7 RNA聚合酶的扩增产生约50ng的已扩增的RNA。

    实施例3：cDNA微阵列杂交和定量分析

    利用组成约20,000个人cDNA克隆的一系列cDNA微阵列以测试样品。同时在微阵列上影印约30个植物基因作为非特异杂交的对照。从LCM捕获的细胞的5ug RNA合成Cy3标记的cDNA探针。用Qiagen核苷酸移取柱纯化探针，然后与微阵列杂交14-16小时。洗涤玻片，在扫描之前空气中干燥。扫描cDNA微阵列的cy3荧光，并且将ImaGene软件(Biodiscovery，Los Angeles，CA)用于定量分析。对于每个cDNA克隆，利用双份点和双份阵列获得四个测量值，取强度的平均值。用Generation III Micro-array Spotter(Molecular Dynamics)在氨基-硅烷包被的玻片(Corning)上印迹cDNA。PCR扩增，纯化(Qiagen PCR纯化试剂盒)cDNA，并且与10M NaSCN影印缓冲液1∶1混合。在杂交之前，在异丙醇中，室温下温育微阵列10分钟。在95℃温育探针2分钟，在室温下5分钟，然后加到3个重复的玻片上。用DPX(Fluka)，在玻片上封闭覆盖的玻片，并且在42℃温育过夜。然后，在55℃，在1×SSC/0.2％SDS和0.1×SSC/0.2％SDS中洗涤玻片5分钟，在0.1×SSC中浸渍，并且在用GenIII阵列扫描仪(MolecularDynamics)扫描之前干燥。用AUTOGENE软件(Biodiscovery，Los Angeles)分析每个点的荧光强度。

    在与每个芯片上100的值相当的75％的百分数时的强度读数线性归一化的芯片强度。通过分开那个基因的强度读数，通过在所有的样品上介导基因的表达值将芯片上的每个基因的本身标准化。在簇化之前，至少在一个样品中不具有100或更大的强度读数的基因过滤掉，以便限制影响相似度量的背景。选择一组6,225基因进行成簇分析。利用相关性进行级梯簇化作为相似性的测量，这将显示阳性变化的基因的样品组合在一起，同时不考虑任何负变化(SiliconGenetics，Sunnyville，CA)。然后，将每个树状图中的主要的结考虑为一个样品的亚组。通过将每个肿瘤亚组与正常的组比较，鉴定了不同地表达的基因。选择是根据1≤|(μ1-μn)(σt+σn)|]]>的算式给出的噪声测量阈值的信号来进行的，其中μt是平均值肿瘤亚系，μn是正常样品的亚系的平均值，δt+δn代表合并的标准偏差。对于包括在顺式配对比较中的基因，基因的强度读数的变化的组内系数小于0.33。对于上调，肿瘤组的中位值比正常组的中位值大于或等于2，对于下调，小于或等于0.5。如果一个基因符合所有规则，就选择它。在结肠癌中一致地认为不能调节的是在所有的比较中选择的基因。利用假设不等的变化的T测试来计算统计意义的p-值。利用软件包(Partek， St Louis，MO)将设置簇化的基因进行基本成分的分析(PCA)。然后，将数据设计在减小的3维空间中。用设计的表达水平代表正常的和肿瘤结肠样品。

    设计具有大的上调差别的基因的表来区别肿瘤和正常的样品。用0.5≤|(μt-MAXn)(σt+σn)|]]>作为噪声截止的信号预选择123个基因。比例等于或大于1.5是上调的最小规则。如果存在0.9≤|(μt-μn)(σt+σn)|,]]>这些基因也包括在其中。建立四个基因的组合体，每个在肿瘤和正常细胞之间至少具有3倍的表达差异。

    在结肠癌中基因不同地表达。当与正常的结肠粘膜比较时，39个基因在所有的肿瘤样品中不同地表达。他们中的37个在所有的肿瘤中明显下调，除了一个超偏值。他们中的两个是上调的。对微阵列上放置的cDNA克隆进行测序证明基因的某同性。结果表示在表1。表1    受调节的基因入藏号基因描述平均信号强度(正常)平均信号强度(肿瘤)P-值AF071569CaM激酶II基因亚型δ93 394.64E-09Seq.ID No.1AB014530人mRNA for KIAA0630蛋白质108 504.83E-07Seq.ID No.2AK000319人cDNA KIAA0630236 697.84E-06Seq.ID No.3U81504 Beta-3A-adaptin subunit of the AP-3complexmRNA，241  75 3.52E-05 Seq.ID No.4 AB011166人cDNAKIAA0594116 553.53E-05Seq.ID No.5AB040914人cDAKIAA1481187 598.85E-05Seq.ID No.6AK025205人cDNAFLJ21552322 970.00013Seq.ID No.7AJ278219脂肪酸羟化酶143 530.00011Seq.ID No.8AB046854人cDNAKIAA1634142 590.00020Seq.ID No.9R00585未知149 571.28E-09Seq.ID No.10S45844Spi-B转录因子140 430.00043Seq.ID No.11X98311癌胚抗原家族成员2(CGM2)6137 2230.00044Seq.ID No.12BAA78050NADPH氧化还原酶同系物153 840.00048Seq.ID No.40N72128未知164 770.00068Seq.ID No.13AB040955人cDNAKIAA1552334 1200.00067Seq.ID No.14AF125101HSPC040蛋白质363 1150.0011Seq.ID No.15AB023229人cDNAKIAA1012263 880.00099Seq.ID No.16N95761a-L岩藻糖苷酶基因429 1040.00047Seq.ID No.17AK025033人cDNAFLJ21380180 850.0010Seq.ID No.18L10844人细胞生长调节蛋白206 1010.0013Seq.ID No.19H96534gp25L2蛋白质人mRNA147 580.0015Seq.ID No.20AK001521人cDNAFLJ10659157 600.0019Seq.ID No.21AF151039HSPC205蛋白质117 600.0017Seq.ID No.22AF052059SEL 1L蛋白质168 530.0016Seq.ID No.23N24597未知166 620.0016Seq.ID No.24AK001950内部丝粒蛋白质148 640.0029Seq.ID No.25BAA02649Macrophage scavenger receptor typel 118 440.0031Seq.ID No.41N75004未知98 480.0031Seq.ID No.26W16916人cDNAKIAA0260162 610.0037Seq.ID No.27X52001人内皮素3mRNA89 330.0042Seq.ID No.28T50788未知364 1020.0059Seq.ID No.38AJ005866推测的Sqv-7类似蛋白质381 1630.0049Seq.ID No.29AF113535MAID蛋白质218 1000.0053Seq.ID No.39AB037789人cDNAKIAA1368164 620.0068Seq.ID No.30M33987碳酸酐酶652 460.0074Seq.ID No.31M77830桥粒斑蛋白1(DPI)184 810.0092Seq.ID No.32H81220EST区转录因子ELF1113 550.017Seq.ID No.33AF000592人染色体21q11-q21基因组克隆33 691.16E-05Seq.ID No.35AK021701人cDNAFLJ1163931 630.00070Seq.ID No.36

    实施例4：结肠肿瘤的最佳组合体

    利用平均变化最佳算式产生基于多个基因的特征，其中包括的基因可以联合用于区别正常和肿瘤样品。利用这些样品和实施例1-3所述的微阵列进行强度的测量。首先，根据在肿瘤和正常细胞之间预限定的5倍差异来预选择待分析的数据。然后，如下利用根据这一规则预选择的基因产生的表达数据。利用未转移的样品作为基准计算每个基因的强度测量的平均和标准偏差。然后，计算每个基准基因(X的指定值为3)的差别值X*(标准偏差+平均值)。将这一值用于保证得到的组合体是严格的。然后，计算每个转移的样品中差别值与基准值的比例。然后，将这一比例转化成普通的对数。然后，将这一数据输入Wagner软件，产生了有效的前沿，从中选择了一个4基因的组合体。包括未知序列的系列，前胶原类型I，大亚单位核糖体蛋白质L21，和纤连蛋白。这些基因鉴定为Seq.ID No 42，Seq.ID No.43，Seq.ID No.44，和Seq.ID.No.49(进一步如下鉴定)。或者，用于制作组合体的基因的联合可以用于产生诊断信息，用于进行关于结肠癌的临床决定。这在从组合体中选择基因的联合是与其它标记结合的情况(遗传的或不是)中是特别有益的。

    为最佳组合体选择的基因：

    ＞gi|1264443|gb|N92134.1|N92134 za 23f09.rl soares胎盘肝脾INFLS人cDNA克隆IMAGE：293417 5′相似于gb|M87908|HUMALNE 32人癌症细胞起源的Alu RNA转录物，(rRNA)；gb：X57025 mal类胰岛素生长因子IA前体(人)

    ＞gi|2221047|gb|AA490172.1|AA490172 ab06b08.s1 Stratagene胎盘视黄素937202人cDNA克隆IMAGE：839991 3′相似于gb：J03464 PROCOLLAGENalpha 2(I)CHAINPRECURSOR(人)

    ＞gi|2188918|gb|AA464034.1|AA464034.1|AA464034 zx86b09.r1 Soares卵巢肿瘤NbHOT人cDNA克隆IMAGE：810617 5′相似于SW：RL21人P46778 60S核糖体蛋白质L21。

    ＞gi|1834491|gb|R62612.1|R62612 yi12d01.s1 Soares胎盘Nb2HP人cDNA克隆IMAGE：139009 3′相似于gb：X02761_cdsl纤维素前体(人)；

    利用不同系列的规则但相同的方法，通过软件选择另外四个基因的组合体。这些是Seq.IDno.46，Seq.ID no.47，Seq.ID no.48和Seq.ID no.45。两个基因与开始的四个基因组合体交迭。两个最佳的组合体也可以合并形成一个6基因的组合体。

    最佳基因组合体：

    ＞gi|2114953|gb1AA431245.1|AA431245 zw 78d06.r1 Soares_testis_NHT人cDNA克隆IMAGE：782315 5′相似于WP：F36H1.2 CE05814 ANKYRIN LIKE

    ＞gi|12156172|gb|AA443497.1|AA443497 zw34d03.r1 Soares卵巢肿瘤NbHOT人cDNA克隆IMAGE：771173

    ＞gi|2221047|gb|AA490172.1|AA490172 ab 06b08.s1 Stratagene胎盘视黄素937202人cDNA克隆IMAGE：839991 3′相似于gb：J03464 PROCOLLAGENALPHA 2(I)CHAIN PRECURSOR(人)

    ＞gi|1264443|gb|N92134.1|N92134 za 23f09.r1 Soares胎盘肝脾INFLS人cDNA克隆IMAGE：293417 5′相似于gb|M87908|HUMALNE 32人癌症细胞起源的Alu RNA转录物，(rRNA)；gb：X57025_rnal胰岛素类似生长因子IA前体(人)；

                                           序列表

    <110>Wang，Yixin

    <120>肠癌诊断

    <130>CDS 266 US NP

    <150>60/368,687

    <151>2002-03-29

    <160>49

    <170>PatentIn version 3.1

    <210>1

    <211>1500

    <212>DNA

    <213>人

    <400>1

    atggcttcga ccaccacctg caccaggttc acggacgagt atcagctttt cgaggagctt    60

    ggaaaggggg cattctcagt ggtgagaaga tgtatgaaaa ttcctactgg acaaggatat    120

    gctgccaaaa ttatcaacac caaaaagctt tctgctaggg atcatcagaa actagaaaga    180

    gaagctagaa tctgccgtct tttgaagcac cctaatattg tgcgacttca tgatagcata    240

    tcagaagagg gctttcacta cttggtgttt gatttagtta ctggaggtga actgtttgaa    300

    gacatagtgg caagagaata ctacagtgaa gctgatgcca gtcattgtat acagcagatt    360

    ctagaaagtg ttaatcattg tcacctaaat ggcatagttc acagggacct gaagcctgag    420

    aatttgcttt tagctagcaa atccaaggga gcagctgtga aattggcaga ctttggctta    480

    gccatagaag ttcaagggga ccagcaggcg tggtttggtt ttgctggcac acctggatat    540

    ctttctccag aagttttacg taaagatcct tatggaaagc cagtggatat gtgggcatgt    600

    ggtgtcattc tctatattct acttgtgggg tatccaccct tctgggatga agaccaacac    660

    agactctatc agcagatcaa ggctggagct tatgattttc catcaccaga atgggacacg    720

    gtgactcctg aagccaaaga cctcatcaat aaaatgctta ctatcaaccc tgccaaacgc    780

    atcacagcct cagaggcact gaagcaccca tggatctgtc aacgttctac tgttgcttcc    840

    atgatgcaca gacaggagac tgtagactgc ttgaagaaat ttaatgctag aagaaaacta    900

    aagggtgcca tcttgacaac tatgctggct acaaggaatt tctcagcagc caagagtttg    960

    ttgaagaaac cagatggagt aaaggagtca actgagagtt caaatacaac aattgaggat    1020

    gaagatgtga aagcacgaaa gcaagagatt atcaaagtca ctgaacaact gatcgaagct    1080

    atcaacaatg gggactttga agcctacaca aaaatctgtg acccaggcct tactgctttt    1140

    gaacctgaag ctttgggtaa tttagtggaa gggatggatt ttcaccgatt ctactttgaa    1200

    aatgctttgt ccaaaagcaa taaaccaatc cacactatta ttctaaaccc tcatgtacat    1260

    ctggtagggg atgatgccgc ctgcatagca tatattaggc tcacacagta catggatggc    1320

    agtggaatgc caaagacaat gcagtcagaa gagactcgtg tgtggcaccg ccgggatgga    1380

    aagtggcaga atgttcattt tcatcgctcg gggtcaccaa cagtacccat caagccaccc    1440

    tgtattccaa atgggaaaga aaacttctca ggaggcacct ctttgtggca aaacatctga    1500

    <210>2

    <211>5761

    <212>DNA

    <213>人

    <400>2

    cacaccgcag tatgcggtgc cctttactct gagctgcgca gccggccggc cggcgctggt    60

    tgaacagact gccgctgtac tggcgtggcc tggagggact cagcaaattc tcctgccttc    120

    aacttggcaa cagttgcctg gggtagctct acacaactct gtccagccca cagcaatgat    180

    tccagaggcc atggggagtg gacagcagct agctgactgg aggaatgccc actctcatgg    240

    caaccagtac agcactatca tgcagcagcc atccttgctg actaaccatg tgacattggc    300

    cactgctcag cctctgaatg ttggtgttgc ccatgttgtc agacaacaac aatccagttc    360

    cctcccttcg aagaagaata agcagtcagc tccagtctct tccaagtcct ctctagatgt    420

    tctgccttcc caagtctatt ctctggttgg gagcagtccc ctccgcacca catcttctta    480

    taattccttg gtccctgtcc aagatcagca tcagcccatc atcattccag atactcccag    540

    ccctcctgtg agtgtcatca ctatccgaag tgacactgat gaggaagagg acaacaaata    600

    caagcccagt agctctggac tgaagccaag gtctaatgtc atcagttatg tcactgtcaa    660

    tgattctcca gactctgact cttctttgag cagcccttat tccactgata ccctgagtgc    720

    tctccgaggc aatagtggat ccgttttgga ggggcctggc agagttgtgg cagatggcac    780

    tggcacccgc actatcattg tgcctccact gaaaactcag cttggtgact gcactgtagc    840

    aacccaggcc tcaggtctcc tgagcaataa gactaagcca gtcgcttcag tgagtgggca    900

    gtcatctgga tgctgtatca cccccacagg gtatcgagct caacgcgggg ggaccagtgc    960

    agcacaacca ctcaatctta gccagaacca gcagtcatcg gcggctccaa cctcacagga    1020

    gagaagcagc aacccagccc cccgcaggca gcaggcgttt gtggcccctc tctcccaagc    1080

    cccctacacc ttccagcatg gcagcccgct acactcgaca gggcacccac accttgcccc    1140

    ggcccctgct cacctgccaa gccaggctca tctgtatacg tatgctgccc cgacttctgc    1200

    tgctgcactg ggctcaacca gctccattgc tcatcttttc tccccacagg gttcctcaag    1260

    gcatgctgca gcctatacca ctcaccctag cactttggtg caccaggtcc ctgtcagtgt    1320

    tgggcccagc ctcctcactt ctgccagcgt ggcccctgct cagtaccaac accagtttgc    1380

    cacccaatcc tacattgggt cttcccgagg ctcaacaatt tacactggat acccgctgag    1440

    tcctaccaag atcagccagt attcctactt atagttggtg agcatgaggg aggaggaatc    1500

    atggctacct tctcctggcc ctgcgttctt aatattgggc tatggagaga tcctccttta    1560

    ccctcttgaa atttcttagc cagcaacttg ttctgcaggg gcccactgaa gcagaaggtt    1620

    tttctctggg ggaacctgtc tcagtgttga ctgcattgtt gtagtcttcc caaagtttgc    1680

    cctattttta aattcattat ttttgtgaca gtaattttgg tacttggaag agttcagatg    1740

    cccatcttct gcagttacca aggaagagag attgttctga agttaccctc tgaaaaatat    1800

    tttgtctctc tgacttgatt tctataaatg cttttaaaaa caagtgaagc ccctctttat   1860

    ttcattttgt gttattgtga ttgctggtca ggaaaaatgc tgatagaagg agttgaaatc   1920

    tgatgacaaa aaaagaaaaa ttactttttg tttgtttata aactcagact tgcctatttt   1980

    attttaaaag cggcttacac aatctccctt ttgtttattg gacatttaaa cttacagagt   2040

    ttcagttttg ttttaatgtc atattatact taatgggcaa ttgttatttt tgcaaaactg   2100

    gttacgtatt actctgtgtt actattgaga ttctctcaat tgctcctgtg tttgttataa   2160

    agtagtgttt aaaaggcagc tcaccatttg ctggtaactt aatgtgagag aatccatatc   2220

    tgcgtgaaaa caccaagtat tctttttaaa tgaagcacca tgaattcttt tttaaattat   2280

    tttttaaaag tctttctctc tctgattcag cttaaatttt tttatcgaaa aagccattaa   2340

    ggtggttatt attacatggt ggtggtggtt ttattatatg caaaatctct gtctattatg   2400

    agatactggc attgatgagc tttgcctaaa gattagtatg aattttcagt aatacacctc   2460

    tgttttgctc atctctccct tctgttttat gtgatttgtt tggggagaaa gctaaaaaaa   2520

    cctgaaacca gataagaaca tttcttgtgt atagctttta tacttcaaag tagcttcctt   2580

    tgtatgccag cagcaaattg aatgctctct tattaagact tatataataa gtgcatgtag   2640

    gaattgcaaa aaatatttta aaaatttatt actgaattta aaaatatttt agaagttttg   2700

    taatggtggt gttttaatat tttacataat taaatatgta catattgatt agaaaaatat   2760

    aacaagcaat ttttcctgct aacccaaaat gttatttgta atcaaatgtg tagtgattac   2820

    acttgaattg tgtacttagt gtgtatgtga tcctccagtg ttatcccgga gatggattga   2880

    tgtctccatt gtatttaaac caaaatgaac tgatacttgt tggaatgtat gtgaactaat   2940

    tgcaattata ttagagcata ttactgtagt gctgaatgag caggggcatt gcctgcaagg   3000

    agaggagacc cttggaattg ttttgcacag gtgtgtctgg tgaggagttt ttcagtgtgt   3060

    gtctcttcct tccctttctt cctccttccc ttattgtagt gccttatatg ataatgtagt   3120

    ggttaataga gtttacagtg agcttgcctt aggatggacc agcaagcccc cgtggaccct   3180

    aagttgttca ccgggattta tcagaacagg attagtagct gtattgtgta atgcattgtt   3240

    ctcagtttcc ctgccaacat tgaaaaataa aaacagcagc ttttctcctt taccaccacc   3300

    tctacccctt tccattttgg attctcggct gagttctcac agaagcattt tccccatgtg   3360

    gctctctcac tgtgcgttgc taccttgctt ctgtgagaat tcaggaagca ggtgagagga   3420

    gtcaagccaa tattaaatat gcattctttt aaagtatgtg caatcacttt tagaatgaat   3480

    ttttttttcc ttttcccatg tggcagtcct tcctgcacat agttgacatt cctagtaaaa   3540

    tatttgcttg ttgaaaaaaa catgttaaca gatgtgttta taccaaagag cctgttgtat   3600

    tgcttaccat gtccccatac tatgaggaga agttttgtgg tgccgctggt gacaaggaac   3660

    tcacagaaag gtttcttagc tggtgaagaa tatagagaag gaaccaaagc ctgttgagtc   3720

    attgaggctt ttgaggtttc ttttttaaca gcttgtatag tcttggggcc cttcaagctg   3780

    tgaaattgtc cttgtactct cagctcctgc atggatctgg gtcaagtaga aggtactggg   3840

    gatggggaca ttcctgccca taaaggattt ggggaaagaa gattaatcct aaaatacagg   3900

    tgtgttccat ccgaattgaa aatgatatat ttgagatata attttaggac tggttctgtg   3960

    tagatagaga tggtgtcaag gaggtgcagg atggagatgg gagatttcat ggagcctggt   4020

    cagccagctc tgtaccaggt tgaacaccga ggagctgtca aagtatttgg agtttcttca   4080

    ttgtaaggag taagggcttc caagatgggg caggtagtcc gtacagccta ccaggaacat   4140

    gttgtgtttt ctttattttt taaaatcatt atattgagtt gtgttttcag cactatattg   4200

    gtcaagatag ccaagcagtt tgtataattt ctgtcactag tgtcatacag ttttctggtc   4260

    aacatgtgtg atctttgtgt ctcctttttg ccaagcacat tctgattttc ttgttggaac   4320

    acaggtctag tttctaaagg acaaattttt tgttccttgt cttttttctg taagggacaa   4380

    gatttgttgt ttttgtaaga aatgagatgc aggaaagaaa accaaatccc attcctgcac   4440

    cccagtccaa taagcagata ccacttaaga taggagtcta aactccacag aaaaggataa   4500

    taccaagagc ttgtattgtt accttagtca cttgcctagc agtgtgtggc tttaaaaact   4560

    agagattttt cagtcttagt ctgcaaactg gcatttccga ttttccagca taaaaatcca   4620

    cctgtgtctg ctgaatgtgt atgtatgtgc tcactgtggc tttagattct gtccctgggg   4680

    ttagccctgt tggccctgac aggaagggag gaagcctggt gaatttagtg agcagctggc   4740

    ctgggtcaca gtgacctgac ctcaaaccag cttaaggctt taagtcctct ctcagaactt   4800

    ggcatttcca acttcttcct ttccgggtga gagaagaagc ggagaagggt tcagtgtagc   4860

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    acataaaaat cgtaaaaact tctagtaaaa acttgatttg gtgaatacag ttatatttta    4920

    aaaccttaag gtgacaagca ttttctatgc ctaaatcttc attggtttgc ctggaaagag    4980

    tctctgttaa aagattttcc atattcaaag taaaaggaaa gatttcttgc ttcctaattg    5040

    tcttttggac acatgcctat tttctttgag gtataaacct ttagatgtga aaaatgtaat    5100

    ttcattctgc tattgtgtgt gcttgtgtgt gtgtaattga aaaaactggg aaatcctgct    5160

    ttgttggtaa taaatcaata tttttatatt c                                   5191

    <210>6

    <211>4755

    <212>DNA

    <213>人

    <400>6

    aagagatctt ccaggctctc agagccctgg gagggcgatt tccaggaaga ccacaatgcc    60

    aacctctgga ggaggctgga gagagaaggc ctaggccaga gcctgtcagg caactttggc    120

    aagaccaagt cagccttctc atctctccag aacattcctg agagtctgag aagacacagc    180

    agcctggagc taggccgggg aacccaggag ggttaccccg ggggcaggcc cacctgtgca    240

    gtcaacacca aggcagaaga ccctgggagg aaagccgctc ctgacctcgg gagccatctg    300

    gaccggcagg tttcctaccc gcggcccgag gggaggaccg gtgcctcggc ttctttcaac    360

    agcacagacc caagtcccga agagccgcct gccccctcgc acccgcacac atccagtctg    420

    ggccggaggg ggcccggccc aggcagcgcc tcggctcttc agggctttca gtacgggaag    480

    ccccactgct cggtgctgga gaaggtctcc aaattcgagc agcgagagca agggagccag    540

    agaccgagtg tgggcggctc tggttttggc cataactata ggccccacag gaccgtctca    600

    acttccagta cttctgggaa tgacttcgag gagacaaaag cacacattcg tttctctgag    660

    tcagctgaac ccctaggcaa cggggagcag cacttcaaaa acggggagct gaagttggaa    720

    gaggcttccc ggcagccctg cggtcagcag ctgagcggag gagcgtcgga cagcggccgt    780

    ggcccccaga ggccggacgc tcggctcctc cgtagccaga gcaccttcca gctctccagc    840

    gagccagaga gggagcccga gtggcgggac aggcccggct cgcccgaatc gcccctgctg    900

    gatgccccct tcagccgcgc ctaccggaac agcatcaagg acgcacagtc ccgtgtcttg    960

    ggggccacct cctttcgacg tcgagacctg gagctggggg cgcccgtggc gtcgaggtcc    1020

    tggcggccac ggccttcctc ggcccacgtg gggctgcgga gccccgaggc gtcggcctcc    1080

    gcctccccgc acacgccccg ggagcggcac agcgtgaccc ctgctgaggg cgacctggcc    1140

    aggcccgtgc cccctgccgc ccggagaggt gctcgccggc gcctgactcc cgagcagaag    1200

    aagcgctcct actcggagcc cgagaagatg aacgaggtgg ggatcgtgga ggaggccgaa    1260

    ccggcacccc tgggcccgca gagaaatggg atgcgtttcc cggagagcag cgtggccgac    1320

    cggcgccgtc tcttcgagcg cgatggcaag gcctgctcca cgctcagcct gtcggggccc    1380

    gagctgaagc agttccagca gagcgccctg gcggactaca tccagcgcaa gaccggcaag    1440

    cggcctacct ccgccgccgg ctgcagcctc caggagcccg ggccactgcg tgagcgcgcc    1500

    cagagtgcct acctccagcc cggccccgcg gcgctcgaag gctccggcct cgcctcggcc    1560

    tccagcttga gctcactgcg ggagcccagc ctgcagcccc gcagggaggc cacgctcctg    1620

    ccggccacag ttgcagaaac ccagcaggct ccccgagatc gcagcagctc cttcgccggt    1680

    ggccgccgcc tcggggaacg gcgacgcggg gacctgctta gcggagcaaa cggtggaaca    1740

    aggggcaccc agagagggga tgagaccccc agggagccat cctcctgggg ggccagggcc    1800

    gggaagtcca tgtcggccga ggacctgctg gaacgctcgg acgtccttgc gggccctgtc    1860

    catgtgaggt ccaggtcatc tcccgccacc gcagacaagc gccaggatgt gcttttgggg    1920

    caagacagtg gctttggtct tgtgaaggat ccatgttatt tggctggtcc tggatctagg    1980

    tcactcagtt gttcagaaag aggccaagaa gagatgctgc tgctcttcca ccatctcacc    2040

    cctcgttggg gtggttcagg ctgcaaagcc attggtgatt cctccgttcc tagtgaatgt    2100

    cctggaaccc tggaccatca gaggcaagcc agtaggacac cctgccccag gccaccactg    2160

    gcaggaacgc aagggctggt cacagacacc agggctgcac ccctgacccc aattggcacc    2220

    cctctgcctt cagccattcc ctctggctac tgctcacagg acggtcagac agggcgacag    2280

    cctctcccgc cctacacccc tgccatgatg cacagaagca atggtcacac cctgacccag    2340

    cctcccggtc caagaggctg tgagggcgat ggcccagagc atggggtaga agagggaacg    2400

    aggaagaggg tctcgctgcc tcagtggcca cctccttctc gagcaaagtg ggcccacgca    2460

    gccagagagg acagccttcc tgaggaatcc tcagcccctg attttgcaaa cctgaagcac   2520

    tatcaaaaac agcagagtct tccaagttta tgcagcactt ctgacccaga cacacctctt   2580

    ggggccccga gcactccagg gaggatctcc ctccgaatat ctgagtctgt cctgcgggac   2640

    tccccgccac ctcatgagga ttatgaagac gaagtgtttg tgagggatcc gcaccccaag   2700

    gccacgtcca gccccacatt tgaacctctt cccccacccc cacctcctcc accgagtcag   2760

    gaaaccccgg tgtatagcat ggatgacttc cctccacctc ctccccacac tgtatgtgag   2820

    gcgcagctgg acagtgagga tcccgagggg ccacgcccca gcttcaacaa actttctaaa   2880

    gtgacaattg caagggaaag gcacatgcct ggtgcagccc atgtggtagg tagtcagaca   2940

    ctggcttcca gactccaaac ttctatcaag ggttcagagg ctgagtccac accaccctcc   3000

    ttcatgagcg ttcacgccca acttgctggg tctcttggtg ggcagccagc acccatccag   3060

    actcaaagcc tcagccatga tccagtcagt ggaactcagg gtttagaaaa gaaagtcagt   3120

    cctgatcctc agaagagttc agaagacatc agaacagagg ctttggccaa ggaaattgtc   3180

    caccaagaca aatctctagc agacattttg gatccagact ccaggctgaa gacaacaatg   3240

    gacctgatgg aaggtttgtt tccccgagat gtgaacttgc tgaaggaaaa cagtgtaaag   3300

    aggaaggcca tacagagaac tgtcagctct tcaggatgtg aaggcaagag gaatgaagac   3360

    aaggaagcag tgagcatgtt ggttaactgc cctgcctact acagtgtgtc tgctcccaag   3420

    gctgagctac tgaacaaaat caaagagatg ccagcagaag tgaatgagga agaggaacag   3480

    gcagatgtca atgaaaagaa ggctgagctc attggaagtc tcacccacaa gctggagacc   3540

    ctccaggagg cgaaggggag cctgctcacg gacatcaagc tcaacaacgc cctgggagaa   3600

    gaggtggagg ctctgatcag cgagctctgc aagcccaatg agtttgacaa gtataggatg   3660

    ttcatagggg atttggacaa ggtggtcaac ctgctgctct ccctctcggg gcgtctagcc   3720

    cgtgttgaga atgtccttag cggccttggt gaagatgcca gtaatgaaga aaggagctct   3780

    ctttacgaga aaaggaagat cctggctggt cagcatgagg atgcccggga gctgaaggag   3840

    aacctggatc gcagggagcg agtagtgctg ggcatcttgg ccaattacct ttcagaggag   3900

    cagctccagg actaccagca cttcgtgaaa atgaagtcca cgctcctcat tgagcaacgg   3960

    aagctggatg acaagatcaa gctgggccag gagcaggtca agtgtctgct ggagagcctg   4020

    ccctcagatt tcattcccaa ggctggggcc ctggctctgc ccccaaacct cacgagtgag   4080

    cccattcctg ctgggggctg tactttcagt ggtattttcc caacattaac ctctccactt   4140

    taacctcttc taaaataccc aaccaaaaga tcactgtttc tctcaacact atttaatctg   4200

    aaaaatgttt cagtacaaac cactgtttga actatctggg ttattggtgt ttgttcctga   4260

    tgaaaggaaa aaaattctct ccaggaggaa gcctttttcc ttcttgccct tcctgattga   4320

    tcttctgaga gctcgaatgc tgctggacac gtaccccttt ctattattac tttgtagtag   4380

    aaagaaagtt aatgaaactg agaactgatt ggagggtgtt tgatcattta gtttttaaca   4440

    ggctgaggca acatggatca gtgtgtgtcc ccctcaggaa tgtatccaca gtggccttcc   4500

    ttgctggtgg gcagtgtatc ctgatggcag ggtacaagta ccattaatga agggtctgca    4560

    acataaagcc ttaaaaagac acacactaag aaaactgtaa aaccttgaac attgttattt    4620

    atatttttta aaatggaaaa gatcactatg tttgttgtgc taaccactta tttgattctg    4680

    ttttgtggtg gacatagatg attacgtttg agctttgtat tttgtgaaaa ccttaatgaa    4740

    atgaattcca aagat                                                     4755

    <210>7

    <211>2045

    <212>DNA

    <213>人

    <400>7

    gaaacttgac cccggctcat cctgtctctg gctgtggccc ggcaaagcac tgaaaacccc    60

    tctggtctca gagacagtag gggcagtgcc actttctaca acctgccaac ccacacactg    120

    gagtaattct gaaaaaaatt attcctaaac tctctaagtg tggacggaga atgagcaagc    180

    cccagaagta ttttacaacc agagtgggta atgaggaggg ggcttactgg aatcgtcata    240

    tctctgaata ttgaaaacaa caactaaaaa agtggacctt ctcagaaaaa aagggcagca    300

    aatgaccaag ggcgcccctt ctggccgtgc ttggcttgag taactgtctc tctttcccca    360

    cccccatcac agggctttca gtttggcaaa ggaaaagcag ataaaaacag aacattccat    420

    atgtttcttt ctccatcggc caaaaacatt ttgacacaat gtttgtgaaa cacctttgga    480

    gaggtgcact tctgaatgct gcctctgccg taaatcctgg ggcaagggat cagcctcttc    540

    ccaggaacca tcgccttcta taaaccgtga actcaagcag gcattttttt tttcttaccg    600

    aaaggctgct attgtgcaag ggcacataat gggtctgttg ctcttattgg cttccaaatg    660

    tgcatggcaa agagagagat gtgggcctag agcagatata ttcagcaagg tgacagcttc    720

    ccataacaat tctaacactt cttatcttat gtgagaataa aatatttaag ggttgaacct    780

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    ctaaacaacc acatcctatc catggatagg tctagtcata acactttaga gagaatgtca    1020

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    gattcaactt tgttttcttt tcctgtggcc ccagtgaaac ctcctgccct ccctgcacgt    1140

    ctgtgtcttc atttctaaaa tgggggtgat gctttcatat tgacctcacc ccatactacc    1200

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    aaaatactta tagacagttt aactattaca tagatatata agtgatctca gtttcttgtt    1320

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    acatcagaca gctatctaag ctctggacta cccctttgtg cagctgaatc actgcagggt    1440

    cgaccatgcc tggtgccaca gccatggttt ccatttctag atgaaaggat ggcctaggac    1500

    ataggtctca aagactcttg gatcagaatc aggagattag ggaaaacagg atggatacct    1560

    gagcactaac agcagtagac gtagacctct gtcctttacc atctgaggtc ttctggattc    1620

    tttgtggggt taattttgat ttgatgtcat ctgtttgccc ttcatcttgc ttgcaagtgt    1680

    gcatggttca atccctcaca tccaggaaat gaattttgca attgggccag atgctaattt    1740

    gcacgttgat tcaccttctt tgcctttaag cctttttttt cttttttttt ttttttggca    1800

    aatgaatgta ccatttcaac tttgatttta atagtgctag ttgatattgg taataatgct    1860

    aaccaagaga tcaatgccag atttttctct tggggtaagt tagctgaagt catttaaaga    1920

    tggaaaggtg ggaaaattct ttgatatttg atgtcattgt atccacattt gttgtaagac    1980

    atattgcata ccaattataa ttatatcaat taaagttgat aaaagcttca aaaaaaaaaa    2040

    aaaaa                                                                2045

    <210>8

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    <213>人

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    atggagaacg agcctgtagc ccttgaggaa actcagaaga cagatcctgc tatggaacca    60

    cggttcaaag tggtggattg ggacaaggac ctggtggact ggcgaaagcc tctcctgtgg    120

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    aaattgtggg attactgttt ccacaccctc actccagaga aaccccacct gaagacgcag    840

    tgacaactcc caccccctcc gtcctgccct cagcccggcc ctggcccctt cccgaccccc    900

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    ttatttataa accagataca tgttcttagt ctggtcccag accaaggagc tggtcagacg    1800

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    ggaaacgcag aaaacagaga gaggcattct gagtcatctg actggatgaa gactgttcca    60

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    <221>misc feature

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    <221>misc feature

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    <223>各种碱基

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    <221>misc feature

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    tcagtcactc tttcaccctg ccaaagcttc actgtcctac tgattgaatt gtatgtgaga    60

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    <220>

    <221>misc feature

    <222>(212)..(212)

    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc feature

    <222>(451)..(451)

    <223>各种碱基

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    gaaacaacaa cagtgtaatc tttaacaggg atgttaaagg taagaagtca ggaagataaa    60

    ccaaaatgat tgagtatgat aaagaatttt gcatggcgat taaaatagaa aacctataaa    120

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    <212>DNA

    <213>人

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    gctggcggag aatggaggtg tcctgcagct ggtgggccca gaggagaaga tgggcctccc   3180

    gggctcagac tcacagaaag agctggcctg accaccaggc acctcactgg cactgctgac   3240

    ccatcccaga aacacaatct cagggacccg agcagctcca aggacgagag gatacagcag   3300

    acacaaccta atagagaggg cgcctgcagc cttaacctcc acggccttcg atacttatgc   3360

    aagcctggtg ttgctcctgt cctcagagtc atcctgcgct catgcctttt cccgaatggg   3420

    ttcacctctg gcagttgccg cttcagtctt ggccttagcc tcatcttgaa gtgggtagct   3480

    ggcgggagag ggtggctgcg ccccctgctg gccctgaggc tgcagagttg ggagcaggac   3540

    acctcacctg agtttcattt tttttcatgt ccaaaccatg cacatactat agtccagaat   3600

    caaagcactt ttgaaaagtg gctgcatggc catcctccag ggcccaggaa gttgcattcc   3660

    aagggcctgt ttacatggca gcagaatcca tccccggcag tcagcccata gcttgggacc   3720

    agtctgtgcc ctcctgccca gtccagttta ctcctcttgg ttcctgaagg tggccaagtc   3780

    attgtgttcc cacaggcttc tctaggctgg gggcaggtgt ggggctgtgg aattccaaag   3840

    cacaaaaggt gcagagggga ttggccttcc tgtgcctcaa ctcaccaacc accctcctgc   3900

    cttccagttc tgccaggtgc tccatgctgg ggacaagtag gagactgcca gggcccaaag   3960

    aaatgggtga gcagtagagt catctcgggg cacttggcag tgtcaagcac ctgccccttg   4020

    cctccttgac cacactgggg tgggtgggcc cccagcactt cagaggcagg agcctttggg   4080

    ctgagcaagc actgaggagg tggatggaag ggagcatctg gaggggggga gcttccttga   4140

    gcagtgggcc caggcctggc cctccacact tcattctctg acctttctct ctcctcattt   4200

    cggtgcatgt cctttctgca gctgcctttc agcacaggtg gttccactgg gggcagctaa   4260

    cgctgagtga caaggatggg aagccacagg tgcattttac tcaagtcttc tctagtcaat   4320

    gaggggcacc cagtgcttct agggcaggct gggtggtggt cccctaggta tcagcctctc   4380

    ttactgtact ctccgggaat gttaaccttt ctattttcag cctgtgccac ctgtctaggc   4440

    aagctggctt ccccattggc ccctgtgggt ccacagcagc gtggctgccc cccagggcca   4500

    ccgcttcttt cttgatcctc tttccttaac agtgacttgg gcttgagtct ggcaaggaac   4560

    cttgctttta gcttcaccac caaggagaga ggttgacatg acctccccgc cccctcacca   4620

    aggctgggaa cagaggggat gtggtgagag ccaggttcct ctggccctct ccagggtgtt   4680

    ttccactagt cactactgtc ttctccttgt agctaatcaa tcaatattct tcccttgcct   4740

    gtgggcagtg gagagtgctg ctgggtgtac gctgcacctg cccactgagt tggggaaaga   4800

    ggataatcag tgagcactgt tctgctcaga gctcctgatc taccccaccc cctaggatcc   4860

    aggactgggt caaagctgca tgaaaccagg ccctggcagc aacctgggaa tggctggagg    4920

    tgggagagaa cctgacttct ctttccctct ccctcctcca acattactgg aactctatcc    4980

    tgttaggatc ttctgagctt gtttccctgc tgggtgggac agaggacaaa ggagaaggga    5040

    gggtctagaa gaggcagccc ttctttgtcc tctggggtaa atgagcttga cctagagtaa    5100

    atggagagac caaaagcctc tgatttttaa tttccataaa atgttagaag tatatatata    5160

    catatatata tttctttaaa tttttgagtc tttgatatgt ctaaaaatcc attccctctg    5220

    ccctgaagcc tgagtgagac acatgaagaa aactgtgttt catttaaaga tgttaattaa    5280

    atgattgaaa cttg                                                      5294

    <210>15

    <211>988

    <212>DNA

    <213>人

    <400>15

    gtcgtgaggc gggccttcgg gctggctcgc cgtcggctgc cggggggttg gcctgggtgt    60

    cattggctct gggaagcggc agcagaggca gggaccactc ggggtctggt gtcggcacag    120

    ccatggcggg cgcgttggtg cggaaagcgg cggactatgt ccgaagcaag gatttccggg    180

    actacctcat gagtacgcac ttctggggcc cagtagccaa ctggggtctt cccattgctg    240

    ccatcaatga tatgaaaaag tctccagaga ttatcagtgg gcggatgaca tttgccctct    300

    gttgctattc tttgacattc atgagatttg cctacaaggt acagcctcgg aactggcttc    360

    tgtttgcatg ccacgcaaca aatgaagtag cccagctcat ccagggaggg cggcttatca    420

    aacacgagat gactaaaacg gcatctgcat aacaatggga aaaggaagaa caaggtcttg    480

    aagggacagc attgccagct gctgctgagt cacagatttc attataaata gcctccctaa    540

    ggaaaataca ctgaatgcta tttttactaa ccattctatt tttatagaaa tagctgagag    600

    tttctaaacc aactctctgc tgccttacaa gtattaaata ttttacttct ttccataaag    660

    agtagctcaa aatatgcaat taatttaata atttctgatg atgttttatc tgcagtaata    720

    tgtatatcat ctattagaat ttacttaatg aaaaactgaa gagaacaaaa tttgtaacca    780

    ctagcactta agtactcctg attcttaaca ttgtctttaa tgaccacaag acaaccaaca    840

    gctggccacg tacttaaaat tttgtcccca ctgtttaaaa atgttacctg tgtatttcca    900

    tgcagtgtat atattgagat gctgtaactt aatggcaata aatgatttaa atatttgtta    960

    aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa                                       988

    <210>16

    <211>4908

    <212>DNA

    <213>人

    <400>16

    ggataacctc gcagggtggg ccggagggcg  ggcgccgccg ctgcctgtgc tgcggcgatg   60

    gcccagtgtg tacaatcagt gcaggagcta  atcccggact ccttcgtccc ctgtgtcgct   120

    gcgctgtgca gcgacgaagc cgagcggctc actcgtctca atcacctcag cttcgcggag    180

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    cttcacgtaa ttaaaaattt gaagatagca gtaagcaaca ttgtcaccca gccacctcag    300

    cctggagcca tccggaagct tttgaatgat gttgtttctg gcagtcagcc tgcagaagga    360

    ttagtagcta atgtgattac agcaggagat tatgacctta acatcagtgc cactactcca    420

    tggtttgagt cttacagaga aacctttctt cagtcgatgc cagcatcgga tcatgaattt    480

    ctgaaccact atttagcatg tatgttggta gcgtcatcta gtgaagctga acctgtggaa    540

    cagttttcaa agttgtcaca agaacagcat cgaattcagc acaacagtga ttattcctac    600

    cccaagtggt ttataccaaa tacacttaaa tactatgtac ttttacatga tgtaagtgca    660

    ggagatgaac agagagctga atcaatttat gaagaaatga aacagaaata tggaactcag    720

    ggttgctatt tacttaaaat taattctcga acatctaatc gagcatcaga tgaacagata    780

    ccagatcctt ggagtcagta tctccagaaa aatagtattc aaaaccagga atcatatgaa    840

    gatggccctt gtactataac ttcaaataag aattctgata ataacttgct ttcattggat    900

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    agtcgatctc tattttctgc aactaaaaaa tggtttagtg gcagtaaagt tccagaaaag    1260

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    caaatcagga aaatggctga cttatgtttt ttggtgcagc attatgattt ggcttacagt    1380

    tgctatcata ctgcaaagaa agattttctt aatgatcaag caatgcttta tgcagctggt    1440

    gccttggaaa tggcagcagt gtctgctttt cttcaaccag gagcacctag gccatatcct    1500

    gctcattaca tggatacagc aattcagaca tacagagata tctgcaagaa tatggtgttg    1560

    gctgaaagat gtgtgttgct tagtgctgaa cttttaaaaa gccaaagcaa atattcagag    1620

    gctgcagctc tcctaatacg gttgaccagt gaggattctg atcttcgaag tgcacttctt    1680

    ttggaacagg cagcacattg ctttataaac atgaaaagtc ccatggttag aaaatatgca    1740

    tttcatatga tattggcagg ccatcgattt agtaaagcag ggcagaaaaa gcatgcttta    1800

    cgctgttatt gtcaagccat gcaagtttac aaaggaaaag gctggtctct tgcagaggat    1860

    cacattaatt tcactattgg gcgccagtcc tatactctta gacagctgga taatgctgtg    1920

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    ttcctcagag aatatcttta tgtttacaag aatgtaagtc agctgtcacc agatggtcct    2040

    ttgccacagc ttcctttacc gtatattaac agttcagcaa cacgggtttt ttttggccat    2100

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    aacaaaggag taattccatc caattttcat cccacacaat actgtttgaa cagttactca   2280

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    agaaaccctt tgaaagttct acttttgttg actgatttgt cattgctttg gaagtttcat   2400

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    ggtcctcgac ttaacaacac aaaagaagag aaaacatctg ttaaatatgg ccctgatcga   2760

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    tactgaaatc cacaataatc agtttttgct ggatgggttt tacagcagta tttgatatac   4440

    ctaacttgtt atggaggttg attgatatct gatccctgca aaatactttg acttgtcatt   4500

    ttgttgatga tgcaaagcac gttggactga gaatacttaa cattcttttt ctgtatttct   4560

    ttaaaccctg agaataattt acatgctcat aatacaggat atcagcatat ttgtgcacct   4620

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    tatacgaata ttaggagatg attctgagaa aggaaaggcc ttgttggcag tactcctgtt   4740

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    ttcatatttc agtatttggt ggtccctatg acttatacat aactttgt                4908

    <210>17

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    <212>DNA

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    <222>(30)..(30)

    <223>各种碱基

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    <223>各种碱基

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    <223>各种碱基

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    <223>各种碱基

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    cctttgaaat gcaccaaatg aattgagttt gtaattaaaa aaattttttt tccctttcag    600

    tcattgtctt atatgcttag catagatttg cagctcagta gtatatgtgt tcctagaatg    660

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    cctttctgaa aacaaaggat ttttaaatca ctttatgcac atatacaaca taggaggttg   1440

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    <223>各种碱基

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    gatgaatcct tagattccaa gactactttg acatcagatg agtcagtaaa ggaccacact   240

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    ttcagggata agtaactctt acctaaactg agctgaatgt ttgtttcagt gccatatgga   2700

    ataacaactt tcagtggctt ttttttttct tttctggaaa catatgtgag acactcagag   2760

    taatgtctac tgtatccagc tatctttctt ggatcctttt ggtcattatt tcagtgtgca   2820

    taagttctta atgtcaacca tctttaaggt attgtgcatc gacactaaaa actgatcagt   2880

    gtaaaaagga aaacccagtt gcaagtttaa acgtgttcga aagtctgaaa atagaacttg   2940

    ccttttaagt taaaaaaaaa aaaagctatc ttgaaaatgt tttggaactg cgataactga   3000

    gaaactctta ccagtccaca tgcaattaga catattcagc atatttgtta ttttaaaagg   3060

    gagggttggg aggtttctta ttggtgattg tcacacggta taccatactc ctctccttca   3120

    aagaatgaaa ggccttgtta aggagttttt tgtgagcttt acttctttgg aatggaatat   3180

    acttatgcaa aaccttgtga actgactcct tgcactaacg cgagtttgcc ccacctactc    3240

    tgtaatttgc ttgtttgttt tgaatataca gagccttgat ccagaagcca gaggatggac    3300

    taagtgggag aaattagaaa acaaaacgaa ctctggttgg ggtactacga tcacagacac    3360

    agacatactt ttcctaaagt tgaagcattt gttcccagga tttattttac tttgcatttc    3420

    cttttgcaca aagaacacat caccatttcc ttttgcacaa agaacacatc acc           3473

    <210>24

    <211>401

    <212>DNA

    <213>人

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(252)..(252)

    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(303)..(303)

    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc feature

    <222>(390)..(390)

    <223>各种碱基

    ttagattatt ttcaatttat tattcagaat aaatatatct tttttcttta acttctcaaa    60

    tagttattga attgtattgg tttaaattaa atgcgtcatg tgtatatatc agtattaatt    120

    caagagatac aaaaggaaat tgagtgaaaa ataagtctgc ctccttccca tcactctcat    180

    gtctctacct agaggcaatt attgtcaaca gtttttgatg tgtctttcaa aaaatagtcc    240

    attaagcctg gngtactaga tctcttttaa aagtttacaa cctgttacag aatatatata    300

    aangttcaat tactagtaac accttattac agatacagat tacaacttag gaaatatatt    360

    ttcatggacc attgatgtca tttggattcn cccctacaat c                        401

    <210>25

    <211>1820

    <212>DNA

    <213>人

    <400>25

    aatgtcttag aaaaaggctt tctaaaagaa aaagagcaag aggccatttc ttttcaagat    60

    agatacaaag aacttcagga aaaacataaa caagaattgg aagacatgag gaaagctggt    120

    cacgaagccc tcagcattat tgtggatgaa tataaggcac tactgcagtc ttcagttaag    180

    caacaagtag aagctattga aaaacagtac atttctgcaa ttgagaaaca ggcacacaag    240

    tgtgaggagt tgctaaatgc tcagcatcag aggctccttg aaatgctaga tacagagaag    300

    gaactgttaa aagaaaaaat aaaggaagct ttgattcagc aatctcaaga acagaaggaa    360

    atattggaaa agtgtttgga ggaagaaagg caaagaaata aagaggcatt agtatccgct    420

    gcaaagcttg aaaaagaagc agtgaaggat gcagttttaa aagtcgtaga agaagaaaga    480

    aaaaatttag aaaaagcgca tgctgaagaa agggaattat ggaagacaga acatgcaaaa    540

    gatcaagaaa aagtatctca ggaaattcaa aaagctatac aagaacaaag aaaaataagt    600

    caggaaactg ttaaggcagc aataatagaa gagcagaaac gaagtgaaaa ggctgtggaa    660

    gaggcagtga aaagaacaag agatgaattg atagagtata taaaagaaca gaaaaggctc    720

    gatcaagtca tccgccaaag aagcctgtcc agtttggaac tgttcctctc ctgtgcacag    780

    aaacagttaa gtgctttaat agctacggaa ccagttgaca ttgaataaaa agaacatgac    840

    aaacccacac tggcattgga taaatcatat tacaccttca aaatacacac tctgaattat    900

    aaagatgtgt ttgttttctt tccaaatcat gtagaattga tttccagttc aaggataaac    960

    caaaacaata tttagaacta tcaagtgatc taatttattt tcttttggtt tcttctttac    1020

    atttactgtt attttattat tattagtagt agcagcaaca gagtatgata tgacccaaaa    1080

    gccattgtaa agtgccacat taccaaaatt aattaagtaa actttatagc ctgtgggagt    1140

    ctattatata ttattttgca aaagtagtaa atatattatt gtttcatgat gactcttgat    1200

    gagatgctag aatgtaacca tacatttatc ttattttgag gatagaaata gcatggattt    1260

    caacatcact tatttatctg tataattgga aataaaacac cgatatgata gagaatcatt    1320

    ccggcattac ctaacctctt ctgcagttgg atctatgtat tttcattggt ctactgaaaa    1380

    cgaacaatac aattaaaagc actaaagatt attatattaa ttcaactttg atctgatata    1440

    tcacttaaac taaaggggtg tgtgtggtgt atgcttgttt cctatttctg ctctttaaag    1500

    atactttgaa tcaataaaac cattagtcta caaatcaaat tgtgaactta atctctagaa    1560

    agagaatata actcagccat ttataggaat ttaggttcaa gtacaggata tatgaaatct    1620

    tttcccagta tttcagaatg tacttaattc acaggcagga tgcttcaatg caaaatcatg    1680

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    attttctgaa atgcatctac tttcatgggc tttgtacgtt tctgagattt ctcagtgtaa    1800

    taaaaagagc tcccaaactt                                                1820

    <210>26

    <211>280

    <212>DNA

    <213>人

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(237)..(237)

    <223>any kind of base

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(261)..(261)

    <223>any kind of base

    <400>26

    tcaagtcata agataaagtt taatcatttg atcatgttaa aagacacaaa acacagccaa    60

    tctaaccaaa tttcaggcat gcatttacat aaatatatta aattaagaaa agaaattgta    120

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    tctctgcatt taccacttca agatacaatt gttctatttt aaagataaca caaactncac    240

    tagtctggtt aggaatttat ntgcattata catatattat                          280

    <210>27

    <211>392

    <212>DNA

    <213>人

    <400>27

    ttggtttgaa atggcacccc aggactttgg gcctgcctta cttgatagcc tcgttcagtg    60

    agcaaagact tagtgagcag ctcttgtatg ccaagtattt tgctaagctc tggaaaaaag    120

    ataaacaaga catggttctt gctttcaagg agtgtgtaat tctttagcca gatatggaaa    180

    cctggaccct gagtgggaga aaggagacag atgaaaggag tccgtgattt tgtaaccaag    240

    agctgcctgc atggttatga gtatcactga ttttagggac gcccacagag ctaaagcatt    300

    tttttaatcc gagaagactt ttgtaactca tattagttaa tcttctagct ctgagatagc    360

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    <210>28

    <211>2299

    <212>DNA

    <213>人

    <400>28

    cgaaccccca cagctggagg gcgaggccag ctgtacccgg ccccagtgcc ctttcgcggc    60

    cacaagcggc cgtcctcctg gtccggtgct ccggcgcctg atctaggttc atggagccgg    120

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    agtctgggga tgctggcagg cgcggcgtgt cccaggcccc cactgcagcc agatctgagg    240

    gggactgtga agagactgtg gctggccctg gcgaggagac tgtggctggc cctggcgagg    300

    ggactgtggc cccgacagca ctgcagggtc caagccctgg aagccctggg caggagcagg    360

    cggccgaggg ggcccctgag caccaccgat ccaggcgctg cacgtgcttc acctacaagg    420

    acaaggagtg tgtctactat tgccacctgg acatcatttg gatcaacact cccgaacaga    480

    cggtgcccta tggactgtcc aactacagag gaagcttccg gggcaagagg tctgcggggc    540

    cacttccagg gaatctgcag ctctcacatc ggccacactt gcgctgcgct tgtgtgggga    600

    gatatgacaa ggcctgcctg cacttttgca cccaaactct ggacgtcagc agacaggttg    660

    aagtcaagga ccaacaaagc aagcaggctt tagacctcca ccatccaaag ctcatgcccg    720

    gcagtggact cgccctcgct ccatctacct gcccccgctg cctctttcag gaaggagccc    780

    cttaggagga caggcctgca gcatcctggt ctcgggaggc ttctgtcatt gctcacacac    840

    agttcagatt tccacctctt tatagacaag aagtgaattt gcctggggca gaacacccac    900

    ccaaagagtc cccacttaac aatacccccc ccccacggca agaatgccca aatccgaatg    960

    accccagttt tcctaatgag taaaatgatc ccagatgtgc cccagagcat gacgcctgca   1020

    gctccggttt catgcaggaa attggttttg gagagttttg gcaagttgga aagccactta   1080

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    tgtaaacaca tgtccatctt gtaataaatg caaaatgccc gtgcagcaga agcatgcgac   1200

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    ggctttagac acagatcata gctctacagg agtttatgaa tttgaagctt atgggatttt   1320

    ggcagagaaa ttttcagctg tgcttgatac ccaccaaaag aatgtatctc gaaagaatga   1380

    aggaagaaga aaaaaggatc cttgatgttt gtgacaagaa aatgagaaag ttagtatctg   1440

    caatacagag cttgttcctg ttcagtgact gaccctctgt attctgtata gacaccaggc   1500

    cgatacacag tggagttccc aggccttgtt tgcaggaagc cgactgtaaa gacagcccca   1560

    gctcaaggct attaggttga atatttgctt tcatgagtaa atgtggatct ttggggaatg   1620

    gcttcaaaat aagtcacgaa cacaaattct ttgtaaatta tgtaaattcc tgtttatata   1680

    aattggcaac aacttatacc gtctgacagt tcaaaatctc tttcagctgc gctcttccca   1740

    ccgagccgag cttactgtga gtgtggagat gttatcccac catgtaaagt cgcctgcgca   1800

    ggggagggct gcccatctcc ccaacccagt cacagagaga taggaaacgg catttgagtg   1860

    ggtgtccagg gccccgtaga gagacattta agatggtgta tgacagagca ttggccttga   1920

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    tatcatgagg aaatgaaagt ggctgatttg ctggtaggat tttgtacagt ttagagaagc   2040

    gattatttat tgtgaaactg ttctccactc caactccttt atgtggatct gttcaaagta   2100

    gtcactgtat atacgtatag agaggtagat aggtaggtag attttaaatt gcattctgaa   2160

    tacaaactca tactccttag agcttgaatt acatttttaa aatgcatatg tgctgtttgg   2220

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    tgtcaaaagc ctaataaaa                                                2299

    <210>29

    <211>1339

    <212>DNA

    <213>人

    <400>29

    ctaaacaaaa tcattcactt ccctgatttt gataagaaaa ttcctgtaaa gctgtttcct   60

    ctgcctctcc tctacgttgg aaaccacata agtggattat caagcacaag taaattaagc   120

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    ggggctttca tagcagctgg gtctgacctt gcttttaact tagaaggcta tatttttgta   300

    ttcctgaatg atatcttcac atcagcaaat ggagtttata ccaaacagaa aatggaccca   360

    aaggagctag ggaaatacgg agtacttttc tacaatgcct gcttcatgat tatcccaact   420

    cttattatta gtgtctccac tggagacctc caacaggcta ctgaattcaa ccaatggaag   480

    aatgttgtgt ttatcctaca gtttcttctt tcctgttttt tggggtttct gctgatgtac    540

    tccacggttc tgtgcagcta ttacaattca gccctgacga cagcagtggt tggagccatc    600

    aagaatgtat ccgttgccta cattgggata ttaatcggtg gagactacat tttctctttg    660

    ttaaactttg tagggttaaa tatttgcatg gcagggggct tgagatattc ctttttaaca    720

    ctgagcagcc agttaaaacc taaacctgtg ggtgaagaaa acatctgttt ggatttgaag    780

    agctaaagag tctgcagcag gattggagac tgacttgtga ctgcgggctg ggggggcatt    840

    cccagtagga atgtgaagcc agaggtttcg gattcgtgac atccaccccc tgggcaagtg    900

    agagcatctg caaatgcaa  agagaactac ctcatatgca ggatgagcca atggcagtct    960

    caagaaatgt actcgggcga caccttacct gtggaaagca aatcttttca aaataagcca    1020

    ctgggactcg gtaggtggag ccccagctgc tcttctaggg acctatgggg ccttcgtggc    1080

    atctctgtgc tgtgtgctgg ggaggaggtt gatgtaatgg tgactctttt ctgatcagca    1140

    ccttggccgt gattcccaag gtcccagcca aagcaaaggg ccagttgttt cagtttaaac    1200

    agacatgtct ttagtctaat aaaattagtt aactgccagt aaagttattt gttagctttg    1260

    atgaaagcta tgttggtatc tttccctaat catcaaagta aataaaaaat catttctatg    1320

    taaaaaaaaa aaaaaaaaa                                                 1339

    <210>30

    <211>4250

    <212>DNA

    <213>人

    <400>30

    gaacacatcg cgtttgcatc ccagaaagta gtcgccgcga ctatttcccc caaagagaca    60

    agcacacatg taggaatgac aaaggcttgc gaaggagaga gcgcagcccg cggcccggag    120

    agatcccctc gataatggat tactaaatgg gatacacgct gtaccagttc gctccgagcc    180

    ccggccgcct gtccgtcgat gcaccgaaaa gggtgaagta gagaaataaa gtctccccgc    240

    tgaactacta tgaggtcaga agccttgctg ctatatttca cactgctaca ctttgctggg    300

    gctggtttcc cagaagattc tgagccaatc agtatttcgc atggcaacta tacaaaacag    360

    tatccggtgt ttgtgggcca caagccagga cggaacacca cacagaggca caggctggac    420

    atccagatga ttatgatcat gaacggaacc ctctacattg ctgctaggga ccatatttat    480

    actgttgata tagacacatc acacacggaa gaaatttatt gtagcaaaaa actgacatgg    540

    aaatctagac aggccgatgt agacacatgc agaatgaagg gaaaacataa ggatgagtgc    600

    cacaacttta ttaaagttct tctaaagaaa aacgatgatg cattgtttgt ctgtggaact    660

    aatgccttca acccttcctg cagaaactat aagatggata cattggaacc attcggggat    720

    gaattcagcg gaatggccag atgcccatat gatgccaaac atgccaacgt tgcactgttt    780

    gcagatggaa aactatactc agccacagtg actgacttcc ttgccattga cgcagtcatt    840

    taccggagtc ttggagaaag ccctaccctg cggaccgtca agcacgattc aaaatggttg    900

    aaagaaccat actttgttca agccgtggat tacggagatt atatctactt cttcttcagg    960

    gaaatagcag tggagtataa caccatggga aaggtagttt tcccaagagt ggctcaggtt   1020

    tgtaagaatg atatgggagg atctcaaaga gtcctggaga aacagtggac gtcgttcctg   1080

    aaggcgcgct tgaactgctc agttcctgga gactctcatt tttatttcaa cattctccag   1140

    gcagttacag atgtgattcg tatcaacggg cgtgatgttg tcctggcaac gttttctaca   1200

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    gatgaacgag ttcctaagcc caggccaggt tgctgtgctg gctcatcctc cttagaaaga   1380

    tatgcaacct ccaatgagtt ccctgatgat accctgaact tcatcaagac gcacccgctc   1440

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    tctctgtatg ttgcgttctc tacctgtgtg ataaaggttc cccttggccg gtgtgaacga   1800

    catgggaagt gtaaaaaaac ctgtattgcc tccagagacc catattgtgg atggataaag   1860

    gaaggtggtg cctgcagcca tttatcaccc aacagcagac tgacttttga gcaggacata   1920

    gagcgtggca atacagatgg tctgggggac tgtcacaatt cctttgtggc actgaatgac   1980

    atttcaactc ctctaccaga taatgaaatg tcttacaaca cagtgtatgg gcattccagt   2040

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    atggcgctgg aggaccaggc cgccacactg gagtataaga ccatcaagga acatctcagc   2880

    agcaagagtc ccaaccatgg ggtgaacctt gtggagaacc tggacagcct gccccccaaa   2940

    gttccacagc gggaggcctc cctgggtccc ccgggagcct ccctgtctca gaccggtcta   3000

    agcaagcggc tggaaatgca ccactcctct tcctacgggg ttgactataa gaggagctac   3060

    cccacgaact cgctcacgag aagccaccag gccaccactc tcaaaagaaa caacactaac   3120

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    cccgccccgc agagggtgga ctccatccag gtgcacagct cccagccatc tggccaggcc   3240

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    aagcgtacgc cctcgctaaa gccggacgta ccccccaaac catcctttgc tcccctttcc   3360

    acatccatga agcccaatga tgcgtgtaca taatcccagg gggagggggt caggtgtcga   3420

    accagcaggc aaggcgaggt gcccgctcag ctcagcaagg ttctcaactg cctcgagtac   3480

    ccaccagacc aagaaggcct gcggcagagc cgaggacgct gggtcctcct ctctgggaca   3540

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    acttcagtta tcatcacaaa catgagccaa aagcacatac ctaccccatc ccccaccccc   3720

    acacacacac acacatgcac acaacacata cacacacacg cacagaggtg aacagaaact   3780

    gaaacatttt gtccacaact tcacgggacg tggccagact gggtttgcgt tccaacctgc   3840

    aaaacacaaa tacatttttt aaaatcaaga aaatttaaaa agacaaaaaa aaaagaattc   3900

    attgataatt ctaactcaga ctttaacaat ggcagaagtt tactatgcgc aaatactgtg   3960

    aaatgcccgc cagtgttaca gctttctgtt gcagcagata aatgccatgt tgggcaacta   4020

    tgtcatagat ttctgctcct cctctctttt aatgaaataa cgtgaccgtt aacgcaagta   4080

    actctttatt tattgttcac cctttttttc cttaaggaaa ggactcttcc aaatatcatc   4140

    ctatgaacag ctcttcagaa agcccattga aagttaaact atttaacgtg aaatccatta   4200

    actggaataa ttgagtttct ttatttttac aataaattca ctgagtaaat              4250

    <210>31

    <211>2785

    <212>DNA

    <213>人

    <400>31

    ctttagccca acagtcaaaa ataattgatg ctaccctaca aatgtccaaa actctagtat   60

    atcatatttc taagttacag caaatattag tcctgctaaa ccagggagct ttggcaaaaa   120

    tgttttttga cagtaaattt gtccttgatt atatattaac tagtcaaaga ggtgtttgta   180

    acattattag agcttcttgt tgtaggtggg ttaacaccac caatcaagag gtcattctaa   240

    cagaaagcct ggatcagaaa accatcaccc taaaaaaaca tgccttacat atttaacaca   300

    ctctgaaatc cagtcaaaat atgactaaag gcccttgcca tgactgatgt attctcctgg   360

    ccaacgccaa acaaatggga gcctggttac gagtcagcct tcagggactt gtcacatttc   420

    tacttggttt cttccttgtt attgtcataa taaaatgttt tctatgctgt ttagtgcaac   480

    ttaggcccta ttctgtagaa gtctcctcta ctattcaggc cactcaaaca ccccaaataa   540

    ttgagttcaa aatcgacatc aagatataaa ggaatcagtg actaaatata tttcatatat   600

    ggtattttta ttgattattg tgctgtcttg acctagtatg gaggccttgg ctagaggctg    660

    gtcagtttcc tctcttgagc agctgattaa atccacaccc caaccacttc ccttatcagg    720

    ttctcacact ctggggccac tatgtaccca ctctaatcac cacagggcca gacatcagac    780

    aattaaggac agcgcccatg ccccaaagcc cgccaaaatt atgcaaatta ttcaaaatta    840

    ttcaacctag ctaaccccac cctttttgct gtacataagc tgcccattcc ccctccagcc    900

    tgtggtaccc agtcctcagg tgcaaccccc tgcgtggtcc tctgtggcag ccttctctca    960

    ttcagagctg ttttccacag aggtagtgaa aagaactgga ttttcaagtt cactttgcaa    1020

    gagaaaaaga aaactcagta gaagataatg gcaagtccag actggggata tgatgacaaa    1080

    aatggtcctg aacaatggag caagctgtat cccattgcca atggaaataa ccaatcccct    1140

    gttgatatta aaaccagtga aaccaaacat gacacctctc tgaaacctat tagtgtctcc    1200

    tacaacccag ccacagccaa agaaattatc aatgtggggc attctttcca tgtaaatttt    1260

    gaggacaacg ataaccgatc agtgctgaaa ggtggtcctt tctctgacag ctacaggctc    1320

    tttcagtttc attttcactg gggcagtaca aatgagcatg gttcagaaca tacagtggat    1380

    ggagtcaaat attctgccga gcttcacgta gctcactgga attctgcaaa gtactccagc    1440

    cttgctgaag ctgcctcaaa ggctgatggt ttggcagtta ttggtgtttt gatgaaggtt    1500

    ggtgaggcca acccaaagct gcagaaagta cttgatgccc tccaagcaat taaaaccaag    1560

    ggcaaacgag ccccattcac aaattttgac ccctctactc tccttccttc atccctggat    1620

    ttctggacct accctggctc tctgactcat cctcctcttt atgagagtgt aacttggatc    1680

    atctgtaagg agagcatcag tgtcagctca gagcagctgg cacaattccg cagccttcta    1740

    tcaaatgttg aaggtgataa cgctgtcccc atgcagcaca acaaccgccc aacccaacct    1800

    ctgaagggca gaacagtgag agcttcattt tgatgattct gagaagaaac ttgtccttcc    1860

    tcaagaacac agccctgctt ctgacataat ccagttaaaa taataatttt taagaaataa    1920

    atttatttca atattagcaa gacagcatgc cttcaaatca atctgtaaaa ctaagaaact    1980

    taaattttag ttcttactgc ttaattcaaa taataattag taagctagca aatagtaatc    2040

    tgtaagcata agcttatctt aaattcaagt ttagtttgag gaattcttta aaattacaac    2100

    taagtgattt gtatgtctat ttttttcagt ttatttgaac caataaaata attttatctc    2160

    tttctttctg ttgtgcattc agtttctaaa accattaagt ttctactcca tttacattca    2220

    aaaatcttaa atactttact tgcaagagta ttttgcttca aatacaacaa cctaagagca    2280

    gctggagatg aaatattggg aaattcattt gcttactcct gaagacaaaa atatagctga    2340

    gatgaccact ggatttaata tcgttatgct ggcccaacat tgctaccatt tgtgttgtct    2400

    gtgatcaaaa tgattatctt ttatatagga agatgacgct tctggatatt gctttcactt    2460

    cttctcccca cgttagcaag gacaatgctt ctctgccatt attacaacta gttagtttgc    2520

    atggagaatc tttactttaa aattggaaga aaagtcacaa gtgaatggtt tataaaaatg    2580

    ctaaagaagt cattcttgct tagaatcata tagaaacatc atgcaatctt ttagtcagat    2640

    gtgcgcttca ccttatgcta tttttatctt taattgacac acaataattg tacatgttta    2700

    tggagtatag tgtggtgttt tctgtttgtt tgtttgtttt ttgagacaag gtctcactct    2760

    gccagtcagg gtggagtgcg atggt                                          2785

    <210>32

    <211>9588

    <212>DNA

    <213>人

    <400>32

    ccgaccaaca ccaacaccca gctccgacgc agctcctctg cgcccttgcc gccctccgag    60

    ccacagcttt cctcccgctc ctgcccccgg cccgtcgccg tctccgcgct cgcagcggcc    120

    tcgggagggc ccaggtagcg agcagcgacc tcgcgagcct tccgcactcc cgcccggttc    180

    cccggccgtc cgcctatcct tggccccctc cgctttctcc gcgccggccc gcctcgctta    240

    tgcctcggcg ctgagccgct ctcccgattg cccgccgaca tgagctgcaa cggaggctcc    300

    cacccgcgga tcaacactct gggccgcatg atccgcgccg agtctggccc ggacctgcgc    360

    tacgaggtga ccagcggcgg cgggggcacc agcaggatgt actattctcg gcgcggcgtg    420

    atcaccgacc agaactcgga cggctactgt caaaccggca cgatgtccag gcaccagaac    480

    cagaacacca tccaggagct gctgcagaac tgctccgact gcttgatgcg agcagagctc    540

    atcgtgcagc ctgaattgaa gtatggagat ggaatacaac tgactcggag tcgagaattg    600

    gatgagtgtt ttgcccaggc caatgaccaa atggaaatcc tcgacagctt gatcagagag    660

    atgcggcaga tgggccagcc ctgtgatgct taccagaaaa ggcttcttca gctccaagag    720

    caaatgcgag ccctttataa agccatcagt gtccctcgag tccgcagggc cagctccaag    780

    ggtggtggag gctacacttg tcagagtggc tctggctggg atgagttcac caaacatgtc    840

    accagtgaat gtttggggtg gatgaggcag caaagggcgg agatggacat ggtggcctgg    900

    ggtgtggacc tggcctcagt ggagcagcac attaacagcc accggggcat ccacaactcc    960

    atcggcgact atcgctggca gctggacaaa atcaaagccg acctgcgcga gaaatctgcg    1020

    atctaccagt tggaggagga gtatgaaaac ctgctgaaag cgtcctttga gaggatggat    1080

    cacctgcgac agctgcagaa catcattcag gccacgtcca gggagatcat gtggatcaat    1140

    gactgcgagg aggaggagct gctgtacgac tggagcgaca agaacaccaa catcgctcag    1200

    aaacaggagg ccttctccat acgcatgagt caactggaag ttaaagaaaa agagctcaat    1260

    aagctgaaac aagaaagtga ccaacttgtc ctcaatcagc atccagcttc agacaaaatt    1320

    gaggcctata tggacactct gcagacgcag tggagttgga ttcttcagat caccaagtgc    1380

    attgatgttc atctgaaaga aaatgctgcc tactttcagt tttttgaaga ggcgcagtct    1440

    actgaagcat acctgaaggg gctccaggac tccatcagga agaagtaccc ctgcgacaag    1500

    aacatgcccc tgcagcacct gctggaacag atcaaggagc tggagaaaga acgagagaaa    1560

    atccttgaat acaagcgtca ggtgcagaac ttggtaaaca agtctaagaa gattgtacag    1620

    ctgaagcctc gtaacccaga ctacagaagc aataaaccca ttattctcag agctctctgt    1680

    gactacaaac aagatcagaa aatcgtgcat aagggggatg agtgtatcct gaaggacaac    1740

    aacgagcgca gcaagtggta cgtgacgggc ccgggaggcg ttgacatgct tgttccctct   1800

    gtggggctga tcatccctcc tccgaaccca ctggccgtgg acctctcttg caagattgag   1860

    cagtactacg aagccatctt ggctctgtgg aaccagctct acatcaacat gaagagcctg   1920

    gtgtcctggc actactgcat gattgacata gagaagatca gggccatgac aatcgccaag   1980

    ctgaaaacaa tgcggcagga agattacatg aagacgatag ccgaccttga gttacattac   2040

    caagagttca tcagaaatag ccaaggctca gagatgtttg gagatgatga caagcggaaa   2100

    atacagtctc agttcaccga tgcccagaag cattaccaga ccctggtcat tcagctccct   2160

    ggctatcccc agcaccagac agtgaccaca actgaaatca ctcatcatgg aacctgccaa   2220

    gatgtcaacc ataataaagt aattgaaacc aacagagaaa atgacaagca agaaacatgg   2280

    atgctgatgg agctgcagaa gattcgcagg cagatagagc actgcgaggg caggatgact   2340

    ctcaaaaacc tccctctagc agaccagggg tcttctcacc acatcacagt gaaaattaac   2400

    gagcttaaga gtgtgcagaa tgattcacaa gcaattgctg aggttctcaa ccagcttaaa   2460

    gatatgcttg ccaacttcag aggttctgaa aagtactgct atttacagaa tgaagtattt   2520

    ggactatttc agaaactgga aaatatcaat ggtgttacag atggctactt aaatagctta   2580

    tgcacagtaa gggcactgct ccaggctatt ctccaaacag aagacatgtt aaaggtttat   2640

    gaagccaggc tcactgagga ggaaactgtc tgcctggacc tggataaagt ggaagcttac   2700

    cgctgtggac tgaagaaaat aaaaaatgac ttgaacttga agaagtcgtt gttggccact   2760

    atgaagacag aactacagaa agcccagcag atccactctc agacttcaca gcagtatcca   2820

    ctttatgatc tggacttggg caagttcggt gaaaaagtca cacagctgac agaccgctgg   2880

    caaaggatag ataaacagat cgactttaga ttatgggacc tggagaaaca aatcaagcaa   2940

    ttgaggaatt atcgtgataa ctatcaggct ttctgcaagt ggctctatga tcgtaaacgc   3000

    cgccaggatt ccttagaatc catgaaattt ggagattcca acacagtcat gcggtttttg   3060

    aatgagcaga agaacttgca cagtgaaata tctggcaaac gagacaaatc agaggaagta   3120

    caaaaaattg ctgaactttg cgccaattca attaaggatt atgagctcca gctggcctca   3180

    tacacctcag gactggaaac tctgctgaac atacctatca agaggaccat gattcagtcc   3240

    ccttctgggg tgattctgca agaggctgca gatgttcatg ctcggtacat tgaactactt   3300

    acaagatctg gagactatta caggttctta agtgagatgc tgaagagttt ggaagatctg   3360

    aagctgaaaa ataccaagat cgaagttttg gaagaggagc tcagactggc ccgagatgcc   3420

    aactcggaaa actgtaataa gaacaaattc ctggatcaga acctgcagaa ataccaggca   3480

    gagtgttccc agttcaaagc gaagcttgcg agcctggagg agctgaagag acaggctgag   3540

    ctggatggga agtcggctaa gcaaaatcta gacaagtgct acggccaaat aaaagaactc   3600

    aatgagaaga tcacccgact gacttatgag attgaagatg aaaagagaag aagaaaatct   3660

    gtggaagaca gatttgacca acagaagaat gactatgacc aactgcagaa agcaaggcaa   3720

    tgtgaaaagg agaaccttgg ttggcagaaa ttagagtctg agaaagccat caaggagaag   3780

    gagtacgaga ttgaaaggtt gagggttcta ctgcaggaag aaggcacccg gaagagagaa   3840

    tatgaaaatg agctggcaaa ggtaagaaac cactataatg aggagatgag taatttaagg   3900

    aacaagtatg aaacagagat taacattacg aagaccacca tcaaggagat atccatgcaa   3960

    aaagaggatg attccaaaaa tcttagaaac cagcttgata gactttcaag ggaaaatcga   4020

    gatctgaagg atgaaattgt caggctcaat gacagcatct tgcaggccac tgagcagcga   4080

    aggcgagctg aagaaaacgc ccttcagcaa aaggcctgtg gctctgagat aatgcagaag   4140

    aagcagcatc tggagataga actgaagcag gtcatgcagc agcgctctga ggacaatgcc   4200

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    ctgagtaagg taagaaacaa ttatgatgag gagatcatta gcttaaaaaa tcagtttgag   4380

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    accagtggct accgggctca gatagacaat ctcacccgag aaaacaggag cttatctgaa   4500

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    gagaggactg tgaaggacca ggatatcacg cggttccaga actctctgaa agagctgcag   4980

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    caaaagcagg ctttagaggc atctaatagg attcaggaat caaagaatca gtgtactcag   5700

    gtggtacagg aaagagagag ccttctggtg aaaatcaaag tcctggagca agacaaggca   5760

    aggctgcaga ggctggagga tgagctgaat cgtgcaaaat caactctaga ggcagaaacc   5820

    agggtgaaac agcgcctgga gtgtgagaaa cagcaaattc agaatgacct gaatcagtgg   5880

    aagactcaat attcccgcaa ggaggaggct attaggaaga tagaatcgga aagagaaaag   5940

    agtgagagag agaagaacag tcttaggagt gagatcgaaa gactccaagc agagatcaag   6000

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    aaaacaacct tggacaaact attgaagggg aagaagtcag tggaagaagt tgcttctgaa   6300

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    gagagaatta aggacttcct ccagggttca agctgcatag caggcatata caatgagacc   7080

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    ctggagaaaa tctccattac agaaggtata gagcggggca tcgttgacag catcacgggt   8220

    cagaggcttc tggaggctca ggcctgcaca ggtggcatca tccacccaac cacgggccag   8280

    aagctgtcac ttcaggacgc agtctcccag ggtgtgattg accaagacat ggccaccagc   8340

    gtgaagcctg ctcagaaagc cttcataggc ttcgagggtg tgaagggaaa gaagaagatg   8400

    tcagcagcag aggcagtgaa agaaaaatgg ctcccgtatg aggctggcca gcgcttcctg   8460

    gagttccagt acctcacggg aggtcttgtt gacccggaag tgcatgggag gataagcacc   8520

    gaagaagcca tccggaaggg gttcatagat ggccgcgccg cacagaggct gcaagacacc   8580

    agcagctatg ccaaaatcct gacctgcccc aaaaccaaat taaaaatatc ctataaggat   8640

    gccataaatc gctccatggt agaagatatc actgggctgc gccttctgga agccgcctcc   8700

    gtgtcgtcca agggcttacc cagcccttac aacatgtctt cggctccggg gtcccgctcc   8760

    ggctcccgct cgggatctcg ctccggatct cgctccgggt cccgcagtgg gtcccggaga   8820

    ggaagctttg acgccacagg gaattcttcc tactcttatt cctactcatt tagcagtagt   8880

    tctattgggc actagtagtc agttgggagt ggttgctata ccttgacttc atttatatga   8940

    atttccactt tattaaataa tagaaaagaa aatcccggtg cttgcagtag agtgatagga   9000

    cattctatgc ttacagaaaa tatagccatg attgaaatca aatagtaaag gctgttctgg   9060

    ctttttatct tcttagctca tcttaaataa gcagtacact tggatgcagt gcgtctgaag   9120

    tgctaatcag ttgtaacaat agcacaaatc gaacttagga tttgtttctt ctcttctgtg   9180

    tttcgatttt tgatcaattc tttaattttg gaagcctata atacagtttt ctattcttgg   9240

    agataaaaat taaatggatc actgatattt tagtcattct gcttctcatc taaatatttc   9300

    catattctgt attaggagaa aattaccctc ccagcaccag cccccctctc aaacccccaa   9360

    cccaaaacca agcattttgg aatgagtctc ctttagtttc agagtgtgga ttgtataacc   9420

    catatactct tcgatgtact tgtttggttt ggtattaatt tgactgtgca tgacagcggc   9480

    aatcttttct ttggtcaaag ttttctgttt attttgcttg tcatattcga tgtactttaa   9540

    ggtgtcttta tgaagtttgc tattctggca ataaactttt agactttt                9588

    <210>33

    <211>366

    <212>DNA

    <213>人

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(351)..(351)

    <223>各种碱基

    <400>33

    gaagtgccat ttatatttat acaaaaatat tacataattc agttagtatt ggtgacataa    60

    tttagttagt atgggtgata taatggtcat aatttttagc atctaataaa gatcttttta    120

    tgagtcccat ataaaatatg tgaacaaagc aatcttgtca taagatttgt gatgatttag    180

    gagaaagtac tttgagataa tttttttctg tctctttgtg aactctctca acagtagttc    240

    tctttagatt agagccagca ggtcggccat aacagttttc ttcaaatttg ggcaacagtt    300

    atacaaatgc ttgaatttca agacaacata ttaaagggtc tatgaactgg naatctaacc    360

    tgggtt                                                               366

    <210>34

    <211>1466

    <212>DNA

    <213>人

    <400>34

    agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtgtc accatgtggg tcccggttgt    60

    cttcctcacc ctgtccgtga cgtggattgg tgctgcaccc ctcatcctgt ctcggattgt    120

    gggaggctgg gagtgcgaga agcattccca accctggcag gtgcttgtgg cctctcgtgg    180

    cagggcagtc tgcggcggtg ttctggtgca cccccagtgg gtcctcacag ctgcccactg    240

    catcaggaac aaaagcgtga tcttgctggg tcggcacagc ctgtttcatc ctgaagacac    300

    aggccaggta tttcaggtca gccacagctt cccacacccg ctctacgata tgagcctcct    360

    gaagaatcga ttcctcaggc caggtgatga ctccagccac gacctcatgc tgctccgcct    420

    gtcagagcct gccgagctca cggatgctgt gaaggtcatg gacctgccca cccaggagcc    480

    agcactgggg accacctgct acgcctcagg ctggggcagc attgaaccag aggagttctt    540

    gaccccaaag aaacttcagt gtgtggacct ccatgttatt tccaatgacg tgtgtgcgca    600

    agttcaccct cagaaggtga ccaagttcat gctgtgtgct ggacgctgga cagggggcaa    660

    aagcacctgc tcgggtgatt ctgggggccc acttgtctgt aatggtgtgc ttcaaggtat    720

    cacgtcatgg ggcagtgaac catgtgccct gcccgaaagg ccttccctgt acaccaaggt    780

    ggtgcattac cggaagtgga tcaaggacac catcgtggcc aacccctgag cacccctatc    840

    aaccccctat tgtagtaaac ttggaacctt ggaaatgacc aggccaagac tcaagcctcc    900

    ccagttctac tgacctttgt ccttaggtgt gaggtccagg gttgctagga aaagaaatca    960

    gcagacacag gtgtagacca gagtgtttct taaatggtgt aattttgtcc tctctgtgtc    1020

    ctggggaata ctggccatgc ctggagacat atcactcaat ttctctgagg acacagatag    1080

    gatggggtgt ctgtgttatt tgtggggtac agagatgaaa gaggggtggg atccacactg    1140

    agagagtgga gagtgacatg tgctggacac tgtccatgaa gcactgagca gaagctggag    1200

    gcacaacgca ccagacactc acagcaagga tggagctgaa aacataaccc actctgtcct    1260

    ggaggcactg ggaagcctag agaaggctgt gagccaagga gggagggtct tcctttggca    1320

    tgggatgggg atgaagtaag gagagggact ggaccccctg gaagctgatt cactatgggg    1380

    ggaggtgtat tgaagtcctc cagacaaccc tcagatttga tgatttccta gtagaactca    1440

    cagaaataaa gagctgttat actgtg                                         1466

    <210>35

    <211>187

    <212>DNA

    <213>人

    <400>35

    gatctggtgc attccggtcg acactctcgt ttatttggac tgtaagtctg acctctatga    60

    ataattactt cagcccctga gtgctcccgg gccaagctcc ttggccaaac tttcacctta    120

    gcttctgata agtcttgggc caagctaagc agcatctatc aatcatccct tcagctcctg    180

    attgatc                                                              187

    <210>36

    <211>2913

    <212>DNA

    <213>人

    <400>36

    actgggtacc gaggactggg tgtgtttaag gcagacagcc aggtgaggat cccagctact    60

    ggggcctgct gtcatctcct gggagtaccc gggggtcagg agcctagggg actcttgcac    120

    ttcacatcca gccatgctaa ttacactttt tggcaaagga aacagctagg agcagtttct    180

    ttcactccta cagccccgtt ttctcagtgt ttagacctcg aattattact gggctagagg    240

    gaaggcagcc tctgaagtgt ggcaggagga ggggaagtct gcctgcatct tggtgtgtct    300

    gtcagatgcc agcactaata acctggcttc tgtgaggcct gtcagtgctc tcaggaatga    360

    aaggggaccc ctgagaggtg ctcagtacca gcaggctgtg aatgctctct acccaccacc    420

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    cccgaaagac cccaaggcag tctgcccctt gtccagccac acgccagcac ccaccctcct    540

    ggcccctgcc tcggcctccc cagaccagct gcacccagcc cccaacacgc accccttctc    600

    cagatgtgtg cagggcctca ttttgcagag caaagacaga tgtttcagcc acacgcttta    660

    ttaacttcta aaacctgtgc tcaggacact cttcaacagt catgaaaagt ttgatcactt    720

    gccacagtca ggacctttgt gtggggctct gatctgatgt tcggtctcat catctcccaa    780

    accagcagtc gtttgtaccc caaccctctg ctcaggggct cataccccca aatgattttc    840

    ctgatttatg tatttcccta caaagggctt tctataccta gcatctgcct ccagcatgag    900

    aagggggaat aggtgagacc catttgccag tagcagacgg ggaccctggg gagaaaatgg    960

    cagagcctgt tggagactcc ctgtctccag ctgaccagcc aatgggattc ctcttccctc    1020

    cactgtctcc cacaaagtag aagaatcctg gtacatttag cccatgagcc tggcacagat    1080

    ccctatctag acatgaggcc ctttagacat gactttggca ttgaccagcc tgttggcaat    1140

    gggtcgggga ggcagagggg atgctcacac cagtaattct catcccctga atgcttggga    1200

    tcacctgggg agagttcaca aaatactggt gcaggggtcc cacctctgat gatgctgagt    1260

    ggtgggtctg gggtgtggcc caggcatcat gatgtttcag gcccccaggt gacttcttag    1320

    gcagcccagc taagccccta gagccttgca atttccccca aatgacctca gagggcccga    1380

    tttgagggaa atgcctaact tcaggggccg taagaatccc ccagggagca tgtgaaatgc   1440

    agataccagg cccaccccca gagatgagct gaggtgggtc aggggtgaag tgcagggatc   1500

    agtgtttttc acaagctcca tacctccagg aaatggtgtt gtggttgggc ccgtagaaaa   1560

    cattctgaga gtcctgttgc ctgtgccttg gtgcacgtgg ggtggaatcc cagtggccct   1620

    gccttgagga ggatgtgcat taacgtggta ggggagacag agacagctcc acctgccccc   1680

    tgtcccaccg gggacctcca aaaacttcat ggatgttaga gcaagcagcc atgctgcagc   1740

    agaggatgag gctggcggat ttagtaagag ccctctgtgt ttgggctgag ttctttctct   1800

    agttgccctg tcatctggcc tctggataac ccacctctcc tccctcatcc taaaattaca   1860

    gatggcgaaa gacggccaca tttagtgaga cccctaaggt cctccaacta gggtgggtcc   1920

    acagtggccc ctggtgcatg gaccacacac tctcttccct cctctggctc aggactacgg   1980

    tctgaaatta gggagatatg aatgtctttc ttgaaaactt ctcttcccag tcttcccact   2040

    ttgcttgggg gtccttggtc aaggccagct ttggactagg gcttgttgcg actaccagct   2100

    gtctcatttt gctgtactgc aaactcaggc ttggttccaa gcttatgggg gccctgtcct   2160

    tcccctagta gggtttgttt tggggtcaca tctggtcata cccttcagag agctcttccc   2220

    cagcctctac atcagggaga gaggtaggta gggaggagca ttcaaggatt agaagaagga   2280

    ctaaagtaca acagccttgg aggaactgcc aggaactaag ggcgagcact ggagaaggca   2340

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    ttctaggtat ttctgattgc aaaattctgg atgggttcat ccaagctgac ctttgctgtt   2520

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    gggcagtcag cagtggttat caggatcctg gctctatggg ttgccttcct cctggtctgt   2640

    aaagcccctg caggcaggga cttcttagat agctgcttcc ttagggcatg gcatgtggtg   2700

    ggtggttaat gaatggaaga gagggaatga gtgatcaagg gagggaggag ggagtggagt   2760

    ggagatttct catcctttcc tgttaattta tgacatcctc ctgcctatga gtccttgact   2820

    ctggagtttt acaaagcagt cacatttcaa ataaaagtct gggaaagcaa cacatcatcg   2880

    ccaactttta attttgctaa ataaggatat tag                                2913

    <210>37

    <211>1466

    <212>DNA

    <213>人

    <400>37

    agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtgtc accatgtggg tcccggttgt   60

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    catcaggaac aaaagcgtga tcttgctggg tcggcacagc ctgtttcatc ctgaagacac   300

    aggccaggta tttcaggtca gccacagctt cccacacccg ctctacgata tgagcctcct    360

    gaagaatcga ttcctcaggc caggtgatga ctccagccac gacctcatgc tgctccgcct    420

    gtcagagcct gccgagctca cggatgctgt gaaggtcatg gacctgccca cccaggagcc    480

    agcactgggg accacctgct acgcctcagg ctggggcagc attgaaccag aggagttctt    540

    gaccccaaag aaacttcagt gtgtggacct ccatgttatt tccaatgacg tgtgtgcgca    600

    agttcaccct cagaaggtga ccaagttcat gctgtgtgct ggacgctgga cagggggcaa    660

    aagcacctgc tcgggtgatt ctgggggccc acttgtctgt aatggtgtgc ttcaaggtat    720

    cacgtcatgg ggcagtgaac catgtgccct gcccgaaagg ccttccctgt acaccaaggt    780

    ggtgcattac cggaagtgga tcaaggacac catcgtggcc aacccctgag cacccctatc    840

    aaccccctat tgtagtaaac ttggaacctt ggaaatgacc aggccaagac tcaagcctcc    900

    ccagttctac tgacctttgt ccttaggtgt gaggtccagg gttgctagga aaagaaatca    960

    gcagacacag gtgtagacca gagtgtttct taaatggtgt aattttgtcc tctctgtgtc    1020

    ctggggaata ctggccatgc ctggagacat atcactcaat ttctctgagg acacagatag    1080

    gatggggtgt ctgtgttatt tgtggggtac agagatgaaa gaggggtggg atccacactg    1140

    agagagtgga gagtgacatg tgctggacac tgtccatgaa gcactgagca gaagctggag    1200

    gcacaacgca ccagacactc acagcaagga tggagctgaa aacataaccc actctgtcct    1260

    ggaggcactg ggaagcctag agaaggctgt gagccaagga gggagggtct tcctttggca    1320

    tgggatgggg atgaagtaag gagagggact ggaccccctg gaagctgatt cactatgggg    1380

    ggaggtgtat tgaagtcctc cagacaaccc tcagatttga tgatttccta gtagaactca    1440

    cagaaataaa gagctgttat actgtg                                         1466

    <210>38

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    <212>DNA

    <213>人

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(116)..(116)

    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(197)..(197)

    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

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    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

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    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

    <222>(429)..(429)

    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

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    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

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    <223>各种碱基

    <220>

    <221>misc_feature

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    <223>各种碱基

    <400>38

    taaggtttta taattatttt tatttttctt ttcttttttt tttatggctt ggatgacact    60

    ttattttcag atccaatact agaagttgtt tccatgttca cattttcctt cctggnttaa    120

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    atccctgggg gaataaattt tgtcttaaca agggtaaggt tngtgaaaag gatggttttg    420

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    <210>39

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    <400>39

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    tttgagaagt ctcggtcggt aagggaagtc ttccaagtcc gtgcagcact aacgtattgg    180

    cacctgcctc ctcttcggcc accccccaga tgaggcagct gtgactgtgt caagggaagc    240

    cacgactctg accatagtct tctctcagct tccactgccg tctccacagg aaacccagaa    300

    gttctgtgaa caagtccatg ctgccatcaa ggcatttatt gcagtgtact atttgcttcc    360

    aaaggatcag gggatcaccc tgagaaagct ggtacggggc gccaccctgg acatcgtgga    420

    tggcatggct cagctcatgg aagtactttc cgtcactcca actcagagcc ctgagaacaa    480

    tgaccttatt tcctacaaca gtgtctgggt tgcgtgccag cagatgcctc agataccaag    540

    agataacaaa gctgcagctc ttttgatgct gaccaagaat gtggattttg tgaaggatgc    600

    acatgaagaa atggagcagg ctgtggaaga atgtgaccct tactctggcc tcttgaatga    660

    tactgaggag aacaactctg acaaccacaa tcatgaggat gatgtgttgg ggtttcccag    720

    caatcaggac ttgtattggt cagaggacga tcaagagctc ataatcccat gccttgcgct    780

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    <400>40

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