注射用美洛西林钠舒巴坦钠及其冻干粉针剂的制备方法.pdf

本发明提供一种注射用美洛西林钠舒巴坦钠及其冻干粉针剂的制备方法，以及注射用的美洛西林钠和舒巴坦钠的分离纯化方法。本发明采用高速逆流色谱，以三氯甲烷、甲醇和水配制构成固定相、流动相的溶剂体系，对美洛西林钠和舒巴坦钠进行分离纯化，得到注射用的美洛西林钠和舒巴坦钠，所得产品纯度可达99％以上，所制得的注射剂具有改善的稳定性。

权利要求书
1、  一种美洛西林钠舒巴坦钠注射剂的制备方法，其特征在于包括美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用高速逆流色谱进行纯化的步骤，其中所述高速逆流色谱的条件为以三氯甲烷、甲醇和水配制构成固定相、流动相的溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，使高速逆流色谱仪整个柱体中充满固定相，再将流动相泵入柱内，美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用流动相作为溶剂溶解后由进样阀进样。

2、  如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比为0.8～1.5∶1.0～2.5∶1；优选所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比为1.2∶1.8∶1。

3、  如权利要求1-2所述的方法，其特征在于固定相和流动相超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，转速为1000～2000rpm，以1.0～2.0ml/min流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，再进行进样；优选转速为1500rpm，以1.5ml/min的流速将流动相泵入柱内。

4、  如权利要求1-3所述的方法，其中所述的注射剂为冻干粉针，美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用高速逆流色谱分离，分别收集美洛西林钠99％以上部分和舒巴坦钠99％以上部分，冷冻干燥、粉碎后，按比例进行无菌分装。

5、  如权利要求4所述的方法，其特征在于：在进行冷冻干燥前先用活性炭脱色，然后用微孔滤膜过滤除菌。

6、  如权利要求1-5所述的方法，其中所述注射剂中美洛西林钠和舒巴坦钠的重量比为(1～5)∶(1～2)，优选美洛西林钠和舒巴坦钠的重量比为4∶1。

7、  如权利要求4-6所述的方法，其特征在于所述冻干粉针的每瓶装量为0.625g～3.75g。

8、  一种注射用美洛西林钠或者注射用舒巴坦钠的纯化方法，其特征在于包括美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用高速逆流色谱进行纯化的步骤，其中所述高速逆流色谱的条件为以三氯甲烷、甲醇和水配制构成固定相、流动相的溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，使高速逆流色谱仪整个柱体中充满固定相，再将流动相泵入柱内，美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用流动相作为溶剂溶解后由进样阀进样。

9、  如权利要求8所述的方法，其特征在于：所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比为0.8～1.5∶1.0～2.5∶1；优选所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比为1.2∶1.8∶1。。

10、  如权利要求8-9所述的方法，其特征在于固定相和流动相超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，转速为1000～2000rpm，以1.0～2.0ml/min流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，再进行进样；优选转速为1500rpm，以1.5ml/min的流速将流动相泵入柱内。

说明书注射用美洛西林钠舒巴坦钠及其冻干粉针剂的制备方法
技术领域
本发明提供一种注射用的美洛西林钠和舒巴坦钠的分离纯化方法，以及美洛西林钠舒巴坦钠粉针剂的制备方法。属于医药领域。
背景技术
美洛西林属青霉素类广谱抗生素，主要通过干扰细菌细胞壁的合成而起杀菌作用；舒巴坦除对奈瑟菌科和不动杆菌外，对其它细菌无抗菌活性，但是舒巴坦对由β-内酰胺类抗生素耐药菌株产生的多数重要的β-内酰胺酶具有不可逆性的抑制作用。舒巴坦可防止耐药菌对青霉素类和头孢菌素类抗生素的破坏，舒巴坦与青霉素类和头孢菌素类抗生素具有明显的协同作用。
目前使用的美洛西林钠舒巴坦钠复方制剂存在有效成分纯度不高，以及由此引起的副作用大等问题。
高速逆流色谱(High-Speed Countercurrent Chromatography)是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，由于采用液态固定相而不需要固体支撑物，因而避免了因不可逆吸附引起的样品损失、失活变性等，在近20～30年发展十分迅速，但未有将高速逆流色谱用于美洛西林钠和舒巴坦钠的分离纯化的报导。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种注射用的美洛西林钠和舒巴坦钠的分离纯化方法，以提高美洛西林钠和舒巴坦钠的注射剂稳定性。
本发明的目的之二在于提供一种美洛西林钠舒巴坦钠粉针剂的制备方法，用这种方法制备的粉针剂稳定性好。
为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：
本发明提供一种美洛西林钠舒巴坦钠注射剂的制备方法，其特征在于包括美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用高速逆流色谱进行纯化的步骤，其中所述高速逆流色谱的条件为以三氯甲烷、甲醇和水配制构成固定相、流动相的溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，使高速逆流色谱仪整个柱体中充满固定相，再将流动相泵入柱内，美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用流动相作为溶剂溶解后由进样阀进样。
上述所述的方法，其中所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比是0.8～1.5∶1.0～2.5∶1；更加优选所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比为1.2∶1.8∶1。
本发明上述所述的方法，高速逆流色谱的主机转速、流速等，没有特别限制。作为本发明具体实施方式，本发明优选将固定相和流动相超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，转速为1000～2000rpm，以1.0～2.0ml/min流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，再进行进样。更加优选高速逆流色谱的主机转速为1500rpm，以1.5ml/min的流速将流动相泵入柱内。
本发明上述所述方法，可以制得纯度至少在99％以上的注射用美洛西林钠和注射用舒巴坦钠。所制得的注射用美洛西林钠和注射用舒巴坦钠，可以根据需要配制成各种注射剂。作为本发明优选方案，所述方法，其中所述的注射剂为冻干粉针，美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用高速逆流色谱分离，分别收集美洛西林钠99％以上部分和舒巴坦钠99％以上部分，冷冻干燥、粉碎后，按比例进行无菌分装。
如果需要，上述所述的方法，其中收集到的99％以上部分，在进行冷冻干燥前，先用活性炭脱色，然后用微孔滤膜(例如0.22um微孔滤膜)过滤除菌，再进行冷冻干燥，制成粉针剂。
本发明上述所述的方法，其中所述注射剂中美洛西林钠和舒巴坦钠的重量比为，可以根据需要按一定比例混合。作为优选方式，所述注射剂中美洛西林钠和舒巴坦钠的重量比为(1～5)∶(1～2)；更优选美洛西林钠和舒巴坦钠的重量比为4∶1。
其中，上述所述方法中，所述冻干粉针的制剂规格，可以根据需要确定，本发明优选每瓶装量为0.625g～3.75g。
进一步地，本发明还提供一种注射用美洛西林钠或者注射用舒巴坦钠的纯化方法，其特征在于包括美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用高速逆流色谱进行纯化的步骤，其中所述高速逆流色谱的条件为以三氯甲烷、甲醇和水配制构成固定相、流动相的溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，使高速逆流色谱仪整个柱体中充满固定相，再将流动相泵入柱内，美洛西林钠或者舒巴坦钠的原料用流动相作为溶剂溶解后由进样阀进样。
上述所述方法，其中所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比为0.8～1.5∶1.0～2.5∶1；更加优选所述溶剂体系中三氯甲烷、甲醇和水的用量体积比为1.2∶1.8∶1。
作为本发明具体实施方式，本发明优选将固定相和流动相超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，转速为1000～2000rpm，以1.0～2.0ml/min流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，再进行进样；优选转速为1500rpm，以1.5ml/min的流速将流动相泵入柱内。
本发明采用高速逆流色谱，以三氯甲烷、甲醇、水配制构成固定相、流动相的溶剂体系，对美洛西林钠和舒巴坦钠进行分离纯化，得到注射用美洛西林钠和舒巴坦钠，所得产品纯度至少在99％以上，所制得的注射剂具有改善的稳定性。
本发明的优点是：
1、本发明采用了高速逆流色谱分离方法，高速逆流色谱技术避免了因吸附作用引起的样品损失、样品组分的化学变性，分离效能与容量可以与制备HPLC相比，而且一般不存在峰的拖尾现象。
2、采用高速逆流色谱纯化方法，使原料的纯度得到很大的提高，产品纯度至少达到99％以上，而且纯化过程无污染，便于工业连续化生产。
3、本方法纯化美洛西林钠和舒巴坦钠的有效理论塔板数为1300～2500，具有分离高效、快速、分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境温和、节约溶剂等特点。
4、采用离速逆流色谱纯化制备的冻干粉针剂，除去了很多水不溶性杂质，提高了在水中的溶解性和溶液的稳定性。
本发明提供的制备美洛西林钠舒巴坦钠粉针剂的方法，制备的粉针剂纯度高，溶解性好，性质稳定。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。
下面的实施例中所用的美洛西林钠和舒巴坦钠原料，均由山东瑞阳制药有限公司提供，纯度分别为96.0％和95.9％。
实施例1
使用半制备型高速逆流色谱仪，配有恒流泵，15ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱体积为200ml，UV紫外检测器。将体积比为1.2∶1.8∶1的三氯甲烷∶甲醇∶水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相，超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为1500rpm，以1.5ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，将美洛西林钠原料溶于下相中，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，收集收集99％以上部分，活性炭脱色，0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得纯化原料粉。
经HPLC分析，美洛西林钠的纯度为99.4％，有效理论塔板数为1988。
同法纯化舒巴坦钠原料，冷冻干燥，得舒巴坦钠纯化原料粉。经HPLC分析，舒巴坦钠的纯度为99.1％，有效理论塔板数为2046。
将冷冻干燥后的美洛西林钠和舒巴坦钠纯品分别过60目筛粉碎，然后按重量比4∶1混合均匀，在无菌室内100级条件下分装，得注射用美洛西林钠舒巴坦钠无菌制剂，每瓶装量为0.625g。
实施例2
使用半制备型高速逆流色谱仪，配有恒流泵，15ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱体积为200ml，UV紫外检测器。将体积比为0.8∶2.5∶1的三氯甲烷∶甲醇∶水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相，超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为2000rpm，以1.2ml/min的流速将流动相泵入住内，待整个体系建立动态平衡后，将美洛西林钠原料溶于下相中，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，收集收集9％以上部分，活性炭脱色，0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得纯化原料粉。
经HPLC分析，美洛西林钠的纯度为99.3％，有效理论塔板数为2014。
同法纯化舒巴坦钠原料，冷冻干燥，得舒巴坦钠纯化原料粉。经HPLC分析，舒巴坦钠的纯度为99.2％，有效理论塔板数为1776。
将冷冻干燥后的美洛西林钠和舒巴坦钠纯品分别过100目筛粉碎，然后按重量比4∶1混合均匀，在无菌室内100级条件下分装，得注射用美洛西林钠舒巴坦钠无菌制剂，每瓶装量为1.25g。
实施例3(对比)
使用半制备型高速逆流色谱仪，配有恒流泵，15ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱体积为200ml，UV紫外检测器。将体积比为0.7∶2.6∶1的三氯甲烷∶甲醇∶水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相，超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为1000rpm，以1.5ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，将美洛西林钠原料溶于下相中，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，收集收集96％以上部分，活性炭脱色，0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得纯化原料粉。
经HPLC分析，美洛西林钠的纯度为97.3％，有效理论塔板数为1685。
同法纯化舒巴坦钠原料，冷冻干燥，得舒巴坦钠纯化原料粉。经HPLC分析，舒巴坦钠的纯度为97.1％，有效理论塔板数为1956。
将冷冻干燥后的美洛西林钠和舒巴坦钠纯品分别过80目筛粉碎，然后按重量比4∶1混合均匀，在无菌室内100级条件下分装，得注射用美洛西林钠舒巴坦钠无菌制剂，每瓶装量为0.625g。
实施例4(对比)
使用半制备型高速逆流色谱仪，配有恒流泵，15ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱体积为200ml，UV紫外检测器。将体积比为1.6∶0.9∶1的三氯甲烷∶甲醇∶水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相，超声脱气后，先用固定相充满整个柱体，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为1300rpm，以1.3ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，将美洛西林钠原料溶于下相中，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，收集收集96％以上部分，活性炭脱色，0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，冷冻干燥，得纯化原料粉。
经HPLC分析，美洛西林钠的纯度为97.4％，有效理论塔板数为2240。
同法纯化舒巴坦钠原料，冷冻干燥，得舒巴坦钠纯化原料粉。经HPLC分析，舒巴坦钠的纯度为97.8％，有效理论塔板数为2006。
将冷冻干燥后的美洛西林钠和舒巴坦钠纯品分别过60目筛粉碎，然后按重量比4∶1混合均匀，在无菌室内100级条件下分装，得注射用美洛西林钠舒巴坦钠无菌制剂，每瓶装量为1.25g。
实验例5  质量研究
分别将以上制得的样品在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，其结果见表1；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，其结果见表2；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，其结果见表3。
表1  影响因素结果

表2  加速试验结果

表3  长期试验结果


注：以上表格中的“Y1，Y2，Y3”分别表示黄色1号、黄色2号、黄色3号标准比色液，“＜Y1”表示不深于黄色1号标准比色液；“1#、2#”表示1号浊度标准液，2号浊度标准液，“＜1#”表示不深于1号标准浊度液。
由以上数据结果可以看出，本发明实施例1、实施例2制得的样品纯度很好，而且影响因素10天、加速6月和长期18月后各项质量指标无明显变化，均符合质量标准。充分说明了在本发明技术范围内可以很好的纯化美洛西林钠和舒巴坦钠原料，制备质量合格的注射用美洛西林钠舒巴坦钠制剂。
已经根据优选实施例对本发明作了描述。应当理解的是前面的描述和实施例仅仅为了举例说明本发明而已。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。