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1、(10)申请公布号 CN 102716113 A (43)申请公布日 2012.10.10 CN 102716113 A *CN102716113A* (21)申请号 201210241694.9 (22)申请日 2012.07.13 A61K 31/35(2006.01) A61P 15/02(2006.01) A61P 31/20(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 31/015(2006.01) A61K 31/045(2006.01) A61K 31/122(2006.01) A61K 31/343(2006.01) (71)申请人 海南碧凯药业有限公司。
2、 地址 570216 海南省海口市南海大道 100 号 美国工业村 1-4,1-5 单元 (72)发明人 陈容 徐扬 冯仲异 黄娴 (54) 发明名称 一种含有莪术烯的药物组合物 (57) 摘要 本发明属于医药技术领域， 本发明提供了一 种含有莪术烯的药物组合物， 该组合物中含有吉 马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香烯、 莪术醇、 莪术烯， 冰片的药物组合物。 该药物组合物成分明 确， 质量可控 ； 该药物组合物控制莪术烯的含量， 减少药物的刺激性 ； 本发明所述的药物组合物可 以用于制备栓剂， 软膏剂、 胶囊剂、 泡腾片、 凝胶 剂、 洗剂、 膜剂或泡沫剂 ； 本发明所述的药物组合 物。
3、对 HR-HPV 和 / 或 LR-HPV 等疾病具有很好的治 疗作用， 适于临床广泛应用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 11 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 11 页 1/1 页 2 1. 一种药物组合物， 其特征药物组合物包含吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香烯、 莪术醇、 莪术烯、 冰片。 2. 根据权利要求 1 所述的药物组合物， 其中所述的药物组合物， 包含以下重量份的成 分 ： 吉马酮 5-16 重量份 ； 呋喃二烯 10-40 重量份 ； 莪术二酮 5-25 重量份 ； - 榄香烯 4-1。
4、1 重量份 ； 莪术醇 1-10 重量份 ； 莪术烯 4 重量份 - 小于 8 重量份 ； 冰片 30-90 重量份。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的药物组合物， 其中所述的冰片选自天然冰片和 / 或合成 冰片。 4. 根据权利要求 1 或 2 所述的药物组合物制备成阴道给药制剂或直肠给药制剂。 5. 根据权利要求 4 所述的制剂， 其中制剂包括栓剂， 软膏剂、 胶囊剂、 泡腾片、 凝胶剂、 洗剂、 膜剂或泡沫剂。 6.根据权利要求1或2所述的药物组合物在制备预防和/或治疗人乳头瘤病毒感染的 药物中的应用。 7. 根据权利要求 6 所述的应用， 其中人乳头瘤病毒感染包含高危型人乳头瘤病。
5、毒感染 和 / 或低危型人乳头瘤病毒感染。 8.根据权利要求1或2所述的药物组合物在制备预防和/或治疗阴道炎、 宫颈糜烂、 宫 颈癌的药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102716113 A 2 1/11 页 3 一种含有莪术烯的药物组合物 技术领域 0001 本发明属于医药技术领域， 具体涉及一种含有吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄 香烯、 莪术醇、 莪术烯、 冰片的药物组合物。 背景技术 0002 近十几年来， 以保妇康栓 ( 主要成分为莪术油和冰片 ) 为代表的中药被广泛应用 于女性生殖道等疾病的治疗 ( 比如 HPV 感染 )， 并取得了很好的疗效 ； 因此， 在此基础。
6、上针 对活性成分开发新的药物组合物来预防治疗 HPV 感染以及其诱发的良性或恶性病变等疾 病， 特别是对至宫颈癌的 HR-HPV 感染具有重要意义。 0003 莪术， 为姜科植物蓬莪术、 广西莪术或温郁金的干燥根茎。后者习称 “温莪术” 。蓬 莪术含挥发油 1.5 2， 以莪术酮含量最高， 其次为莪术醇、 莪术烯醇、 莪术二醇等。此 外尚含有莪术多糖。 广西莪术含挥发油11.2， 油中含20余种成分， 含量最高为樟脑、 约 17.7， 桉油精约 7.5， 并含姜烯、 莪术醇、 芳姜黄烯、 芳姜酮、 莪术双酮等。温郁金含挥 发油1.42.0， 油中含20余种主成分， 主要为莪术醇， 莪术双酮、 。
7、吉马烯、 吉马酮等， 近 报道从中分出 -， -， - 榄香烯， 其中 - 榄香烯为主要抗肿瘤活性成分。 0004 3 个品种莪术挥发油化学成分的比较 ( 中草药， 第 36 卷第 12 期， 1785 1787) 对上述三个产地的莪术进行了比较， 指出不同品种莪术虽然有很多共有成分， 但质量分数 差别较大 ； 莪术烯在不同产地莪术挥发油中的量均较高， 特别是常用的温莪术的挥发油中 的莪术烯高达 21.10。 0005 莪术烯 ( 英文名 Curzerene)， 化学名 ： 6- 甲二叉甲基 -4， 5， 6， 7- 四氢 -3， 6- 二甲 基 -5- 异丙烯基 - 反式 - 苯并呋喃， 分。
8、子式为 C15H20O， 分子量为 216.32， 结构式如下 ： 0006 0007 莪术油主要活性成分之一的呋喃二烯在 100或 100以上长时间加热过程中发 生周环化得到莪术烯。经家兔阴道刺激性实验证实， 莪术烯具有刺激性。 发明内容 0008 为解决上述现有技术中所存在的问题， 本发明提供了一种药物组合物及其制剂。 0009 本发明的目的是提供一种药物组合物， 该组合物对 HR-HPV 和 / 或 LR-HPV 感染有 效。 0010 本发明的目的是提供一种药物组合物， 该组合物对阴道炎有效。 0011 本发明的目的是提供一种药物组合物， 该药物组合物中控制莪术烯的用量。 0012 本。
9、发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂。 说 明 书 CN 102716113 A 3 2/11 页 4 0013 本发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂， 所得制剂的刺激性较小。 0014 本发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂在抗 HPV 病毒中的应用。 0015 本发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂在治疗阴道炎中的应用。 0016 具体而言， 本发明提供了 ： 0017 一种药物组合物， 其特征药物组合物包含吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香 烯、 莪术醇、 莪术烯、 冰片。 0018 上述所述的药物组合物， 包含以下重量份的成分 ： 0019 吉马酮 5。
10、-16 重量份 ； 0020 呋喃二烯 10-40 重量份 ； 0021 莪术二酮 5-25 重量份 ； 0022 - 榄香烯 4-11 重量份 ； 0023 莪术醇 1-10 重量份 ； 0024 莪术烯 4 重量份 - 小于 8 重量份 (4 重量份至小于 8 重量份 ) ； 0025 冰片 30-90 重量份。 0026 上述所述的冰片选自天然冰片和 / 或合成冰片。 0027 上述所述的药物组合物制备成阴道给药制剂或直肠给药制剂。 0028 所述制剂包括栓剂， 软膏剂、 胶囊剂、 泡腾片、 凝胶剂、 洗剂、 膜剂或泡沫剂。 0029 上述所述的药物组合物在制备预防和 / 或治疗人乳头瘤。
11、病毒感染的药物中的应 用。 0030 其中人乳头瘤病毒感染包含高危型人乳头瘤病毒感染和 / 或低危型人乳头瘤病 毒感染。 0031 上述所述的药物组合物在制备预防和 / 或治疗阴道炎、 宫颈糜烂、 宫颈癌的药物 中的应用。 0032 本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果 ： 0033 1、 本方明所述的药物组合物成分明确， 质量可控 ； 0034 2、 本发明所述的药物组合物不受原料产地的限制， 适合工业大生产 ； 0035 3、 本发明所述的药物组合物对 HR-HPV 和 / 或 LR-HPV 均有效， 适于临床广泛应用。 0036 药理学试验 0037 以下通过具体实施方式的描述对本。
12、发明作进一步说明， 但这并非是对本发明的限 制， 本领域技术人员根据本发明的基本思想， 可以做出各种修改或改进， 但是只要不脱离本 发明的基本思想， 均在本发明的范围之内。 0038 莪术油购自江西吉安华美香料提炼厂， 根据中国药典 2010 版第一部的要求检测 吉马酮含量为 12.3。 0039 吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香烯、 莪术醇、 莪术烯购自上海顺勃生物有限 公司。 0040 冰片购自天津利朗化工科技有限公司。 0041 试验例 1 ： 阴道刺激性实验 0042 动物 ： 健康性成熟雌性大耳白家兔 30 只， 体重 2.5 3.0kg。 0043 试验药物 ： 说 明 。
13、书 CN 102716113 A 4 3/11 页 5 0044 药物 1 组 ： 保妇康栓， 海南碧凯药业有限公司生产， 每粒重 1.74g， 其中含莪术油 88mg， 冰片 75mg， 其余成分为基质。 0045 药物 2 组 ： 实施例 1 所得栓剂 ( 含莪术烯 4mg/ 粒 )。 0046 药物 3 组 ： 向实施例 1 所述的处方中再添加 4g 莪术烯， 按实施例 1 所述方法制备 的栓剂 ( 含莪术烯 8mg/ 粒 )。 0047 药物 4 组 ： 向实施例 1 所述的处方中再添加 6g 莪术烯， 按实施例 1 所述方法制备 的栓剂 ( 含莪术烯 10mg/ 粒 )。 0048 。
14、试验方法 ： 0049 雌兔 30 只， 随机分为 6 组， 分别为空白组、 机械刺激组、 药物 1 组、 药物 2 组、 药物 3 组、 药物 4 组。每天定时以消毒的玻璃套管将栓剂缓缓推入阴道深处 ( 机械刺激组只使 用玻璃套管不加药物 )， 给药前用消毒过的玻璃套管刺激使其排尿， 给药后将家兔仰卧位固 定 10min 后放回， 连续给药 7 天， 给药量为 8mg 活性成分 /kg。于末次试验后 24h 内将雌兔 处死解剖， 肉眼观察并记录阴道充血和炎症情况。 取阴道组织， 以10甲醛液固定， 分成上、 中、 下三段， 制成 5m 石蜡包埋切片， 常规染色进行组织学炎症刺激程度判定染色，。
15、 光镜下 观察。按 Eckstein 标准， 以充血、 水肿、 炎症细胞浸润及上皮细胞坏死 4 项指标评分。每项 刺激程度分别判定为 0 4 分， 0 分为无刺激反应， 4 分为严重损伤， 总分在 0 8 分为可接 受， 9 10 分为边缘值， 11 分为不可接受。 0050 试验结果 ： 肉眼观察 6 组雌兔阴道均未见异常。各组雌兔阴道溃疡、 浸润、 水肿和 充血评分及总分值见表 1。 0051 表 1 ： 雌兔阴道刺激实验结果 0052 0053 试验结论 ： 从上表可知药物 4 组的总分数属于不可接受的范围， 而机械刺激组、 药 物 1 组、 药物 2 组、 药物 3 组的总分均在可接受。
16、的范围内 ； 药物 1 组与药物 3 组的总分数无 显著性差异 (P 0.05) ； 药物 3 组与药物 4 组总分数有显著性差异 (P 0.05) ； 药物 2 组 与药物 4 组总分数有显著性差异 (P 0.01) ； 说明药物组合物中莪术烯的量影响药物的刺 激性。 0054 试验例 2 ： 对 HPV E6、 E7 基因抑制作用的影响 0055 试验材料 0056 (1) 细胞系 ： 0057 CaSki 细胞系， HPV16 阳性的人宫颈癌细胞株， 由中国医学科学院基础医学研究所 说 明 书 CN 102716113 A 5 4/11 页 6 生物物理室提供 ； 0058 H8 细胞系。
17、， 人宫颈鳞状上皮永生化细胞系， HPV16 阳性细胞株， 由中国医学科学院 基础医学研究所生物物理室提供 ； 0059 SiHa 细胞系， HPV16 阳性细胞株， 由上海锐聪实验室设备有限公司提供 ； 0060 (2) 试验药物 ： 0061 药物 ： 0062 药物 1 组 ： 保妇康栓， 海南碧凯药业有限公司生产， 每粒重 1.74g， 其中含莪术油 88mg， 冰片 75mg， 其余成分为基质。 0063 药物 2 组 ： 实施例 1 所得栓剂， 每粒重 1.79g， 其中含吉马酮 10g、 呋喃二烯 35g、 莪 术二酮 24g、 - 榄香烯 9g、 莪术醇 1g、 莪术烯 4g，。
18、 冰片 75g， 其余成分为基质。 0064 药物 3 组 ： 向实施例 1 所述的处方中添加 4g 莪术烯并相应减少呋喃二烯的量， 按 实施例 1 所述方法制备的栓剂， 每粒重 1.79g， 其中含吉马酮 10g、 呋喃二烯 31g、 莪术二酮 24g、 - 榄香烯 9g、 莪术醇 1g、 莪术烯 8g， 冰片 75g， 其余成分为基质。 0065 药物4组 ： 向实施例1所述的处方中添加6g莪术烯， 并相应减少呋喃二烯的量， 按 实施例 1 所述方法制备的栓剂， 每粒重 1.79g， 其中含吉马酮 10g、 呋喃二烯 29g、 莪术二酮 24g、 - 榄香烯 9g、 莪术醇 1g、 莪术烯。
19、 10g， 冰片 75g， 其余成分为基质。 0066 (3) 试剂 ： 0067 工具酶 ： Taq DNA 聚合酶 (Promega) ； 0068 逆转录酶 (M-NLV Reverse Transcriptase)(Promega) ； 0069 分子标志物 ： pBR322DNA/Hae III Markers(600， 500， 400， 300， 200， 100bp)( 华美 生物工程公司 ) ； 0070 培养基和血清 ： Dulbecco s Modified Eagle Medium(DMEM)培养基(GIBCO BRL) ； 胎牛血清 ( 天津市川页生化制品有限公司 )。
20、 ； 0071 (4) 引物 ： 0072 由上海生工生物工程技术服务有限公司， 应用美国 PE 公司 391 型 DNA 自动合成仪 合成， 纯化方式 ： PAGE。 0073 试验方法 0074 (1) 细胞培养 ： CaSki、 SiHa 细胞在含 5胎牛血清的 DMEM 培养基中， H8 细胞 在含 2胎牛血清的 DMEM 培养基中， 37、 体积分数 5的 CO2饱和湿度恒温培养箱中 培养。CaSki、 SiHa、 H8 细胞接种密度均为 ： 100ml 培养瓶， 10.0104/10ml ； 6 孔培养板， 3104/3ml ； 24 孔培养板， 1.0104/ml ； 96 孔培。
21、养板， 0.2104/200l。 0075 (2) 栓剂药物浓度选择 ： 分别将各栓剂溶解于 44ml 无血清的 DMEM 培养基中， 其浓 度为 3.70103mg/l( 活性成分 )， 待溶液澄清后， 用孔径为 0.22m 的滤器过滤除菌， 分装 后 4避光保存备用。根据预试验结果， 实验组最终加入的各栓剂的浓度为， 3.7mg/l， 对照 组加入等量的培养基。测定加药后 CaSki 细胞增殖力。 0076 (3) 细胞形态观察 ： 0077 1)活细胞照相 ： 将对数生长期的细胞接种于6孔板培养板， 每孔3104个细胞， 在 各实验组的 6 孔培养板中每孔放置一片盖玻片， 形成附有细胞的。
22、盖片， 第二天细胞贴壁后 更换为含药培养基， 培养三天后， 在倒置显微镜下观察细胞形态并照相。 观察不同药物作用 说 明 书 CN 102716113 A 6 5/11 页 7 下 CaSki、 H8 细胞系形态学变化。 0078 2)Giemsa 染色观察 ： SiHa、 CaSki、 H8 细胞系三种细胞实验均分 2 组 ： 对照组， 等 量乙醇 ； 药物处理组。 在各实验组的6孔培养板中每孔放置一片盖玻片， 接种3105个对 数生长期细胞。培养 3 天后用三氯醋酸 (TCA) 固定， 每孔加预冷的 50 TCA 液 600l(TCA 最终浓度为 10 ) 固定， 加 TCA 时轻轻地加在。
23、培养液表面 ( 使死亡或凋亡的细胞被固定在 原位 )， 静置 5 分钟后在将平板移至 4放置 1 小时。取出盖玻片， 用去离子水冲洗 3 遍， 空 气干燥。经三氯醋酸固定后的细胞加入体积分数 0.4的 SRB( 磺酰罗丹明 B) 冲洗 2 遍， 甩 干。用现配的 Giemsa 染色液 (Giemsa 染液贮存液 ： pH7.0 PBS 1 1) 染色 15min， 用自 来水冲去玻片上多余的燃料， 空气干燥， 二甲苯透明， 光学树脂胶封固， 在光学显微镜下分 别用低、 高倍镜观察细胞。 0079 (4) 四甲基偶氮唑蓝 (MTT) 比色法检测不同栓剂对细胞生长抑制情况 ： 0080 将 CaS。
24、ki、 H8 细胞接种于六板 96 孔细胞培养板， 每孔 3000 个细胞， 第二天更换 为含药培养基， 每个药物组平行 5 孔。37， 5 CO2培养 24 小时后每孔加入 5mg/ml MTT 20l， 继续培养 4 小时， 弃去上清液每孔加入二甲基亚砜 150l， 37放置 20min， 振荡时 蓝紫色结晶完全溶解后， 用酶标仪测定 OD 值， 波长 492nm， 连续 6 天， 作生长曲线。 0081 同法将 SiHa、 CaSki、 H8 细胞接种于 96 孔细胞培养板， 每孔 3000 个细胞， 第二天更 换为含药培养基， 设空白对照组。连续 6 天， 作生长曲线。结果见表 2 3。
25、。 0082 表 2 ： 各药物组对 CaSki 细胞的生长抑制作用 (OD，n 5) 0083 对照 药物 1 组 药物 2 组 药物 3 组 药物 4 组 1d 0.1700.008 0.1420.007* 0.1220.005*# 0.1380.011* 0.1570.007* 2d 0.2450.016 0.2150.006* 0.1770.009*# 0.1970.009* 0.2340.013 3d 0.3120.009 0.2750.004* 0.2280.009*# 0.2670.007*# 0.2950.005 4d 0.3980.027 0.3650.020* 0.2690。
26、.010*# 0.3160.008*# 0.3870.045 5d 0.4560.019 0.4120.034* 0.3120.021*# 0.3760.009*# 0.4490.065 6d 0.6520.038 0.5120.019* 0.3630.024*# 0.4160.010*# 0.5780.019 0084 注 ： 与对照组比较 *P 0.01， 与试验 1 组比较 #P 0.05。 0085 表 3 ： 各药物组对 H8 细胞的生长抑制作用 (OD，n 5) 0086 对照 药物 1 组 药物 2 组 药物 3 组 药物 4 组 1d 0.1980.003 0.1410.006。
27、* 0.1320.006*# 0.1370.021*# 0.1420.009* 2d 0.2540.006 0.1980.008* 0.1350.008*# 0.1650.009*# 0.1870.011* 3d 0.3890.009 0.3650.004* 0.2790.006*# 0.2860.009*# 0.3570.009* 说 明 书 CN 102716113 A 7 6/11 页 8 4d 0.4220.027 0.4220.020 0.2980.006*# 0.3780.011*# 0.4170.009* 5d 0.5680.019 0.5200.034 0.3550.010*#。
28、 0.4210.008*# 0.4970.005* 6d 0.7110.038 0.5660.019 0.3560.021*# 0.4660.024*# 0.5130.031* 0087 注 ： 与对照组比较 *P 0.01， 与试验 1 组比较 #P 0.05。 0088 结果 ： 由表 1 和表 2 可知， MTT 检测发现药物对宫颈癌细胞 CaSki 以及宫颈永生化 细胞 H8 均有生长抑制作用 ； 且药物 2、 3 组的抑制作用明显优于药物 1、 4 组。当药物组中莪 术烯量增加时， 其对宫颈癌细胞 CaSki 以及宫颈永生化细胞 H8 均减弱。 0089 随药物组中莪术烯的量的增加，。
29、 药物对宫颈癌细胞 CaSki 以及宫颈永生化细胞 H8 的生长抑制作用减弱。 0090 试验例 3 ： 对小鼠宫颈癌模型的体内抑瘤实验 0091 试验材料 0092 (1) 瘤细胞 ： 人宫颈癌 Hela 细胞系。 0093 (2) 试验动物 ： 昆明种雌性健康小鼠， 2-3 月龄， 体重 (253)g。 0094 (3) 试验药物 ： 0095 给药 1 组 ： 市售保妇康栓 0096 给药 2 组 ： 本发明实施例 2。 0097 (4) 试剂 ： 超级新生牛血清， 杭州四季青公司产品 ； 胰蛋白酶， 北京格源天润生物 技术有限公司。 0098 小鼠宫颈癌模型的建立 ： 0099 Hel。
30、a 细胞在 37， 5 CO2， 含 10胎牛血清的 DMEM 培养液中培养， 将处于对数生 长期的细胞用0.25胰蛋白酶消化， 用无菌PBS液重悬制成5107/ml的单细胞悬液， 每只 小鼠于右侧颈背部皮下接种 0.2ml 细胞悬液， 共接种 30 只， 每天观察各注射点有无红肿破 溃。 0100 抑瘤实验 0101 将 30 只小鼠随机分组， 每组 10 只， 实验设给药组和空白对照组。给药组分别于接 种细胞悬液 2 周后腹腔注射 100mg/kg 剂量的药物 ( 用生理盐水配制 )， 每天 1 次， 连续 4 周 ； 而对照组腹腔注射等体积的生理盐水。 实验中观察肿瘤体积和生长速度， 实。
31、验进行4周 后颈椎脱臼处死小鼠， 称量体重和瘤重。 0102 结果 0103 1、 全部 30 只小鼠在实验过程中均成活， 各细胞悬液接种点未见红肿破溃及出血 现象。 0104 2、 在细胞悬液接种的第 14 天， 各接种点均见肿瘤结节， 直径 0.5cm。 0105 3、 小鼠在给予药物后， 对小鼠体内剥离下的瘤组织进行肉眼观察， 呈结节状， 灰白 色， 质地偏硬， 表面有假包膜， 容易和周围组织剥离， 两个用药组肿瘤横断面大部分可见中 央出现明显的坏死灶， 对照组则少见坏死灶。 0106 4、 称量给药组和对照组小鼠体重， 及瘤体重量， 结果见表 4。 0107 表 4 ： 小鼠平均体重及。
32、瘤重 说 明 书 CN 102716113 A 8 7/11 页 9 0108 0109 注 ： 与对照组比较 *P 0.01， *P 0.05 ； 与给药 1 组比较 #P 0.05。 0110 试验总结 ： 通过刺激性试验和药效学试验表明， 在药物组合物中控制莪术烯的含 量具有重要科学意义。 0111 试验例 4 ： 体外抗菌试验 0112 采用微量连续二倍稀释法测定本发明实施例 1 的药物组合物对大肠埃希氏菌、 金 黄色葡萄球菌、 绿脓假单胞菌、 表皮葡萄球菌、 普通变形杆菌、 粪链球菌、 淋病奈瑟氏菌的标 注菌株和大肠埃希氏菌、 金黄色葡萄球菌、 绿脓假单胞菌、 表皮葡萄球菌、 普通变。
33、形杆菌、 粪 链球菌、 淋病奈瑟氏菌临床分离株的最小抑菌浓度 (MIC)， 采用平板转染法测定本发明药物 组合物对上述细菌的最小杀菌浓度 (MBC)。将大肠埃希氏菌、 金黄色葡萄球菌、 绿脓假单 胞菌、 表皮葡萄球菌、 普通变形杆菌、 阴道加特纳菌接种于 MH 肉汤， 置普通培养箱 37培养 24h ； 粪链球菌接种于 TPY 肉汤 ( 厌氧菌营养肉汤 )， 置厌氧培养箱 37培养 48h ； 淋病奈瑟 氏菌接种于汗 5小牛血清的 MH 肉汤， 置 5 CO2培养性 37培养 48h。 0113 表 5 本发明药物组合物对标准菌株的 MIC 和 MBC 0114 0115 由上表可知， 本发明。
34、药物组合物对试验所选用的大肠埃希氏菌、 金黄色葡萄球菌、 绿脓假单胞菌、 表皮葡萄球菌、 普通变形杆菌、 粪链球菌、 淋病奈瑟氏菌的标注菌株和阴道 加特纳菌临床分离参考株均有较明显的抑制和灭活作用， 其 MBC 为 MIC 的 2 4 倍。 0116 表 6 本发明药物组合物对 405 株临床分离菌株的 0117 MIC、 MIC50、 MIC99和 MBC(mg 组合物 /ml) 0118 菌株 株数 MIC MIC50 MIC99 MBC 金黄色葡萄球菌 100 0.39 1.56 1.0486 1.3048 0.93 6.25 说 明 书 CN 102716113 A 9 8/11 页 。
35、10 大肠杆菌 120 6.25 50 18.9036 23.1567 26.2 100 表皮葡萄球菌 50 0.39 3.13 0.7132 1.4916 1.56 6.25 变形杆菌 100 12.5 50 26.118 34.0526 25 100 淋病奈瑟氏菌 24 0.190 0.38 0.2348 0.2715 0.190 0.76 阴道加特纳菌 11 0.39 1.56 0.7790 0.9146 0.77 1.54 0119 由上表可见， 本发明药物组合物对试验所选用的 405 株临床分离菌株均有一定的 抑制和灭活作用， 其 MBC 为 MIC 的 2 4 倍。 0120 试验。
36、例 5 ： 体外抗真菌试验 0121 采用微量连续二倍稀释法测定本发明实施例 1 的药物组合物对念珠菌的 MIC， 采 用平板转染法测定本发明药物组合物对念珠菌的 MBC。采用微量连续二倍稀释法测定本发 明药物组合物对霉菌的 MIC， 采用平板转染法测定本发明药物组合物对霉菌的 MBC。 0122 表 7 本发明药物组合物对试验菌株的 MIC 和 MBC 0123 0124 由上表可知， 本发明药物组合物对试验所选用的白色念珠菌、 近平滑念珠菌、 季也 蒙念珠菌、 副克柔念珠菌、 热带念珠菌、 青霉菌、 黄曲霉菌的标注菌株或临床分离参考株均 有较明显的抑制和灭活作用， 其 MBC 为 MIC 。
37、的 2 4 倍。 0125 表 8 本发明药物组合物对白色念珠菌临床分离菌株的 0126 MIC、 MIC50、 MIC99和 MBC(mg 组合物 /ml) 0127 株数 MIC MIC50 MIC99 MBC 50 1.53 6.13 0.0982 0.1234 6.12 11.8 0128 由上表可见， 本发明药物组合物对变色试验所选用的 50 株白色念珠菌临床分离 菌株有一定的抑制和灭活作用。 0129 试验例 6 ： 抗阴道毛滴虫试验 0130 采用体外培养法测定本发明实施例 1 的药物组合物对阴道毛滴虫的最小杀虫浓 说 明 书 CN 102716113 A 10 9/11 页 1。
38、1 度。阴道毛滴虫在改良的 CPLM 培养基 37培养 48h， 滴虫运动活泼， 生长良好， 自然死亡率 2， 试验用阴道毛滴虫液含虫浓度为 1.8 2.5103/ml。 0131 结果表明， 本发明药物组合物体外对杀灭阴道毛滴虫有效。 0132 制备实施例 0133 实施例 1 0134 处方 ： 0135 吉马酮 10g、 呋喃二烯 35g、 莪术二酮 24g、 - 榄香烯 9g、 莪术醇 1g、 莪术烯 4g， 冰 片 75g。 0136 剂型 ： 栓剂。 0137 制备方法 ： 将处方量的吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香烯、 莪术醇与 70g 聚 山梨酯 80(Tween-8。
39、0) 混匀， 冰片 75g 用适量的乙醇溶解， 与上述溶液混匀。 0138 处方量的聚氧乙烯硬脂酸酯 1534g， 置水浴上加热使熔化， 加入上述药液， 搅匀， 灌 装， 制成栓剂 1000 只。 0139 实施例 2 8 0140 按如下处方制备栓剂， 制备方法同实施例 1。 0141 实施例 2 3 4 5 6 7 8 吉马酮 5.5 6 9 10 11 13 14 呋喃二烯 37 33 30 28 25 15 11 莪术二酮 6 8 9 15 18 20 23 - 榄香烯 10.5 10 9.5 8 6.5 5 4.5 莪术醇 1.5 2 4 6 8 9 9.5 莪术烯 4.5 5 5.。
40、5 6 6.5 7 8 冰片 30 40 50 60 70 80 90 聚山梨酯 80 54 62 62 68 74 78 82 聚氧乙烯硬脂酸酯 1561 1570 1460 1568 1580 1540 1547 0142 实施例 9 0143 处方 ： 吉马酮6.5g、 呋喃二烯32g、 莪术二酮21g、 -榄香烯8.5g、 莪术醇7.9g、 莪 术烯 4g， 冰片 35g。 0144 剂型 ： 泡腾片。 0145 制备方法 ： 0146 1) 取 - 环糊精， 按 25ml/g 加水适量， 搅拌使其全溶， 必要时加热， 得 - 环糊精 溶液 ； 吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄。
41、香烯， 莪术醇、 莪术烯， 冰片， 用无水乙醇稀释后 说 明 书 CN 102716113 A 11 10/11 页 12 缓慢加入 - 环糊精溶液中， 继续搅拌至成均相， 冰箱中放置过夜， 抽滤， 用少量石油醚洗 涤 3 次， 冷冻， 的得白色粉末。 0147 2) 将上述白色粉末与 35g 冰片、 枸橼酸 150g 和乳糖 160g 混匀 ； 另取碳酸氢钠 120g 与乳糖 160g 混匀， 分别用 5 PVP 无水乙醇溶液作为粘合剂制粒， 50干燥， 整粒， 加 入 PEG6000 适量， 混匀， 压片。 0148 实施例 10 0149 处方 ： 吉马酮7.5g、 呋喃二烯31g、 莪。
42、术二酮19g、 -榄香烯5.5g、 莪术醇3.5g、 莪 术烯 6.9g， 冰片 45g。 0150 剂型 ： 胶囊剂 0151 制备方法 ： 0152 1)囊皮制备 ： 按明胶甘油水103.79.5的重量份混合物， 取明胶， 加入 适量水使明胶吸水膨胀。另取甘油及余下的水置煮胶锅中加热至 70 2， 混合均匀， 加入膨 胀的明胶， 搅拌， 熔融， 保温， 真空抽气除去气泡， 虑过， 加入约 3重量份的聚乙二醇 400， 混匀， 然后保温 50， 备用。 0153 2) 内容物制备 ： 取 300g 聚乙二醇 400 加热至 80， 加入冰片 45g， 待完全溶解后 加入150g聚乙二醇400。
43、0搅拌至溶解， 温度降至4050时， 加入处方量的吉马酮、 呋喃二 烯、 莪术二酮、 - 榄香烯、 莪术醇、 莪术烯， 搅拌均匀， 降温至 25 30， 过胶体磨磨 2 遍， 每次 5min， 制成内容物， 保温条件下， 制成 1000 粒软胶囊。 0154 实施例 11 0155 处方 ： 吉马酮8.5g、 呋喃二烯29g、 莪术二酮21g、 -榄香烯4.5g、 莪术醇4.5g、 莪 术烯 7.5g， 冰片 55g。 0156 剂型 ： 膜剂。 0157 制备方法 ： 取聚乙烯醇 800g 于 800ml 水中浸泡 24 小时， 在 80温度下水浴中溶 解 ； 将吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二。
44、酮21g、 -榄香烯， 莪术醇、 莪术烯， 冰片， 溶解于1000ml乙 醇 (W/V 75 ) 中， 将上述聚乙烯醇溶液混合， 搅拌均匀 ； 在上述混合液中加入抗氧化剂 焦亚硫酸钠 10g、 保湿剂甘油 80g、 增塑剂三醋酸甘油 80g， 搅拌均匀 ； 按常规方法脱出气泡， 涂覆成膜后， 干燥， 分切， 即得 1000 张膜剂产品。 0158 实施例 12 0159 处方 ： 吉马酮9.5g、 呋喃二烯26g、 莪术二酮23g、 -榄香烯4.2g， 莪术醇5.5g、 莪 术烯 5.5g， 冰片 65g。 0160 剂型 ： 凝胶剂 0161 制备方法 ： 取卡波姆 20g 溶胀于丙二醇 7。
45、60g 中， 静置至溶胀完全后调节 pH 值到 4 7， 并加入丙二醇 600g 制成基质备用 ； 将吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香烯， 莪术 醇、 莪术烯， 冰片溶于 120g 聚乙二醇 400 中得混合溶液， 搅匀， 将混合液与上述基质混合均 匀， 分装， 即得。 0162 实施例 13 0163 处方 ： 吉马酮 10.5g、 呋喃二烯 23g、 莪术二酮 24.5g、 - 榄香烯 4.6g， 莪术醇 6.5g、 莪术烯 4.7g， 冰片 70g。 0164 剂型 ： 洗剂 说 明 书 CN 102716113 A 12 11/11 页 13 0165 制备方法 ： 取冰片 。
46、70g， 加适量乙醇使其溶解 ； 将吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香烯， 莪术醇、 莪术烯与氮酮 20g， 2500g 吐温 80 混合均匀， 加入乙醇至 2800g， 搅拌均 匀后加入注射用水至 10kg， 搅匀， 分装， 得浓溶液， 使用时加水稀释 10 倍使用。 0166 实施例 14 0167 处方 ： 吉马酮 12.5g、 呋喃二烯 17g、 莪术二酮 18.5g、 - 榄香烯 6.3g， 莪术醇 7.5g、 莪术烯 6.3g， 冰片 80g。 0168 剂型 ： 软膏剂 0169 制备方法 ： 将凡士林 800g 在温控 80 100下熔化后， 控温 115 120灭菌， 将 已灭菌的凡士林冷却到7080； 将羊毛脂40g在控温115120灭菌 ； 将二甲亚砜25g 控温5565至熔化 ； 将凡士林放入配料罐中， 放入一半时搅拌 ； 再将冰片、 二甲亚砜和羊 毛脂共熔， 过滤并投入配料罐中搅拌 ； 然后将吉马酮、 呋喃二烯、 莪术二酮、 - 榄香烯， 莪 术醇、 莪术烯加入配料罐中， 搅拌均匀， 即成。 说 明 书 CN 102716113 A 13 。