大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症的药物中的应用.pdf

摘要
申请专利号：	CN201210452525.X	申请日：	2010.02.26
公开号：	CN103202829A	公开日：	2013.07.17
当前法律状态：	实审	有效性：	审中
法律详情：	发明专利申请公开后的视为撤回IPC(主分类):A61K31/192申请公开日:20130717\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A61K 31/192申请日:20100226\|\|\|公开
IPC分类号：	A61K31/192; A61K47/48; A61P3/10; A61P13/12	主分类号：	A61K31/192
申请人：	浙江中医药大学中药饮片厂
发明人：	丛晓东; 戴德哉; 张云; 戴茵
地址：	311401 浙江省杭州市富阳东洲工业功能区3号路11号
优先权：
专利代理机构：	南京知识律师事务所 32207	代理人：	栗仲平
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内容摘要

大黄酸与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用；所述的治疗糖尿病肾病药物，是指改善微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗药物。本发明提供的良好安全性的新药；其药效将优于传统的治疗药物和治疗方法；并将开启中药超分子技术在改造重要有效成分的范例，扩大超分子技术在中药创新药物的研究和应用。本复合物简称大精酸，为新的结晶型化合物，进入体内释放出大黄酸和精氨酸；改变了大黄酸的溶解性，生物利用度提高。稳定性好。赋予大黄酸母体化合物以新的结构特征；大精酸进入体内释放出大黄酸和精氨酸。发挥大黄酸抑制多种抗炎性因子：NFκB，TNFα，ROS，EGF等，能对内皮素系统调控，改善内皮细胞的功能。

权利要求书

权利要求书
1.   大黄酸与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用；所述的治疗糖尿病肾病药物，是指改善微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗药物。

2.   根据权利要求1所述的大黄酸与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用，其特征在于，
所述的大黄酸与精氨酸的复合物为：大黄酸与L‑精氨酸的复合物；
所述的给药方式是：经口服给药；
所述的给药剂量是：50～200mg/kg。

3.   根据权利要求2所述的大黄酸与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用，其特征在于，所述的大黄酸与L‑精氨酸的复合物黄色针状结晶，熔点：254‑256℃。

说明书

说明书大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症的药物中的应用
本申请为分案申请。
原申请的申请号为：201010115021X；申请日为：2010年2月26日；发明名称为：大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病并发症药物中的应用。以下说明书除发明主题外，均为原说明书原文。
技术领域
本发明涉及一种大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症药物中应用。治疗糖尿病血管并发症药物是指：对抗发病器官病变细胞中内质网应激，抑制内皮素，ROS，和炎性物质的药物。
背景技术
糖尿病及其并发症属于常见病、多发病。糖尿病的发病率居高不下，呈高发病率的态势。中国的发病率较高。糖尿病主要是II型，侵袭中老年人群，具有高度致病性，成为高病死率的病因。II型糖尿病由于多种致病因素的作用下，形成对胰岛素耐受，而后发展成高血糖症，损害重要器官的细胞，导致并发症的出现。主要是微血管并发症和大血管并发症，涉及糖尿病心肌病，糖尿病大血管并发症，糖尿病肾病，糖尿病男性性功能低下症(睾丸病，阳痿)，糖尿病视网膜病，以及糖尿病神经病变，等。糖尿病并发症的发生率高，血管并发症构成糖尿病致死病因的大多数，约占80％以上。
目前，对糖尿病的药物治疗，不仅考虑降低高血糖症，单用降糖药治疗并不能达到满意的治疗效果，并发症仍会发展。由于糖尿病的高血糖症激活体内的细胞因子等。虽用降糖药控制血糖基本正常，细胞病变仍存在，还可能发展，使病理过程不断进行。如糖尿病肾病，虽血糖控制在正常范围内，多年后仍会发展成终末性肾病，尿毒症。另方面，单用降糖药并不能使糖尿病患者寿命延长。因此，对糖尿病患者，使用保护细胞的药物，阻断细胞因子等致病因子，治疗和防治糖尿病并发症，显得十分重要。
糖尿病并发症主要是大血管和微血管并发症。高血糖生成糖基化终末产物(AGEs)，损害血管内皮细胞，以及心肌细胞，肾系膜细胞，视网膜，睾丸等。AGEs 有氧自由基特性，损害细胞，生成ROS(反应氧自由基)及ET(内皮素)等多种细胞因子。TGFβ1上调等也参与糖尿病的细胞损害。血管内皮细胞功能损害。使NO(一氧化氮)降低，同时使ET上调。增强缩血管功能，降低舒血管功能，使血管呈痉挛状态。微血管损害，导致糖尿病肾病，视网膜病，及睾丸病。细胞因子增多成为糖尿病并发症的主要病因。
本发明所涉及的糖尿病并发症包括以下疾病：
糖尿病心肌病
糖尿病心肌病的发病率很高，致病性严重。表现心肌损害，心功能减弱，易于出现心力衰竭，病死率高。
糖尿病大血管病变；
糖尿病大血管并发症，如动脉粥样硬化等。累及颈总动脉，冠状动脉，四肢动脉，等。糖尿病血管壁中NO减少，细胞因子如内皮素增多，内膜增厚，血管壁趋于硬化。不仅使血管舒张功能降低。血管功能明显异常，呈轻度痉挛状态。而且，内膜损害易引起动脉血栓，闭塞血管。
糖尿病肾病；
糖尿病肾病是糖尿病的严重并发症，常在血糖控制到正常范围后，常常潜在的不断发展，会发展到尿毒症，后果极为严重。已公认是造成肾功能衰竭的重要病因。
糖尿病男性性功能低下症‑睾丸病
男性性功能低下已构成现代社会的一个重要问题。糖尿病，高血压和高血脂，肥胖等代谢综合症发病较多。男性性功能低下在美国，占45岁以上男性医院就诊1/3。构成全球性的医药问题。
申请人首次发现：睾丸病中ET(内皮素)表达，可分为过度和低下表达二类：ET系统上调型，多见于糖尿病性和应激性睾丸病(见后)，ET系统下调型，见于腺嘌呤性睾丸病。这差异可能对药物的治疗反应有所不同。糖尿病睾丸病与睾丸中旁分泌(paracrine)性的ET，与反应氧类(ROS)自由基的生成较多，十分相关。
糖尿病性男性性功能低下症的阳痿：阴茎海绵体病变。
男性性功能低下伴有阴茎海绵体的异常。海绵体由大量血管组成。勃起障害与NO有关。西地那非抑制5‑脂氧酶使海绵体NO增高，明显增强舒血管功能，改善勃起功能。但是，糖尿病性勃起障害。阴茎海绵体血管反应性降低，出现纤维化等，西地那非的治疗效应差。因此，要寻求其他有效地药物。海绵体勃起功能减退，由多种病因，与ET 系统和ROS上调等相关，以及，海绵体病变中细胞外基质增多，MMPs(金属蛋白酶系)和TIMPs(组织内源性金属蛋白酶抑制物)间失调等，构成致病性。
糖尿病并发症还包括：糖尿病视网膜病和糖尿病神经病变等。糖尿病和它的诸多并发症，均由于慢性炎症，发生内质网应激是本质。也与细胞因子，等增多有关。本专利申报的大黄酸精氨酸(大精酸)抑制内质网应激，故而对众多糖尿病并发症均有治疗作用。糖尿病病变中的多个分子靶点，申请人已有系统研究及系列论文中均有论述。
中国第200610106502.8号发明专利申请：“大黄酸或大黄酸类化合物的复合物、其制备方法及其在制备治疗骨关节炎药物中的应用”、中国第200610106515.5号发明专利申请：“大黄酸或大黄酸类化合物的复合物、其制备方法及其在制备预防肠粘连药物中的应用”，及中国第200610106516.X号发明专利申请：“大黄酸或大黄酸类化合物的复合物、其制备方法及其在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用”，公开了一种大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物。该复合物的结构如通式(I)：

通式(I)中的左侧部分为以下两者之一：
(1)大黄酸或大黄酸类化合物单体成分，其中的R2～R3、R6～R7有1～2个取代基为‑COOH，其余位置为任意的以下取代基：‑H，‑O‑glucose，‑OH，‑OCH3，‑CH3，其特征是R1～R8至少有2个为‑H；
(2)含大黄酸的植物提取物；
所述含大黄酸的植物提取物是指：大黄药材粉碎，用水或醇提取，过滤，滤液按酸碱法进行分离，即利用大黄类化合物不溶于酸水由沉淀而获得；而该化合物溶于碱性水中，极易与中性的蒽醌化合物分离开。
通式(I)中的M，表示含氮有机碱或碱性氨基酸，所述的大黄酸或大黄酸类化合物，与含氮有机碱或碱性氨基酸，以分子间作用力结合形成复合物；
所述的通式(I)中左侧部分的含大黄酸的有效部位，其中大黄酸的含量在50～99％范围。
以上发明尚未涉及到使用大黄酸或大黄酸类化合物的复合物治疗糖尿病并发症，包括尚未涉及对糖尿病心肌病；糖尿病大血管病变；男性性功能低下的治疗。
发明内容
本发明的目的：提供一种大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症药物中应用。治疗糖尿病血管并发症药物是指：对抗发病器官病变细胞中内质网应激，抑制内皮素，ROS，和炎性物质的药物。本发明将提供一个优良的，安全性的新药。优于传统治疗糖尿病药物；并将开启中药超分子技术，在改造中药有效成分的范例，扩大超分子技术在中药创新药物的研究和应用。该新药用于治疗糖尿病并发症，包括：糖尿病心肌病，糖尿病大血管病变，糖尿病肾病，糖尿病性男性性功能低下(睾丸病和阳痿)，糖尿病视网膜病，糖尿病神经病变的治疗，具有优良治疗效果。不仅在理论上，对本学科的发展和提升，起到积极的效应。对医药产业发展，以及医药经济竞争力提高，均有促进作用。
完成本申请发明任务的方案是：
大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症药物中应用。治疗糖尿病血管并发症药物是指：对抗发病器官病变细胞中内质网应激，抑制内皮素，ROS，和炎性物质的药物。
本发明所述的糖尿病并发症包括以下疾病：
糖尿病心肌病、糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病性男性性功能低下(睾丸病和阳痿)、糖尿病视网膜病，和/或糖尿病神经病变，等等。
具体地说，本发明所述的大黄酸或大黄酸类化合物，与精氨酸形成的复合物的制备，在治疗糖尿病多种并发症药物中应用的实例。药物治疗使用口服途径，剂量：50～200mg/kg。在糖尿病各种并发症的治疗中相同。
换言之，本发明包括：
大黄酸或大黄酸类化合物，与精氨酸化合而成的复合物，在制备治疗糖尿病心肌病药物中应用；
大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病大血管病变药物中应用；
大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病肾病药物中应用；
大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病并发的男性性功能低下(睾丸病和阳痿)药物中应用。
大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病视网膜病药物中应用。
本发明所述的大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，其中“大黄酸与精氨酸的复合物”可以简称为大精酸。
本申请所述的大黄酸精氨酸化合物与一般意义的“大黄酸盐”完全不同，该化合物生成过程不是简单的酸碱反应，这反应过程中没有脱掉一分子水形成离子键，本专利所述的反应：在两个分子之间以弱共价键作用力相结合，生成超分子化合物。大黄酸精氨酸结晶型化合物，它的元素分析结果，证明分子式：C15H8O6·C6H14N4O2。该反应过程中没有脱水。从热重分析图谱可知，大黄酸精氨酸超分子化合物为结晶性化合物(不含结晶水)。13C‑NMR谱测定数据，与大黄酸文献报道的数据比较，2位碳[d：147.37(rhein138.18)]及2位上的羧基碳[d：172.02(rhein165.06)]的化学位移，分别向低场移动约9个单位和7个单位，而精氨酸部分，由于其结构中含有中等强度的碱性基团胍基。因此推断：大黄酸的2位羧基与精氨酸的胍基成超分子新化合物，结构式见下。
化学结构：精氨酸,4,5‑二羟基‑9,10‑二氢‑9,10‑二氧‑2‑蒽羧酸

大黄中有主要的5种蒽醌成分：大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。其中，大黄酸安全性最高。为了规避除大黄酸以外的4种蒽醌类相关物质的超标，本发明中所用的大黄酸，从芦荟中提取。结果相关4种蒽醌类物质的质量均含量小于1.0％。
①大黄酸精氨酸，3批中试样品的技术指标：

本发明的大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物(大精酸)治疗糖尿病的并发症，具有以下明显效果：
大精酸改善糖尿病的并发症：
糖尿病的持续高血糖，引起多种并发症，主要由血管并发症引起，大血管并发症和微血管并发症，均与血管舒张功能减退相关。糖尿病形成后，引发多种并发症。从生物学的本质上理解，糖尿病的本身和它的多种并发症，均由于在细胞的内质网中，出现了应激。这是一种慢性炎症。大精酸治疗糖尿病的并发症，有效地对抗各种病变细胞中的内质网应激，抑制内皮素，ROS，和其它细胞因子和炎性物质。大精酸治疗糖尿病和它的并发症，从主要药效学的药效指标，到分子生物学的多个相关重要靶点，疗效都十分明显，包括逆转与糖尿病和与发病密切相关的内质网应激重要蛋白的靶点。本专利书仅列出大精酸治疗几种糖尿病并发症的主要药效学的一些指标。
以下的实施大精酸对各类糖尿病并发症治疗，糖尿病的形成的方法相同，可造成多种不同的并发症。由各个系统和器官所表现的疾病不同的指标，反映糖尿病的并发症的存在，以及大精酸的疗效。在各个并发症项下，分别表示出大精酸的治疗效果。各类糖尿病的并发症。雄性大鼠，由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。给链脲霉素4周后，糖尿病持久升高，已经引起各类并发症(早期)。在未用药物治疗组中，各种并发症发展很明显。大精酸的药物治疗在第5周后实施：在第5‑8周中，连续经口给药治疗(灌胃)：大精酸3个剂量组：50，100，200mg/kg，。用阳性药氨基胍100mg/kg作参比。糖尿病的未治疗组虽未给药，试验中大鼠均给予饮食控制的治疗方法，使未用药物治疗的大鼠，也获得适当治疗。
药效观察：对糖尿病的各种并发症，分别观察宏观的主要药效学指标，以及器官和细胞中重要生物活性分子的表达(mRNA，和蛋白)。研究工作十分详尽。但在本专利中，只显示主要药效学的数据，其它多种靶点的分子生物学数据未列出。治疗糖尿病视网膜病和糖尿病神经病变，也未列出。
大精酸对糖尿病心肌病的实施和疗效；
糖尿病心肌病的发病率很高。出现心肌损害，心功能减弱，易于出现心力衰竭。大精酸治疗糖尿病心肌病所表现的心功能障害，有明显的改善作用。同时，抑制心肌细胞凋亡，消除心肌纤维化，由于抑制异常基质金属蛋白酶2，9(MMP2，9)，抑制上调的内皮素受体，和抑制NADPH氧化酶，明显减轻心肌中氧化应激。抑制心肌凋亡：纠正凋亡相关基因BCl2，Bax的表达，及细胞色素C。和抑制心肌中内质网应激指标：Bip(Ig重链结合蛋白)，和PERK(与内质网应激相关蛋白)的上调。明显改善心肌中钙调控蛋白的异常表达下调。大精酸使上述各项指标均恢复到正常的范围内，并呈剂量依从性。
本专利仅列出主要药效学指标。下同。
参见图1～图3：A，纵坐标：心收缩功能(+dp/dtmax)，B，心舒张功能(‑dp/dt max).C，心肌中抗超氧阴离子自由基能力。横坐标：Normal‑正常组；STZ(糖尿病未治疗组)；AMG(氨基胍组)；RL，RM，，RH(大精酸低，中，高剂量组)。其它指标均未列出。
大精酸治疗糖尿病大血管病变的实施和疗效；
糖尿病大血管并发症，如动脉粥样硬化等很多见。糖尿病血管壁内皮细胞中NO减少，而细胞因子如内皮素，炎性因子增多，使血管舒张功能降低。在本专利的实施例中：大鼠糖尿病8周后，血管功能明显异常：血管收缩功能增强，血管舒张功能降低，NO生物利用度降低，呈轻度痉挛状态。经4周用大精酸和氨基胍的治疗，使血管舒张功能和NO生物利用度恢复。同时，在实施中也观察到：使血管壁中异常表达的分子生物学靶点，基本恢复到正常范围内。如：血管紧张素受体1(AT1)，内皮素A受体，NADPH氧化酶表达的异常上调；PPARα和PPARγ下调等。大精酸和氨基胍使异常表达恢复到正常范围内。
血管功能和NO生物利用度的结果，参见图4、图5：A，纵坐标：血管舒张功能。B，纵坐标：NO生物利用度降低。图中：Normal‑正常组，STZ‑糖尿病未治疗组，AMG‑氨基胍100mg/kg，灌胃；RL，RM，RH‑分别为大精酸50，100，200mg/kg，灌胃。其它分子生物学数据，均未列出。
大精酸治疗糖尿病肾病的实施和疗效；
糖尿病患者常有发生糖尿病肾病并发症的明显倾向。糖尿病肾病大鼠8周后，24h尿中微量蛋白明显增加，血中肌酐和非蛋白氮增多，提示：糖尿病肾病已很明显。同时，观察到分子生物学指标：肾脏PPARa的基因及蛋白表达，NADPH氧化酶和内皮素系统表达均上调，肾皮质的Cx43表达下调。这些靶点的异常，进一步提示糖尿病肾病的分子病变，均作为大精酸的治疗靶点。大精酸明显改善糖尿病肾病，药效与氨基胍相仿。
大精酸治疗糖尿病肾病，改善微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗作用。参见图6～图8：A，纵坐标：24h尿中白蛋白(urine albumin)。横坐标：正常组(Normal)，糖尿病肾病组(STZ，链脲霉素，制作糖尿病)，氨基胍组(AMG)，大精酸小剂量，中剂量和大剂量组(Rhein‑Arginine‑Low，Rhein‑Arginine‑middle，Rhein‑Arginine‑high)。下同。B，纵坐标：血肌酐(blood creatinine)。C，纵坐标：血非蛋白氮(BUN)。其他未列出。
大精酸治疗大鼠糖尿病性雄性性功能低下症的实施和疗效；
糖尿病患者常呈现男性性功能低下症，常由于形成糖尿病睾丸病，血中睾酮降低。在大精酸治疗的实施：糖尿病雄性大鼠8周后，明显出现血中睾酮降低，提示：糖尿病睾丸病明显，并出现了雄性性功能低下症。同时，血中LH(黄体生成素)，FSH(卵泡刺激素)也明显降低，提示：这是低促性腺激素性雄性性功能低下症，与糖尿病睾丸病变临床表现一致。已观察到：睾丸中的睾酮生物合成的相关基因表达均下调。睾丸中内皮素A受体和NADPH氧化酶，p66Shc蛋白的表达，以及反映内质网应激的PERK蛋白，均上调。睾丸细胞间的信息沟通的连接蛋白Cx43明显下调。这些结果，充分证明糖尿病睾丸病以及分子生物学靶点均发生病变。大精酸药物治疗：与阳性药氨基胍对比，大精酸对糖尿病睾丸病有很明显的治疗作用。
糖尿病睾丸病大鼠的血中睾酮，LH，FSH的显著降低，大精酸的治疗作用明显，使恢复到正常范围。参见图9～图11：A，纵坐标血清睾酮；横坐标：自左向右：正常组，糖尿病组，氨基胍治疗组，大精酸小剂量组，大精酸中剂量组，大精酸大剂量组。B，纵坐标：血清黄体生成素。横坐标同。C，纵坐标：血清卵泡刺激素。横坐标同。
大精酸治疗大鼠应激性雄性性功能低下症实施和疗效。
由于男性性功能低下，常因持久应激所致，糖尿病和代谢综合征的男性性功能低下，也与应激状态有关。故建立应激性雄性性功能低下症。
雄性大鼠皮下注射异丙肾上腺素1.0mg/kg，10天，形成雄性性功能低下症。特征为高促性腺激素性的雄性性功能低下症：血中睾酮降低，而FSH，LH上升。在最后5天(第6～10天)用大精酸治疗大鼠(30mg/kg，皮下注射)，阳性药为丙酸睾酮0.5mg/kg，皮下注射。大精酸明显改善睾丸病变，提高血中睾酮含量。抑制上升的FSH和LH。并改善睾丸内其他分子生物学指标。阳性药丙酸睾酮，只能提高血中睾酮，但不降低FSH和LH。也不改善睾丸内多个分子生物学靶点mRNA或蛋白表达改变指标。另外的实施，进行大精酸离体治疗研究：大鼠睾丸匀浆与高糖，或异丙肾上腺素温孵，损害睾丸组织，使多个分子生物学靶点mRNA或蛋白表达改变，大精酸离体治疗(温孵)，均使逆转。下图，列出部分整体试验的结果。
大精酸的整体给药，明显改善应激性睾丸病变。参见图12～图14：A，纵坐标血清睾酮；横坐标：自左向右：正常组，异丙肾上腺素(异丙)组，异丙+丙酸睾酮治疗组，异丙+大精酸治疗组。B，纵坐标：血清黄体生成素(LH)。横坐标同。C，纵坐标：血清卵泡刺激素(FSH)。横坐标同。
大精酸治疗糖尿病性阳痿(男性性功能低下的一部分)的实施和疗效：
糖尿病患者常出现勃起功能障害，呈现阳痿。大精酸治疗实施：糖尿病雄性大鼠8周，作离体阴茎海绵体制备，先以血管收缩药物使海绵体血管收缩，而后观察对乙酰胆碱的舒张反应，作为勃起能力的指标。
糖尿病大鼠的海绵体，舒张功能明显减弱(显示阳痿)，与正常组的差别很大。大精酸3个剂量治疗组，均使海绵体舒张功能明显恢复，大剂量组与氨基胍组，均能恢复到接近正常状态。同时，观察到海绵体中的分子生物学靶点的mRNA或蛋白表达改变：eNOS表达下调，iNOS上调。p66Shc，反映内质网应激，内质网应激的Bip蛋白指标上调，MMP9(基质金属蛋白酶9)和细胞连接蛋白Cx43，也上调。大精酸和氨基胍均使逆转，趋于正常。
大精酸改善海绵体的血管舒张功能的疗效，参见图15：显示海绵体的舒张功能明显降低和大精酸的治疗作用。其它未列出。图15中：纵坐标：海绵体舒张反应；STZ‑链脲霉素制作的糖尿病大鼠海绵体，Nor‑正常组，AM‑氨基胍组，high，Middle，low‑大精酸的高、中、低的3个剂量组。
大精酸的药效基础：
从芦荟中提取的大黄酸，与L‑精氨酸以氢键结合，构成超分子化合物，改善了大精酸的理化特性，保留了大黄酸的对抗炎症因子和细胞因子等活性。另方面，糖尿病的血管并发症，从机制上分析，大多由于NO的缺乏，而致血管舒张功能减弱。大精酸在体内释放出L‑精氨酸，它是NO的前体药物，可生成NO。大黄酸与大精酸形成的新化合物，具有双重作用：不仅具有大黄酸对抗炎症因子，和对抗内皮素受体的作用；并且，作为NO前体，提供NO，直接保护血管舒张功能，二者具有协同作用，加强药效。大精酸本身并无降血糖的作用，但能够明显地减轻内质网应激，供应额外的NO，有利于对抗大血管和微血管并发症发生，使转变到正常。
本发明选择大黄酸类中药活性成分，创制大黄酸类氨基酸系列衍生物新化合物，优选大黄酸精氨酸。这类化合物称为：①复合物(反应过程中不生成水，如大黄酸精氨酸复合物，不同于药剂学包裹)；②盐(旧称，广义的酸碱反应，如大黄酸精氨酸盐)；③中药超分子化合物，其定义是2种或2种以上的分子依靠分子之间的弱共价键相互作用结合的，组合成排列有序的、具有明确的微观结构和宏观特征，如大黄酸精氨酸超分子；其优点是：
(1)大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物(简称大精酸)为新的结晶型化合物，是大黄酸与精氨酸依靠之间的弱共价键，接合形成的复合物，进入体内释放出大黄酸和精氨酸(专利，见后)。
(2)大黄酸系难溶性药物，体内吸收较差，大黄酸精氨酸改变了大黄酸的溶解性，口服制剂体外溶出度明显优于大黄酸，提示药物的生物利用度提高。
(3)大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物为结晶体化合物，稳定性好。
(4)大黄酸与之疏松键合的链接分子(客体)的选择范围较广，本发明选择了安全性、协同作用好的物质，精氨酸。
(5)精氨酸与大黄酸的结合，赋予大黄酸母体化合物以新的结构特征，并能巧借母体大黄酸化合物关于作用机理、药效、药理、药代、毒理、临床应用的文献资料，提高新药的成功率，有效控制新药研发的风险。
因此，本发明提供大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物超分子新化合物，其技术依据是“中药化学+超分子化学”，不妨称“中药超分于化学”。
大黄酸精氨酸，进入体内释放出大黄酸和精氨酸。发挥大黄酸抑制多种抗炎性因子：NFκB，TNFα，ROS，EGF等，能对内皮素系统调控，改善内皮细胞的功能。
本发明的积极效果有：
大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物是创新药，对抗炎性因子和提供NO的双重功能的药物分子。改善大黄酸的溶解度，和吸收。具有复合型药效，将显示有优良的治疗睾丸病的药理作用
附图说明
图1～图3：大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物(大精酸)治疗糖尿病心肌病的疗效；
图4、图5：大精酸治疗糖尿病大血管病变，改善血管功能的疗效；
图6～图8：大精酸治疗糖尿病肾病的疗效；
图9～图11：大精酸治疗糖尿病性睾丸病的疗效；
图12～图14：大精酸治疗应激性雄性性功能低下的疗效；
图15：大精酸治疗糖尿病性阳痿的疗效。
具体实施方式
实施例1，大黄酸与精氨酸的复合物(大精酸)治疗糖尿病心肌病。
大鼠由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。经4周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后4周中给药治疗(mg/kg，灌胃)：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组：50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。
药效观察：由宏观的主要药效学指标，病变细胞中重要生物活性分子的表达(mRNA，和蛋白)等多种指标。
大精酸使上述各项指标均恢复到正常的范围内，并呈剂量依从性。
参照图1～图3：A，纵坐标：心收缩功能(+dp/dtmax)，B，心舒张功能(‑dp/dtmax).C，心肌中抗超氧自由基活性。横坐标：Normal‑正常组；STZ(糖尿病未治疗组)；AMG(氨基胍组)；RL，RM，RH(大精酸低，中，高剂量组)。
实施例2，大精酸治疗糖尿病大血管病变。与实施例1基本相同，
大鼠由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。经4周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后4周中给药治疗(mg/kg，灌胃)：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组：50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。
经4周大精酸和氨基胍的治疗，使血管舒张功能和NO生物利用度恢复。同时，使血管壁中异常表达的分子生物学靶点，基本恢复到正常范围内。如：血管紧张素受体1(AT1)，内皮素A受体，NADPH氧化酶表达的异常上调；PPARα和PPARγ下调等。大精酸和氨基胍使异常表达恢复到正常范围内。
参照图4、图5：A，纵坐标：最大舒张功能(％)。B，纵坐标：NO生物利用度降低。图中：Normal‑正常组，STZ(链脲霉素)‑糖尿病未治疗组，AMG‑氨基胍100mg/kg，灌胃；RL，RM，RH‑分别为大精酸50，100，200mg/kg，灌胃。
实施例3，大精酸治疗糖尿病肾病。
大鼠由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。经4周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后4周中给药治疗(mg/kg，灌胃)：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组：50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。
糖尿病肾病大鼠的24h尿中微量蛋白明显增加，血中肌酐和非蛋白氮增多，提示：糖尿病肾病。同时，分子生物学指标：肾脏PPARa的基因及蛋白表达，NADPH氧化酶和内皮素系统表达均上调，肾皮质的Cx43表达下调。这些靶点的异常，进一步提示糖尿病肾病充分建立。大精酸明显改善糖尿病肾病，药效与氨基胍相仿。下列图显示对微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗作用。
参照图6～图8：A，纵坐标：24h尿中白蛋白(urine protein)。横坐标：正常组(Normal)，糖尿病肾病组(STZ，链脲霉素制作糖尿病)，氨基胍组(AMG)，大精酸小剂量，中剂量和大剂量组(Rhein‑Arginine‑Low，Rhein‑Arginine‑middle，Rhein‑Arginine‑high)。下同。B，纵坐标：血肌酐(blood creatinine)。C，纵坐标：血非蛋白氮(BUN)。
实施例4，大精酸治疗糖尿病性睾丸病(男性性功能低下症)。
大鼠由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。经4周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后4周中给药治疗(mg/kg，灌胃)：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组：50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。
8周糖尿病大鼠，血中睾酮明显降低，提示：由糖尿病睾丸病引起雄性性功能低下症。血中LH(黄体生成素)，FSH(卵泡刺激素)也明显降低，提示：低促性腺激素性雄性性功能低下症，与临床糖尿病睾丸病变一致。同时，睾丸中的睾酮生物合成的相关基因表达均下调。睾丸中内皮素A受体和NADPH氧化酶，p66Shc蛋白的表达，以及反映内质网应激的PERK蛋白，均上调。睾丸细胞间的信息沟通的连接蛋白Cx43下调。充分证明糖尿病睾丸病以及分子生物学靶点均发生病变。与阳性药氨基胍对比，大精酸对糖尿病睾丸病有很明显的治疗作用。
以下图中显示：血中睾酮，LH，FSH的显著降低，和大精酸的治疗作用，是恢复到正常范围。其它观察指标未列出。
参照图9～图11：A，纵坐标血清睾酮；横坐标：自左向右：正常组，糖尿病组，氨基胍治疗组，大精酸小剂量组，大精酸中剂量组，大精酸大剂量组。B，纵坐标：血清黄体生成素。横坐标同。C，纵坐标：血清卵泡刺激素。横坐标同。
实施例5，大精酸治疗应激性睾丸病(男性性功能低下症)；
大鼠皮下注射异丙肾上腺素1.0mg/kg，10天，形成雄性性功能低下症。特征为高促性腺激素性的雄性性功能低下症：血中睾酮降低，而FSH，LH上升。在最后5天(第6～10天)用大精酸治疗大鼠(30mg/kg，皮下注射)，阳性药为丙酸睾酮0.5mg/kg，皮下注射。大精酸明显改善睾丸病变，提高血中睾酮含量。抑制上升的FSH。并改善睾丸内其他分子生物学指标。阳性药丙酸睾酮，只能提高血中睾酮，但不降低FSH，和LH；已不能改善睾丸内多个分子生物学靶点mRNA或蛋白表达改变指标。离体研究：睾丸匀浆体外与高糖，或异丙肾上腺素温孵，使损害睾丸组织中分子生物学靶点mRNA或蛋白表达改变，大精酸离体治疗，均使逆转。下图，列出部分整体试验的结果。
参照图12～图14：A，纵坐标血清睾酮；横坐标：自左向右：正常组，异丙肾上腺素(异丙)组，异丙+丙酸睾酮治疗组，异丙+大精酸治疗组。B，纵坐标：血清黄体生成素。横坐标同。C，纵坐标：血清卵泡刺激素。横坐标同。
实施例6，大精酸治疗糖尿病性阳痿(男性性功能低下症的一种表现)。
大鼠由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。经4周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后4周中给药治疗(mg/kg，灌胃)：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组：50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。
糖尿病雄性大鼠8周，作离体阴茎海绵体制备，先以血管收缩药物使海绵体血管收缩，而后观察对乙酰胆碱的舒张反应，作为勃起能力的指标。糖尿病大鼠的海绵体，舒张功能明显减弱，与正常组的差别很大。大精酸3个剂量组均使海绵体舒张功能明显恢复，大剂量组与氨基胍组，均使接近正常。同时，观察到海绵体中的分子生物学靶点的mRNA或蛋白表达改变：eNOS表达下调，iNOS上调。p66Shc，反映内质网应激，内质网应激的Bip蛋白指标上调，MMP9(基质金属蛋白酶9)和细胞连接蛋白Cx43，也上调。大精酸和氨基胍均使逆转，趋于正常。
参照图15：显示海绵体的舒张功能明显降低和大精酸的治疗作用。纵坐标：海绵体舒张反应；图中：STZ‑链脲霉素制作的糖尿病大鼠海绵体，Nor‑正常组，AM‑氨基胍组，high，Middle，low‑大精酸的高、中、低的3个剂量组。
实施例7，大精酸治疗糖尿病视网膜病。
大鼠由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。经4周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后4周中给药治疗(mg/kg，灌胃)：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组：50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。
糖尿病视网膜病病理本质都是由质网应激相关的慢性类症。与实施例1～6基本相同，已证实大精酸对由质网应激的指标PERK及Bip的上调。因此，大精酸对糖尿病视网膜病已有疗效。
实施例8，大精酸治疗糖尿病神经病变
大鼠由链脲霉素65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达25mM，维持8周。经4周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后4周中给药治疗(mg/kg，灌胃)：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组：50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。
糖尿病神经病变的病理本质都是由质网应激相关的慢性类疗。实施例1～6基本相同，已证实大精酸对由质网应激的指标PERK及Bip的上调。因此，大精酸对糖尿病神经病变已有疗效。
实施例9，大黄酸类化合物与精氨酸的复合物治疗糖尿病并发症
6孔细胞培养板中培养心肌细胞，高糖组加入高糖溶液(25mmol/L)1μl，治疗组分别加入高糖溶液1μl，再分别加入供试药物下表中#1‑39溶液1μl(10‑6mol/L)，待细胞完全贴壁。
弃去培养板中的培养基，吸1ml蛋白裂解液来提取细胞蛋白。用1×上样缓冲液上样，99℃下加热使蛋白变性，于‑20℃下保存。分别取#1‑39蛋白液适量，按聚丙烯酰胺凝胶电泳法操作。
将展开的胶转膜到硝酸纤维素滤膜上，用脱脂奶粉封闭，孵一抗PERK(或Bip)37℃1h；PBS(磷酸缓冲液)洗脱三次后，孵二抗37℃1h或4℃过夜；PBS洗脱后，用DAB(3，3’‑二氨基联苯胺四盐酸盐)显色剂显色，比较高糖组与治疗组的PERK(Bip)的条带。结果显示化合物#1‑39使PERK及Bip指标上调，提示化合物#1‑39有抗糖尿病并发症活性。
上述大黄酸类化合物与精氨酸的复合物中的大黄酸类化合物见下表：
表所述大黄酸类化合物结构式中包括的替换官能团

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1、(10)申请公布号 CN 103202829 A (43)申请公布日 2013.07.17 CN 103202829 A *CN103202829A* (21)申请号 201210452525.X (22)申请日 2010.02.26 201010115021.X 2010.02.26 A61K 31/192(2006.01) A61K 47/48(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 13/12(2006.01) (71)申请人浙江中医药大学中药饮片厂地址 311401 浙江省杭州市富阳东洲工业功能区 3 号路 11 号 (72)发明人丛晓东戴德哉张云。

2、戴茵 (74)专利代理机构南京知识律师事务所 32207 代理人栗仲平 (54) 发明名称大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症的药物中的应用 (57) 摘要大黄酸与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用；所述的治疗糖尿病肾病药物，是指改善微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗药物。本发明提供的良好安全性的新药；其药效将优于传统的治疗药物和治疗方法；并将开启中药超分子技术在改造重要有效成分的范例，扩大超分子技术在中药创新药物的研究和应用。本复合物简称大精酸，为新的结晶型化合物，进入体内释放出大黄酸和精氨酸；改变了。

3、大黄酸的溶解性，生物利用度提高。稳定性好。赋予大黄酸母体化合物以新的结构特征；大精酸进入体内释放出大黄酸和精氨酸。发挥大黄酸抑制多种抗炎性因子： NFB， TNF， ROS， EGF 等，能对内皮素系统调控，改善内皮细胞的功能。 (62)分案原申请数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 14 页附图 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书14页附图5页 (10)申请公布号 CN 103202829 A CN 103202829 A *CN103202829A* 1/1 页 2 1. 大黄酸与精氨。

4、酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用；所述的治疗糖尿病肾病药物，是指改善微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗药物。 2. 根据权利要求 1 所述的大黄酸与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用，其特征在于，所述的大黄酸与精氨酸的复合物为：大黄酸与 L- 精氨酸的复合物；所述的给药方式是：经口服给药；所述的给药剂量是： 50 200mg/kg。 3. 根据权利要求 2 所述的大黄酸与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用，其特征在于，所述的大黄酸与 L- 精氨酸的复合物黄色针状结晶，熔点： 254-256。权利要求书 CN 。

5、103202829 A 2 1/14 页 3 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症的药物中的应用 0001 本申请为分案申请。 0002 原申请的申请号为： 201010115021X ；申请日为： 2010 年 2 月 26 日；发明名称为：大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病并发症药物中的应用。以下说明书除发明主题外，均为原说明书原文。技术领域 0003 本发明涉及一种大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症药物中应用。治疗糖尿病血管并发症药物是指：对抗发病器官病变细胞中内质网应激，抑制内。

6、皮素， ROS，和炎性物质的药物。背景技术 0004 糖尿病及其并发症属于常见病、多发病。糖尿病的发病率居高不下，呈高发病率的态势。中国的发病率较高。糖尿病主要是 II 型，侵袭中老年人群，具有高度致病性，成为高病死率的病因。II 型糖尿病由于多种致病因素的作用下，形成对胰岛素耐受，而后发展成高血糖症，损害重要器官的细胞，导致并发症的出现。主要是微血管并发症和大血管并发症，涉及糖尿病心肌病，糖尿病大血管并发症，糖尿病肾病，糖尿病男性性功能低下症 ( 睾丸病，阳痿)，糖尿病视网膜病，以及糖尿病神经病变，等。糖尿病并发症的发生率高，血管并发症。

7、构成糖尿病致死病因的大多数，约占 80以上。 0005 目前，对糖尿病的药物治疗，不仅考虑降低高血糖症，单用降糖药治疗并不能达到满意的治疗效果，并发症仍会发展。由于糖尿病的高血糖症激活体内的细胞因子等。虽用降糖药控制血糖基本正常，细胞病变仍存在，还可能发展，使病理过程不断进行。如糖尿病肾病，虽血糖控制在正常范围内，多年后仍会发展成终末性肾病，尿毒症。另方面，单用降糖药并不能使糖尿病患者寿命延长。因此，对糖尿病患者，使用保护细胞的药物，阻断细胞因子等致病因子，治疗和防治糖尿病并发症，显得十分重要。 0006 糖尿病并发症主要是大血管和微血管并发症。。

8、高血糖生成糖基化终末产物 (AGEs)，损害血管内皮细胞，以及心肌细胞，肾系膜细胞，视网膜，睾丸等。 AGEs 有氧自由基特性，损害细胞，生成 ROS( 反应氧自由基 ) 及 ET( 内皮素 ) 等多种细胞因子。TGF1 上调等也参与糖尿病的细胞损害。血管内皮细胞功能损害。使 NO( 一氧化氮 ) 降低，同时使 ET 上调。增强缩血管功能，降低舒血管功能，使血管呈痉挛状态。微血管损害，导致糖尿病肾病，视网膜病，及睾丸病。细胞因子增多成为糖尿病并发症的主要病因。 0007 本发明所涉及的糖尿病并发症包括以下疾病： 0008 糖尿病心肌病 0009 糖尿病心肌病的。

9、发病率很高，致病性严重。表现心肌损害，心功能减弱，易于出现心力衰竭，病死率高。 0010 糖尿病大血管病变；说明书 CN 103202829 A 3 2/14 页 4 0011 糖尿病大血管并发症，如动脉粥样硬化等。累及颈总动脉，冠状动脉，四肢动脉，等。糖尿病血管壁中 NO 减少，细胞因子如内皮素增多，内膜增厚，血管壁趋于硬化。不仅使血管舒张功能降低。血管功能明显异常，呈轻度痉挛状态。而且，内膜损害易引起动脉血栓，闭塞血管。 0012 糖尿病肾病； 0013 糖尿病肾病是糖尿病的严重并发症，常在血糖控制到正常范围后，常常潜在的不断发展，会发。

10、展到尿毒症，后果极为严重。已公认是造成肾功能衰竭的重要病因。 0014 糖尿病男性性功能低下症 - 睾丸病 0015 男性性功能低下已构成现代社会的一个重要问题。糖尿病，高血压和高血脂，肥胖等代谢综合症发病较多。男性性功能低下在美国，占 45 岁以上男性医院就诊 1/3。构成全球性的医药问题。 0016 申请人首次发现：睾丸病中ET(内皮素)表达，可分为过度和低下表达二类： ET系统上调型，多见于糖尿病性和应激性睾丸病(见后)， ET系统下调型，见于腺嘌呤性睾丸病。这差异可能对药物的治疗反应有所不同。糖尿病睾丸病与睾丸中旁分泌 (paracrine) 性的 ET，。

11、与反应氧类 (ROS) 自由基的生成较多，十分相关。 0017 糖尿病性男性性功能低下症的阳痿：阴茎海绵体病变。 0018 男性性功能低下伴有阴茎海绵体的异常。海绵体由大量血管组成。勃起障害与NO 有关。西地那非抑制 5- 脂氧酶使海绵体 NO 增高，明显增强舒血管功能，改善勃起功能。但是，糖尿病性勃起障害。阴茎海绵体血管反应性降低，出现纤维化等，西地那非的治疗效应差。因此，要寻求其他有效地药物。海绵体勃起功能减退，由多种病因，与 ET 系统和 ROS 上调等相关，以及，海绵体病变中细胞外基质增多， MMPs( 金属蛋白酶系 ) 和 TIMPs( 组织内源。

12、性金属蛋白酶抑制物 ) 间失调等，构成致病性。 0019 糖尿病并发症还包括：糖尿病视网膜病和糖尿病神经病变等。糖尿病和它的诸多并发症，均由于慢性炎症，发生内质网应激是本质。也与细胞因子，等增多有关。本专利申报的大黄酸精氨酸 ( 大精酸 ) 抑制内质网应激，故而对众多糖尿病并发症均有治疗作用。糖尿病病变中的多个分子靶点，申请人已有系统研究及系列论文中均有论述。 0020 中国第 200610106502.8 号发明专利申请：“大黄酸或大黄酸类化合物的复合物、其制备方法及其在制备治疗骨关节炎药物中的应用” 、中国第 200610106515.5 号发明专利申请。

13、：“大黄酸或大黄酸类化合物的复合物、其制备方法及其在制备预防肠粘连药物中的应用” ，及中国第 200610106516.X 号发明专利申请：“大黄酸或大黄酸类化合物的复合物、其制备方法及其在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用” ，公开了一种大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物。该复合物的结构如通式 (I) ： 0021 说明书 CN 103202829 A 4 3/14 页 5 0022 通式 (I) 中的左侧部分为以下两者之一： 0023 (1) 大黄酸或大黄酸类化合物单体成分，其中的 R2 R3、 R6 R7 有 1 2 个取代基为 -COOH，其余位置为任意的。

14、以下取代基： -H， -O-glucose， -OH， -OCH3， -CH3，其特征是 R1 R8 至少有 2 个为 -H ； 0024 (2) 含大黄酸的植物提取物； 0025 所述含大黄酸的植物提取物是指：大黄药材粉碎，用水或醇提取，过滤，滤液按酸碱法进行分离，即利用大黄类化合物不溶于酸水由沉淀而获得；而该化合物溶于碱性水中，极易与中性的蒽醌化合物分离开。 0026 通式 (I) 中的 M，表示含氮有机碱或碱性氨基酸，所述的大黄酸或大黄酸类化合物，与含氮有机碱或碱性氨基酸，以分子间作用力结合形成复合物； 0027 所述的通式 (I) 中左侧部分的含大。

15、黄酸的有效部位，其中大黄酸的含量在 50 99范围。 0028 以上发明尚未涉及到使用大黄酸或大黄酸类化合物的复合物治疗糖尿病并发症，包括尚未涉及对糖尿病心肌病；糖尿病大血管病变；男性性功能低下的治疗。发明内容 0029 本发明的目的：提供一种大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症药物中应用。治疗糖尿病血管并发症药物是指：对抗发病器官病变细胞中内质网应激，抑制内皮素， ROS，和炎性物质的药物。本发明将提供一个优良的，安全性的新药。优于传统治疗糖尿病药物；并将开启中药超分子技术，在改造中药有效成分的范例，扩大超分子技术在中药创。

16、新药物的研究和应用。该新药用于治疗糖尿病并发症，包括：糖尿病心肌病，糖尿病大血管病变，糖尿病肾病，糖尿病性男性性功能低下 ( 睾丸病和阳痿 )，糖尿病视网膜病，糖尿病神经病变的治疗，具有优良治疗效果。不仅在理论上，对本学科的发展和提升，起到积极的效应。对医药产业发展，以及医药经济竞争力提高，均有促进作用。 0030 完成本申请发明任务的方案是： 0031 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物在制备治疗糖尿病血管并发症药物中应用。治疗糖尿病血管并发症药物是指：对抗发病器官病变细胞中内质网应激，抑制内皮素， ROS，和炎性物质的药物。 0032 。

17、本发明所述的糖尿病并发症包括以下疾病：说明书 CN 103202829 A 5 4/14 页 6 0033 糖尿病心肌病、糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病性男性性功能低下 ( 睾丸病和阳痿 )、糖尿病视网膜病，和 / 或糖尿病神经病变，等等。 0034 具体地说，本发明所述的大黄酸或大黄酸类化合物，与精氨酸形成的复合物的制备，在治疗糖尿病多种并发症药物中应用的实例。药物治疗使用口服途径，剂量： 50 200mg/kg。在糖尿病各种并发症的治疗中相同。 0035 换言之，本发明包括： 0036 大黄酸或大黄酸类化合物，与精氨酸化合而成的复合物，在制备。

18、治疗糖尿病心肌病药物中应用； 0037 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病大血管病变药物中应用； 0038 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病肾病药物中应用； 0039 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病并发的男性性功能低下 ( 睾丸病和阳痿 ) 药物中应用。 0040 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，在制备治疗糖尿病视网膜病药物中应用。 0041 本发明所述的大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物，其中 “大黄酸与精氨酸的复合物” 可以简称为大精酸。 0042 本申请所述的大黄酸精氨酸化合物。

19、与一般意义的 “大黄酸盐” 完全不同，该化合物生成过程不是简单的酸碱反应，这反应过程中没有脱掉一分子水形成离子键，本专利所述的反应：在两个分子之间以弱共价键作用力相结合，生成超分子化合物。大黄酸精氨酸结晶型化合物，它的元素分析结果，证明分子式： C15H8O6C6H14N4O2。该反应过程中没有脱水。从热重分析图谱可知，大黄酸精氨酸超分子化合物为结晶性化合物 ( 不含结晶水 )。13C-NMR 谱测定数据，与大黄酸文献报道的数据比较， 2 位碳 d ： 147.37(rhein138.18) 及 2 位上的羧基碳d ： 172.02(rhein165.06)的。

20、化学位移，分别向低场移动约9个单位和7个单位，而精氨酸部分，由于其结构中含有中等强度的碱性基团胍基。因此推断：大黄酸的2位羧基与精氨酸的胍基成超分子新化合物，结构式见下。 0043 化学结构：精氨酸 ,4,5- 二羟基 -9,10- 二氢 -9,10- 二氧 -2- 蒽羧酸 0044 说明书 CN 103202829 A 6 5/14 页 7 0045 0046 0047 0048 0049 0050 大黄中有主要的 5 种蒽醌成分：大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。其中，大黄酸安全性最高。为了规避除大黄酸以外的 4 种蒽醌类相关物质的超标。

21、，本发明中所用的大黄酸，从芦荟中提取。结果相关 4 种蒽醌类物质的质量均含量小于 1.0。 0051 大黄酸精氨酸， 3 批中试样品的技术指标： 0052 说明书 CN 103202829 A 7 6/14 页 8 0053 0054 本发明的大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物(大精酸)治疗糖尿病的并发症，具有以下明显效果：说明书 CN 103202829 A 8 7/14 页 9 0055 大精酸改善糖尿病的并发症： 0056 糖尿病的持续高血糖，引起多种并发症，主要由血管并发症引起，大血管并发症和微血管并发症，均与血管舒张功能减退相关。糖尿病形成后，。

22、引发多种并发症。从生物学的本质上理解，糖尿病的本身和它的多种并发症，均由于在细胞的内质网中，出现了应激。这是一种慢性炎症。大精酸治疗糖尿病的并发症，有效地对抗各种病变细胞中的内质网应激，抑制内皮素， ROS，和其它细胞因子和炎性物质。大精酸治疗糖尿病和它的并发症，从主要药效学的药效指标，到分子生物学的多个相关重要靶点，疗效都十分明显，包括逆转与糖尿病和与发病密切相关的内质网应激重要蛋白的靶点。本专利书仅列出大精酸治疗几种糖尿病并发症的主要药效学的一些指标。 0057 以下的实施大精酸对各类糖尿病并发症治疗，糖尿病的形成的方法相同，可造成多种不同的并发。

23、症。由各个系统和器官所表现的疾病不同的指标，反映糖尿病的并发症的存在，以及大精酸的疗效。在各个并发症项下，分别表示出大精酸的治疗效果。各类糖尿病的并发症。雄性大鼠，由链脲霉素 65mg/kg，一次腹腔注射，诱发糖尿病。血糖高达 25mM，维持 8 周。给链脲霉素 4 周后，糖尿病持久升高，已经引起各类并发症 ( 早期 )。在未用药物治疗组中，各种并发症发展很明显。大精酸的药物治疗在第 5 周后实施：在第 5-8 周中，连续经口给药治疗(灌胃) ：大精酸3个剂量组： 50， 100， 200mg/kg，。用阳性药氨基胍100mg/ kg作参比。糖尿病。

24、的未治疗组虽未给药，试验中大鼠均给予饮食控制的治疗方法，使未用药物治疗的大鼠，也获得适当治疗。 0058 药效观察：对糖尿病的各种并发症，分别观察宏观的主要药效学指标，以及器官和细胞中重要生物活性分子的表达 (mRNA，和蛋白 )。研究工作十分详尽。但在本专利中，只显示主要药效学的数据，其它多种靶点的分子生物学数据未列出。治疗糖尿病视网膜病和糖尿病神经病变，也未列出。 0059 大精酸对糖尿病心肌病的实施和疗效； 0060 糖尿病心肌病的发病率很高。出现心肌损害，心功能减弱，易于出现心力衰竭。大精酸治疗糖尿病心肌病所表现的心功能障害，有明显的改善作用。同。

25、时，抑制心肌细胞凋亡，消除心肌纤维化，由于抑制异常基质金属蛋白酶 2， 9(MMP2， 9)，抑制上调的内皮素受体，和抑制 NADPH 氧化酶，明显减轻心肌中氧化应激。抑制心肌凋亡：纠正凋亡相关基因 BCl2， Bax 的表达，及细胞色素 C。和抑制心肌中内质网应激指标： Bip(Ig 重链结合蛋白 )，和 PERK( 与内质网应激相关蛋白 ) 的上调。明显改善心肌中钙调控蛋白的异常表达下调。大精酸使上述各项指标均恢复到正常的范围内，并呈剂量依从性。 0061 本专利仅列出主要药效学指标。下同。 0062 参见图 1 图 3 ： A，纵坐标：心收缩功能 (。

26、+dp/dtmax)， B，心舒张功能 (-dp/dt max).C，心肌中抗超氧阴离子自由基能力。横坐标： Normal- 正常组； STZ( 糖尿病未治疗组 ) ； AMG( 氨基胍组 ) ； RL， RM，， RH( 大精酸低，中，高剂量组 )。其它指标均未列出。 0063 大精酸治疗糖尿病大血管病变的实施和疗效； 0064 糖尿病大血管并发症，如动脉粥样硬化等很多见。糖尿病血管壁内皮细胞中 NO 减少，而细胞因子如内皮素，炎性因子增多，使血管舒张功能降低。在本专利的实施例中：大鼠糖尿病 8 周后，血管功能明显异常：血管收缩功能增强，血管舒张功能。

27、降低， NO 生物利用度降低，呈轻度痉挛状态。经 4 周用大精酸和氨基胍的治疗，使血管舒张功能和 NO 生物利说明书 CN 103202829 A 9 8/14 页 10 用度恢复。同时，在实施中也观察到：使血管壁中异常表达的分子生物学靶点，基本恢复到正常范围内。如：血管紧张素受体 1(AT1)，内皮素 A 受体， NADPH 氧化酶表达的异常上调； PPAR 和 PPAR 下调等。大精酸和氨基胍使异常表达恢复到正常范围内。 0065 血管功能和 NO 生物利用度的结果，参见图 4、图 5 ： A，纵坐标：血管舒张功能。B，纵坐标： NO 生物利用度。

28、降低。图中： Normal- 正常组， STZ- 糖尿病未治疗组， AMG- 氨基胍 100mg/kg，灌胃； RL， RM， RH- 分别为大精酸 50， 100， 200mg/kg，灌胃。其它分子生物学数据，均未列出。 0066 大精酸治疗糖尿病肾病的实施和疗效； 0067 糖尿病患者常有发生糖尿病肾病并发症的明显倾向。糖尿病肾病大鼠 8 周后， 24h 尿中微量蛋白明显增加，血中肌酐和非蛋白氮增多，提示：糖尿病肾病已很明显。同时，观察到分子生物学指标：肾脏 PPARa 的基因及蛋白表达， NADPH 氧化酶和内皮素系统表达均上调，肾皮质的 Cx43 表达下。

29、调。这些靶点的异常，进一步提示糖尿病肾病的分子病变，均作为大精酸的治疗靶点。大精酸明显改善糖尿病肾病，药效与氨基胍相仿。 0068 大精酸治疗糖尿病肾病，改善微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗作用。参见图 6 图 8 ： A，纵坐标： 24h 尿中白蛋白 (urine albumin)。横坐标：正常组 (Normal)，糖尿病肾病组 (STZ，链脲霉素，制作糖尿病 )，氨基胍组 (AMG)，大精酸小剂量，中剂量和大剂量组 (Rhein-Arginine-Low， Rhein-Arginine-middle， Rhein-Arginine-high)。下同。B，。

30、纵坐标：血肌酐 (blood creatinine)。C，纵坐标：血非蛋白氮 (BUN)。其他未列出。 0069 大精酸治疗大鼠糖尿病性雄性性功能低下症的实施和疗效； 0070 糖尿病患者常呈现男性性功能低下症，常由于形成糖尿病睾丸病，血中睾酮降低。在大精酸治疗的实施：糖尿病雄性大鼠 8 周后，明显出现血中睾酮降低，提示：糖尿病睾丸病明显，并出现了雄性性功能低下症。同时，血中LH(黄体生成素)， FSH(卵泡刺激素)也明显降低，提示：这是低促性腺激素性雄性性功能低下症，与糖尿病睾丸病变临床表现一致。已观察到：睾丸中的睾酮生物合成的相关基因。

31、表达均下调。睾丸中内皮素 A 受体和 NADPH 氧化酶， p66Shc 蛋白的表达，以及反映内质网应激的 PERK 蛋白，均上调。睾丸细胞间的信息沟通的连接蛋白 Cx43 明显下调。这些结果，充分证明糖尿病睾丸病以及分子生物学靶点均发生病变。大精酸药物治疗：与阳性药氨基胍对比，大精酸对糖尿病睾丸病有很明显的治疗作用。 0071 糖尿病睾丸病大鼠的血中睾酮， LH， FSH 的显著降低，大精酸的治疗作用明显，使恢复到正常范围。参见图 9 图 11 ： A，纵坐标血清睾酮；横坐标：自左向右：正常组，糖尿病组，氨基胍治疗组，大精酸小剂量组，大精酸中。

32、剂量组，大精酸大剂量组。B，纵坐标：血清黄体生成素。横坐标同。C，纵坐标：血清卵泡刺激素。横坐标同。 0072 大精酸治疗大鼠应激性雄性性功能低下症实施和疗效。 0073 由于男性性功能低下，常因持久应激所致，糖尿病和代谢综合征的男性性功能低下，也与应激状态有关。故建立应激性雄性性功能低下症。 0074 雄性大鼠皮下注射异丙肾上腺素 1.0mg/kg， 10 天，形成雄性性功能低下症。特征为高促性腺激素性的雄性性功能低下症：血中睾酮降低，而 FSH， LH 上升。在最后 5 天 ( 第 6 10 天 ) 用大精酸治疗大鼠 (30mg/kg，皮下注射 )，阳。

33、性药为丙酸睾酮 0.5mg/kg，皮下注射。大精酸明显改善睾丸病变，提高血中睾酮含量。抑制上升的 FSH 和 LH。并改善睾丸内说明书 CN 103202829 A 10 9/14 页 11 其他分子生物学指标。阳性药丙酸睾酮，只能提高血中睾酮，但不降低 FSH 和 LH。也不改善睾丸内多个分子生物学靶点 mRNA 或蛋白表达改变指标。另外的实施，进行大精酸离体治疗研究：大鼠睾丸匀浆与高糖，或异丙肾上腺素温孵，损害睾丸组织，使多个分子生物学靶点 mRNA 或蛋白表达改变，大精酸离体治疗 ( 温孵 )，均使逆转。下图，列出部分整体试验的结果。 0075 。

34、大精酸的整体给药，明显改善应激性睾丸病变。参见图 12 图 14 ： A，纵坐标血清睾酮；横坐标：自左向右：正常组，异丙肾上腺素(异丙)组，异丙+丙酸睾酮治疗组，异丙+ 大精酸治疗组。B，纵坐标：血清黄体生成素 (LH)。横坐标同。C，纵坐标：血清卵泡刺激素 (FSH)。横坐标同。 0076 大精酸治疗糖尿病性阳痿 ( 男性性功能低下的一部分 ) 的实施和疗效： 0077 糖尿病患者常出现勃起功能障害，呈现阳痿。大精酸治疗实施：糖尿病雄性大鼠 8 周，作离体阴茎海绵体制备，先以血管收缩药物使海绵体血管收缩，而后观察对乙酰胆碱的舒张反应，作为。

35、勃起能力的指标。 0078 糖尿病大鼠的海绵体，舒张功能明显减弱 ( 显示阳痿 )，与正常组的差别很大。大精酸 3 个剂量治疗组，均使海绵体舒张功能明显恢复，大剂量组与氨基胍组，均能恢复到接近正常状态。同时，观察到海绵体中的分子生物学靶点的 mRNA 或蛋白表达改变： eNOS 表达下调， iNOS 上调。p66Shc，反映内质网应激，内质网应激的 Bip 蛋白指标上调， MMP9( 基质金属蛋白酶 9) 和细胞连接蛋白 Cx43，也上调。大精酸和氨基胍均使逆转，趋于正常。 0079 大精酸改善海绵体的血管舒张功能的疗效，参见图 15 ：显示海绵体的舒张功能明。

36、显降低和大精酸的治疗作用。其它未列出。图 15 中：纵坐标：海绵体舒张反应； STZ- 链脲霉素制作的糖尿病大鼠海绵体， Nor- 正常组， AM- 氨基胍组， high， Middle， low- 大精酸的高、中、低的 3 个剂量组。 0080 大精酸的药效基础： 0081 从芦荟中提取的大黄酸，与 L- 精氨酸以氢键结合，构成超分子化合物，改善了大精酸的理化特性，保留了大黄酸的对抗炎症因子和细胞因子等活性。另方面，糖尿病的血管并发症，从机制上分析，大多由于 NO 的缺乏，而致血管舒张功能减弱。大精酸在体内释放出 L- 精氨酸，它是 NO 的前体。

37、药物，可生成 NO。大黄酸与大精酸形成的新化合物，具有双重作用：不仅具有大黄酸对抗炎症因子，和对抗内皮素受体的作用；并且，作为NO前体，提供NO，直接保护血管舒张功能，二者具有协同作用，加强药效。大精酸本身并无降血糖的作用，但能够明显地减轻内质网应激，供应额外的 NO，有利于对抗大血管和微血管并发症发生，使转变到正常。 0082 本发明选择大黄酸类中药活性成分，创制大黄酸类氨基酸系列衍生物新化合物，优选大黄酸精氨酸。这类化合物称为：复合物 ( 反应过程中不生成水，如大黄酸精氨酸复合物，不同于药剂学包裹 ) ；盐 ( 旧称，广义的酸碱反应，。

38、如大黄酸精氨酸盐 ) ；中药超分子化合物，其定义是2种或2种以上的分子依靠分子之间的弱共价键相互作用结合的，组合成排列有序的、具有明确的微观结构和宏观特征，如大黄酸精氨酸超分子；其优点是： 0083 (1) 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物 ( 简称大精酸 ) 为新的结晶型化合物，是大黄酸与精氨酸依靠之间的弱共价键，接合形成的复合物，进入体内释放出大黄酸和精氨酸 ( 专利，见后 )。说明书 CN 103202829 A 11 10/14 页 12 0084 (2) 大黄酸系难溶性药物，体内吸收较差，大黄酸精氨酸改变了大黄酸的溶解性，口服制剂体外。

39、溶出度明显优于大黄酸，提示药物的生物利用度提高。 0085 (3) 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物为结晶体化合物，稳定性好。 0086 (4)大黄酸与之疏松键合的链接分子(客体)的选择范围较广，本发明选择了安全性、协同作用好的物质，精氨酸。 0087 (5) 精氨酸与大黄酸的结合，赋予大黄酸母体化合物以新的结构特征，并能巧借母体大黄酸化合物关于作用机理、药效、药理、药代、毒理、临床应用的文献资料，提高新药的成功率，有效控制新药研发的风险。 0088 因此，本发明提供大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物超分子新化合物，其技术依据是 “中药化学 + 。

40、超分子化学” ，不妨称 “中药超分于化学” 。 0089 大黄酸精氨酸，进入体内释放出大黄酸和精氨酸。发挥大黄酸抑制多种抗炎性因子： NFB， TNF， ROS， EGF 等，能对内皮素系统调控，改善内皮细胞的功能。 0090 本发明的积极效果有： 0091 大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物是创新药，对抗炎性因子和提供 NO 的双重功能的药物分子。改善大黄酸的溶解度，和吸收。具有复合型药效，将显示有优良的治疗睾丸病的药理作用附图说明 0092 图 1 图 3 ：大黄酸或大黄酸类化合物与精氨酸的复合物 ( 大精酸 ) 治疗糖尿病心肌病的疗效； 0093 图 4。

41、、图 5 ：大精酸治疗糖尿病大血管病变，改善血管功能的疗效； 0094 图 6 图 8 ：大精酸治疗糖尿病肾病的疗效； 0095 图 9 图 11 ：大精酸治疗糖尿病性睾丸病的疗效； 0096 图 12 图 14 ：大精酸治疗应激性雄性性功能低下的疗效； 0097 图 15 ：大精酸治疗糖尿病性阳痿的疗效。具体实施方式 0098 实施例 1，大黄酸与精氨酸的复合物 ( 大精酸 ) 治疗糖尿病心肌病。 0099 大鼠由链脲霉素 65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达 25mM，维持 8 周。经 4 周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。。

42、治疗组在后 4 周中给药治疗 (mg/kg，灌胃) ：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组： 50mg/kg， 100mg/kg， 200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。 0100 药效观察：由宏观的主要药效学指标，病变细胞中重要生物活性分子的表达 (mRNA，和蛋白 ) 等多种指标。 0101 大精酸使上述各项指标均恢复到正常的范围内，并呈剂量依从性。 0102 参照图 1 图 3 ： A，纵坐标：心收缩功能 (+dp/dtmax)， B，心舒张功能 (-dp/ dtmax).C，心肌中抗超氧自。

43、由基活性。横坐标： Normal- 正常组； STZ( 糖尿病未治疗组 ) ； AMG( 氨基胍组 ) ； RL， RM， RH( 大精酸低，中，高剂量组 )。 0103 实施例 2，大精酸治疗糖尿病大血管病变。与实施例 1 基本相同，说明书 CN 103202829 A 12 11/14 页 13 0104 大鼠由链脲霉素 65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达 25mM，维持 8 周。经 4 周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后 4 周中给药治疗 (mg/kg，灌胃) ：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组： 50mg/。

44、kg， 100mg/kg， 200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。 0105 经4周大精酸和氨基胍的治疗，使血管舒张功能和NO生物利用度恢复。同时，使血管壁中异常表达的分子生物学靶点，基本恢复到正常范围内。如：血管紧张素受体 1(AT1)，内皮素 A 受体， NADPH 氧化酶表达的异常上调； PPAR 和 PPAR 下调等。大精酸和氨基胍使异常表达恢复到正常范围内。 0106 参照图4、图5 ： A，纵坐标：最大舒张功能()。 B，纵坐标： NO生物利用度降低。图中： Normal- 。

45、正常组， STZ( 链脲霉素 )- 糖尿病未治疗组， AMG- 氨基胍 100mg/kg，灌胃； RL， RM， RH- 分别为大精酸 50， 100， 200mg/kg，灌胃。 0107 实施例 3，大精酸治疗糖尿病肾病。 0108 大鼠由链脲霉素 65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达 25mM，维持 8 周。经 4 周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继续发展。治疗组在后 4 周中给药治疗(mg/kg，灌胃) ：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组： 50mg/kg， 100mg/kg， 200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控。

46、制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。 0109 糖尿病肾病大鼠的 24h 尿中微量蛋白明显增加，血中肌酐和非蛋白氮增多，提示：糖尿病肾病。同时，分子生物学指标：肾脏 PPARa 的基因及蛋白表达， NADPH 氧化酶和内皮素系统表达均上调，肾皮质的 Cx43 表达下调。这些靶点的异常，进一步提示糖尿病肾病充分建立。大精酸明显改善糖尿病肾病，药效与氨基胍相仿。下列图显示对微量蛋白尿，肌酐和非蛋白氮的治疗作用。 0110 参照图 6 图 8 ： A，纵坐标： 24h 尿中白蛋白 (urine protein)。横坐标：正常组 (Normal)，。

47、糖尿病肾病组 (STZ，链脲霉素制作糖尿病 )，氨基胍组 (AMG)，大精酸小剂量，中剂量和大剂量组 (Rhein-Arginine-Low， Rhein-Arginine-middle， Rhein-Arginine-high)。下同。B，纵坐标：血肌酐 (blood creatinine)。C，纵坐标：血非蛋白氮 (BUN)。 0111 实施例 4，大精酸治疗糖尿病性睾丸病 ( 男性性功能低下症 )。 0112 大鼠由链脲霉素 65mg/kg，一次腹腔注射，诱发的糖尿病。血糖高达 25mM，维持 8 周。经 4 周后，糖尿病并发症已经出现。未治疗组，继。

48、续发展。治疗组在后 4 周中给药治疗 (mg/kg，灌胃) ：阳性药氨基胍100，大精酸3个剂量组： 50mg/kg， 100mg/kg， 200mg/kg。糖尿病的未治疗组虽未给药，但控制了食量，给予饮食控制的治疗方法，使获得适当治疗。 0113 8 周糖尿病大鼠，血中睾酮明显降低，提示：由糖尿病睾丸病引起雄性性功能低下症。血中 LH( 黄体生成素 )， FSH( 卵泡刺激素 ) 也明显降低，提示：低促性腺激素性雄性性功能低下症，与临床糖尿病睾丸病变一致。同时，睾丸中的睾酮生物合成的相关基因表达均下调。睾丸中内皮素 A 受体和 NADPH 氧化酶， p66Shc 蛋白的表达，以及反映内质网应激的 PERK 蛋白，均上调。睾丸细胞间的信息沟通的连接蛋白 Cx43 下调。充分证明糖尿病睾丸病以及分子生物学靶点均发生病变。与阳性药氨基胍对比，大精酸对糖尿病睾丸病有很明显的治疗作用。 0114 以下图中显示：血中睾酮， LH， FSH 的显著降低，和大精酸的治疗作用，是恢复到正常范围。其它观察指标未列出。说明书 CN 103202829 A 13 12/14 页 14 0115 参照图 9 图 11 ： A，纵坐标血清睾酮；横坐标：自左向右：正常组，糖尿病组，氨基胍治疗组，。

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