一种白花益肝排毒颗粒及其制备方法和检测方法技术领域
本发明涉及一种白花益肝排毒颗粒及其制备方法和检测方法，属于中
药技术领域。
背景技术
肝脏是重要的解毒器官，各种毒素经过肝脏的一系列化学反应后，变
成无毒或低毒物质。肝脏一旦发生病变，引发肝病，其危害性极大，
常见的肝病有乙肝、甲肝、丙肝、肝硬化、脂肪化、肝癌、酒精肝等
。因此具有益肝排毒功效的中药制剂能发挥良好作用。
申请号为“200410022730.8”的专利申请公开了一种益肝排毒药物及
其制备方法，该制备方法是将11味药材全部用水煎煮提取；经进一步
研究发现，该处方中的熟大黄含有的游离羟基蒽醌类物质、五味子中
含有的大量联苯环辛烯型木质素成分、泽泻中的有效成分等都是对抗
病毒性肝炎的主要活性物质，而用水煎煮时提取率低，没有将这些主
要活性物质充分提取出来，从而使得该复方的疗效受到影响。
此外，目前对益肝排毒药品还没有一套严格可靠的质量检测标准。如
果没有严格的质量标准，得到的产品不能确保其质量，结果必将影响
该药物的临床疗效；所以为提高益肝排毒药物的治疗作用，确保用药
的安全、有效及产品质量的稳定，制定一个严格可靠的质量标准成为
保证药品质量的基本要求。随着现代仪器分析技术的发展，高效液相
色谱法、薄层色谱鉴别法等分析方法在药品的质量控制中得到了越来
越广泛的应用。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种白花益肝排毒颗粒及其制备方法和检测
方法。本发明针对现有技术的不足，对白花益肝排毒颗粒的制备工艺
进行了优化，使其对病毒性肝炎的疗效更为显著，并建立了系统的、
完整的、有效的成分鉴别和含量测定方法，可有效控制该药品的质量
，从而确保其临床疗效。
本发明的技术方案：一种白花益肝排毒颗粒，它是以白花蛇舌草5~25
kg、灵芝2~15kg、黄精1~10kg、黄芪2~15kg、泽泻1~10kg、熟大黄1~
10kg、肉苁蓉1~5kg、鳖甲2~15kg、五味子1~10kg、银杏叶1~10kg和甘
草1~6kg为原料药，提取后加入适量可溶性淀粉和阿斯巴甜，并以80%
乙醇为润湿剂制成的。
优选的白花益肝排毒颗粒是以白花蛇舌草20kg、灵芝10kg、黄精8kg、
黄芪10kg、泽泻8kg、熟大黄8kg、肉苁蓉4kg、鳖甲10kg、五味子8kg
、银杏叶8kg和甘草6kg为原料药，提取后加入适量可溶性淀粉和阿斯
巴甜，并以80%乙醇为润湿剂制成的。
前述白花益肝排毒颗粒的制备方法为：将熟大黄、五味子、泽泻药材
加6倍量70％乙醇提取3次，每次2h，过滤，醇提液70℃减压浓缩至密
度1.2，稠浸膏于80℃真空减压干燥36h，得干膏，粉碎过筛，得醇提
粉末；其余8味原料药与醇提药渣混合加6倍量水浸泡0.5h，再加6倍量
水先煎0.5h，共计加水12倍量，煎煮三次，煎煮时间分别为：3h、3h
和1h，85℃减压浓缩至密度1.2，80℃减压干燥48h，得干膏，粉碎过
筛，得水提粉末；将醇
提粉末和水提粉末混合，按1∶1的重量比例加入辅料可溶性淀粉和0.
2%阿斯巴甜做甜味剂，以80%乙醇做润湿剂，湿法制粒，颗粒75℃干燥
4-6h，整粒，过筛，包装，即得。
前述白花益肝排毒颗粒的检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定
项目；其中鉴别是对制剂中的银杏叶、甘草、大黄、五味子的薄层色
谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法分别测定制剂中大黄所含总游
离蒽醌类成分和五味子所含五味子醇甲的含量。
银杏叶的鉴别方法是以银杏叶对照药材为对照，以乙酸乙酯-丁酮-甲
酸-水=5：3：1：1为展开剂的薄层色谱法；甘草的鉴别方法是以甘草
对照药材和甘草酸铵对照品为对照，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水=15
：1：1：2为展开剂的薄层色谱法；大黄的鉴别方法是以大黄对照药材
为对照，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：1的上层溶液为展
开剂的薄层色谱法；五味子的鉴别方法是以五味子对照药材和五味子
甲素对照品为对照，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：1的上
层溶液为展开剂的薄层色谱法。
具体鉴别方法为：
（1）银杏叶的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加40%甲醇20mL，加热
回流30min，放冷，滤过，取滤液10mL浓缩至2mL，作为供试品溶液；
另取银杏叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》一
部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μL及对照药材
溶液6μL分别点于同一含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂制
备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=5：3：1：1为展开剂
，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置365
nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上
，显相同颜色的荧光主斑点；
（2）甘草的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加乙醚40mL，加热回流1
h，滤过，药渣加甲醇30mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加
水40mL使溶解，用正丁醇提取3 次，每次20mL，合并正丁醇液，用水
洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供
试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取甘草
酸铵对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照《
中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μL，另
吸取上述对照品溶液、对照药材溶液各1～2μL，分别点于同一用1%氢
氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水=15：
1：1：2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在1
05℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，
在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照
品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；
（3）大黄的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加甲醇20mL，浸泡1h，滤
过，取滤液5mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回
流30min，立即冷却，用乙醚分2次萃取，每次20mL，合并乙醚液，蒸
干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材
0.1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色
谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各4μL，分别点于同
一以羧甲基纤维
素钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸
=15：5：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光
灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同
的五个橙黄色荧光主斑点；
（4）五味子的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂3g，加三氯甲烷20mL，加热
回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试
品溶液；另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取五味
子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液
；照《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取五味子对照药
材溶液、五味子甲素对照品溶液各2μL和供试品溶液6μL分别点于同
一硅胶GF254 薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：1
的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜
色的斑点。
大黄中总游离蒽醌类成分的含量测定方法是以芦荟大黄素对照品、大
黄酸对照品、大黄素对照品和大黄酚对照品为对照，以乙腈：0.1%磷
酸=58%-85%：42%-15%为流动相的高效液相色谱法；五味子中五味子醇
甲的含量测定方法是以五味子醇甲对照品为对照，以乙腈：水=45%：
55%为流动相的高效液相色谱法。
具体含量测定方法为：
（1）总游离蒽醌类成分含量测定：参照2010版《中国药典》一部附录
Ⅵ D高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈：0.1%磷酸=58%-85%
：42%-15%为流动相；流速1.0 mL·min-1；检测波长为254 nm；柱温
为25℃；理论塔板数以大黄酚峰计算不低于6000；
对照品溶液的制备：分别精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品
、大黄素对照品和大黄酚对照品，加甲醇制成每1mL各含0.0145mg、0
.0277mg、0.0283mg、0.0655mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本颗粒剂0.6g，精密称定，置
50mL圆底烧瓶中，加8%盐酸溶液10mL，超声处理5min，再加三氯甲烷
10mL，加热回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容
器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用三氯甲烷萃取4次
，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残余物加甲醇使
溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，
即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液5μL与供试品溶液10μL，注入高效
液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂每袋含大黄以包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的
总游离蒽醌类成分计，不得低于4.9mg；
（2）五味子醇甲含量测定：参照2010版《中国药典》一部附录Ⅵ D
高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
Diamonsil C18 (250mm×4.6mm，5μm)；乙腈：水=45%：55%为流动
相；流速为1.0 mL·min-1；柱温25℃；检测波长为250 nm；理论塔
板数以五味子醇甲峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1mL含
五味子醇甲7.8μg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本颗粒剂0.6g，精密称定，置
25mL容量瓶中，加甲醇20mL，在功率250W、频率20HZ条件下超声处理
45min后取出，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液10μL与供试品溶液10μL，注入高
效液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂每袋含五味子以五味子醇甲计，不得低于1.56mg。
本发明所述的检测方法包括：
性状：本制剂为棕褐色颗粒，气芳香，味微甜略带酸；
鉴别：（1）银杏叶的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加40%甲醇20mL
，加热回流30min，放冷，滤过，取滤液10mL浓缩至2mL，作为供试品
溶液；另取银杏叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药
典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μL及对
照药材溶液6μL，分别点于同一含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为
黏合剂制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=5：3：1：
1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹
干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应
的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；
（2）甘草的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加乙醚40mL，加热回流1
h，滤过，药渣加甲醇30mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加
水40mL使溶解，用正丁醇提取3 次，每次20mL，合并正丁醇液，用水
洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供
试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取甘草
酸铵对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照《
中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μL，另
吸取上述对照品溶液、对照药材溶液各1～2μL，分别点于同一用1%氢
氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水=15：
1：1：2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在1
05℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，
在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照
品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；
（3）大黄的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加甲醇20mL，浸泡1h，滤
过，取滤液5mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回
流30min，立即冷却，用乙醚分2次萃取，每次20mL，合并乙醚液，蒸
干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材
0.1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》一部附录Ⅵ B
薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各4μL，分别
点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以30～60℃
石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，
晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相
应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；
（4）五味子的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂3g，加三氯甲烷20mL，加热
回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试
品溶液；另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取五味
子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液
；照《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取五味子对照药
材溶液、五味子甲素对照品溶液各2μL和供试品溶液6μL分别点于同
一硅胶GF254 薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：1
的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜
色的斑点；
检查：应符合《中国药典》2010年版一部附录ⅠC颗粒剂项下有关的各
项规定；
含量测定：（1）总游离蒽醌类成分含量测定：参照2010版《中国药典
》一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以
乙腈：0.1%磷酸=58%-85%：42%-15%为流动相；流速1.0 mL·min-1；
检测波长为254 nm；柱温为25℃；理论塔板数以大黄酚峰计算不低于
6000；
对照品溶液的制备：分别精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品
、大黄素对照品和大黄酚对照品对照品，加甲醇制成每1mL各含0.014
5mg、0.0277mg、0.0283mg、0.0655mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本颗粒剂0.6g，精密称定，置
50mL圆底烧瓶中，加8%盐酸溶液10mL，超声处理5min，再加三氯甲烷
10mL，加热回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容
器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用三氯甲烷萃取4次
，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残余物加甲醇使
溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，
即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液5μL与供试品溶液10μL，注入高效
液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂每袋含大黄以包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的
总游离蒽醌类成分计，不得低于4.9mg；
（2）五味子醇甲含量测定：参照2010版《中国药典》一部附录Ⅵ D
高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Di
amonsil C18 (250mm×4.6mm，5μm)；乙腈：水=45%：55%为流动相
；流速为1.0 mL·min-1；柱温25℃；检测波长为250 nm；理论塔板
数以五味子醇甲峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1mL含
五味子醇甲7.8μg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本颗粒剂0.6g，精密称定，置
25mL容量瓶中，加甲醇20mL，在功率250W、频率20HZ条件下超声处理
45min后取出，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液10μL与供试品溶液10μL，注入高
效液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂每袋含五味子以五味子醇甲计，不得低于1.56mg。
白花益肝排毒方由银杏叶、五味子、熟大黄、甘草等11味药组成，具
有清热解毒，滋阴潜阳，软坚散结，益气生津功用，该处方在经验方
基础上，以辨病与辨证相结合，通过补益肝体、软坚散结、调畅肝用
、防止传变、利胆退黄等多个环节，用于治疗湿热蕴久成毒，结于肝
胆的各种肝炎，如病毒性肝炎、慢性乙肝、丙型肝炎、黄疸型肝炎等
，疗效显著。
白花益肝排毒方由11味药材组成，药物组成较多，化学成分较复杂。
大量文献表明，处方中的熟大黄含有的游离羟基蒽醌类物质、五味子
中含有的大量联苯环辛烯型木质素成分（五味子素、五味子甲素、五
味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯乙等）
、泽泻中有效成分等都是对抗病毒性肝炎的主要活性物质，用水煎时
提取率低,故通过查阅文献综合考虑采用醇提。根据该处方在临床使用
的情况,查阅文献发现该方其余8味药材所含的有效成分均具有较好的
水溶性，宜采用水提。
发明人根据11味药材的化学成分与临床疗效结合，设计了4种不同的提
取方案。方案一：将11味药材组合用蒸馏水煎煮三次，第一次按总量
加6倍量纯净水浸泡30min，加热煮沸2h，得煎煮液备用；第二次加4倍
量纯净水，加热煮沸1.5h得煎煮液备用；第三次加2倍量纯净水，加热
煮沸45min得煎煮液备用；合并三次煎煮液，静置4-6h，过200目筛，
溶液加热蒸发浓缩至稠膏状，60℃减压干燥，得干膏，粉碎，即得。
方案二：将熟大黄、五味子、泽泻三味药采用乙醇回流法，第一次按
总量加9倍量70%乙醇浸泡30min，回流提取1.5h，得醇提液备用；第二
次加7倍量70%乙醇，回流提取1h得醇提液备用；第三次加5倍量70%乙
醇，回流提取0.5h得醇提液备用；合并三次醇提液，浓缩，干燥，粉
碎得粉末。其余8味药材与醇提药渣混合，按“方案一”加水煎煮，6
0℃减压干燥，得干膏，粉碎，与醇提粉末混合，即得。
方案三：熟大黄、五味子、泽泻三味药采用乙醇回流法，方法同“方
案二”，合并三次醇提液，浓缩，干燥，粉碎得粉末。其余8味药材与
醇提药渣混合，按“方案一”水提，合并三次煎煮液，浓缩至一定密
度，加6倍量80%乙醇，静置24h，过200目筛，溶液加热蒸发至稠膏状
，60℃减压干燥，得干膏，粉碎，与醇提粉末混合，即得。
方案四：11味药材组合用蒸馏水煎煮三次，第一次按总量加9倍量纯净
水浸泡30min，加热煮沸2h，得煎煮液备用；第二次加7倍量纯净水，
加热煮沸1.5h得煎煮液备
用；第三次加5倍量纯净水，加热煮沸45min得煎煮液备用；合并三次
煎煮液，浓缩至一定密度，加6倍量80%乙醇，静置24h，用200目筛过
滤，溶液加热蒸发至稠膏状，60℃减压干燥，得干膏，粉碎，即得。
通过将四种不同的提取方案提取的白花益肝排毒复方对CCl4所致的急
性肝损伤小鼠血清AST、ALT的影响与正常对照组比较，优选最佳提取
工艺。实验结果表明4个不同提取方案的白花益肝排毒复方对抑制AST
及ALT升高（P<0.05）的程度不同（方案二﹥方案三﹥方案一﹥方案四
）。比较了处方醇沉前后对0.5%CCL4致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST
含量的影响，方案四该处方11味药经过水提醇沉的复方基本没有抑制
AST、ALT的作用，而方案三3味药材醇提，药渣与其他8味药材水提后
醇沉复方对小鼠急性肝损伤血清ALT、AST的影响，虽能看出高剂量有
显著的抑制作用，但低剂量却没有降低的趋向。据文献报道该处方11
味药材中具有保肝、抗免疫作用的多糖等有效成分在醇沉的过程中被
去除，从而造成该复方的疗效受影响，也再一次证明水提醇沉法并不
是中药最理想的提取分离方法。而本实验根据该处方药材的化学成分
并结合临床疗效的方案二对0.5%CCL4致小鼠急性肝损伤血清的ALT、A
ST含量表现出极为显著的影响。
因此，结合上述药理实验研究，筛选出最佳提取方案为：熟大黄、五
味子、泽泻三味药材醇提，药渣与其余8味药材合并水提，浓缩，干燥
，粉碎得干膏粉，加入辅料制粒，干燥，整粒，即得白花益肝排毒颗
粒。
另外，为了确保本发明检测方法科学、合理、可行，申请人进行了一
系列试验研究和考察。
（一）鉴别
1、仪器与试药
仪器采用超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份）、电热鼓风干燥箱
（上海精宏实验设备有限公司DHG9070A）和ZF三用紫外分析仪；试剂
均为分析纯，薄层层析用硅胶为化学纯。
2、鉴别方法与结果
（1）大黄的薄层色谱鉴别方法
本试验基本参照《中国药典》2010版一部中大黄的薄层色谱鉴别方法
，取三批样品颗粒（批号20111201、20111202、20111203）各4g，缺
大黄的粉末约2g，各加甲醇20mL，浸泡1h，滤过，取滤液5mL，蒸干，
残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回流30min，立即冷却，用
乙醚分2次萃取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL
使溶解，作为3份供试品溶液和1份阴性溶液；另取大黄对照药材0.1g
，同法制成1份对照药材溶液；照《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色
谱法试验，吸取上述供试品溶液、阴性溶液、对照药材溶液各4μL，
分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以30～
60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：1的上层溶液为展开剂，展开，取
出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色
谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光
主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
经多次试验，方法灵敏，重复性好，方便可行，阴性液无干扰，结果
见图1，其中，1 ：大黄对照药材，2：批号为20111201的供试品溶液
，3：批号为20111202的供试品溶液，4：批号为20111203的供试品溶
液，5：缺大黄阴性溶液。故将其列入本发明检测项目。
（2）五味子的薄层色谱鉴别方法
本试验基本参照《中国药典》2010版一部中五味子的薄层色谱鉴别方
法，取三批样品（批号20111201、20111202、20111203）颗粒各3g，
缺五味子的阴性粉末约2g，各加三氯甲烷20mL，加热回流30min，滤过
，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为3份供试品溶液和1份阴
性溶液；另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取五味
子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液
；照《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取五味子对照药
材溶液、五味子甲素对照品溶液各2μL和供试品溶液、阴性溶液各6μ
L分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-
甲酸=15：5：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫
外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位
置上，显相同颜色的斑点。经多次试验，方法灵敏，重复性好，方便
可行，阴性液无干扰，结果见图2，其中，1 ：五味子甲素对照品溶
液，2：五味子对照药材溶液，3：批号为20111201的供试品溶液，4：
批号为20111202的供试品溶液，5：批号为20111203的供试品溶液，6
：缺五味子阴性溶液。故将其列入本发明检测项目。
（3）甘草的薄层色谱鉴别方法
本试验基本参照《中国药典》2010版一部中甘草的薄层色谱鉴别方法
，取三批样品（批号20111201、20111202、20111203）颗粒各4g，缺
甘草的粉末约2g，各加乙醚40mL，加热回流1 h，滤过，药渣加甲醇
30mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁
醇提取3 次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，
正丁醇蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为3份供试品溶液和1份阴性溶
液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取甘草酸铵对
照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药
典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、阴性溶液各8
μL，另吸取上述对照品溶液、对照药材溶液各1～2μL，分别点于同
一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸
-水=15：1：1：2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶
液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品
色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，阴性无干
扰。经多次试验，方法灵敏，重复性好，方便可行，阴性液无干扰，
结果见图3，其中，1：甘草酸铵对照品溶液，2：甘草对照药材溶液，
3：批号为20111201的供试品溶液，4：批号为20111202的供试品溶液
，5：批号为20111203的供试品溶液，6：缺甘草阴性溶液。故将其列
入本发明检测项目。
（4）银杏叶的薄层色谱鉴别方法
本试验基本参照《中国药典》2010版一部中银杏叶的薄层色谱鉴别方
法，取三批样品（批号20111201、20111202、20111203）颗粒4g，缺
银杏叶的粉末约2g，各加40%甲醇20mL，加热回流30min，放冷，滤过
，取滤液10mL浓缩至2mL，作为3份供试品溶液和1份阴性溶液；另取银
杏叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》一部附录
Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、阴性溶液各10μL及对
照药材溶液6μL，分别点于同一含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为
黏合剂制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=5：3：1：
1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹
干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应
的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，阴性无干扰。经多次试验，方
法灵敏，重复性好，方便可行，阴性液无干扰，结果见图4，其中，1
：银杏叶对照药材溶液，2：批号为20111201的供试品溶液，3：批号
为20111202的供试品溶液，4：批号为20111203的供试品溶液，5：缺
银杏叶阴性溶液。故将其列入本发明检测项目。
（二）检查
1、粒度检查
粒度测定法参照《中国药典》2010年版一部附录Ⅺ B第二法测定。取
本品颗粒剂5袋，称定重量，置规定的药筛内过筛，保持水平状态，左
右往返轻轻筛动3min。取不能通过一号筛与能通过五号筛的总和称定
重量，计算所占百分比。经检测三批样品均少于15%，符合规定，结果
见表1。
表1 三批样品粒度检查
2、装量差异检查
取本品颗粒剂10袋，分别称定每袋内容物的重量，每袋装量与标示量
相比较，不得超出标示量的±10%，经测定三批样品均符合规定，结果
见表2。
表2 三批样品装量差异检查
3、溶化性
取本品供试品10g，加热水20倍，搅拌5min，立即观察，可溶性颗粒
应该全部融化，允许有轻微浑浊，3批供试品结果见表3。
表3 三批样品溶化性检查结果
4、水分检查
水分测定法参照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H第一法测定。取
本品供试品3g，精密称定，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度
不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在100-105℃干燥5h，将瓶盖盖好，
移置干燥器中，冷却30min，精密称定，再在上述温度干燥1h，冷却，
称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，根据减失的重量，计算
供试品中含水量。标准规定水分不超过6.0%，经检测三批样品均小于
6.0%，符合规定，结果见表4。
表4 三批样品水分检查结果
5、重金属与砷盐检查
（1）重金属检查
取本品颗粒2g，研细，置坩锅内，缓缓炽灼至完全炭化，取出，放冷
，加硫酸1.0m1，使其恰润湿，低温挥去硫酸，放冷，加硝酸0.5mL，
蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500-600℃炽灼至完全灰化，按
《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ B重金属检查法第二法进行检查，
三批供试品的结果见表5。
（2）砷盐检查
取本品1g，研细，加入无砷氢氧化钙0.5g混合均匀，加水湿润，缓缓
炽灼至烟雾除尽，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，按照《中国
药典》2010年版一部附录(IXB)砷盐检查法第一法自“加盐酸5m1与水
21m1…”操作，三批供试品的结果见表5。
表5 三批样品重金属，砷盐检查结果
结果表明：三批供试品的重金属、砷盐检查均符合2010版《中国药典
》的规定。
（二）含量测定
由于君药白花蛇舌草的作用机理研究不够深入，缺乏系统的药效物质
基础研究，目前未被收载于2010版《中国药典》，无统一的标准控制
其质量，因此不作为本发明的含量测
定指标成分。本颗粒剂以大黄为臣药，具有泻热通肠、凉血解毒、逐
瘀通经的作用，而其保肝利胆的主要成分为大黄游离蒽醌类成分，故
以大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚为含量测定指标成分
，来控制颗粒剂的质量，以确保其临床疗效；另外，五味子具有益气
生津、补肾宁心、收敛固涩的作用，其有效成分五味子醇甲作为本发
明含量测定指标成分，可以更好地控制成品质量。
1、大黄中总游离蒽醌类成分
（1）仪器与试药
仪器：高效液相色谱仪（Agilent1100）、超声波清洗机（HS20500D）
、天平（AB204-S）、Bμchi旋转蒸发仪。
试剂：乙腈（天津科密欧）色谱醇、娃哈哈纯净水。
对照品：大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0756-200
110）；大黄酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0757-2002
06）；芦荟大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110795
-200504）；大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号为11079
6-201017）；。
样品：本发明颗粒剂（白花益肝排毒颗粒，贵阳中医学院药物分析实
验中心自行研制批号20111118、20111119、20111120）。
（2）对照品溶液的制备
分别精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大
黄酚对照品，加甲醇制成每1mL各含0.0145mg、0.0277mg、0.0283mg、
0.0655mg的对照品溶液。
（3）色谱条件优选
色谱波长的优选：在进行大黄游离蒽醌含量测定色谱条件选择时，参
考《中国药典》2010年版一部麻黄项下大黄游离蒽醌成分的含量测定
色谱条件，进行了色谱波长的筛选。分别比较240nm、250nm、254nm、
260nm等波长下大黄游离蒽醌的分离度和理论塔板数及其峰面积，结果
证明在波长250nm处，大黄游离蒽醌成分分离度最好，峰面积最大，干
扰因素最小。
色谱柱温度的优选：本实验比较了20℃、25℃、30℃的柱温对大黄游
离蒽醌成分的影响，实验结果表明25℃柱温条件下，分离度好，保留
时间短，理论塔板数高。
流动相的选择：本实验参照2010版《中国药典》方法比较甲醇-0.1%磷
酸水（85%：15%；70%：30%；60%：40%；50%：50%）等不同比例的流
动相，大黄游离蒽醌的成分都不能达到完全分离。实验中设计了甲醇
-0.1%磷酸水梯度洗脱发现5个化学成分的保留时间易漂移，故本实验
设计不同浓度乙腈-0.1%磷酸水的梯度洗脱，达到各个成分间的完全分
离。最终确定最佳的色谱条件为：乙腈：0.1%磷酸=58%-85%：42%-15
%为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长为254 nm，柱温为25℃
。
（4）系统适应性试验
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，
置50mL圆底烧瓶
中，加8%盐酸溶液10mL，超声处理5min，再加三氯甲烷10mL，加热回
流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液
漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用三氯甲烷萃取4次，每次10mL，
合并三氯甲烷过滤液，减压回收溶剂至干，残余物加甲醇使溶解，转
移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性溶液的制备：取缺大黄的阴性样品约0.6g, 精密称定，置50mL圆
底烧瓶中，加8%盐酸溶液10mL，超声处理5min，再加三氯甲烷10mL，
加热回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入
分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用三氯甲烷萃取4次，每次1
0mL，合并三氯甲烷过滤液，减压回收溶剂至干，残余物加甲醇使溶解
，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得
。
空白溶液的制备：50mL圆底烧瓶中，加8%盐酸溶液10mL，超声处理5m
in，再加三氯甲烷10mL，加热回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量
三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用
三氯甲烷萃取4次，每次10mL，合并三氯甲烷过滤液，减压回收溶剂至
干，残余物加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀
，滤过，取续滤液，即得。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液5μL、供试品溶液10μL、空白溶
液10μL、阴性溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
由图谱可知，在上述色谱条件下进样分析，芦荟大黄素、大黄酸、大
黄素、大黄酚与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。理论塔板数以大黄酚
峰计算不低于6000，在与芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素
对照品、大黄酚对照品相同的保留时间内，阴性对照无干扰。其HPLC
图分别如图5、图6、图7、图8所示。
（5）供试品溶液的制备方法选择
A.8%盐酸与氯仿的比例选择
取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，50mL圆底烧瓶中，加
8%盐酸溶液XmL（按表6操作），超声处理5min，再加三氯甲烷YmL（按
表6操作），加热回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗
涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用三氯甲烷萃
取4次，每次10mL，合并三氯甲烷过滤液，减压回收溶剂至干，残余物
加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取
续滤液，即得。结果见表6。
表6 不同比例的8%盐酸与氯仿的提取效率
结论：比例为10：15的8%盐酸与氯仿与5：10、10：5、10：10等不同
比例的8%盐酸与氯仿提取的大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大
黄酚的总含量存在显著性差异；比例为10：15、15：10、15：15的8%
盐酸与氯仿提取的大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的总
含量无显著性差异。从溶剂角度综合考虑，故优选比例为10:15的8%盐
酸与氯仿为最佳提取比例。
B.回流提取时间的选择
取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，50mL圆底烧瓶中，加
8%盐酸溶液10mL，超声处理5min，再加三氯甲烷10mL，加热回流（时
间按表7操作），放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并
入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用三氯甲烷萃取4次，每次
10mL，合并三氯甲烷过滤液，减压回收溶剂至干，残余物加甲醇使溶
解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即
得。结果见表7。
表7 不同回流提取时间的提取效率（mg/g）
结论：回流60min、90min较回流45min，大黄总游离蒽醌含量明显增加
；而回流60min相对90min，大黄总游离蒽醌含量并无显著性差异，综
合考虑选择，提取60min为最佳提取时间。
C.萃取次数选择
取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，50mL圆底烧瓶中，加
8%盐酸溶液
10mL，超声处理5min，再加三氯甲烷10mL，加热回流1h，放冷，置分
液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲
烷层，酸水层再用三氯甲烷萃取（次数按表8操作），每次10mL，合并
三氯甲烷过滤液，减压回收溶剂至干，残余物加甲醇使溶解，转移至
10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见
表8。
表8 不同萃取次数的提取效率
结论：根据溶液萃取的颜色，萃取第三次时样品为无色。通过比较萃
取3次、4次、5次无显著性差异，故综合考虑确定萃取4次。
（6）线性关系的考察
分别按（2）项下对每一个对照品溶液（即芦荟大黄素、大黄酸、大黄
素、大黄酚对照品溶液）各精密吸取2μL、4μL、6μL、8μL、10μ
L、12μL，注入仪器，分别按（3）项下的色谱条件进样,测定峰面积
，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归得到线性
方程(n=6)：
芦荟大黄素y=3.7654x+5.6267(R=0.9999)；
大黄酸y=3.5933x+7.367(R=0.9998)；
大黄素y=3.2078x+3.9133(R=0.9999)；
大黄酚y=4.1528x+10.653(R=0.9999)。
证明芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚对照品的质量浓度分别在
29μg/mL-174 μg/mL、55.4μg/mL-332.4 μg/mL、56.6μg/mL-3
39.6μg/mL、131μg/mL-786μg/mL范围内具有良好的线性关系。
（7）精密度试验
分别取（2）项下的对照品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，按（3
）项下所述的色谱条件测定峰面积，重复进样6次，以芦荟大黄素、大
黄酸、大黄素、大黄酚面积进行计算，求出相对标准偏差RSD（%），
结果见表9、表10、表11、表12。
表9 芦荟大黄素精密度考察结果
表10 大黄酸精密度考察结果
表11 大黄素精密度考察结果
表12 大黄酚精密度考察结果
结果：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的精密度相对标准偏差
RSD（%）<3%（n=6），表明精密度良好。
（8）稳定性试验
取同一批号样品，按（4）项下的供试品溶液制备方法操作，吸取供试
品溶液10μL，分别在0、2、4、8、12h注入高效液相色谱仪，按（3）
项下的色谱条件测定峰面积，以大黄游离蒽醌类成分面积进行计算，
求出相对标准偏差RSD（%），结果见表13、表14、表15、表16。
表13 芦荟大黄素稳定性考察结果
表14 大黄酸稳定性考察结果
表15 大黄素稳定性考察结果
表16 大黄酚稳定性考察结果
结论：上述稳定性结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚
在12h内稳定性好，因此符合要求。
（9）重复性试验
取同一批号样品，按（4）项下的供试品溶液制备方法操作，吸取供试
品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，按（3）项下的色谱条件测定峰
面积，按外标一点法计算出各样品中大黄游离蒽醌总含量，结果见表
17。
表17 重复性试验结果表
结果表明：该样品中的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的RSD均
小于3%，故重现性良好。
（10）加样回收率试验
取同一批号本样品，混匀，取约0.3g，9份，分成三组，每组3份，精
密称定，置具塞锥形瓶中，每三份分别精密移取、加入芦荟大黄素、
大黄酸、大黄素、大黄酚的对照品储备液（浓度及其加入的体积见表
18），混合对照品与样品混合至50mL圆底烧瓶内水浴蒸干。按（4）项
下，供试品溶液制备方法操作，吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL
和10μL，注入高效液相色谱仪，按（3）项下的色谱条件测定峰面积
，按下式计算出回收率，计算式如下：
回收率=（C-A）/B×100%；
其中，A：样品中含对应对照品的量（mg）；
B：对照品加入量（mg）；
C：测得量（mg）。
加样回收的结果见表19。
表18 加入对照品浓度及其体积
表19 加样回收的结果
结论：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的平均回收率均在95%-
105%之间分别为，RSD分别小于3%(n=9)，该结果表明回收率高。
（12）样品测定
取三批样品，按（5）项下供试品溶液制备方法操作，制备供试品溶液
，测定三批样品中大黄中的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的
含量，测定结果见表20。
表20 三批样品含量测定结果
测定结果表明，在平均含量的基础上，总含量下浮20%制定本颗粒剂含
量限度，限定每包颗粒中，大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大
黄酚的总游离蒽醌类成分含量不得低于4.9mg。
2、五味子中五味子醇甲
（1）仪器与试药
仪器：高效液相色谱仪（Agilent1100）、超声波清洗机（HS20500D）
、天平（AB204-S）。
试剂：乙腈（天津科密欧）色谱醇、娃哈哈纯净水。
对照品：五味子醇甲对照品（中国药品生物制品检定所，批号110857
-200709）。
样品：本发明颗粒剂（白花益肝排毒颗粒，贵阳中医学院药物分析实
验中心自行研制，
批号20111201、20111202、20111203）。
（2）对照品溶液制备
精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1mL 含7.8 μg 的对照
品溶液。
（3）色谱条件的选择
色谱波长的优选：在选择五味子醇甲测定色谱条件时，参考《中国药
典》2010年版一部五味子项下五味子醇的含量测定色谱条件，进行色
谱波长的筛选。分别比较240nm、250nm、254nm、260nm等波长下五味
子醇甲峰的分离度、理论塔板数及其峰面积，结果证明在波长250nm处
，大黄中游离蒽醌类成分分离度最好，峰面积最大，干扰因素最小。
色谱柱温度的优选：本实验比较了20℃、25℃、30℃的柱温对大黄中
游离蒽醌类成分的影响，实验结果表明，在25℃柱温条件下，分离度
好，保留时间短，理论塔板数高。
流动相的选择：本实验参照2010《中国药典》的流动相比较甲醇-水等
不同流动相比例，五味子醇甲的成分都不能达到完全分离，而且以甲
醇-水流动相系统保留时间发生漂移，主要原因是甲醇与水混合时容易
产生气泡，而本实验优选出的梯度洗脱比例导致大黄的色谱峰保留时
间发生漂移，而且基线不稳，不能达到流类新药的相关要求。由于乙
腈的洗脱能力强、分离度好，因此本实验采用乙腈-水为流动相，比较
了乙腈-水的不同比例（45：55；40：60；55：45；50：50），从而使
五味子醇甲峰与其他色谱峰到达完全分离。
（4）系统适应性试验
阴性溶液的制备：取缺五味子的阴性样品约0.6g，精密称定，置25mL
容量瓶中，加甲醇约20mL，超声处理（功率250W、频率20HZ）45min，
取出，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得。
空白溶液的制备：取25mL容量瓶，加甲醇约20mL，超声处理（功率25
0W、频率20HZ）45min，取出，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得
。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品约0.6g，精密称定，置25
mL 容量瓶中，加甲醇约20mL，超声处理（功率250W、频率20HZ）45
min，取出，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液5μl，空白溶液、阴性溶液、供
试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
由图谱可知在，上述色谱条件下进样分析，五味子醇甲与相邻色谱峰
的分离度均大于1.5。样品理论板数以五味子醇甲计，故确定理论塔板
数以五味子醇甲计不低于3000，在与五味子醇甲相同的保留时间内，
阴性对照无干扰。结果如图9、图10、图11、图12所示。
（5）供试品溶液的制备方法的选择
A.提取溶剂的选择：
取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，置25mL容量瓶中，加
不同的提取溶剂（具体见表20）约20mL，超声处理（功率250W、频率
20HZ）45min，取出，加不同溶剂至刻度，摇匀，取续滤液，即得。结
果见表21。
表21 不同溶剂对五味子醇甲的提取率的影响
结论：考虑到五味子醇甲的化学性质，参考2010版《中国药典》五味
子醇甲的提取溶剂，考察以50%甲醇、70%乙醇、100%甲醇等不同溶剂
对五味子醇甲的提取率的影响，结果表明50%甲醇的提取率最高，故选
择50%甲醇作为最佳提取溶剂。
B.提取方法的选择：
超声提取：取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，置25mL容
量瓶中，加50%甲醇约20mL，超声处理（功率250W、频率20HZ）45min
，取出，加50%甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得。
回流提取：取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，置50mL锥
形瓶，精密量取25mL 50%甲醇，精密称重，加热回流45min，放冷，
补重，摇匀，过滤，取续滤液，即得。结果见表22。
表22 不同提取方法对五味子醇甲的提取率的影响
结论：加热回流与超声提取这两种提取方法的效率相当，但超声提取
法提取时间短，方法简便易行，因此选用超声提取法。
C．提取时间的选择
超声提取：取装量差异项下的本颗粒剂约0.6g，精密称定，置25mL容
量瓶中，加50%甲醇约20mL，超声处理（功率250W、频率20HZ）不同时
间，取出，加50%甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得。结果见表23。
表23 不同提取时间对五味子醇甲的提取率的影响
结论：超声提取45min以后,五味子醇甲含量不再增加，说明超声提取
45min时五味子醇甲已提取完全，因此选择超声提取时间为45min。
（6）线性关系的考察
分别精密吸取（2）项下对照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL，按（
3）项下色谱条件进样测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积积分值为
纵坐标，进行线性回归得到线性方程Y=3.9032X-18.93（n=5），证明
五味子醇甲的质量浓度在31.2μg/mL-124.8μg/mL（r=1）范围内具有
良好的线性关系。
（7）精密度试验
取对照品溶液5μL，注入高效液相色谱仪，按（3）项下色谱条件测定
峰面积，重复进样6次，以五味子醇甲面积进行计算，求出相对标准偏
差RSD（%），结果见表24。
表24 五味子醇甲精密度考察实验结果表
结论：相对标准偏差RSD<3%（n=6），表明精密度良好。
（8）稳定性试验
取同一批号样品，按（4）项下制备供试品溶液，吸取供试品溶液10μ
L，分别在0、2、4、8、12h注入高效液相色谱仪，按（3）项下色谱条
件测定峰面积，以五味子醇甲面积进行计算，求出相对标准偏差RSD（
%），结果见表25。
表25 五味子醇甲稳定性考察实验结果表
结论：取供试品溶液，在设定的时间内注入色谱仪，测得平均峰面积
为：304.98，RSD（%）为1.91%(n=5)，表明本供试品溶液在12h内稳定
。
（9）重复性试验
取同一批号本品，按（4）项下的供试品溶液制备方法操作，吸取供试
品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，按（3）项下色谱条件测定峰面
积，按外标一点法计算出各样品中所含五味子醇甲含量，结果见表26
。
表26 重复性试验结果表
结果表明：该样品中的五味子醇甲平均含量为0.3362mg/g，RSD均小于
3%，故该方法重现性良好。
（10）加样回收率试验
取同一批号的本颗粒剂，混匀，取约0.3g，9份，精密称定，置具塞锥
形瓶中，每三份分别精密移取加40.345μg/mL浓度的五味子醇甲对照
品的储备液（体积分别为2mL、2.5mL、3mL,），与样品混合，按（4）
项下制备供试品溶液，吸取对照品溶液5μL和供试品溶液10μL，注入
高效液相色谱仪，按（3）项下色谱条件测定峰面积，按下式计算出回
收率，结果见表27，计算公式如下：
回收率=（C-A）/B×100%；
A: 样品中含对应对照品的量（μg）；
B：对照品加入量（μg）；
C：测得量（μg）；
表27 五味子醇甲的加样回收率结果
结论：该方法测定平均回收率为98.55%，RSD值为2.86%。说明该方法
可行，回收率好。
（11）样品测定
三批样品中五味子醇甲含量测定按（4）项下制备供试品溶液，吸取对
照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按（3）项下
色谱条件测定峰面积，计算三批样品的五味子醇甲含量，结果见表28
。
表28 三批白花益肝排毒颗粒中五味子醇甲含量测定
结果表明，三批白花益肝排毒颗粒每袋（6g）中五味子醇甲的平均含
量为1.9557 mg。根据总含量上下浮动20%制定本制剂含量限度，限定
每袋白花益肝排毒颗粒含五味子醇甲成分含量不得低于1.56mg。
与现有技术相比，本发明对白花益肝排毒颗粒的制备工艺进行了改进
，使得药材中对抗病毒性肝炎的主要活性物质提取更为充分，其临床
疗效更好；而且，本发明针对改进后的白花益肝排毒颗粒建立了系统
的、完整的、有效的质量检测方法，所述方法的专属性强，精密度高
，重现性好，回收率高，测量结果准确，达到了有效控制药物质量的
目的，从而确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。
附图说明
图1是大黄的薄层色谱鉴别图；
图2是五味子的薄层色谱鉴别图；
图3是甘草的薄层色谱鉴别图；
图4是银杏叶的薄层色谱鉴别图；
图5是芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚对照品的HPLC图；
图6是总游离蒽醌类成分含量测定中益肝排毒颗粒供试品的HPLC图；
图7是总游离蒽醌类成分含量测定中益肝排毒颗粒缺大黄的阴性样品的
HPLC图；
图8是总游离蒽醌类成分含量测定中溶剂空白样品的HPLC图；
图9是五味子醇甲对照品的HPLC图；
图10是五味子醇甲含量测定中益肝排毒颗粒供试品的HPLC图；
图11是五味子醇甲含量测定中益肝排毒颗粒缺五味子的阴性样品的HP
LC图；
图12是五味子醇甲含量测定中溶剂空白样品的HPLC图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：称取白花蛇舌草20kg、灵芝10kg、黄精8kg、黄芪10kg、泽
泻8kg、熟大黄8kg、肉苁蓉4kg、鳖甲10kg、五味子8kg、银杏叶8kg和
甘草6kg；将熟大黄、五味子、泽泻药材加6倍量70％的乙醇提取3次，
每次2h，过滤，醇提液70℃减压浓缩至密度1.2（比重瓶测），稠浸膏
于80℃真空减压干燥36h，得干膏，粉碎过3号筛，得醇提粉末。其余
8味原料药与醇提药渣混合加6倍量水浸泡0.5h，再加6倍量水先煎0.5
h，共计加水12倍量，煎煮三次，煎煮时间分别为：3h、3h和1h，85℃
减压浓缩至密度1.2（比重瓶测），80℃减压干燥48h，得干膏，粉碎
过3号筛，得水提粉末。将醇提粉末和水提粉末混合，按1：1的比例加
入辅料可溶性淀粉和0.2%阿斯巴甜做甜味剂，以80%的乙醇做润湿剂（
每100g混合物加17.5mL 80%乙醇），湿法制粒，颗粒75℃干燥4-6h，
整粒，过1号筛除大颗粒，过5号筛除粉末（过5号筛所得细粉加入下次
制粒），按每包6g包装，即得。
实施例2：称取白花蛇舌草5kg、灵芝2kg、黄精1kg、黄芪2kg、泽泻1
kg、熟大黄1kg、肉苁蓉1kg、鳖甲2kg、五味子1kg、银杏叶1kg和甘草
1kg；将熟大黄、五味子、泽泻药材加6倍量70％乙醇提取3次，每次2
h，过滤，醇提液70℃减压浓缩至密度1.2，稠浸膏于80℃真空减压干
燥36h，得干膏，粉碎过筛，得醇提粉末；其余8味原料药与醇提药渣
混合加6倍量水浸泡0.5h，再加6倍量水先煎0.5h，共计加水12倍量，
煎煮三次，煎
煮时间分别为：3h、3h和1h，85℃减压浓缩至密度1.2，80℃减压干燥
48h，得干膏，粉碎过筛，得水提粉末；将醇提粉末和水提粉末混合，
按1∶1的重量比例加入辅料可溶性淀粉和0.2%阿斯巴甜做甜味剂，以
80%乙醇做润湿剂，湿法制粒，颗粒75℃干燥4-6h，整粒，过筛，包装
，即得。
实施例3：称取白花蛇舌草25kg、灵芝15kg、黄精10kg、黄芪15kg、泽
泻10kg、熟大黄10kg、肉苁蓉5kg、鳖甲15kg、五味子10kg、银杏叶1
0kg和甘草6kg；将熟大黄、五味子、泽泻药材加6倍量70％乙醇提取3
次，每次2h，过滤，醇提液70℃减压浓缩至密度1.2，稠浸膏于80℃真
空减压干燥36h，得干膏，粉碎过筛，得醇提粉末；其余8味原料药与
醇提药渣混合加6倍量水浸泡0.5h，再加6倍量水先煎0.5h，共计加水
12倍量，煎煮三次，煎煮时间分别为：3h、3h和1h，85℃减压浓缩至
密度1.2，80℃减压干燥48h，得干膏，粉碎过筛，得水提粉末；将醇
提粉末和水提粉末混合，按1∶1的重量比例加入辅料可溶性淀粉和0.
2%阿斯巴甜做甜味剂，以80%乙醇做润湿剂，湿法制粒，颗粒75℃干燥
4-6h，整粒，过筛，包装，即得。
实施例4：本发明所述白花益肝排毒颗粒的完整检测方法为：
性状：本制剂为棕褐色颗粒，气芳香，味微甜略带酸；
鉴别：（1）银杏叶的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加40%甲醇20mL
，加热回流30min，放冷，滤过，取滤液10mL浓缩至2mL，作为供试品
溶液；另取银杏叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药
典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μL及对
照药材溶液6μL，分别点于同一含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为
黏合剂制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=5：3：1：
1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹
干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应
的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；
（2）甘草的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加乙醚40mL，加热回流1
h，滤过，药渣加甲醇30mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加
水40mL使溶解，用正丁醇提取3 次，每次20mL，合并正丁醇液，用水
洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供
试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取甘草
酸铵对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照《
中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μL，另
吸取上述对照品溶液、对照药材溶液各1～2μL，分别点于同一用1%氢
氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水=15：
1：1：2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在1
05℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，
在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照
品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；
（3）大黄的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂4g，加甲醇20mL，浸泡1h，滤
过，取滤液5mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回
流30min，立即冷却，用乙
醚分2次萃取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使
溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材
溶液；照《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述供试
品溶液、对照药材溶液各4μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏
合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：
1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视
；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙
黄色荧光主斑点；
（4）五味子的薄层色谱鉴别：取本颗粒剂3g，加三氯甲烷20mL，加热
回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试
品溶液；另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取五味
子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液
；照《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取五味子对照药
材溶液、五味子甲素对照品溶液各2μL和供试品溶液6μL分别点于同
一硅胶GF254 薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15：5：1
的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜
色的斑点；
检查：应符合《中国药典》2010年版一部附录ⅠC颗粒剂项下有关的各
项规定；
含量测定：（1）总游离蒽醌类成分含量测定：参照2010版《中国药典
》一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以
乙腈：0.1%磷酸=58%-85%：42%-15%为流动相；流速1.0 mL·min-1；
检测波长为254 nm；柱温为25℃；理论塔板数以大黄酚峰计算不低于
6000；
对照品溶液的制备：分别精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品
、大黄素对照品和大黄酚对照品，加甲醇制成每1mL各含0.0145mg、0
.0277mg、0.0283mg、0.0655mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本颗粒剂0.6g，精密称定，置
50mL圆底烧瓶中，加8%盐酸溶液10mL，超声处理5min，再加三氯甲烷
10mL，加热回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容
器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层再用三氯甲烷萃取4次
，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残余物加甲醇使
溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，
即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液5μL与供试品溶液10μL，注入高效
液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂每袋含大黄以包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的
总游离蒽醌类成分计，不得低于4.9mg；
（2）五味子醇甲含量测定：参照2010版《中国药典》一部附录Ⅵ D
高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙
腈：水=45%：
55%为流动相；流速为1.0 mL·min-1；柱温25℃；检测波长为250 n
m；理论塔板数以五味子醇甲峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1mL含
五味子醇甲7.8μg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本颗粒剂0.6g，精密称定，置
25mL容量瓶中，加甲醇20mL，在功率250W、频率20HZ条件下超声处理
45min后取出，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液10μL与供试品溶液10μL，注入高
效液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂每袋含五味子以五味子醇甲计，不得低于1.56mg。