药用水合物 技术范围
本发明涉及二盐酸盐，它也是式(1)所代表的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑的一种含水分子的水合物及其制备方法，并进一步涉及该水合物在治疗人和动物或药物生产中的用途。
背景技术
已经公开，例如，在美国专利3,362,956中某些吲唑衍生物具有抗焦虑活性、、抗癫痫活性等中枢神经作用。同样，在Arzneim-Forsch.，37(4)，498-502(1987)中亦称某些哌嗪衍生物具有抑制钙调素的功能。
式(1)所示化合物是一种新的化合物，其盐和水合物也是新的化合物，已经证实式(1)所示化合物和它的盐可显示很强的钙调素抑制作用，在各种脑紊乱动物典型中也显示优异的脑保护作用。因此，该化合物有望用作药用以防止和治疗钙调素过分活化引起的各种疾病和缺血性脑疾患、脑变性疾病、外伤性脑病、药物中毒以及缺氧等引起的脑紊乱。
式(1)化合物的盐酸盐脱水物可通过如下制备：将游离碱在有机溶剂和盐酸混合物中进行结晶沉淀处理。然而，已经发现通过这种方法获得的脱水结晶含有用于结晶沉淀的溶剂，而且结晶中所含的溶剂即使在减压条件下加热干燥也不易除去。例如，当使用乙醇时，结晶中所含乙醇的量为一个大和宽的值由18,000到33,000ppm。它同样也发现，要预测晶体中所含溶剂的量和要将其调节到预先决定的水平并不容易。
另一方面，当在结晶沉淀中使用甲醇做溶剂时，这样所得的式(1)化合物的盐酸盐脱水物中也含有甲醇，但在减压条件下对晶体加热(120 ℃)干燥数天或更多天，所含的甲醇可几乎完全除去。然而，通过这种方法除去甲醇所得的盐酸盐脱水物却显示如下性质：在室温条件下可“应答”环境湿度而吸收水分(即显示当环境湿度高时吸收水分，但在湿度低时则释放水分的性质。见图1)。
因此，它表明式(1)化合物的盐酸盐脱水物的结晶不易制成药物制剂，因为它们引起各种问题。所以它们不适宜作为药物原料。
发明的公开内容：
本发明地目的是提供3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐，它没有前述的问题，作为药物制剂具有优异的性质并具有高的贮存稳定性。为了达到这一目的，本发明的发明人已经进行了深入的研究。
研究的结果令我们惊奇，3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐的一种水合物并不具有其盐酸盐脱水物的缺点，而且当贮存在一般环境条件下是完全稳定的。该水合物具有式(2)表示的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物的结晶形式。(有时后面简单提及为二盐酸盐3.5水合物)
相应地，本发明涉及3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐的结晶。它基本上具有如下的X射线衍射特征。
点阵间距d值() 相对强度
28.1 中等
27.5 中等
27.0 中等
26.4 中等
25.6 中等
25.3 强
24.7 中等
24.3 强
22.0 强
21.4 弱
20.9 中等
19.3 特别弱
17.8 中等
15.4 中等
13.8 中等
9.60 特别强
9.09 特别弱
8.46 中等
本发明还涉及前述晶体，其中3-〔 2-〔 4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐的结晶是3.5水合物。
本发明还涉及制备3-〔 2-〔 4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物的方法，它包括(a)在水存在下用盐酸处理游离形式的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑，或者(b)用水或/和盐酸处理3-〔 2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物，它所含的水和/或盐酸要少于3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物，或者(c)自3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物(它所含的水和/或盐酸多于欲制备的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物)中除去水和/或盐酸。或者(d)用水和盐酸处理3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑的非盐酸盐的盐。
本发明还涉及制备3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐的方法，它基本上具有如下的X-射线衍射特征：
点阵间距d值() 相对强度
28.1 中等
27.5 中等
27.0 中等
26.4 中等
25.6 中等
25.3 强
24.7 中等
24.3 强
22.0 强
21.4 弱
20.9 中等
19.3 特别弱
17.8 中等
15.4 中等
13.8 中等
9.60 特别强
9.09 特别弱
8.46 中等它包括： (a)在水存在下用盐酸处理游离形式的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑，或者(b)用水或/和盐酸处理3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物，它所含的水和/或盐酸少于3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物，或者(c)自3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物(它所含的水和/或盐酸多于欲制备的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物)中除去水和/或盐酸。或者(d)用水和盐酸处理3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑的非盐酸盐的盐。
本发明还涉及前述的制备方法，其中结晶3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐是3.5水合物。
本发明还涉及前述制备方法，其中在水存在下用盐酸处理游离形式的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑。
本发明还涉及前述制备方法，其中用水或/和盐酸处理3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物，它含的水和/或盐酸少于3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物。
本发明还涉及前述制备方法，其中自3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物，(它含的水和/或盐酸多于欲制备的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物)中除去水和/或盐酸。
本发明还涉及前述制备方法，其中在水和盐酸存在下处理3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑的非盐酸盐的盐。
另一方面。本发明还涉及3-〔 2-〔 4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物；
用于治疗人或动物的前述化合物；
用于治疗钙调素过分表达所引起的疾病的前述化合物；
用于治疗脑疾患的前述化合物或前述结晶；
前述化合物或前述结晶在药物制剂配制中的应用；
前述化合物或前述结晶在用于治疗脑疾患的药物制剂制备中的应用；
一个药物制剂，它包含3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物和至少一种可供药用的载体；
一个药物制剂，它包含3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐结晶，它基本上具有下列的X-射线衍射特征：
点阵间距d值(A) 相对强度
28.1 中等
27.5 中等
27.0 中等
26.4 中等
25.6 中等
25.3 强
24.7 中等
24.3 强
22.0 强
21.4 弱
20.9 中等
19.3 特别弱
17.8 中等
15.4 中等
13.8 中等
9.60 特别强
9.09 特别弱
8.46 中等以及至少一种可供药用的载体；
前述药物制剂，其中结晶3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐是3.5水合物；
前述药物制剂，其中该制剂用于治疗钙调素过分表达所引起的疾病；以及
前述药物制剂，其中该制剂用于治疗脑疾患。
下面详细描述本发明。
令我们惊奇的发现，式(2)所代表的本发明3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物具有下列性质。即，在25 ℃当相对湿度从约20％到80％范围内变动时，水合物的粉末X-射线衍射花样或可检测的水含量不显示变化(图2)。同样，在干热条件下，(50℃，瓶中密封，1个月)或湿热条件下(40℃，75％湿度，1个月)几乎没有发现它的外观变化，也没有发现它的含量(用HPLC测定)有变化。
从这些结果证实，式(1)化合物的二盐酸盐3.5水合物(由式(2)表示)具有优异的贮存稳定性。因此这意味着该水合物可贮存很长一段时间而无变化。特别是，该水合物并不吸收作为3.5水合物所含水分子以外的水分子，因此作为药物所含的活性成分的量在贮存期间不会变化。此外，发现它同脱水物的情况相似，其结晶中不含有机溶剂。
式(2)的二盐酸盐3.5水合物的结晶可通过它的粉末X-射线衍射花样检定，例如，它们显示出图3的光谱以及表6中的特征峰。
式(2)的二盐酸盐3.5水合物可通过元素分析进一步检定，它与其分子式C26H31ClN6O2·2HCl·3.5H2O的理论值相符(分子量：631.00)
理论值：C，49.49％；H，6.39％；N，13.32％；Cl，16.86％
实测值：C，49.22％；H，6.38％；N，13.09％；Cl，16.85％
用Karl Fischer′s法测定式(2)的二盐酸盐3.5水合物的含水量与其理论值相符。
理论值：9.99％
实测值：10.53％
式(2)的二盐酸盐3.5水合物还可通过图4的热分析检定。
式(2)的二盐酸盐3.5水合物可由选自下列方法中的一个方法制备。(a)一种方法，其中在水存在下用盐酸处理游离形式的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑。(b)一种方法，其中用水或/和盐酸处理3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物，它所含的水和/或盐酸少于欲制备的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物。(c)一种方法，例如通过中和、干燥和类似方法，自3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐水合物中(它所含的水和/或盐酸多于欲制备的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1 H-吲唑二盐酸盐3.5水合物)除去水和/或盐酸。(d)一种方法，其中在水和盐酸存在下处理3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑的非盐酸盐的盐，在此情况下，作为偶然要求，可能要在获得游离形式的化合物后进行处理。
在进行上述处理时，作为偶然要求可使用有机溶剂。最常用醇类作这类溶剂，并且，当考虑到毒性时，常考虑用乙醇或丙醇，更考虑用乙醇。
要进行这种处理，意即需让原料化合物在水存在下和盐酸反应，以便有效生成期望的盐酸盐水合物结晶。这可以在悬浮状态下进行，但一般更愿意在溶液状态下进行处理。在该情况下，可以使用纯化步骤，例如，通过加入活性炭。
当要中和一个盐酸盐(含有的盐酸多于二盐酸盐)或非盐酸盐的一种酸加成盐时，则可通过让它和一种碱金属的氢氧化物，碳酸盐，碳酸氢盐，醇(酚)盐等在溶液中反应而中和，然后，游离形式的化合物可通过常用的方法获得，如果需要，可进行萃取等处理。
在含有过多的盐酸(氯化氢)或水的结晶情况下，依据它们的性质在有些场合下可能更为有效，即先获得游离形式然后将它转变成期望的化合物，而不是通过中和，干燥等方法得到期望的结晶。
当要将游离形式的或含盐酸少的结晶转变成二盐酸盐时，所用盐酸量的范围在等量到3倍量之内，一般在1.5到2倍当量范围内，水的用量大致是所用结晶重量的2到20倍，优选是在3到5倍范围内。(当1g结晶粗品用2ml水时，意即2倍)
优选的制备二盐酸盐3.5水合物的方法，其中向式(1)游离形式的化合物中加入适宜数量的1N盐酸和水，加热使混合物溶解并在搅拌下将所得均一溶液冷至室温，这样，将期望的化合物结晶析出。
因为它在水中的稳定性，本发明的二盐酸盐3.5水合物不仅可通过口服给药，也可由胃肠道外给药，特别是静脉内注射发挥它的效用。因此，它可通过口服和胃肠道外方法给药。
本发明二盐酸盐3.5水合物的剂量可依据每个患者的症状，年龄，体重等灵活变动，通常，每个成人每天口服剂量可在1mg到1,000mg范围内，优选为10mg到500mg。其剂型的例子包括片剂，胶囊，粉末，颗粒等。这些可用已知的制剂技术，结合常用的填充剂，润湿剂，结合剂等附加剂来制备。在胃肠道外给药情况下，每个成人每天剂量可在1mg到500mg范围内，优选为10mg到250mg，它可通过皮下或静脉内注射或滴注给药。
一个含有式(2)所代表的本发明的二盐酸盐3.5水合物的药物制剂，当和其它药物联用时，将在预防和治疗各种疾病方面发挥相加的和协同作用。这类药的实例包括脑循环改善剂(桂哌酚马来酸盐或类似物)，脑代谢改善剂(艾地苯醌，茚氯嗪或类似物)，精神治疗药物(替米哌隆或类似物，imiplamin或类似物，安定或类似物)，颅内减压剂(glyceol或类似物)，抗高血压药，血管扩张药(曲匹地尔或类似物)，解热镇痛消炎药，抗炎甾体，抗凝血剂(肝素或类似物)，纤维蛋白溶解诱导剂(组织纤维蛋白溶解原活化剂或类似物)，利尿药，抗血脂剂(普罗布考或类似物)，抗溃疡药，人工血液制剂，肝病治疗剂，抗恶性肿瘤药及等等。
〔制剂实例〕
本发明的二盐酸盐3.5水合物可通过一般的已知方法制成药物制剂。这些方法可参考下列配方实例叙述阐明，当然本发明当然不受这些实例的限制。一些处方，其中使用了发明实例3所制备的化合物，被应用于配方实例中。〔制剂实例1〕
(1)发明实例3的化合物 10g
(2)乳糖 50g
(3)玉蜀黍淀粉 15g
(4)羟丙基纤维素 8g
(5)羧甲基淀粉钠 7g
(6)硬脂酸镁 1g
将上述组分(1)，(2)，(3)和(5)放入流化床制粒机中并混合均匀，并以组分(4)的6％水溶液作粘合溶液将混合物制成粒。将这种颗粒与组分(6)混合均匀并作为制片时用的混合物粉末。用这些粉末可制备直径8mm并含100mg化合物.(1)的片剂100片。〔制剂实例2〕
(1)发明的实例3化合物 2g
(2)0.1N盐酸 150ml
(3)葡萄糖 50g
(4)注射用蒸馏水 可调
(见下)
将以上组分(1)、(2)和(3)相混合并溶解，然后通过加入注射用蒸馏水调节至总体积1,000ml。此溶液用0.2μm过滤器进行无菌过滤，再按10ml一份分配到容量10ml的安瓿中。
附图简述
图1是一曲线显示3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑盐酸盐脱水物重量变化，按湿度的函数绘制的。图2是一曲线显示本发明3.5水合物重量变化，按湿度函数绘制的。图3是本发明的3.5水合物的粉末X-射线衍射谱，图4是本发明的3.5水合物的热分析谱。
实施本发明的最佳方式：
本发明可参考下面实例更详细叙述，当然，本发明不受这些实例所限制。〔参考实例1〕5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-羧酸乙酯
将5，6-二甲氧基吲唑-3-羧酸乙酯(250.2g)悬浮于二甲基亚砜(5,000ml)中，悬浮液与甲氧基锂(40.2g)混合并在室温下搅拌。室温搅拌1小时后，室温下经10分钟于该混合物滴加4-氯甲基-1-三苯甲基咪唑(447.8g)的二甲亚砜(2,000ml)溶液。当所得混合物如上述在室温搅拌2小时后，与甲氧基锂(4.2g)和4-氯甲基-1-三苯甲基咪唑(44.8g)混合，然后室温搅拌1小时，观察到原料点在薄层色谱(氯仿/乙醇二30/1)上差不多消失。将反应液倒入搅拌着的冰水(30,000ml)中，结晶沉淀。结晶用吸滤器收集，用水(2,000ml×3)洗，然后空气干燥。将结晶溶于氯仿(10,000ml)，所得溶液用硫酸钠干燥，过滤，然后减压蒸去溶剂。所得剩余物用硅胶柱(氯仿/乙醇＝50/1)分离和纯化。用氯仿-异丙醇重结晶得到222.0g无色棱状晶体(熔点：184-186℃)IR(KBr)cm-1：1704，1496，1268，1146，1132，1092，748，7001H-NMRδ(ppm，CDCl3)：
1.21(6H，d，J＝5.9Hz，Me of iso-PrOH)，
1.46(3H，t，J＝7.3Hz)，3.93(3H，s)，
3.97(3H，s)，4.01(1H，m，CH of iso-PrOH)，
4.49(2H，q，J＝7.3Hz)，5.61(2H，s)，
6.79(1H，s)，7.03(5H，m)，(7.13(1H，s)，
7.28(10H，m)，7.47(1H，s)，7.51(1H，s).元素分析C35H32N4O4·C3H8O
理论值：C72.13％；H6.37％；N8.85％
实测值：C71.53％；H6.37％；N8.70％〔参考实例2〕5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-甲醇
用研钵将5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-羧酸乙酯(222.0g)研磨成粉，室温下混悬于四氢呋喃(1,300ml)中，并用冰水冷却此悬浮液。于15分钟内向该悬浮液加入双甲氧基乙氧基氢化铝钠(3.4M甲苯溶液，约250.0ml)，随后于冰浴中搅拌。30分钟后，可观察到原料点在薄层色谱上几乎消失(乙酸乙酯/己烷＝2/1)，将反应液与过饱和硫酸钠水溶液混合，搅拌1小时，和硫酸钠混合，然后过滤。在该情况下，用热的氯仿(500ml×5)洗涤过滤器上的硫酸钠。合并滤液和洗涤液，在减压条件下蒸发掉溶剂得无色固体(220.1g)。自氯仿重结晶，得181.0g无色棱状晶体(熔点：115-120℃(分解))。IR(KBr)cm-1：3216，3172，3008，2936，1510，1488，1472，1444，1302，1260，1172，1156，1128，1102，1036，1014，836，764，746，702，678，666，6361H-NMRδ(ppm，CDCl3)：3.91(3H，s)，3.92(3H，s)，4.92(2H，s)，5.44(2H，s)，6.76(1H，s)，6.95(1H，s)，7.05(5H，m)，7.26(1H，s，CHCl3)，7.28(1H，s)，7.31(10H，m)，7.46(1H，s)元素分析C33H30N4O3·CHCl3
理论值：C62.83％；H4.81％；N8.62％
实测值：C62.50％；H4.63％；N8.42％ 〔参考实例3〕3-氯甲基-5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑
用研钵将5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-甲醇(180.0g)磨成粉末，室温下混悬于二氯甲烷(1,700ml)中。形成悬浮液后，冰浴冷却下搅拌此反应液。于5分钟内向反应液中滴加48.6ml亚硫酰氯，1分钟后可观察到薄层色谱(氯仿/乙醇＝30/1)上的原料点几乎消失。将反应液倒入至饱和碳酸氢钠水液(2,000ml)中，并用氯仿(5,000ml)萃取，萃取液用硫酸钠干燥，过滤而后减压蒸发，得到无色固体(165.1g)。该固体物质即可用于以下的反应。1H-NMRδ(ppm，CDCl3)：
3.95(3H，s)，4.09(3H，s)，4.83(2H，s)，
5.67(2H，s)，7.02(8H，m)，7.37(10H，m)，
7.88(1H，br)〔参考实例4〕5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-乙腈
将3-氯甲基-5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑(165.0g)混悬于二甲亚砜(1,200ml)中并室温搅拌。向此悬浮液加入已用研钵磨成粉末的氰化(cyanate)钾(43.6g)。当反应液在70℃搅拌1小时后，反应液变得均一透明，并观察到薄层色谱(乙酸乙酯/己烷＝2/1)上的原料点几乎全消失。将反应液冷却至室温并倒入至剧烈搅拌的水(15,000ml)中，并搅拌此混合物1小时。这样沉淀下来的固体物质用吸滤收集，用水(1,000ml×3)洗涤并溶于氯仿(5,000ml)，所得溶液用硫酸钠干燥并过滤。然后减压蒸发掉溶剂。用硅胶柱(乙酸乙酯)分离纯化所得剩余物，得到108.7g浅褐色固体。此固体物质在随后的反应中可直接使用。1H-NMRδ(ppm，CDCl3)：
3.92(3H，s)，3.94(3H，s)，3.97(2H，s)，
5.42(2H，s)，6.79(1H，s)，7.00(1H，s)，
7.02(1H，s)，7.06(5H，m)，7.30(10H，m)，
7.46(1H，s)〔参考实例5〕5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-乙酸
于室温下将5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-乙腈(107.0g)混悬于乙醇(1,000ml)中，向该悬浮液加入10N氢氧化钠水液(自40.0g氢氧化钠，100ml水制备)，随后回流下加热此混合物。6小时后可观察到薄层色谱(乙酸乙酯)上的原料点几乎消失。反应液冷却至室温并倒入水(5,000ml)中，用10％
盐酸水液调节pH3到4时，一种无色固体物质沉淀析出，过滤收集此固体物质并用水(500ml×3)洗涤，将这样得到的固体物质溶于氯仿(5,000ml)，所得溶液用硫酸钠干燥并过滤。然后减压蒸发溶剂。这样得到的134.0g固体物质可直接用于随后反应。1H-NMRδ(ppm，CDCl3)：
3.84(3H，s)，3.87(3H，s)，3.89(2H，s)，
5.43(2H，s)，6.76(1H，s)，6.88(1H，s)，
6.93(1H，s)，7.03(5H，m)，7.28(10H，m)，
7.48(1H，s)〔参考实例6〕4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-〔〔5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-基〕乙酰基〕哌嗪
将5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基-1H-吲唑-3-乙酸(134.0g)混悬于二氯甲烷(1,000ml)中，向此悬浮液加入2，2-二吡啶基二硫化物(disulfide)(63.5g)和三苯膦(75.6g)，随后于室温搅拌此混合物(悬浮液变成均一溶液)。于5分钟内向此混合物中滴加4-(3-氯-2-甲基苯基)哌嗪(60.7g)的二氟甲烷(200ml)溶液，随后室温搅拌5小时。可观察到薄层色谱(乙酸乙酯/己烷＝3/1)上的原料点几乎全消失。减压蒸发掉反应液中的二氯甲烷，所得剩余物用热乙酸乙酯混合并搅拌到发生固体物质沉淀。吸滤收集此固体物质，乙酸乙酯(500ml)洗涤并空气干燥得到140.4g无色固体物质。用硅胶柱(氯仿/乙醇＝30/1)分离纯化此固体物质，得134.9g无色固体。用乙醇重结晶，得到120.0g无色棱状结晶(熔点：103-105℃) IR(KBr)cm-1：1646，1628，1508，1566，1450，1430，1260，750，7021H-NMRδ(ppm，CDCl3)：
1.23(1.2H，t，J＝6.8Hz)，Me of EtOH)，2.28
(3H，s)，2.55(2H，m)，2.73(2H，m)，3.67
(4H，m)，3.71(0.8H，q，J＝6.8Hz，CH2 of EtOH)，
3.90(3H，s)，3.93(3H，s)，4.03(2H，s)，5.43
(2H，s)，6.68(1H，s)，6.72(1H，d，J＝8.3Hz)，
6.90(1H，s)，7.03(7H，m)，7.14(1H，s)，7.27
(10H，m)，7.41(1H，s)元素分析C45H43N6O3Cl·0.4EtOH·H2O
理论值：C70.10％；H5.70％；N10.70％；Cl4.72％
实测值： C70.02％；H5.78％；N10.60％；Cl5.11〔发明的实例1〕3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑
将4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-〔〔〔5，6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-咪唑基)甲基〕吲唑-3-基〕乙酰基〕哌嗪(120.0g)混悬于四氢呋喃(1,000ml)中。向该悬浮液加入1.0M甲硼烷四氢呋喃络合物(800ml)，随后回流加热此混合物，90分钟后可观察到薄层色谱(乙酸乙酯)上的原料点几乎消失。将反应液冷却至室温并与水(30ml)混合以分解过量试剂。减压下蒸发掉四氢呋喃，所得剩余物与浓盐酸(150ml)，水(200ml)及乙醇(40ml)混合并在50℃搅拌1小时。将水层冷却至室温，用碳酸钾碱化并用氯仿(3,000ml)萃取，有机层用硫酸钠干燥并过滤，随后减压蒸发掉溶剂，用硅胶柱色谱(氯仿/乙醇＝40/1)分离并纯化所得剩余物，得到一无色固体。用异丙醇-异丙醚重结晶此无色固体得到71.0g无色棱状结晶(熔点：143-144.5℃)IR(KBr)cm-1：1510，1464，1432，1272，1238，1206，10061H-NMRδ(ppm，CDCl3)：
2.34(3H，s)，2.78(4H，m)，2.90(2H，m)，
2.97(4H，m)，3.17(2H，m)，3.90(3H，s)，
3.91(3H，s)，5.45(2H，s)，6.83(1H，s)，
6.84(1H，s)，6.92(1H，m)，7.00(1H，s)，
7.09(2H，m)，7.52(1H，s)元素分析C26H31N6O2Cl
理论值：C63.09％；H6.31％；N16.98％；Cl7.16％
实测值：C62.93％；H6.30％；N16.88％；Cl7.16％〔发明的实例2〕3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑1.5盐酸盐(无水结晶)
在1,000ml乙醇中加热溶解60g结晶3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑(游离形式)。所得溶液与182.2ml 1N盐酸混合并搅拌20分钟，然后减压蒸发掉溶剂。所得剩余物在五氧化二磷存在下减压室温干燥12小时。用1,300ml无水乙醇加热溶解所得粉末。溶解后，加热浓缩溶液至约1,000ml。在搅拌下将浓缩液自动冷却，加入晶种后，于搅拌下进一步冷却至室温。过滤收集沉淀的结晶并于五氧化二磷存在下减压加热(60℃)干燥12小时，得64g无色结晶(熔点：226.5-228℃)IR(KBr)cm-1：2968，2836，2712，2544，2456，1512，1470，1436，1338，1260，1208，1166，1108，1032，1006，8621H-NMR(ppm，d6-DMSO)δ：
2.32(3H，s)，3.20-3.21(3.5H，m)，
3.40-3.52(10H，m)，3.82，3.86(each 3H，s)，
5.53(2H，s)，7.08(1H，dd)，7.19-7.25(2H，m)，
7.31-7.33(3H，m)，8.36(1H，s).通过HPLC分析证实在这种情况下得到的结晶含有约15,000ppm的残余乙醇。〔发明的实例3〕3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物。
一份4.95g游离形式的3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑与20ml 1N盐酸和蒸馏水混合至总体积49.5ml。然后，反应容器于外部温度120℃加热以使体系内部有效回流以使完全溶解结晶。在搅拌器搅拌下将溶解的溶液冷却至室温而后搅拌一天一夜。过滤收集沉淀的结晶并空气干燥2天，得到5.5g无色棱状结晶(熔点：166-167℃)IR(KBr)cm-1：3400，2850，1625，1505，1460，1425，1245，1150，1010，8401H-NMR(ppm，d6-DMSO)δ：
2.39(3H，s)，3.30-3.80(20H，m)，5.74(2H，s)，
7.15(1H，dd)，7.28(1H，s)，7.30(1H，dd)，
7.43(1H，s)，7.52(1H，s)，7.69(1 H，s)，
9.13(1H，s)，11.80(1H，bs)，14.80(1H，bs).元素分析C26H31N6O2Cl·2HCl·3.5H2O
理论值：C，49.41；H，6.54；N，13.30；Cl，16.83
实测值：C，49.15；H，6.44；N，13.29；Cl，16.99.粉末X-射线衍射数据
测量条件；
射线源：Cu-Kα射线(检测器旁边，单色器产生的单色射
线)
检测器：闪烁计数器
X-射线电压：35KV 电流：20mA
扫描速率：2°/分 取样间距：0.010°
狭缝系统：
发散狭缝：1.0° 散射狭缝：1.0°
接收狭缝：0.15mm
仪器：粉末X-射线衍射计MXP-3V
Mack Science制造
表6显示的是X-射线衍射光谱的特征峰。
点阵间距d值() 相对强度
28.1 中等
27.5 中等
27.0 中等
26.4 中等
25.6 中等
25.3 强
24.7 中等
24.3 强
22.0 强
20.9 中等
19.3 特别弱
17.8 中等
15.4 中等
13.8 中等
9.60 特别强
9.09 特别弱
8.46 中等〔发明的实例4〕3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物。
一份5.50g的结晶3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑1.5盐酸盐(脱水产物)与5.0ml 1N盐酸和蒸馏水混合至总体积49.5ml。然后，反应容器在外部温度120℃加热使体系内部有效回流，从而使结晶全溶。该溶解液在搅拌器搅拌下冷却至室温然后搅拌一日一夜。过滤收集这样沉淀的结晶并空气干燥2天，得到5.6g无色棱状结晶(熔点：166-167℃)
这样得到的结晶显示出与发明的实例3所得的同样的物理数据。
本发明化合物的药理实验实例如下所示，其中结果主要用它的无水物得到的。
关于毒性，其口服一次给药毒性为200mg/kg或更多，于大鼠重复口服给药毒性实验10天以上和重复静脉内注射毒性实验10天以上，没有观察到严重的副作用。
于狗没有观察到对血液动力学和心电图的特别严重的作用，于恒河猴，甚至当静脉内注射给药剂量为10mg/kg时也未观察到明显的中枢神经抑制作用。〔药理实验实例1〕钙调素抑制作用
通过以钙调素-依赖的磷酸二酯酶(PDE)抑制作用作为指数可评价钙调素的抑制作用。本实验修改并使用Tompson et al法(Advancesin Cyclic Nucleotide Research 10，69，1979)。即，将50mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.5，含有5mM氯化镁和1mg/ml牛血清清蛋白)，1mM氯化钙，〔3H〕-cGMP，钙调素(CaM，自牛脑，CaM-PDE(钙调素-依赖的磷酸二酯酶，自牛脑)和一待测样品混合并于30℃孵化10分钟。在沸水浴中加热该混合物1分钟使反应停止，与蛇毒(1mg/ml)混合然后在30℃反应10分钟以使PDE形成的5′-GMP有效转变成鸟嘌呤核苷。随后，用离子交换树脂(AG1-X8)吸附未反应的cGMP，并用液体闪烁计数器测量经过离心得到的上清液的放射性活度。PDE抑制作用(按IC50计算)为5.46μM。另一方面，以W-7作对照化合物显示值为33.5μM。〔药理试验实例2〕对小鼠负荷氮缺氧模型的作用
这个试验是依照Albert Wauquier et al的方法(Japan J.Pharmacol.，38，1-7(1985))进行的。
每组所用小鼠总数为9到10只，并将每只小鼠在口服给药待试验的药(30mg/kg)60分钟后放入装有空气出口的透明容器(容积500ml)中，然后以5.0L/min的速率向容器中通氮气。测量从开始通气到呼吸停止这段时间。当定义对照组为100％时，增长率为15.1％。〔药理实验实例3〕脑局部缺血模型中河马神经细胞的变化
当对一只沙鼠进行瞬间脑局部缺血处理，此后几天河马神经细胞开始坏死，这样的改变称为迟滞性神经细胞死亡。
下面的实验是依据T.Kirino的方法(Brain Res.，239，57-69(1982))进行的。即，每一只沙鼠处于脑局部缺血5分钟，然后杀死并计算河马CA1区域中剩余的神经细胞的数目。
经过脑局部缺血后河马CA1神经细胞几乎全部死亡，但在脑局部缺血处理1小时后口服给药化合物(100mg/kg)显示显著的抗神经细胞死亡的保护作用。实验组 河马神经细胞密度
(细胞数/mm)正常组 194±6.1脑局部缺血组 9±1.3脑局部缺血+化合物组 131±21.2**
**：P＜0.01对脑局部缺血组，n＝9-10〔药理实验实例4〕大鼠中心体脑栓模型中的抗水肿效应
这个实验是依据Nobutaka Demura et al的方法(NeuroscienceRes.，17，23-30(1983))进行的。
在卤烷麻醉下，将事先经过尾静脉插管术处理的Slc；Wis大鼠(约300g)切开颈部并撕断左侧“普通”颈动脉，同样撕断同侧的翼突腭动脉(Wing process palate artery)和外部颈动脉并夹上动脉夹。将碳微球体(Carbon microspheres，直径在50±10μm)混悬于20％葡聚糖中并注入到左侧普通颈动脉管，以使微球体通过左侧内部颈动脉分散在左脑半球中，立即夹住左侧普通颈动脉阻止血液从微球体注射部位流出，随后再移掉动脉夹让血液循环重新开始。此后，用一个输注泵从已经插入尾动脉的导管连续不断的注入各个药物溶液。
手术后24小时，用断头术杀死每一只动物，断头术后立即切开大脑，称量左右半球的湿重，然后将每个组织于150℃干燥过夜，称量其干重并计算每个半球的水含量。
作为对照组，按同样方式安排和处理赋形剂组(只有20％葡聚糖)。实验组 对照侧 患病侧
(右半球) (左半球)
水含量(％)对照组(应用赋形剂组) 78.8±0.1 81.1±0.3应用化合物组(剂量2mg/kg/hr，8hr) 78.7±0.1 79.8±0.3*(剂量1mg/kg/hr，8hr) 78.8±0.1 80.1±0.4*
P＜0.05(Students t试验)n＝5
工业适用性
本发明发现3-〔2-〔4-(3-氯-2-甲基苯基)-1-哌嗪基〕乙基〕-5，6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基)-1H-吲唑二盐酸盐3.5水合物为一种新的结晶。该结晶特征为其显著的贮存稳定性，因此，它可用作为一种药物原料。