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1、(10)申请公布号 CN 103202825 A (43)申请公布日 2013.07.17 CN 103202825 A *CN103202825A* (21)申请号 201310056835.4 (22)申请日 2013.02.23 A61K 31/136(2006.01) A61K 31/122(2006.01) A61K 31/12(2006.01) A61P 5/28(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 13/08(2006.01) A61P 17/10(2006.01) A61P 17/00(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A。
2、61P 17/14(2006.01) A61P 15/00(2006.01) A61P 15/16(2006.01) (71)申请人 杭州翼海轩生物科技有限公司 地址 311501 浙江省杭州市桐庐县城迎春南 路 205 号新青年广场 B 座 (72)发明人 葛仁山 葛海芳 连庆泉 胡国新 郭晶晶 梁广 (74)专利代理机构 杭州天欣专利事务所 33209 代理人 李斌 (54) 发明名称 姜黄素类似物的应用 (57) 摘要 本发明涉及一种姜黄素类似物的应用， 姜黄 素类似物作为抑制人 III 型 17beta- 羟基类固醇 脱氢酶活性药物使用。 本发明化合物用作药物时， 可以采用散装形成直接。
3、使用， 也可以采用药物组 合物的形式使用。而该药物组合物含有 0.1%-99% 本发明化合物， 其余为药物学上可接受的， 对人和 动物无毒和惰性的可药用载体或者赋形剂。可药 用载体或赋形剂是一种或者多种固体、 半固体、 液 体稀释剂、 填料以及药物制品。 将本发明的药物以 单位体重服务量的形式使用， 可以经多种形式， 例 如口服、 直肠舌下、 静脉或者透皮给药， 但优选口 服给药。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书6页 (10)申请公布号 CN 103202825 A CN 10320。
4、2825 A *CN103202825A* 1/2 页 2 1. 一种姜黄素类似物的应用， 其特征在于 ： 式、 式、 式、 式、 式、 式所述化 合物之一或者其组合物作为抑制人 III 型 17beta- 羟基类固醇脱氢酶活性药物使用， （） （） （） （） （） （） 。 2. 根据权利要求 1 所述的姜黄素类似物的应用， 其特征在于 ： 式、 式、 式、 式、 式、 式所述化合物之一或者其组合物作为雄激素依赖性疾病的预防和 / 或治疗药物使 权 利 要 求 书 CN 103202825 A 2 2/2 页 3 用。 3. 根据权利要求 2 所述的姜黄素类似物的应用， 其特征在于 ： 所。
5、述雄激素依赖性疾病 包括但不限于 ： 人类雄激素依赖性前列腺癌、 良性前列腺增生症、 痤疮、 皮脂炎、 多毛症、 雄 激素性脱发、 性早熟、 肾上腺增生和多囊卵巢综合征。 4. 根据权利要求 1 所述的姜黄素类似物的应用， 其特征在于 ： 式、 式、 式、 式、 式、 式所述化合物之一或者其组合物作为避孕药使用。 权 利 要 求 书 CN 103202825 A 3 1/6 页 4 姜黄素类似物的应用 技术领域 0001 本发明涉及一种姜黄素类似物的应用， 属于医药技术领域。 背景技术 0002 前列腺癌 （Prostate cancer， PCa） 是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤， 发病随年。
6、 龄而增长。据报道仅次于肺癌， 是男性癌症死亡的第二位。近年来由于我国人口老龄化， 前列腺癌发病率呈显著上升趋势 （孙颖浩， 中华泌尿外科杂志， 2004， 25， 2） 。前列腺癌的病 因与雄激素有关， 早期前列腺细胞及前列腺癌细胞生长具有雄激素依赖的生物学特性， 雄 激素的作用是通过雄激素受体 （androgen receptor, AR） 介导的， 故此期前列腺癌称为雄 激素依赖性前列腺癌 (androgen-dependent prostate cancer, ADPC)（方晓亮， 国际泌尿 系统杂志， 2009， 29， 500） 。但这种治疗对于某些患者来说具有一定的有效期。事实已。
7、经证 明许多患者经历了从雄激素依赖性到雄激素非依赖性 (androgen independent prostate cancer, AIPC) 这一转变过程， 而对抗雄激素治疗不再有效， 最终癌症病人死于雄激素非依 赖性前列腺癌转移 （Fizazi K, et al. Clin Cancer Res， 2002， 8， 775） 。 尽管如此， 降低雄 激素的水平或抑制雄激素的活性, 依然是前列腺癌早期防治和治疗中非常重要的策略。 前 列腺组织内的细胞对激素的依赖性各不相同， 而癌细胞大多依赖于雄激素， 当体内雄激素 水平下降， 癌细胞失去了雄激素这一环境， 癌细胞即会死亡， 这是内分泌治疗前。
8、列腺癌的核 心所在。 人体血清中的雄激素主要来源于睾丸和肾上腺， 睾丸可产生大部分雄激素， 睾丸切 除后， 肾上腺仍可产生一定量的雄激素， 这些雄激素的存在影响手术治疗前列腺癌的效果。 因此 1945 年行睾丸切除加双侧肾上腺切除， 以同时消除睾丸和肾上腺的雄激素， 即所谓全 阻断雄激素治疗前列腺癌， 但往往患高烧、 低血压、 阿狄森氏病的色素沉着、 贫血等并发症， 疗效不是很理想 （CHARLES HUGGINS, M.D, WILLIAM WALLACE SCOTT, M.D AND Annals of Surgery， 1945， 12， 1031 ； 华立新， 中华肿瘤杂志， 2005。
9、,25,496） 。1983 年 Labrie 等同时采 用黄体生成素释放激素类似物 （LHRHa） 和抗雄激素药物治疗前列腺癌， 既用药物去势又用 抗雄激素药物阻断肾上腺产生的雄激素， 疗效明显优于单种内分泌药物 （Labrie F, et al. J Steroid Biochem， 1983,19,999） 。睾丸切除术、 LHRH 抑制剂这些疗法， 具有使患者的生 活质量下降、 性欲减退以及骨密度降低等副作用。 0003 从雄激素依赖性到雄激素非依赖性这一癌症转变过程的机制很多， 但其中之一 是雄激素非依赖性癌细胞自身产生了一些雄激素合成酶， 其中包括 HSD17B3（人 III 型 。
10、17beta- 羟基类固醇脱氢酶） ， 该酶可以利用肾上腺的去氢表雄酮 （DHEA） ， 而产生睾酮， 从 而刺激癌细胞的增殖和生长 （Marchais-Oberwinkler, et al. J Steroid Biochem Mol Biol， 2011， 125， 1)。 0004 抑制雄激素活性可以通过拮抗雄激素受体， 也可以干扰雄激素生物合成的一个或 多个步骤的关键酶。 HSD17B3是雄激素生物合成的关键酶， 可转化雄烯二酮为睾酮。 通过抑 制 HSD17B3 的活性从而降低睾酮的合成， 能够有效地治疗雄激素依赖型和一些非依赖型前 列腺癌。同时， HSD17B3 抑制剂对良性前列腺。
11、增生具有同样的疗效， 也可以做为避孕药使用 说 明 书 CN 103202825 A 4 2/6 页 5 （Joanna M. Daya, et al. Molecular and Cellular Endocrinology， 2009,301,251） 。 0005 姜黄素 （Curcumin）是一种从姜黄根茎中提取得到的黄色色素， 是一种酸性酚 类物质， 主链为不饱和脂族及芳香族基团。药效学研究结果显示， 姜黄素及其衍生物 具有显著的抗氧化、 抗炎、 抗肿瘤以及抗血管生成等活性 （中国专利 200410013118.4 ； 200580042393.1 ； 200610163262.5 。
12、； 200610102338.3 ； 200810222060.2 ； 200810072457.8） 。 目前， 姜黄素也可以治疗前列腺癌 （Sundram V等， PLoS One， 2012， 7， e35368 ； Shehzad A等， Future Oncol.， 2012 ， 8， 179） ， 而且安全性非常高。人体试验结果表明， 即使达到 8 g/kg 的剂量， 仍不产生副作用 （Villegas, I et al. Mol. Nutr. Food Res. 2008, 52, 1040） 。 此外， 对怀孕大鼠试验结果表明， 大量口服姜黄素并不会明显增加出现死胎和流产的几率。
13、 （Sharma, R. A, et al. Clin. Cancer Res. 2001, 7, 1452） 。 0006 尽管姜黄素具有潜在的治疗前列腺癌的作用， 然而其生物利用度低、 人体吸收 极差， 因而极大地限制了其治疗前列腺癌的应用 （Ni X, et al. Oncol Rep. 2012， 28， 85 ； Yallapu MM, et al. Curr Drug Metab， 2012 ， 13， 120） ， 为此， 需要开发更好的抑制 HSD17B3 酶活性的姜黄素衍生物， 为日后开发预防和治疗雄激素依赖性疾病的药物提供实 验和临床基础。 0007 申请公布号 CN 10。
14、2381951 A 的发明专利说明书中公开了含环己酮的姜黄素单羰 基结构类似物用于治疗炎症或肿瘤的应用， 但是其未公开具体治疗那种类型的肿瘤。 0008 申请公布号 CN 102432447 A 的发明专利说明书中公开了含环戊酮的姜黄素单羰 基结构类似物用于治疗炎症或肿瘤的应用， 但是其未公开具体治疗那种类型的肿瘤。 0009 授权公告号 CN 101003470 B 的发明专利说明书中公开了一种姜黄素单羰基结构 类似物备用于治疗炎症或肿瘤的药物中的应用， 但是其未公开具体治疗那种类型的肿瘤。 发明内容 0010 本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足， 而提供一种生物利用度高、 人体容。
15、易吸收的一种姜黄素类似物的应用。 0011 本发明解决上述问题所采用的技术方案是 ： 该姜黄素类似物的应用， 其特殊之处 在于 ： 式、 式、 式、 式、 式、 式所述化合物之一或者其组合物作为抑制人 III 型 17beta- 羟基类固醇脱氢酶活性药物使用， （） 说 明 书 CN 103202825 A 5 3/6 页 6 （） （） （） （） （） 0012 本发明中， 式、 式、 式、 式、 式、 式所述化合物之一或者其组合物作为 雄激素依赖性疾病的预防和 / 或治疗药物使用。 0013 本发明中， 所述雄激素依赖性疾病包括但不限于 ： 人类雄激素依赖性前列腺癌、 良 性前列腺增生症。
16、、 痤疮、 皮脂炎、 多毛症、 雄激素性脱发、 性早熟、 肾上腺增生和多囊卵巢综 合征。 0014 本发明中， 式、 式、 式、 式、 式、 式所述化合物之一或者其组合物作为 避孕药使用。 0015 本发明中， 式所述化合物称为 YHX01， 式所述化合物称为 YHX02， 式所述化 合物称为 YHX03， 式所述化合物称为 YHX04， 式所述化合物称为 YHX05， 式所述化合物 称为 YHX06。 说 明 书 CN 103202825 A 6 4/6 页 7 0016 早期前列腺细胞及前列腺癌细胞生长具有雄激素依赖的生物学特性， 抑制雄激素 活性可以通过拮抗雄激素受体， 也可以干扰雄激素。
17、生物合成的一个或多个步骤的关键酶。 而 HSD17B3 酶是雄激素生物合成的关键酶， 抑制 HSD17B3 酶的活性可以降低睾酮的合成， 有效地治疗雄激素依赖型前列腺癌。后期前列腺细胞及前列腺癌细胞生长具有雄激素不 依赖的生物学特性， 因为此时前列腺癌细胞产生 HSD17B3 酶而利用肾上腺生产的去氢表雄 酮合成睾酮。抑制雄激素活性可以通过干扰雄激素生物合成的一个或多个步骤的关键酶 HSD17B3。同时， HSD17B3 酶抑制剂对良性前列腺增生具有同样的疗效， 也可以作为避孕药 使用。人体试验结果表明， HSD17B3 酶抑制剂姜黄素即使达到 8g/kg 的剂量， 仍不产生副作 用。此外， 。
18、对怀孕大鼠试验结果表明， 大量口服 HSD17B3 酶抑制剂姜黄素并不会明显增加 出现死胎和流产的几率。本发明中的姜黄素类似物具有抑制人睾丸 HSD17B3 酶的活性， 其 IC50在0.1-2.7 M， 显著高于姜黄素的67.3 M。 在这6个候选化合物中 （YHX01、 YHX02、 YHX03、 YHX04、 YHX05、 YHX06） ， 以 YHX02、 YHX04、 YHX05 优选作为治疗药用的化合物。YHX05 最佳。 0017 本发明化合物用作药物时， 可以采用散装形成直接使用， 也可以采用药物组合物 的形式使用。而该药物组合物含有 0.1%-99% 本发明化合物， 其余为药。
19、物学上可接受的， 对 人和动物无毒和惰性的可药用载体或者赋形剂。可药用载体或赋形剂是一种或者多种固 体、 半固体、 液体稀释剂、 填料以及药物制品。将本发明的药物以单位体重服务量的形式使 用， 可以经多种形式， 例如口服、 直肠舌下、 静脉或者透皮给药， 但优选口服给药。 0018 具体实施方式 0019 下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明， 以下实施例是对本发明的解释而 本发明并不局限于以下实施例。 0020 实施例 1。 0021 6 种姜黄素类似物抑制大鼠和人睾丸微粒体中 HSD17B3 性的检测。 0022 HSD17B3 是一种以 NADPH 为辅酶的还原酶， 主要在睾丸等组织。
20、的微粒体中表达。 0023 微粒体蛋白的制备 ： 成年大鼠睾丸和人睾丸微粒体通过 Ge RS， et al 报道的方法 进行制备 Ge RS， et al.Endocrinology， 1997， 138 ： 435-42。 0024 成年大鼠和人睾丸微粒体蛋白 HSD17B3 的活性检测 ： 成年大鼠和人睾丸微粒体蛋 白HSD17B3的活性检测按Ge RS， et al报道的方法进行Hu G， et al. J Steroid Biochem Mol Biol. 2009; 115:14-9。利用 3H- 雄烯二酮为底物， 检测睾酮生成的量， 表征 HSD17B3 活性。每个 HSD17B3。
21、 活性检测管中加入 200nM3H- 雄烯二酮 ( 该浓度在雄烯二酮 睾丸中浓度范围之内)和50mg微粒体蛋白和0.2 mM NADPH， 培养1.5-2hr后， 用2ml冰乙 醚终止。然后， 用有机溶剂提取孵育液中的甾体， 氮气气流中干燥后， 以氯仿 / 甲醇 (97:3， v/v) 为流动相， 通过薄层层析法分离甾体， 3H- 可雄烯二酮和 3H 睾酮的放射性通过扫 描辐射仪检测 (System AR2000， Bioscan Inc.， Washington， DC， USA)， 雄烯二酮和睾酮之间 的转化率由它们本身的放射性标准数计算确定。本实验以 DMSO 作为对照。 0025 实验。
22、结果如表1所示， 6种姜黄素类似物对人的睾丸HSD17B3酶的抑制能力均优于 姜黄素 （IC50=67.3M） ， 其 IC50为 0.1 M-2.7 M。因此优选用于治疗结前列腺癌的化合 物采用 YHX02, YHX03, YHX05, 以 YHX05 为最佳。 0026 表 1 姜黄素类似物对人和大鼠睾丸微粒体 HSD17B3 酶活性的抑制作用 说 明 书 CN 103202825 A 7 5/6 页 8 化合物 大鼠睾丸人睾丸 YHX01 （IC50=3.3M） a 39%b YHX0215%(IC50=2.4M) YHX03(IC50=8.5M)(IC50=2.7M) YHX0433%。
23、48% YHX05(IC50=1.8M)(IC50=0.1M) YHX0634%38% 姜黄素 (IC50=2.3M)(IC50=67.3M) a (IC 50, ) ； b 化合物浓度为 100 M 时 % 抑制。 0027 实施例 2。 0028 6 种姜黄素类似物抑制大鼠睾丸间质细胞中 HSD17B3 性的检测。 0029 HSD17B3是一种以NADPH为辅酶的还原酶， 主要在睾丸间质细胞中表达。 睾丸间质 细胞中HSD17B3活性测量无需外加NADPH。 用完整的睾丸间质细胞测量化合物， 反映化合物 对细胞的穿透性。 0030 成年大鼠睾丸间质细胞的分离 ： 90 日龄 6 只 SD。
24、 大鼠睾丸用于成年大鼠睾丸间质 细胞的分离。分离方法按 Salva， et al 报道的方法进行制备 Salva, A.; Klinefelter, G. R.; Hardy, M. P. J. Androl. 2001, 22,665。睾丸间质细胞的纯度按 Payne， et al 报道的方法用组织化学染色进行评估 3b- 类固醇脱氢酶， 睾丸间质细胞纯度为 95。 0031 成年大鼠睾丸间质细胞 HSD17B3 的活性检测 ： 大鼠睾丸间质细胞 HSD17B3 的 活 性 检 测 按 Ge RS， et al 报 道 的 方 法 进 行 Ge RS， et al. Endocrinolog。
25、y， 1997， 139(9):3787-95。 利用3H-雄烯二酮为底物， 检测睾酮生成的量， 表征HSD17B3活性。 每 个 HSD17B3 活性检测管中加入 200nM3H- 雄烯二酮 ( 该浓度在雄烯二酮睾丸中浓度范围 之内 ) 和 0.05106细胞， 培养 1.5-2hr 后， 用 2ml 冰乙醚终止。然后， 用有机溶剂提取孵 育液中的甾体， 氮气气流中干燥后， 以氯仿 / 甲醇 (97:3， v/v) 为流动相， 通过薄层层析法 分离甾体， 3H- 可雄烯二酮和 3H 睾酮的放射性通过扫描辐射仪检测 (System AR2000， Bioscan Inc.， Washingto。
26、n， DC， USA)， 雄烯二酮和睾酮之间的转化率由它们本身的放射性 标准数计算确定。 0032 实验结果如表2所示， 6种姜黄素类似物对人的睾丸间质细胞HSD17B3酶的抑制能 力与微粒体中效果不同。 0033 表 2 姜黄素类似物对大鼠睾丸间质细胞 HSD17B3 酶活性的抑制作用。 化合物 大鼠睾丸间质细胞 YHX01 （IC50=0.1M） a YHX02无抑制 b YHX0320%c YHX0430% YHX05(IC50=100M) YHX0613% 姜黄素 (IC50=9.0M) 0034 (IC50, ) ； b 无抑制 ； c 化合物浓度为 100 M 时 % 抑制。 00。
27、35 实施例 3。 说 明 书 CN 103202825 A 8 6/6 页 9 0036 姜黄素类似物抑制大鼠睾丸间质细胞中睾酮合成。 0037 睾丸间质细胞在 LH 刺激下合成睾酮。 0038 成年大鼠睾丸间质细胞的睾酮合成和测量 ： 0.1106睾丸间质细胞与不同浓度化 合物和 100ng/ml LH 培养 3hr， 培养液中睾酮用放免测量。睾酮用放免测量按 Salva et al 方法 Salva, A.; Klinefelter, G. R.; Hardy, M. P. J. Androl. 2001, 22,665。 0039 姜黄素对 LH 刺激睾酮 （T） 生产的影响。 0040 成年睾丸间质细胞。培养不同浓度的姜黄素用 0.1x106成年睾丸间质细胞在 100ng/ 毫升 LH 和脂蛋白的存在下 18 小时。平均 SE（SEM） ， N= 8，“*” 表示显着性水 平与对照值相比 0.001。 0041 10M 姜黄素抑制大鼠睾丸间质细胞睾酮生成。 0042 本说明书中所描述的以上内容仅仅是对本发明所作的举例说明。 本发明所属技术 领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式 替代， 只要不偏离本发明说明书的内容或者超越本权利要求书所定义的范围， 均应属于本 发明的保护范围。 说 明 书 CN 103202825 A 9 。