抑制癌细胞生长的中药组合物及其中药萃取物.pdf

本发明是关于抑制癌细胞生长的中药组合物及其中药萃取物，其中一态样包括：连翘、薄荷、栀子、黄芩、竹叶、甘草、大黄、朴硝以及苍术，其余态样如说明书所述。

权利要求书一种抑制癌细胞生长的中药组合物，包括：当归、川芎、白芍、生地、白术、甘草、续断、杜仲、黄芩、山药以及艾草，其中，该当归为1.5至6重量份、该川芎为1.5至6重量份、该白芍为1.5至6重量份、该生地为1.5至6重量份、该白术为1.5至6重量份、该甘草为1.5至6重量份、该续断为1.5至6重量份、该杜仲为1.5至6重量份、该黄芩为1.5至6重量份、该山药为2.5至10重量份以及该艾草为2.5至10重量份。
一种抑制癌细胞生长的中药萃取物，包括：将当归、川芎、白芍、生地、白术、甘草、续断、杜仲、黄芩、山药以及艾草混合后，以水加热萃取后滤除药渣所得的萃取物，其中，该当归为1.5至6重量份、该川芎为1.5至6重量份、该白芍为1.5至6重量份、该生地为1.5至6重量份、该白术为1.5至6重量份、该甘草为1.5至6重量份、该续断为1.5至6重量份、该杜仲为1.5至6重量份、该黄芩为1.5至6重量份、该山药为2.5至10重量份以及该艾草为2.5至10重量份。

说明书抑制癌细胞生长的中药组合物及其中药萃取物
本发明是申请号201010237141.7的分案申请
技术领域
本发明是关于抑制癌细胞生长的中药组合物及其中药萃取物，尤其是指抑制肺癌细胞生长的中药组合物及其中药萃取物。
背景技术
癌症是位于十大死因之一，已连续二十七年为居十大死因的榜首。引发癌症起因主要为：细胞变成异常，且持续的自行分裂，形成更多的异常细胞，就是癌症。
一般肿瘤细胞中，潜存些许具有干细胞特性的癌细胞，此种癌细胞虽然数量不多，但却类似干细胞，可以不断的进行癌细胞分裂及分化，因此称之为癌干细胞。由于癌干细胞具有极高的抗药性，西方医学化学治疗药物难以将其毒杀，因此，常听到许多经过化疗的病患，体内癌症复发的情形，目前生物医学已知的标准癌症疗法，对癌干细胞根本束手无策。
况且，目前西医疗法所使用的手术、放射线治疗、化学疗法、贺尔蒙疗法、生物制剂疗法等，常常对于患者身体产生强烈副作用，因此，若能使用比较温和，且能抑制癌干细胞分化的疗法，进行癌症治疗，对于病患而言将是一大福音。
现今，民众普遍认以中药对患者进行治疗，属于比较温和的治疗方法，且具有相当高的市场接受度。因此，若能发展出一种中药组合物，其经实验证实后，确实可抑制癌细胞，或阻止癌干细胞进行分裂，势必可对于癌症治疗具有相当的帮助。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抑制癌细胞生长的中药组合物及其中药萃取物，能抑制如肺癌等癌细胞生长。
为实现上述目的，本发明的一态样提供一种抑制癌细胞生长的中药组合物，包括：龙胆(Gentiana scabra Bunge)、黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、栀子(Gardenia jasminoides Ellis)、当归(Angelica sinensis Diels)、生地(Rehmannia glutinosa Libosch.f.hueichingensis(Chao et Schih)Hsiao)、木通(Hocquartia manshuriensis(Kom.)Nakai)、北柴胡(Bupleurum falcatum Linne)、车前子(Plantago asiatica Linne)、苍术(Atractylodes lancea De Candolle)、泽泻(Alisma plantago‑aquatica L. var.orientale SAM.)以及甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)。将此中药组合物进行萃取，亦即将龙胆、黄芩、栀子、当归、生地、木通、北柴胡、车前子、苍术、泽泻以及甘草混合后，以水加热萃取后滤除药渣所得的萃取物，同样可以达到抑制癌细胞生长的功效。
较佳而言，该龙胆为1.5至6重量份、该黄芩为1.5至6重量份、该栀子为1.5至6重量份、该当归为1.5至6重量份、该生地为1.5至6重量份、该木通为1.5至6重量份、该北柴胡为1.5至6重量份、该车前子为1.5至6重量份、该苍术为2至8重量份、该泽泻为2至8重量份以及该甘草为2.5至10重量份。
更佳而言，该龙胆为2至4重量份、该黄芩为2至4重量份、该栀子为2至4重量份、该当归为2至4重量份、该生地为2至4重量份、该木通为2至4重量份、该北柴胡为2至4重量份、该车前子为2至4重量份、该苍术为3至6重量份、该泽泻为3至6重量份以及该甘草为4至7重量份。
本发明另一态样提供一种抑制癌细胞生长的中药组合物，包括：连翘(Forsythia suspense(Thunb.)Vahl)、薄荷(Mentha haploclyx BRIQ.)、栀子(Gardenia jasminoides Ellis)、黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、竹叶(Lophatherum gracile Brongniart)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、大黄(Rheum palmatum Linne)、朴硝(Na2SO4)以及苍术(Atractylodes lancea De Candolle)。将此中药组合物进行萃取，亦即将连翘、薄荷、栀子、黄芩、竹叶、甘草、大黄、朴硝以及苍术混合后，以水加热萃取后滤除药渣所得的萃取物，同样可以达到抑制癌细胞生长的功效。
较佳而言，该连翘为1.5至6重量份、该薄荷为1.5至6重量份、该栀子为1.5至6重量份、该黄芩为1.5至6重量份、该竹叶为1.5至6重量份、该甘草为1.5至6重量份、该大黄为0.5至2重量份、该朴硝为0.5至2重量份以及该苍术为2至8重量份。
更佳而言，该连翘为2至4重量份、该薄荷为2至4重量份、该栀子为2至4重量份、该黄芩为2至4重量份、该竹叶为2至4重量份、该甘草为2至4重量份、该大黄为0.75至1.5重量份、该朴硝为0.75至1.5重量份以及该苍术为3至6重量份。
本发明再另一态样提供一种抑制癌细胞生长的中药组合物，包括：当归(Angelica sinensis Diels)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hortorum)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、生地(R.glutinosa Libosch.f.hueichingensis(Chao et Schih.)Hsiao)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、地骨皮(Lycium chinense Mill.Root)、丹皮(Paeonia suffruticosa Andr.Root)以及苍术(Atractylodes lancea De Candolle)。将此中药组合物进行萃取，亦即将当归、川芎、赤芍、生地、甘草、黄芩、地骨皮、丹皮以及苍术混合后，以水加热萃取后滤除药渣所得的萃取物，同样可以达到抑制癌细胞生长的功效。
较佳而言，该当归为1.5至6重量份、该川芎为1.5至6重量份、该赤芍为1.5至6重量份、该生地为1.5至6重量份、该甘草为1.5至6重量份、该黄芩为1.5至6重量份、该地骨皮为2.5至10重量份、该丹皮为2.5至10重量份以及该苍术为2至8重量份。
更佳而言，该当归为2至4重量份、该川芎为2至4重量份、该赤芍为2至4重量份、该生地为2至4重量份、该甘草为2至4重量份、该黄芩为2至4重量份、该地骨皮为4至7重量份、该丹皮为4至7重量份以及该苍术为2至8重量份。
本发明还有一态样提供一种抑制癌细胞生长的中药组合物，包括：当归(Angelica sinensis Diels)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hortorum)、白芍(Paeonia lactiflora Pall.)、生地(R.glutinosa Libosch.f.hueichingensis(Chao et Schih.)Hsiao)、白术(Atractylodes ovata De Canndolle)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、续断(Dipsacus asper Wall.)、杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)、黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、山药(Dioscorea opposita Thunb.)以及艾草(Artemisia argyi Levl.et Vant.)。将此中药组合物进行萃取，亦即将当归、川芎、白芍、生地、白术、甘草、续断、杜仲、黄芩、山药以及艾草混合后，以水加热萃取后滤除药渣所得的萃取物，同样可以达到抑制癌细胞生长的功效。
较佳而言，该当归为1.5至6重量份、该川芎为1.5至6重量份、该白芍为1.5至6重量份、该生地为1.5至6重量份、该白术为1.5至6重量份、该甘草为1.5至6重量份、该续断为1.5至6重量份、该杜仲为1.5至6重量份、该黄芩为1.5至6重量份、该山药为2.5至10重量份以及该艾草为2.5至10重量份。
更佳而言，该当归为2至4重量份、该川芎为2至4重量份、该白芍为2至4重量份、该生地为2至4重量份、该白术为2至4重量份、该甘草为2至4重量份、该续断为2至4重量份、该杜仲为2至4重量份、该黄芩为2至4重量份、该山药为4至7重量份以及该艾草为4至7重量份。
本发明另外一态样提供一种抑制癌细胞生长的中药组合物，包括：玉桂(Cinnamomum cassia Presl.)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、生姜(Zingiber officinale Roscoe)、黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)以及红枣(Ziziphus jujuba Mill.)。将此中药组合物进行萃取，亦即将玉桂、赤芍、甘草、生姜、黄芩以及红枣混合后，以水加热萃取后滤除药渣所得的萃取物，同样可以达到抑制癌细胞生长的功效。
较佳而言，该玉桂为2.5至10重量份、该赤芍为2.5至10重量份、该甘草为2.5至10重量份、该生姜为2.5至10重量份、该黄芩为1.5至6重量份以及该红枣为2.5至10重量份。
更佳而言，该玉桂为4至7重量份、该赤芍为4至7重量份、该甘草为4至7重量份、该生姜为4至7重量份、该黄芩为2至4重量份以及该红枣为4至7重量份。
本发明再另外一态样提供一种抑制癌细胞生长的中药组合物，包括：升麻(Cimicifuga heracleifolia Kam)、生地(R.glutinosa Libosch.F.hueichingensis(Chao et Schich.)Hsiao)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、丹皮(P.suffruticosa Andr.Root)以及黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)。此中药组合物进行萃取，亦即将升麻、生地、赤芍、丹皮以及黄芩混合后，以水加热萃取后滤除药渣所得的萃取物，同样可以达到抑制癌细胞生长的功效。
较佳而言，该升麻为1至4重量份、该生地为7.5至30重量份、该赤芍为5至20重量份、该丹皮为5至20重量份以及该黄芩为5至20重量份。
更佳而言，该升麻为1.5至3重量份、该生地为10至20重量份、该赤芍为8至15重量份、该丹皮为8至15重量份以及该黄芩为8至15重量份。
此外，上述中药组合物及其中药萃取物中，水的加热温度及时间、水添加的重量及水的浓缩比例没有特别限定，较佳如下所述：加热系将水加热至90‑100℃且持续60分钟至90分钟；水的重量为所萃取药材总重量的5至15倍；以及加热萃取系将水浓缩至原始重量的1/2至1/4。
附图说明
图1系本发明实施例5的处理时间与A549肺癌细胞的存活率的关系图，其中***表示经过学生氏t检测(Student’s t test)分析后，p值小于0.001。
图2显示A549肺癌细胞经过本发明实施例5不同时间的处理后，各周期的细胞所占比率，其中*、**及***分别表示经过学生氏t检测分析后，p值小于0.05、0.01及0.001。
图3显示A549肺癌细胞经过本发明实施例5处理后，周期为G0期的A549肺癌细胞的比率，其中***表示经过学生氏t检测(Student’s t test)分析后，p值小于0.001。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容，轻易地了解本发明的其它优点与功效，亦可了解以下实施例仅为说明用，并非用于限制本发明范围。本发明亦可由其它不同的具体实施例加，以施行或应用，本说明书中的各项细节，亦可基于不同观点与应用，在不悖离本发明的精神下进行各种修饰与变更。
实施例1
取药材龙胆11.25克、黄芩11.25克、栀子11.25克、当归11.25克、生地11.25克、木通11.25克、北柴胡11.25克、车前子11.25克、苍术15克、泽泻15克以及甘草18.75克，分别进行切片后，加入水1200克并加热至90℃以上，持续萃取60至90分钟后成400克，滤除药渣便可获得萃取物。
实施例2
取药材连翘11.25克、薄荷11.25克、栀子11.25克、黄芩11.25克、竹叶11.25克、甘草11.25克、大黄3.75克、朴硝3.75克以及苍术15克，分别进行切片后，加入水1200克并加热至90℃以上，持续萃取60至90分钟后成400克，滤除药渣便可获得萃取物。
实施例3
取药材当归11.25克、川芎11.25克、赤芍11.25克、生地11.25克、甘草11.25克、黄芩11.25克、地骨皮18.75克、丹皮18.75克以及苍术15克，分别进行切片后，加入水1200克并加热至90℃以上，持续萃取60至90分钟后成400克，滤除药渣便可获得萃取物。
实施例4
取药材当归11.25克、川芎11.25克、白芍11.25克、生地11.25克、白术11.25克、甘草11.25克、续断11.25克、杜仲11.25克、黄芩11.25克、山药18.75克以及艾草18.75克，分别进行切片后，加入水1200克并加热至90℃以上，持续萃取60至90分钟后成400克，滤除药渣便可获得萃取物。
实施例5
取药材玉桂18.75克、赤芍18.75克、甘草18.75克、生姜18.75克、黄芩11.25克以及红枣18.75克，分别进行切片后，加入水1200克并加热至90℃以上，持续萃取60至90分钟后成400克，滤除药渣便可获得萃取物。
实施例6
取药材升麻7.5克、生地56.25克、赤芍37.5克、丹皮37.5克以及黄芩37.5克，分别进行切片后，加入水1200克并加热至90℃以上，持续萃取60至90分钟后成400克，滤除药渣便可获得萃取物。
测试例
研究指出癌细胞中，存在一群展现干细胞特性的癌干细胞，因此，倘若只针对一般癌细胞进行治疗，肿瘤中续存的癌干细胞，因为具有干细胞的特性，仍可分化成一般的癌细胞而形成恶性肿瘤，造成治疗后癌症复发的情况；反之，假使针对癌干细胞进行治疗的话，则肿瘤中没有续存的癌干细胞，可以持续分化并补充一般癌细胞的数量，如此便可抑制肿瘤。
根据文献报导，已有学者自A549肺癌细胞株中，分离出具有干细胞特性的癌干细胞族群，因此本发明于下述实施例中，利用A549肺癌细胞株，分析本发明中药组合物的萃取物，对细胞存活率的影响，并以流式细胞仪，检测细胞周期是否受本发明中药组合物阻断，也以染色分析法，研究本发明中药组合物的萃取物，促进细胞自戕的作用，再以流式细胞仪、双荧光染色法，判断本发明中药组合物的萃取物，对癌细胞毒杀效果。
测试例1细胞存活率测试
分别以10％、20％及100％浓度的实施例1至6萃取物，针对A549肺癌细胞处理72小时后，以MTT法测定细胞存活率，实验结果如下表1所示。
表1

存活率(％)＝实验组平均吸光值/对照组平均吸光值
对照组：仅以二次水处理，未添加中药处理
上述表1的结果显示，随着医药组合物的用量越高，A549细胞在72小时处理后的细胞存活率越低。
测试例2处理时程对细胞存活的影响
由测试例1的结果，可推知实施例5的半抑制剂量为35μl，使用此半抑制剂量处理A549肺癌细胞，分别于24、48及72小时三个时间点，以MTT法检测A549肺癌细胞的存活情形，其结果如图1所示。
图1的结果显示，相较于未经实施例5处理的对照组A549肺癌细胞，经实施例5处理24、48及72小时的A549肺癌细胞，其存活率有显著的降低，且随着时间增加，存活率差异程度越大。
测试例3细胞周期阻断测试
(1)PI染色
取半抑制剂量35μl的实施例5，处理A549肺癌细胞24、48及72小时后，进行PI染色，而后以流式细胞仪检测肺癌细胞的DNA含量，经定量统计后结果如图2所示，其中，横轴的G0/G1、S、G2/M分别代表细胞周期，而纵轴则代表各周期细胞所占的比率。
本测试是观测A549肺癌细胞在实施例5(半抑制剂量)不同时间的处理下，细胞周期的分布情形。图2的结果显示，相较于未经实施例5处理的对照组A549肺癌细胞，经实施例5处理的A549肺癌细胞，无论是经过24、48或72小时，其G0/G1期的细胞比率均有显著上升，此表示实施例5可能造成A549肺癌细胞停滞在G0/G1的细胞周期。
(2)PI及Ki67抗体共染色
取半抑制剂量35μl的实施例5，处理A549肺癌细胞72小时后，进行PI及Ki67抗体共染，而后以流式细胞仪检测，以测量G0期A549肺癌细胞的细胞比率，经定量统计后结果如图3所示。
图3的结果显示，相较于未经实施例5处理的A549肺癌细胞，经实施例5处理的A549肺癌细胞中，处于G0期的细胞比率有显著的上升，此结果表示经由实施例5处理后，有较多的A549肺癌细胞离开细胞周期，进入不分裂的G0期。
由上述测试例的结果，可知本发明所提供的中药组合物及其中药萃取物，可达到抑制癌细胞生长的功效，也可让癌细胞进入分裂停滞期，进而阻止癌细胞持续分裂。
上述实施例仅为了方便说明而举例而已，本发明所主张的权利范围自应以申请的权利要求范围所述为准，而非仅限于上述实施例。