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1、(10)申请公布号 CN 103006762 A (43)申请公布日 2013.04.03 CN 103006762 A *CN103006762A* (21)申请号 201210590793.8 (22)申请日 2012.12.31 A61K 36/489(2006.01) A61K 47/40(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 9/06(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 3/06(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 。
2、35/00(2006.01) A61P 1/06(2006.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 1/12(2006.01) A61P 15/00(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 31/20(2006.01) A61P 15/14(2006.01) (71)申请人 广东海纳川药业股份有限公司 地址 528515 广东省佛山市高明区沧江工业 园杨和园区沙水河西路 (72)发明人 周玉岩 梁剑平 陶蕾 (74)专利代理机构 北京中恒高博知识产权代理 有限公司 11249 代理人 高松 (54) 发明名称 一种苦豆子总碱包合物及其制备方法 (57。
3、) 摘要 本发明提供了一种苦豆子总碱包合物， 它是 以苦豆子总碱为客体、 - 环糊精为主体按照 1 ： 1-6 的质量比在三蒸水溶解条件下形成的包合 物。 本发明能够改善苦豆子总碱适口性差、 见光分 解性的问题， 减少了药物的见光分解性， 有利于药 物制剂的制备， 改善了药物的吸收和生物利用度。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 6 页 1/1 页 2 1. 一种苦豆子总碱包合物， 其特征在于， 它是以苦豆子总碱为客体、 - 环糊精为主体 按照 1 ： 1-6 的质量比在三蒸水溶解。
4、条件下形成的包合物。 2.根据权利要求1所述的苦豆子总碱包合物， 其特征在于， 苦豆子总碱与-环糊精的 质量比为 1 ： 2-4。 3. 权利要求 1 或 2 所述的苦豆子总碱包合物的制备方法， 其特征在于， 包括如下步骤 ： （1）原料的处理 ： 按照比例， 将 - 环糊精溶解于三蒸水中， 搅拌溶解至均匀， 所得 - 环糊精水溶液的浓度为 30%60%（g ml） ； 将苦豆子总碱溶解于三蒸水中， 搅拌溶解至均匀， 所得苦豆子总碱水溶液的浓度为 30%60%（g ml） ； （2） 将步骤 （1） 所得的所得 - 环糊精水溶液缓慢加入苦豆子总碱水溶液中， 经电动搅 拌、 超声、 高速剪切分散。
5、乳化、 磁力搅拌， 搅拌 1-2 小时， 使得完全包合 ； （3） 将步骤 （2） 所得的包合物溶液经过真空干燥箱 60干燥、 冷冻干燥或喷雾干燥， 获 得苦豆子总碱包合物。 4. 根据权利要求 3 所述的苦豆子总碱包合物的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1）中 - 环糊精水溶液的浓度为 40%50%（g ml） ； 苦豆子总碱水溶液的浓度为 40%50% （g ml） 。 权 利 要 求 书 CN 103006762 A 2 1/6 页 3 一种苦豆子总碱包合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种包合物， 具体地， 涉及一种苦豆子总碱包合物及其制备方法。 背景技术 0002 苦。
6、豆子为多年生豆科草本植物， 苦豆子的干燥全草及种子。苦豆子广泛分布于甘 肃、 宁夏、 新疆、 西藏、 内蒙古等地。全草夏季采收， 种子春季采收， 干燥。全草生用， 种子炒 用。近年来国家将苦豆子列入重点保护的六大地道药材之一， 纳入国家中药现代化科技产 业行动计划中， 对于生产基地建设和深层次开发都有长足的发展。苦豆子味极苦、 性寒有 毒， 具有清热解毒， 抗菌消炎、 止痛杀虫等作用。民间用根治疗喉痛、 咳嗽、 痢疾及湿疹等。 目前用于药物开发的主要有 8 种生物碱 ： 槐果碱， 苦参碱， 氧化苦参碱， 氧化槐果碱一， 槐胺 碱， 槐定碱， 莱曼碱， 苦豆碱。苦豆子生物碱的药理作用 ： 1、 。
7、对中枢神经系统的作用， 体现在 镇静催眠、 镇痛及降温 ； 2、 对心血管系统的作用， 体现在抗心律失常、 正性肌力作用， 降压和 降低心率作用， 对心肌缺血和梗塞的保护作用， 降血脂作用 ； 3、 抗病毒、 抗炎及免疫抑制作 用， 苦豆子总碱能抑制多种病毒繁殖增强免疫调节功能和免疫促进作用 ； 4、 抗肿瘤作用， 对肝癌细胞抑制作用明显， 对宫颈癌、 淋巴肉瘤、 肺癌也有抑制作用 ； 5、 对平滑肌的作用， 苦 豆子总碱和一些单体生物碱均能对抗由炎症介质诱导的离体回肠收缩， 对支气管平滑肌具 有松弛作用， 对整体模型也有作用 ： 6、 目前临床应用苦豆子浸膏片、 苦豆碱治疗急性菌痢， 槐果碱。
8、片治疗支气管哮喘， 苦参碱治疗妇科炎症、 苦参素注射液治疗慢性乙型病毒性肝炎 均取得很好的疗效， 苦豆子总碱灌注液用于治疗奶牛乳房炎的研究已开发成功。 0003 苦豆子总碱具有多种药理活性， 其有效治疗浓度较低， 适合研制成多种新型现代 制剂应用于临床， 但苦豆子总碱有效部位极易见光分解， 尤其总生物碱含量高时， 更容易 见光分解， 适口性差， 对药物制剂的开发及生物利用度将受到影响和限制， 因此减少适口性 差、 见光分解性以提高药效意义重大。 发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷， 提供了一种苦豆子总碱包合物及其 制备方法， 它能够改善苦豆子总碱适口性差、 见光分解性的。
9、问题， 减少了药物的见光分解 性， 有利于药物制剂的制备， 改善了药物的吸收和生物利用度。 0005 为了解决上述技术问题， 本发明提供了如下的技术方案 ： 苦豆子总碱包合物， 它是以苦豆子总碱为客体、 - 环糊精为主体按照 1 ： 1-6 的质量比 在三蒸水溶解条件下形成的包合物。 0006 优选地， 苦豆子总碱与 - 环糊精的质量比为 1 ： 2-4。 0007 苦豆子总碱包合物的制备方法， 包括如下步骤 ： （1）原料的处理 ： 按照比例， 将 - 环糊精溶解于三蒸水中， 搅拌溶解至均匀， 所得 - 环糊精水溶液的浓度为 30%60%（g ml） ； 将苦豆子总碱溶解于三蒸水中， 搅拌溶。
10、解至均匀， 所得苦豆子总碱水溶液的浓度为 说 明 书 CN 103006762 A 3 2/6 页 4 30%60%（g ml） ； （2） 将步骤 （1） 所得的所得 - 环糊精水溶液缓慢加入苦豆子总碱水溶液中， 经电动搅 拌、 超声、 高速剪切分散乳化、 磁力搅拌， 搅拌 1-2 小时， 使得完全包合 ； （3） 将步骤 （2） 所得的包合物溶液经过真空干燥箱 60干燥、 冷冻干燥或喷雾干燥， 获 得苦豆子总碱包合物。 0008 优选地， 步骤 （1） 中 - 环糊精水溶液的浓度为 40%50%（g ml） ； 苦豆子总碱水 溶液的浓度为 40%50%（g ml） 。 0009 以下为相关。
11、实验 ： 苦豆子总碱 - 环糊精包合物的确认和分析 ： 1、 苦豆子总碱 - 环糊精包合物的确证 （1） 苦豆子总碱 - 环糊精包合物呈水溶性。 0010 （2） 将苦豆子总碱用乙酸乙酯溶解， 苦豆子总碱 - 环糊精包合物用水溶解， 然后 将二者用硅胶 G 薄层板分析， 展开剂为高沸点石油醚 （60-90） ， 结果苦豆子总碱可以展开， 苦豆子总碱-环糊精包合物仍停留在原点未展开， 证明苦豆子总碱被包合于-环糊精。 0011 苦豆子总碱的包合工艺优化试验 ： 1.1 苦豆子总碱提取物的测定 苦豆子总碱 取本品约 0.15g， 精密称定， 置烧杯中， 加盐酸 0.2mol/L5ml 溶解， 移入。
12、 分液漏斗中， 用水 10ml 分数次洗涤烧杯， 洗液与溶液合并， 加氯化钠 6g， 摇散， 再加入氢 氧化钠液 1mol/l5ml， 用氯仿振摇提取 5 次分别为 25ml、 20ml、 10ml、 10ml、 10ml 分取的氯 仿层依次通过塞有脱脂棉并盛有 1g 无水硫酸钠的玻璃漏斗， 滤入另一分液漏斗中， 合并 氯仿液， 精密加入硫酸滴定液 0.05mol/L20ml 及水 10ml。振摇提取后， 分出酸层， 氯仿层 用水洗涤三次， 每次 10ml。合并酸液及洗液， 置锥形瓶中， 水浴加热除去残留的氯仿， 放 冷至室温， 加甲基红指示剂 2 滴， 用氢氧化钠滴定液 0.1mol/l 滴。
13、定， 每 1ml 硫酸滴定液 0.05mol/l 相当于 24.84mg 的 C15H21N2O。 槐定碱 按照高效液相色谱法中国药典 2000 年版二部附录 VID 测定。 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱 Spherisorb 氨基柱 ； 以乙 腈 - 磷酸水溶液 PH2- 无水乙醇 80:8:10 为流动相 ； 检测波长 220nm ； 槐定碱和其他生物 碱的分离度应符合要求 ； 相对标准差应小于 2.0。 测定法 取本品 25mg， 精密称定， 置 100ml 量瓶中， 用乙腈 - 无水乙醇 8:1 溶解并稀释至刻度， 摇匀。精密量取 20l 注入液 相色谱仪， 记录色谱图 ； 另取槐。
14、定碱对照品约 10mg， 精密称定， 置 100ml 量瓶中， 用上述溶 剂溶解并稀释至刻度， 摇匀， 同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中槐定碱 C15H24N2O 的含量。 0012 1.2 包合方法的选择 试验拟分别采用搅拌法、 超声法和研磨法制备包合物， 并计算其包合率， 公式如下 ： 包 合物包合率 （包合物中苦豆子总碱量 / 投入的苦豆子总碱量） 100%。 0013 1.2.1 搅拌法将苦豆子总碱用适量水溶解， 在磁力搅拌器中缓慢加入 - 环糊精 溶液中， 在室温下避光搅拌 1h， 所得混合液冷冻干燥即得包合物， 计算包合率。 0014 1.2.2 精确称量 - 环糊精溶于适。
15、量三蒸水中， 精确称量苦豆子总碱， 用适量水溶 解后加入到 - 环糊精溶液中， 常温下超声至 2h， 计算包合率。 0015 1.2.3 研磨法将 - 环糊精用适量蒸馏水溶解后研成糊状， 苦豆子总碱用水溶解， 说 明 书 CN 103006762 A 4 3/6 页 5 加入上述糊状物中充分研磨 1h， 挥去水后， 糊状物变成半固体， 将此物减压抽滤， 滤饼在 60烤箱干燥至恒重， 然后计算包合率。 0016 1.3 单因素试验 通过单因素试验确定影响， 包合率主要因素 （包合时间、 反应温度、 投料比和三蒸水的 适合范围， 为苦豆子总碱与 - 环糊精的包合正交试验提供数据。 0017 1.3。
16、.1 投料比 （A） 选取 3 个不同质量比 （1 1， 1 2， 1 3） 处理的苦豆子总碱， 在相同条件下 （反应温度 30） 采用磁力搅拌器搅拌 2h 制备包合物， 并计算包合率。 0018 1.3.2 包合温度 （B） 根据投料比试验结果按摩尔比 1 2 取苦豆子总碱和 - 环 糊精， 混和搅拌 2h 的相同条件下， 选取 3 个不同包合温度 （20， 30， 40） 制备包合物， 并计算包合率。 0019 1.3.3 反应时间 （C） 根据包合温度试验结果取苦豆子总碱和 - 环糊精 （质量比 1 2） ， 用磁力搅拌法在不同搅拌时间 （1h， 2h， 3h） 下制备包合物， 并计算包。
17、合率。 0020 包合物最佳制备工艺的选择根据单因素考察结果以及总结文献资料， 以影响包合 率的主要因素 A（投料比， 1 X） 、 B（包合温度） 、 C（反应时间） 为考察对象， 各因素分别取 3 个水平 （表 1） ， 选用 L9（34） 进行正交试验， 以包合率为考察指标， 确定最佳制备工艺。 0021 包合物的制备采用磁力搅拌法制备包合物， 该包合物的制备在液体中进行。准确 称取苦豆子总碱 1.0 ， 加入 10 ml 三蒸水， 使其充分溶解 ； 准确称取 - 环糊精 20.0 ， 苦豆子总碱与 - 环糊精的质量比为 1 2， 加入 30 ml 三蒸水搅拌使其溶解成为溶液， 置 于磁。
18、力搅拌器上 ； 再将 - 环糊精的水滴加入到 - 环糊精溶液中， 继续搅拌一定的时间。 倒入培养皿， 放入低温冰箱过夜 ； 待结成冰后用真空冷冻干燥机制成蓬松的块状物质研碎 即得包合物。包合物要保存于干燥器中。 0022 2 结果与分析 2.1 苦豆子提取物吸光度值的测定 2.1.1 波长的确定紫外分光光度计扫描结果显示， 苦豆子提取物的水溶液在 220nm 波 说 明 书 CN 103006762 A 5 4/6 页 6 长处有强吸收峰， -环糊精在此波长处无吸收， 故确定220nm 波长为-环糊精的测定波 长。 0023 2.1.2 标准曲线的绘制经测定各稀释溶液在 220nm 波长处的吸。
19、光度， 以吸光度值 为纵坐标， 质量浓度为横坐标， 进行线性回归， 结果， 在30150g/mg范围内呈线性关系， 经拟合获得回归方程 ： Y 41897X 417536， r 0.9994。 0024 2.2 苦豆子总碱 - 环糊精制备方法的确定将用不同方法制备的包合物测定溶解 度增溶倍数和包合率。 结果表明， 包合率由高到低的顺序为磁力搅拌法研磨法超声法。 磁力搅拌法制备的苦豆子总碱 - 环糊精包合物在增溶倍数和包合率方面都优于研磨法 和超声法， 且该方法操作简便易行 ； 而研磨法对药物溶解度的提高有限， 多数药物呈分散状 态而并非被包合。因此， 试验选定磁力搅拌法制备包合物。 0025 。
20、2.3 苦豆子总碱 - 环糊精制备工艺的确定 从表 2 可以看出， - 环糊精包合苦豆子总碱的最佳工艺为 ： 投料比为 1:2 ； 温度为 30 ； 反应时间为 2 小时。 0026 苦豆子总碱稳定性试验 ： （一） 材料 1、 选 取 分 装 产 品 六 批， 批 号 分 别 为 20010112， 20010115， 20010117， 200110119， 20010121， 20010125， 进行稳定性试验。 0027 2、 采用高效红相色谱仪 （Waters,Alliance2695） ， 色谱条件与系统适用性试验色 谱柱 Spherisorb 氨基柱。 0028 3、 常规分析试。
21、剂均按苦豆子总碱质量控制标准操作。 0029 （二） 、 方法 分别将六批苦豆子总碱进行有效成分及高效液相分析， 常温储存二年后进行分析测 定。 说 明 书 CN 103006762 A 6 5/6 页 7 0030 （三） 、 试验结果 讨论 ： 苦豆子总碱化学性质稳定， 放置 2 年， 含量未改变 ； 本发明具有以下有益效果 ： 改善了苦豆子总碱适口性差、 见光分解性， 减少药物的见光分解性， 有利于药物制剂的 制备， 如制成冲剂、 液体灌注液等。提高药物的稳定性， 不少药物可因氧化、 遇热、 见光易分 解或在其他环境中降解， 用 - 环糊精包合这些药物以后， 可使得药物分子机构中的活性 。
22、基因受到保护， 从而提高药物的稳定性。 改善了药物的吸收和生物利用度， 环糊精可以用作 渗透促进剂， 改善局部给药的吸收， 增加经皮给药、 眼部给药、 黏膜给药的药物透过量， 提高 疗效。环糊精的促渗透机制不同于其他的渗透促进剂， 它是在不改变局部黏膜组织机构的 前提下， 通过增加药物在膜一侧供应室浓度， 提高药物分子的热力学活性， 从而增加药物的 通透量。 0031 环糊精是由数个 D- 吡喃葡萄糖构成的、 拥有独特的腔内疏水及腔外亲水的 “锥 筒” 状空腔的环状低聚糖。 环糊精可以与很多疏水性化合物如药物有效成分、 食品添加剂和 有机污染物等形成包合物， 从而改变其理化性质， 达到提高水溶。
23、性、 缓释、 改善稳定性等目 的。最常见的环糊精分子是分别由 6、 7 和 8 个葡萄糖残基组成的 - 环糊精、 - 环糊精 和 - 环糊精， 其中含有 7 个葡萄糖残基的 - 环糊精生产工艺简单， 成本较低， 是目前唯 一工业上能大量生产且应用较广的环糊精产品。 0032 苦豆子总碱类化合物容易包合在 - 环糊精内部， 利用 - 环糊精外部的亲水性 而使之完全溶于水中。由于苦豆子总碱类化合物分散在 - 环糊精空隙内形成包囊化， 而 使其对光、 热及氧化影响大大降低， 增加其稳定性。 具体实施方式 0033 实施例 1 苦豆子总碱包合物， 它是以苦豆子总碱为客体、 - 环糊精为主体按照 1 ：。
24、 1-6 的质量比 在三蒸水溶解条件下形成的包合物。其中， 苦豆子总碱与 - 环糊精的质量比可以为 1 ： 1、 1 ： 2、 1 ： 3、 1 ： 4、 1 ： 5 或 1 ： 6 中的任意一值， 最佳选择为 1 ： 2-4。 0034 实施例 2 苦豆子总碱包合物的制备方法， 包括如下步骤 ： （1）原料的处理 ： 按照比例， 将 - 环糊精溶解于三蒸水中， 搅拌溶解至均匀， 所得 说 明 书 CN 103006762 A 7 6/6 页 8 - 环糊精水溶液的浓度为 30%（g ml） ； 将苦豆子总碱溶解于三蒸水中， 搅拌溶解至均匀， 所得苦豆子总碱水溶液的浓度为 30% （g ml）。
25、 ； （2） 将步骤 （1） 所得的所得 - 环糊精水溶液缓慢加入苦豆子总碱水溶液中， 经电动搅 拌、 超声、 高速剪切分散乳化、 磁力搅拌， 搅拌 1 小时， 使得完全包合 ； （3） 将步骤 （2） 所得的包合物溶液经过真空干燥箱 60干燥， 获得苦豆子总碱包合物。 0035 实施例 3 苦豆子总碱包合物的制备方法， 包括如下步骤 ： （1）原料的处理 ： 按照比例， 将 - 环糊精溶解于三蒸水中， 搅拌溶解至均匀， 所得 - 环糊精水溶液的浓度为 60%（g ml） ； 将苦豆子总碱溶解于三蒸水中， 搅拌溶解至均匀， 所得苦豆子总碱水溶液的浓度为 60% （g ml） ； （2） 将步骤。
26、 （1） 所得的所得 - 环糊精水溶液缓慢加入苦豆子总碱水溶液中， 经电动搅 拌、 超声、 高速剪切分散乳化、 磁力搅拌， 搅拌 2 小时， 使得完全包合 ； （3） 将步骤 （2） 所得的包合物溶液经过喷雾干燥， 获得苦豆子总碱包合物。 0036 实施例 4 与实施例 2 不同的是， 步骤 （1） 中 - 环糊精水溶液的浓度为 40%（g ml） ； 苦豆子总 碱水溶液的浓度为 40%（g ml） ， 其余参数均相同。 0037 实施例 5 与实施例 2 不同的是， 步骤 （1） 中 - 环糊精水溶液的浓度为 50%（g ml） ； 苦豆子总 碱水溶液的浓度为 50%（g ml） ， 其余参数均相同。 0038 最后应说明的是 ： 以上所述仅为本发明的优选实施例而已， 并不用于限制本发明， 尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明， 对于本领域的技术人员来说， 其依然可 以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改， 或者对其中部分技术特征进行等同替换。 凡在本发明的精神和原则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的 保护范围之内。 说 明 书 CN 103006762 A 8 。