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1、(10)申请公布号 CN 103025170 A (43)申请公布日 2013.04.03 CN 103025170 A *CN103025170A* (21)申请号 201180034560.3 (22)申请日 2011.05.31 61/350,217 2010.06.01 US A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01) A01N 63/04(2006.01) (71)申请人 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发 展有限公司 地址 以色列耶路撒冷 (72)发明人 马格尼特莱维 阿维娃加夫尼 (74)专利代理机构 北京安信方。
2、达知识产权代理 有限公司 11262 代理人 武晶晶 杨淑媛 (54) 发明名称 作为针对各种植物病原体的生物控制剂的 PSEUDOZYMA APHIDIS (57) 摘要 在此提供了生物控制剂, 其保护植物和植物 材料免受害虫和病原体的影响并且促进植物的生 长。 还提供了包含这种生物控制剂的组合物、 用于 保护植物和植物材料并且促进在植物中的生长的 方法、 以及所述生物控制剂在制备农药组合物和 生长促进组合物中的用途。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2013.01.14 (86)PCT申请的申请数据 PCT/IL2011/000420 2011.05.31 (87)P。
3、CT申请的公布数据 WO2011/151819 EN 2011.12.08 (51)Int.Cl. 权利要求书 4 页 说明书 47 页 序列表 5 页 附图 15 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 4 页 说明书 47 页 序列表 5 页 附图 15 页 1/4 页 2 1. 一种包含生物控制剂作为有效成分的农药组合物, 该生物控制剂包含以下至少一 项 : a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; d. 来自。
4、 Pseudozyma aphids 的分泌化合物 ; e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合 ; 所述组合物任选地进一步包 含载体、 稀释剂和赋形剂。 2. 根据权利要求 1 所述的组合物, 其中所述农药组合物是用于治疗、 防止、 缓解、 抑制、 消除细菌感染或侵染或延迟其发作的杀细菌组合物。 3. 根据权利要求 2 所述的组合物, 其中所述细菌感染由以下至少一项引起 : 密执安棍 状杆菌、 根癌农杆菌、 解淀粉欧文氏菌、 丁香假单胞菌黄瓜致病变种、 丁香假单胞菌番茄致 病变种、 马铃薯疮痂病菌、 野油菜。
5、黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病 致病变种。 4. 根据权利要求 1 所述的组合物, 其中农药组合物是用于治疗、 防止、 缓解、 抑制、 消除 真菌感染或侵染或延迟其发作的杀真菌组合物。 5. 根据权利要求 4 所述的组合物, 其中所述真菌感染由以下至少一项引起 : 灰葡萄孢 菌、 指状青霉、 甘蓝链格孢菌、 疣顶单胞锈菌、 鞑靼内丝白粉菌、 核盘菌和禾冠柄锈菌。 6. 根据权利要求 5 所述的组合物, 其中所述组合物抑制真菌孢子萌发和菌丝形成中的 至少一项。 7. 根据权利要求 1 所述的组合物, 其中所述农药组合物是用于治疗、 防止、 缓解、 抑制、 消除病毒感染或侵染或延。
6、迟其发作的抗病毒组合物。 8. 一种用于在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性的组合物, 其包含一种生物控制剂 作为有效成分, 该生物控制剂包含以下至少一项 : a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合 ; 所述组合物任选地进一步包 含载体、 稀释剂和赋形剂。 9。
7、. 根据权利要求 8 所述的组合物, 其中所述组合物上调或诱导植物免疫相关基因的表 达。 10. 根据权利要求 9 所述的组合物, 其中所述植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家 族和防御素家族的至少一项。 11. 根据权利要求 1 所述的组合物, 用于在农场和工业产品中防止、 缓解、 抑制、 消除害 虫感染或侵染或延迟其发作, 从而延长所述产品的货架期或储存时间。 12. 一种用于促进在植物中的生长的组合物, 其包含一种生物控制剂作为有效成分, 该 权 利 要 求 书 CN 103025170 A 2 2/4 页 3 生物控制剂包含以下至少一项 : a.Pseudozyma aphidis 细胞。
8、或其任何分离株或突变体 ; b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合 ; 所述组合物任选地进一步包 含载体、 稀释剂和赋形剂。 13. 根据权利要求 12 所述的组合物, 其中所述组合物诱导以下至少一项的增加 : 植物 重量、 植物高度、 植物叶数、 根系、 植物粗度和植物生物量。 14. 根据权利要求 1、 8 和 12 中任一项。
9、所述的组合物, 其中所述组合物进一步包含另外 的农用药剂, 其选自下组, 该组由以下各项组成 : 除草剂、 杀虫剂、 生长刺激剂和肥料。 15. 一种治疗、 防止、 缓解、 抑制、 消除在植物或植物材料中的细菌、 真菌或害虫侵染或 延迟其发作的方法, 包括以下步骤 : 将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用 至一种植物上、 施用至一种植物材料或施用在所述植物或植物材料附近, 所述生物控制剂 包含以下至少一项 : a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; c.Pseudozyma aphidis 的条件培。
10、养基 ; d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 16. 根据权利要求 15 所述的方法, 其中所述方法用于治疗、 抑制、 消除细菌感染或侵染 或延迟其发作。 17. 根据权利要求 16 所述的方法, 其中所述细菌感染由以下至少一项引起 : 密执安棍 状杆菌、 根癌农杆菌、 解淀粉欧文氏菌、 丁香假单胞菌黄瓜致病变种、 丁香假单胞菌番茄致 病变种、 马铃薯疮痂病菌、 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病 致病变种。 18。
11、. 根据权利要求 15 所述的方法, 其中所述方法用于治疗、 抑制、 消除真菌感染或延迟 其发作。 19. 根据权利要求 18 所述的方法, 其中所述真菌感染由以下至少一项引起 : 灰葡萄孢 菌、 指状青霉、 甘蓝链格孢菌、 疣顶单胞锈菌、 鞑靼内丝白粉菌、 核盘菌和禾冠柄锈菌。 20. 根据权利要求 19 所述的方法, 其中所述方法抑制孢子萌发和菌丝形成的至少一 项。 21. 用于在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性的方法, 所述方法包括以下步骤 : 将 一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、 施用至一种植物材料或 施用在所述植物或植物材料附近, 所述生物控制剂包含以下至少。
12、一项 : a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; 权 利 要 求 书 CN 103025170 A 3 3/4 页 4 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 22. 根据权利要求 21 所述的方法, 其中所述方法上调或诱导植物免疫相关基因的表 达。 23. 根据权利要求 22 所述的方法, 其。
13、中所述植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家族 和防御素家族的至少一项。 24. 根据权利要求 15 所述的方法, 用于防止、 缓解、 抑制、 消除在农场和工业产品中的 害虫感染或侵染或延迟其发作, 从而延长所述产品的货架期或储存时间。 25. 一种用于促进在植物中的生长的方法, 其包括以下步骤 : 将一种生物控制剂或包 含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、 施用至一种植物材料或施用在所述植物或植 物材料附近, 所述生物控制剂包含以下至少一项 : a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; c.Pseudozym。
14、a aphidis 的条件培养基 ; d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 26. 根据权利要求 25 所述的方法, 其中所述方法导致以下至少一项的增加 : 植物重量、 植物高度、 植物叶数、 根系、 植物粗度和植物生物量。 27. 一种生物控制剂在制造用于防止、 缓解、 抑制、 消除害虫感染或侵染或延迟其发作 的农药组合物中的用途, 所述生物控制剂包含以下至少一项 : a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变。
15、体 ; b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 28. 根据权利要求 27 所述的用途, 其中所述农药组合物是用于治疗、 防止、 缓解、 抑制、 消除细菌感染或侵染或延迟其发作的杀细菌组合物。 29. 根据权利要求 28 所述的用途, 其中所述细菌感染由以下至少一项引起 : 密执安棍 状杆菌、 根癌农杆菌、 解淀粉欧文氏菌、 丁。
16、香假单胞菌黄瓜致病变种、 丁香假单胞菌番茄致 病变种、 马铃薯疮痂病菌、 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病 致病变种。 30. 根据权利要求 27 所述的用途, 其中所述农药组合物是用于治疗、 防止、 缓解、 抑制、 消除真菌感染或侵染或延迟其发作的杀真菌组合物。 31. 根据权利要求 30 所述的用途, 其中所述真菌感染由以下至少一项引起 : 灰葡萄孢 菌、 指状青霉、 甘蓝链格孢菌、 疣顶单胞锈菌、 鞑靼内丝白粉菌、 核盘菌和禾冠柄锈菌。 权 利 要 求 书 CN 103025170 A 4 4/4 页 5 32. 根据权利要求 27 所述的用途, 其中所述组合物在植。
17、物中针对害虫感染或侵染赋予 抗性。 33. 根据权利要求 27 所述的用途, 其中所述组合物用于防止、 缓解、 抑制、 消除在农场 和工业产品中的害虫感染或侵染或延迟其发作, 从而延长所述产品的货架期或储存时间。 34. 根据权利要求 27 所述的用途, 其中所述组合物用于促进在植物中的生长。 权 利 要 求 书 CN 103025170 A 5 1/47 页 6 作为针对各种植物病原体的生物控制剂的 PSEUDOZYMA APHIDIS 发明领域 0001 本发明涉及源自Pseudozyma aphidis的有效对抗各种植物病原体的生物控制剂。 更具体地, 本发明提供了一种包含源自 P.Ap。
18、hidis 的杀细菌、 杀真菌并且杀虫的真菌生物 控制剂的组合物, 所述组合物还用于增强植物生长、 活力和病原体抗性以及延长产品和其 他有机产品的寿命或货架期。本发明还涉及用于实现这些的方法。 0002 发明背景 0003 贯穿本申请提及的所有出版物通过引用完全结合在此, 包括在其中引证的所有参 考文献。 0004 植物病原体通过它们迅速产生农药抗性的能力而对最大化作物生产量的努力提 出了挑战, 这种能力可以导致每年巨大的产量损失。 如今, 主要研究目的之一包括开发控制 病原体的新工具。 0005 由于环境问题的缘故, 真菌生物控制剂已经变成化学品使用的重要替代物。可以 通过以下机制之一或组合。
19、来实现生物控制 : 抗生作用、 真菌寄生作用、 竞争以及在宿主中诱 导的抗性。这些机制可以阻碍病原体的生长和发育, 从而减少病害。生物控制剂的复杂作 用方式降低了病原体产生抗性的能力。生物控制剂的开发始于拮抗剂的发现, 随后是它们 的潜在生物控制活性的分离和表征。 0006 少数生物杀真菌产品是在一些国家可商业获得的, 例如 AQ10, 其含有白粉寄生 孢 (Ampelomyces quisqualis)的分生孢子, 以及 Sporodex, 其为基于酵母絮绒假酶菌 (Pseudozymaflocculosa)的分生孢子, 二者均用于控制白粉病。也存在一些基于木霉 (Trichoderma s。
20、pp.) 的产品, 如Throcodex 和Thrichopel, 它们用来对抗灰霉、 根腐病和根 枯病。然而, 生物控制的使用相对于化学杀真菌剂的使用仍然仅仅是适度的 Paulitz,T. C. 和 Belanger,.R.(2001)植物病理学年鉴 (Annu.Rev.Phytopathol.) 39:103-133。 0007 定殖于不同植物表面的附生酵母被认为具有生物控制活性并且提供对抗一些植 物病原体的天然屏障 Avis,T.J. 和 Belanger,R.R.(2001) 应用与环境微生物学 (Appl. Environ.Microbiol.) 67(2):956-960 ; Ur。
21、quhart,E.J. 和 Punja,Z.K.(2002)加拿大微生 物学杂志 (Can.J.Microbiol.) 48(3):219-229。已经证明了酵母和酵母样真菌对于采 后病害 Spadaro,D., 和 Gullino,M.L.(2004)国际食品微生物学杂志 (International Journal of Food Microbiology) 91:185-194 和 温 室 中 的 病 害 Paulitz,T.C. 和 Belanger,R.R.(2001)植物病理学年鉴 (Annu.Rev.Phytopathol.) 39(103-133) 的 生物控制活性。Pseud。
22、ozyma spp. 是与黑粉菌目 (Ustilaginales)相关的酵母小群体 Boekhout,T.(1995)普通与应用微生物学杂志 (General and Applied Microbiology) 41(359-366)。它们大多是附生的 (从空气和雨水中取得水分和养分) 或是腐生的 (生长 在死亡或腐败的有机质上并从中取得它们的营养) , 并且它们对植物和动物是不致病的 Avis,T.J. 和 Belanger,R.R.(2002)欧洲微生物学会联合会酵母研究 (FEMS Yeast Res) 2(l):5-8。最近已经发现 Pseudozyma rugulosa 和絮绒假酶菌。
23、 (P.Flocculosa) 针 说 明 书 CN 103025170 A 6 2/47 页 7 对与它们相关的不同白粉病显示出生物活性 Dik,A.J. 等人, (1998)欧洲植物病理学杂 志 (Eur.J.Plant Pathol.) 104(413-423。已经发现絮绒假酶菌 (P.Flocculosa) 分泌 一种表现出针对几种病原体的抗生素活性的特殊脂肪酸 (unusual fatty acid) Avis,T. J. 和 Belanger,R.R.(2001)Appl Environ Microbiol67(2):956-960 ; Avis,T.J. 等 人 ,(2001)植。
24、物病理学 (Phytopathology) 91(3):249-254 ; 。另一方面, Avis 等人 Avis,T.J. 等人, (2001)植物病理学 (Phytopathology) 91(3):249-254 发现没有白粉 病 (单丝壳 (Sphaerothecafuliginea) (Schlechtend.:Fr.)Pollacci) 的菌落崩溃 (colony collapse) 以及从蚜虫分泌物分离的 Pseudozymaaphidis( 分离株 CBS517.83) 没有产生抗 真菌脂肪酸。P.aphidis 是 P.rugulosa 的近亲 Begerow,D. 和 Ba。
25、uer,R.(2000)My col. Res.104(53-60), 其首次从蚜虫分 泌物分离 Henninger,W 和 Windisch,S.(1975)微生 物学文献集(Arch.Microbiol.) 105(l):47-48, 但是也已经在植物表面上发现 Allen,T. W. 等人 ,(2004)加拿大微生物学杂志 (Can.J.Microbiol.) 50(10):853-860。 0008 发明人最近从草莓叶分离出附生酵母 Pseudozyma aphidis(分离株 L12) 。分离 株 L12 与白粉病菌落崩溃相关。在此呈现的数据表明, L12 分泌在体外抑制几种真菌性和。
26、 细菌性病原体的细胞外代谢物。另外, 将 L12 孢子施用在分离的番茄叶或温室中的完整番 茄植物上显著地减少了灰葡萄孢菌 (Botrytis cinerea) 感染。因此诸位发明人进一步表 征 P.aphidis 的 L12 分离株, 将它开发为对抗植物病原体的有效生物控制剂。大量生产活 性培养物所需要的条件的特征为测试不同的温度和培养基并且通过灰葡萄孢菌生物测定 法监测孢子浓度和活性。使用显微镜检查, 测定了 P.aphidis 在宿主植物上的建立和传播。 诸位发明人还测定了在体外对抗各种病原体的 L12 的分泌部分。另外, 将 P.aphidis L12 孢子施用在温室中的番茄植物上并且验。
27、证它们在体内控制真菌性和细菌性病原体的能力。 由本发明提供的新的并且有效的生物控制剂因此可以有助于减少控制病原体所需要的化 学品的量, 并且因而可以真正地有益于农民、 消费者和环境。 0009 诸位发明人在此基于天然存在的真菌开发了P.aphidis L12作为生物控制剂的实 际应用, 该生物控制剂增加植物对真菌、 病毒、 细菌和昆虫侵染的抗性并且增强生长。呈现 的结果证明了P.aphidis L12用于控制导致作物植物的重大损伤的真菌性和细菌性植物病 原体的高潜力。此外, 这种分离株的新颖性在于它容易生产、 十分稳定并且在低浓度有效。 传统上已经用来控制食用植物病原体的化学品正在被禁用或不再。
28、是有效的, 并且不允许有 机农场主使用这些化学品。其他控制策略是不可获得或不能实行的。受环境问题和日益增 长的有机产品需求的推动, 迫切需要开发新的生物防御策略。 0010 因此, 本发明的一个目的是提供一种包含 Pseudozyma aphidis 细胞、 组分或产物 的组合物, 从而提供改进的针对病原体感染的植物抗性。 而且, 本发明进一步提供了用于治 疗、 缓解、 抑制或消除已建立的感染或侵染的组合物。 0011 本发明的另一个目的是提供一种用于诱导植物免疫应答的包含 Pseudozyma aphidis 细胞、 组分或产物的组合物。 0012 本发明的又另一个目的是提供一种用于改善植物。
29、生长和产量的包含 Pseudozyma aphids 细胞、 组分或产物的组合物。 0013 本发明的这些目的和其他目的将随着描述的继续进行而变得清楚。 0014 发明概述 说 明 书 CN 103025170 A 7 3/47 页 8 0015 诸位发明人在此证明了Pseudzyma aphidis及其产物的杀虫和促生长特性。 因此, 考虑了本发明的各个方面。 0016 在第一方面, 本发明涉及一种包含生物控制剂作为有效成分的农药组合物。该组 合物包含以下至少一项 : 0017 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; 0018 b.Pseudozyma ap。
30、hidis 孢子 ; 0019 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; 0020 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 0021 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0022 f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 该组合物任选地进一步 包含载体、 稀释剂和赋形剂。 0023 本发明的第二方面涉及一种用于在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性的组合 物。该组合物包含以下至少一项 : 0024 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; 0025 b.Pseudozyma ap。
31、hidis 孢子 ; 0026 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; 0027 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 0028 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0029 f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 这种组合物任选地进一 步包含载体、 稀释剂和赋形剂。 0030 本发明在第三方面还提供了一种用于促进在植物中的生长的组合物, 其包含一种 生物控制剂作为有效成分。该组合物包含以下至少一项 : 0031 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; 0032 b.。
32、Pseudozyma aphidis 孢子 ; 0033 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; 0034 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 0035 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0036 f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 该组合物任选地进一步 包含载体、 稀释剂和赋形剂。 0037 除了提供用于保护植物或植物材料免受病害的影响和用于促进在植物中的生长 的组合物之外, 本发明还提供了用于实现相同目的的方法。 0038 因此, 在一个另外的方面, 本发明涉及一种治疗、 防止、 缓解、 。
33、抑制、 消除在植物或 植物材料中的细菌、 真菌或害虫侵染或延迟其发作的方法。 该方法包括以下步骤 : 将一种生 物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、 施用至一种植物材料或施用在 该植物或植物材料附近, 其中该生物控制剂包含以下至少一项 : 0039 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; 0040 b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; 0041 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; 0042 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 说 明 书 CN 103025170 A 8 4/。
34、47 页 9 0043 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0044 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 0045 在另一个方面, 本发明提供了一种用于促进在植物中的生长的方法, 该方法包括 以下步骤 : 将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施 用至一种植物上、 施用至一 种植物材料或施用在该植物或植物材料附近。该生物控制剂包含以下至少一项 : 0046 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; 0047 b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; 0048 c.Pseudozyma aph。
35、dis 的条件培养基 ; 0049 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 0050 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0051 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 0052 诸位发明人还考虑了根据本发明的生物控制剂在制备杀虫并且促生长的组合物 中的用途。 0053 因此, 在一个另外的方面, 本发明是针对生物控制剂在制造用于防止、 缓解、 抑制、 消除害虫感染或侵染或延迟其发作的农药组合物中的用途。 这种生物控制剂包含以下至少 一项 : 0054 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离。
36、株或突变体 ; 0055 b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; 0056 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; 0057 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 0058 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0059 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 0060 在又一个另外的方面, 本发明是针对一种生物控制剂在制造用于促进在植物中的 生长的组合物中的用途。该生物控制剂包含以下至少一项 : 0061 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; 。
37、0062 b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; 0063 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; 0064 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 0065 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0066 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合。 0067 借助于以下附图, 本发明的这些方面和其他方面将变得清楚。 0068 附图简要说明 0069 图 1A-1B 0070 Pseudozma aphidis L12 的分离 0071 图 1A : 用白粉菌接种之前以蒸馏水 (DW) 。
38、或 L12 孢子处理的黄瓜子叶。 0072 图 1B : 在 PDA 上生长的 L12 分泌粉红色代谢物至培养基中。 0073 图 2 0074 采用可用数据库的 P.aphidis 序列比对 0075 对于 ITS1 显示 L12 分离株 (由 SEQ ID NO.5 表示) 、 P.aphids(由 SEQ ID NO.6 表 说 明 书 CN 103025170 A 9 5/47 页 10 示) 、 P.regulosa(由 SEQ ID NO.7 表示) 和 P.Antarctica(由 SEQ ID NO.8 表示) 的序列 比对。 0076 图 3A-3J 0077 P.aphid。
39、is 在 PDA 平板上和在植物上的生长 0078 图 3A : 在 PDA 培养基上生长 10 天后的 P.aphids 的光学显微镜图像。箭头标出分 泌物。 0079 图 3B : 酵母样生长形状显现在从在 PDA 上的 P.aphidis 的上方拍摄的光学显微镜 图像中。 0080 图3C : 如在光学显微镜中所见到的在PDA上的P.aphidis的束丝 (Synemata) 样外 观。 0081 图 3D : 如在 SEM 中在剖面上看到的在 PDA 上的 P.aphidis 菌丝体 / 酵母样形式。 0082 图 3E : 如在 SEM 中从上方看到的在 PDA 上的 P.aphid。
40、is 酵母样形式 0083 图 3F : 如在光学显微镜中看到的在番茄叶上生长 2 天后的 P.aphidis。 0084 图 3G : 在光学显微镜中使用血细胞计数器的在 PDB 上的孢子形状。 0085 图 3H : 在光学显微镜中使用血细胞计数器的在 YMPD 上的孢子形状。 0086 图 3I 和 3J :(SEM) 在拟南芥 (A.thaliana) 叶上生长 3 天后的 P.aphidis : 箭头指 示 P.aphidis。 0087 图 4 0088 P.aphidis 在 UV 暴露下存活 0089 使接种到PDA平板上的108个P.aphidis细胞暴露于UV持续不同的时间。
41、量 (0、 10、 20 和 30 分钟) 并且随后转移至 25 C 的培养箱中。在 3 周之后记录暴露平板的照片。 0090 缩写 : Exp.t.UV(分钟) ,(暴露于 UV 的时间 (min)) 。 0091 图 5A-5C 0092 P.aphidis 培养优化 0093 图 5A : 显示 PDB 培育的 P.aphidis 菌落直径作为培养温度和孵育时间的函数。 0094 图 5B : 显示 PDB 培育的 P.aphidis 菌落分泌物直径作为培养温度和孵育时间的函 数。 0095 图 5C : 显示在不同温度培育 21 天的 PDB 培育的 P.aphidis 的照片。 00。
42、96 缩写 : Col.Diam.(mm),(菌落直径 (mm)) ; Secret.Diam.(mm),(分泌物直径 (mm)) ; T.(d),(时间 ( 天 )) 。 0097 图 6 0098 P.aphidis 的纤维素分泌 0099 生长在用或不用纤维素膜覆盖的自来水琼脂平板上的 P.aphidis。接种后 7 天记 录细胞数。采用标准误差棒提供 10 个样品的平均数。*(p15mm2) 和叶扭曲, 但是优选地不应当杀死在施用本发明的组 合物的植物上的多于 30%、 优选地不多于 20% 的叶。术语 “植物产量” 是指植物或植物群体 的产品产量。 在一个实施方案中, 该产量可以是产。
43、品的产量, 所述产品包括但不限于完整植 说 明 书 CN 103025170 A 28 24/47 页 29 物或植物部分如根、 鳞茎、 球茎、 块茎、 叶、 插枝、 花、 茎、 果实和种子或其他繁殖材料中的一 种或多种。 0266 在第三方面, 本发明提供了用于促进在植物中的生长的组合物。本发明的组合物 包含一种生物控制剂作为活性成分, 该生物控制剂包含以下至少一项 : 0267 a.Pseudozyma aphidis 细胞或其任何分离株或突变体 ; 0268 b.Pseudozyma aphidis 孢子 ; 0269 c.Pseudozyma aphidis 的条件培养基 ; 0270。
44、 d. 来自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物 ; 0271 e.(a) 至 (d) 中任一项的任何提取物或制备品 ; 和 0272 f. 在 (a) 至 (e) 中定义的生物控制剂的至少两种的组合 ; 所述组合物任选地进一 步包含载体、 稀释剂和赋形剂。 0273 术语 “促进生长” 是指以下事实 : 在处理足够时间后, 与未处理的对照植物相比, 在 用该组合物处理的植物中的至少一个植物部分的质量是显著更大的。 0274 更具体地, 根据一个实施方案, 该组合物诱导以下至少一项的增加 : 植物重量、 植 物高度、 植物叶数、 根系、 植物粗度和植物生物量。 0275 应当理。
45、解的是, 该组合物可以在各个植物部分中促进植物生长。如在此提及的术 语 “植物部分” 是针对以下任何一项 : 叶盘、 根、 茎、 嫩枝、 叶、 花粉、 种子、 胚、 子叶、 下胚轴、 大 配子体、 愈伤组织、 分生组织以及各种形式的细胞和培养物如单细胞、 原生质体、 胚和愈伤 组织。植物组织可以处于植物中或处于器官、 组织或细胞培养物中。 0276 在一个实施方案中, 质量增加的部分是对植物商业产量有影响的部分 (果实、 籽 粒、 根、 花和叶) 。 0277 应当的理解是, 本发明的组合物可以增加木本植物的粗度、 生物量和刚性并且因 此可以适用于造纸工业中。 0278 具体而言, 增强植物生。
46、长的组合物可能以大约 1% 至大约 99.9% 之间, 更具体地以 至少大约 1%、 大约 3%、 大约 5%、 大约 7%、 大约 9%、 大约 11%、 大约 13%、 大约 15%、 大约 17%、 大 约 19%、 大约 20%、 大约 21%、 大约 23%、 大约 25%、 大约 27%、 大约 29%、 大约 30%、 大约 31%、 大 约33%、 大约35%、 大约37%、 大约39%、 大约41%、 大约43%、 大约45%、 大约47%、 大约49%、 大约 51%、 大约 53%、 大约 55%、 大约 57% 或大约 60% 增加植物的高度。更具体地, 处理可能以至少。
47、 大约 15% 至大约 25% 增加植物的高度。 0279 此外, 该组合物可能以大约 1% 至大约 99.9% 之间, 更具体地以至少大约 1%、 大约 3%、 大约5%、 大约7%、 大约9%、 大约11%、 大约13%、 大约15%、 大约17%、 大约19%、 大约21%、 大 约 23%、 大约 25%、 大约 27%、 大约 29%、 大约 30%、 大约 31%、 大约 33%、 大约 35%、 大约 37%、 大 约 39%、 大约 41%、 大约 43%、 大约 45%、 大约 47%、 大约 49%、 大约 51%、 大约 53%、 大约 55%、 大 约 57% 或大约 。
48、60% 增加植物的重量。更具体地, 处理可能以至少大约 25% 至大约 35% 增加 植物的重量。 0280 就每株植物的叶数而言, 该组合物可能以大约 1% 至大约 99.9% 之间, 更具体地以 至少大约 1%、 大约 3%、 大约 5%、 大约 7%、 大约 9%、 大约 11%、 大约 13%、 大约 15%、 大约 17%、 大 约 19%、 大约 20%、 大约 21%、 大约 23%、 大约 24%、 大约 25%、 大约 26%、 大约 27%、 大约 29%、 大 约 30%、 大约 31%、 大约 33%、 大约 35%、 大约 37%、 大约 39%、 大约 41%、 大约 43%、 大约 45%、 大 说 明 书 CN 103025170 A 29 25/47 页 30 约 47%、 大约 49%、 大约 51%、 大约 53%、 大约 55%、 大约 57% 或大约 60% 增加所述数目。更具体 地, 处理可能以至少大约 20% 至大约 30% 增加植物叶数。 0281 可以在实例 11 和图 11A-11C 中找到这样的增强的实例。 0282 该组合物也可以增强植物根系, 表示为所述植物的地下部分的重量的增加。在一 些实施方案中, 所述植物的地下部分的重量增加大约 1% 至大约 99.9% 之间, 更具体地至。