九里香叶总黄酮在制备治疗糖尿病药物中的应用.pdf

本发明公开了九里香叶总黄酮在制备治疗糖尿病药物中的应用。从中药九里香叶中提取分离的九里香叶总黄酮，主要含有5，7，3′，4′－四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′－五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′－五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′－六甲氧基黄酮、7－羟基－5，3′，4′－三甲氧基黄酮。动物实验结果表明，九里香叶总黄酮能够明显降低T2DM大鼠的血糖，改善T2DM大鼠的脂代谢紊乱，升高T2DM大鼠血清中C－肽水平和胰岛素含量，提高胰岛β细胞分泌指数，降低胰岛素抵抗指数，改善IR，降低T2DM大鼠的血清MDA含量，升高SOD活性，降低T2DM大鼠的血清IL－1β、IL－6、TNF－α含量。证明九里香叶总黄酮对糖尿病具有显著的治疗作用。

权利要求书
1、  九里香叶总黄酮在制备治疗糖尿病药物中的应用。

2、  权利要求1所述的九里香叶总黄酮，其特征在于其中至少含有5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮中的两种或两种以上。

3、  权利要求1所述的九里香叶总黄酮，其特征在于其中5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮的含量之和大于50％。

4、  权利要求1所述的九里香叶总黄酮，其特征在于其中5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮和5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮的含量之和大于50％。

5、  九里香叶总黄酮与化学药或中药或天然药物组成的治疗糖尿病的复方药物。

说明书九里香叶总黄酮在制备治疗糖尿病药物中的应用
本发明涉及对糖尿病具有治疗作用的中药有效部位，属于中医中药领域。
背景技术
目前糖尿病发病率和病死率逐渐上升，已成为继肿瘤、心脑血管疾病之后，危害人类健康的第三大病种，我国糖尿病的发病率与国外发达国家相比虽然并不算高，但我国人口众多，病人的绝对人数却居世界首位。因此，寻找安全有效的药物用于防治糖尿病成为医学研究的重要课题之一。目前用于治疗2型糖尿病的口服降糖药包括：磺酰脲类、双胍类、胰岛素增敏剂、促胰岛素分泌药、醛糖还原酶抑制剂等。而这些口服降糖药存在低血糖症、胃肠道反应等副作用，同时随着治疗时间的延长，降糖效果呈降低趋势。
九里香[Murraya paniculata(L.)Jack]为芸香科九里香属植物，主要产自我国云南、贵州、湖南、广东、广西、福建、台湾等地。到目前为止从九里香[Murraya paniculata(L.)Jack]叶中共分得9个黄酮类化合物，分别是3，5，6，7，8，3′，4′，5′-八甲氧基黄酮(3，5，6，7，8，3′，4′，5′-octamethoxyflavone)、3，5，6，7，3′，4′，5′--七甲氧基黄酮(3，5，6，7，3′，4′，5′-heptamethoxyflavone)(江苏新医学院，中药大辞典，上册，上海人民出版社，1977：44-45)；5，7，8，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮(5，7，8，3′，4′，5′-hexamethoxyflavone)、3，5，7，8，3′，4′，5′-七甲氧基黄酮(3，5，7，8，3′，4′，5′-heptamethoxyflavone)(植物学报1984，26(2)：184-186)；5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮(5，7，3′，4′，5′-pentamethoxyflavone)(化学学报1984，42，1308-1311)以及5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮以及3-羟基-5，7，4′-三甲氧基黄酮(中国专利《九里香叶总黄酮及其制备方法及应用》，申请号200710147357.2)。
发明内容
本发明提供的是一种植物提取物的新的医药用途，即九里香叶总黄酮在制备治疗糖尿病药物中的应用。所述九里香叶总黄酮其特征在于其中至少含有5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮中的两种或两种以上。而且其中5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮的含量之和大于50％或者5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮和5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮的含量之和大于50％。本发明所述的药物可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等口服剂型，也可以是注射剂等非口服剂型。另外本发明所述的九里香叶总黄酮可以与其他药物包括化学药、中药以及天然药物组成复方药物用于糖尿病的治疗。
本发明是通过如下创新性研究完成的。(1)通过对九里香叶化学成分的提取分离，从九里香叶中分得了6种黄酮类化合物，并通过NMR等波谱数据的分析鉴定了其结构，它们分别是5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮以及3-羟基-5，7，4′-三甲氧基黄酮(2)通过提取纯化工艺的研究，完成了九里香叶总黄酮的制备工艺，所得九里香叶总黄酮以5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮为主要成分，(3)建立了5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮的HPLC含量测定方法，测定结果表明九里香叶总黄酮中上述黄酮类化合物的含量之和在50％至100％之间(4)通过动物实验发现了九里香叶总黄酮对糖尿病的治疗作用(5)对以九里香叶总黄酮为活性成分的药物制剂进行了研究，从而完成了本发明。具体如下。
1、九里香叶化学成分的提取分离及结构鉴定(中国专利《千里香叶总黄酮及其制备方法及应用》，申请号200710147357.2)。
2、九里香叶总黄酮的制备工艺(中国专利《千里香叶总黄酮及其制备方法及应用》，申请号200710147357.2)。
3、九里香叶总黄酮中黄酮含量测定
(1)仪器、试剂、对照品
Agilent 1100 Series高效液相色谱仪
ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm ODS，5μm色谱柱
VWD可变波长自外检测器
色谱甲醇、二次蒸馏水
(2)色谱条件
色谱柱用Zorbax Extend ODS柱，4.6×250mm，5μm；柱温为25℃；流动相为甲醇∶水＝58∶42；流速为1.2mL/min；检测波长为337nm；进样量为20μl。
(3)对照品溶液的制备
分别取5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮和7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1毫升分别含0.4、0.3、0.03、0.03、0.04毫克的溶液，摇匀，即得。
(4)供试品溶液的制备
取九里香叶总黄酮100mg，精密称定，加甲醇溶解，超声提取3次，每次加甲醇15ml，超声时间均为20min，合并提取液，蒸干溶剂，加甲醇溶解并定容至100ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
(4)测定方法
分别精密吸对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，利用外标一点法进行含量计算。
具体实施方式
实施例1
取九里香叶2公斤，85％乙醇回流提取3次，乙醇量分别为10、8、6倍，回流时间分别为60、45、30分钟，滤过，合并提取液，减压浓缩至无乙醇味，加水稀释，过AB-8大孔吸附树脂吸附，50升千分之一氢氧化钠水溶液冲洗，水洗至中性，85％乙醇洗脱至薄层层析检测不到JA为止，洗脱液减压回收乙醇，得九里香叶提取物。取此九里香叶提取物进行硅胶柱层析，乙酸乙酯和乙醇的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱，收集黄酮部分，回收溶剂，得九里香叶总黄酮38克。经HPLC检测，其中5，7，3′，4′-四甲氧基黄酮含量为39.8.0％，5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮含量33.2％为，5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮含量为3.2％、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮含量为2.8％，7-羟基-5，3′，4′-三甲氧基黄酮含量为5.0％。
实施例2
取九里香叶总黄酮10克，加淀粉适量，制粒，装入胶囊，制成1000粒，得九里香叶总黄酮胶囊。
实施例3
取九里香叶总黄酮10克，加预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠适量，制粒，压片，制成1000粒，得九里香叶总黄酮片。
实施例4
取九里香叶总黄酮10克，加吐温80适量，加10升加热溶解，高温灭菌，分装成100瓶，得九里香叶总黄酮口服液。
实施例5
取九里香叶总黄酮10克，加入1000ml丙二醇和1000ml注射用水，搅拌溶解，过滤，灭菌，罐装，每支2ml，得九里香叶总黄酮注射液。
实验实施例
第一部分  九里香叶总黄酮对肾上腺素所致高血糖小鼠的影响
1 实验材料
1.1 实验动物
健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重16～20g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，质量合格证号：SCXK-(吉)2003-0001。九里香叶总黄酮，批号：070905，自制，以下简称TFMP。
1.2 药品与试剂
盐酸肾上腺素注射液  上海禾丰制药有限公司   批号：070303
二甲双胍            天津太平洋制药有限公司 批号：070416
1.3 主要仪器
血糖仪              优克糖
优克糖血糖试纸      惠基生物科技股份有限公司
2 实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组：
空白对照组          给予0.5％CMC-Na    
模型组              给予0.5％CMC-Na
二甲双胍组          给予二甲双胍100mg/kg
TFMP中剂量组        给予50mg/kg TFMP
TFMP大剂量组        给予100mg/kg TFMP
各组动物按上面方案灌胃给药(容量为20ml/kg)，每日1次，共10日，实验动物于给药第9日禁食不禁水12h，第10日以优克糖血糖仪测定空腹血糖值(mmol/L)为药前值，然后给药。末次药后1小时，除对照组外其他各组动物分别皮下注射0.1％肾上腺素0.25mg/kg，注射后于30、60、90min断尾取血，用血糖仪测定血糖值(mmol/L)。
3 统计学分析
数据以均数±标准差表示，统计分析采用组间比较t检验。
4 实验结果
结果表明，与空白对照组比较，模型组小鼠注射肾上腺素后30～90min血糖均明显升高，有显著性差异(P＜0.01)。与模型组比较，二甲双胍组和TFMP大剂量组注射肾上腺素后60min、90min血糖值明显下降(P＜0.05或P＜0.01)，提示TFMP可明显对抗肾上腺素所致高血糖，结果见Tab.1。
        Tab.1.Effect of TFMP on blood glucose in hyperglycemia
                mice induced by adrenaline(n＝10)

#P＜0.05，##P＜0.01 vs Control；*P＜0.05，**P＜0.01 vs Model
第二部分  TFMP的糖耐量实验
1 实验材料
1.1 实验动物
健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重16～20g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，质量合格证号：SCXK-(吉)2003-0001。
1.2 药品与试剂
10％葡萄糖注射液      吉林科伦康乃尔制药有限公司  批号：S070224LI
格列本脲              天津太平洋制药有限公司      批号：070205
1.3 主要仪器
血糖仪                优克糖
优克糖血糖试纸        惠基生物科技股份有限公司
2 实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组：
空白对照组            给予0.5％CMC-Na
模型组                给予0.5％CMC-Na
格列本脲组            给予格列本脲50mg/kg
TFMP中剂量组          给予50mg/kg TFMP
TFMP大剂量组          给予100mg/kg TFMP
各组动物按以上方案灌胃给药，每日1次，连续10日，实验动物于给药第9日禁食不禁水12h，第10日以血糖仪测定空腹血糖值(mmol/L)为药前值，然后给药。末次药后1小时，除对照组外其他各组经腹腔注射葡萄糖2g/kg，测定0.5、1、2小时的血糖值，观察各组药物作用。
3 统计学分析
数据以均数±标准差表示，统计分析采用组间比较t检验。
4 实验结果
结果表明，与空白对照组比较，模型组小鼠注射葡萄糖后30～120min血糖均明显升高，有显著性差异(P＜0.01)。与模型组比较，格列本脲组注射葡萄糖后60、120min血糖值明显下降(P＜0.05)；TFMP中、大剂量组注射葡萄糖后60min、120min血糖值均下降(P＞0.05)，但无统计学意义。提示TFMP对葡萄糖所致高血糖无显著性作用，结果见Tab.2。
Tab.2.Effect of TFMP on blood glucose in hyperglycemia mice
      induced by glucose(n＝10)

#P＜0.05，##P＜0.01 vs Control；*P＜0.05，**P＜0.01 vs Model
第三部分  TFMP对大鼠实验性2型糖尿病的影响
1 实验材料
1.1 实验动物
健康Wistar大鼠，雄性，体重230～290g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，质量合格证号：SCXK-(吉)2003-0001。
1.2 药品与试剂
链脲佐菌素          美国Sigma化学公司           批号：20070512
二甲双胍            天津太平洋制药有限公司      批号：070416
胆固醇              上海新兴化工研究所          批号：060228
丙硫氧嘧啶          上海复星朝晖药业有限公司    批号：070602
吐温-80             天津市昆达工贸有限公司      批号：070317
1，2-丙二醇         天津市博迪化工有限公司      批号：20061003
戊巴比妥钠          中国上海                    批号：060612
TC测试盒            温州津玛生物科技有限公司    批号：2007090384
HDL测试盒           温州津玛生物科技有限公司    批号：2007080011
LDL测试盒           温州津玛生物科技有限公司    批号：2007080160
TG测试盒            温州津玛生物科技有限公司    批号：2007090383
肝糖原测试盒        南京建成生物研究所          批号：20070924
SOD测试盒           南京建成生物研究所          批号：20071122
MDA测试盒           南京建成生物研究所          批号：20071121
IL-1β放免测试盒    解放军总医院科技放免所      批号：20071130
IL-6放免测试盒      解放军总医院科技放免所      批号：20071130
TNF-α放免测试盒    解放军总医院科技放免所      批号：20071130
INS放免测试盒       解放军总医院科技放免所      批号：20071130
C肽放免测试盒       解放军总医院科技放免所      批号：20071130
1.3 主要仪器
血糖仪                      优克糖
优克糖血糖试纸              惠基生物科技股份有限公司
LDZ5-2型普通离心机          北京医用离心机厂
DR-HW-1电热恒温水温箱       北京西城区医疗器械厂
7202B型可见分光光度计       尤尼柯(上海)仪器有限公司
GAMMA matic II型г计数器    瑞士KONTRON公司
QL-901 Vortex混悬器         海门市其林贝尔仪器制造
2.实验方法
2.1 药物配制
脂肪乳配方：猪油25％，胆固醇1％，丙硫氧嘧啶1％，吐温-80 25％，1，2-丙二醇20％。
脂肪乳制备：取猪油25g放入200ml烧杯中，加热至100℃，加入25ml吐温-80，制成油相。另一烧杯中加入30ml蒸馏水和20ml 1，2-丙二醇加热，制成水相。然后将水相加入油相，充分混匀，即制成脂肪乳剂。
链脲佐菌素(STZ)，临用时以0.1mol/L，PH4.2柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液新鲜配制成1％的STZ溶液。
将TFMP用0.5％CMC-Na配成0.7％、0.35％的溶液，二甲双胍在研钵内用0.5％CMC-Na配成0.7％的溶液。
2.2 动物造模
将110只Wistar大鼠随机分为正常组和模型组，正常组大鼠给予蒸馏水10ml/kg，模型组大鼠在正常饮食基础上按10ml/kg灌胃(ig)给脂肪乳剂，10日后，正常组和模型组随机取12只大鼠尾静脉取血检测血清TC、TG、FFA含量。然后，各组动物禁食不禁水12小时，正常组舌下iv 0.1mol/L，PH4.2的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，模型组舌下iv STZ 30mg/kg，药后4小时ig给模型组大鼠25％葡萄糖溶液避免低血糖反应，72h后从造模大鼠中选取空腹血糖值＞11.1mmol/L的大鼠为2型糖尿病模型大鼠。
2.3 分组及给药方法
将2型糖尿病模型大鼠按血糖和体重随机分为5组，每组15只，即：TFMP大、中、小剂量组、二甲双胍组及模型对照组。具体给药方案为：
正常对照组          给予0.5％CMC-Na
模型对照组          给予0.5％CMC-Na
二甲双胍组          给予二甲双胍70mg/kg
TFMP小剂量组        给予TFMP 17.5mg/kg
TFMP中剂量组        给予TFMP 35mg/kg
TFMP大剂量组        给予TFMP 70mg/kg
各组动物按照上述方案ig给药，连续4周。2型糖尿病大鼠ig给脂肪乳10ml/kg，每3日给药1次。每周断尾取血，用血糖仪测定空腹血糖值一次，以实测值或变化百分率进行组间比较。各组存活动物于第四周最后1次给药前禁食不禁水12h，测定空腹血糖值，ig给药，药后1h腹腔注射3％戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，腹主动脉采血，分离血清，进行各种生化指标和放免指标的测定。采集各鼠同一部位肝脏，测定肝糖原含量。采集各鼠胰腺，10％甲醛固定。
2.4 观测指标及测定方法
2.4.1 一般状态观察
监测实验过程中空白组及糖尿病各组大鼠的一般状态、体重、摄食及摄水等变化，并记录各组大鼠每日的摄食摄水量。
2.4.2 血糖和肝糖元的测定
测血糖前夜，各组大鼠禁食不禁水12h，次日断尾取血，用血糖仪和优克糖试纸测定空腹血糖值，每周1次。给药第28日采集各鼠同一部位肝脏，按照肝糖元试剂盒说明书测定肝糖原含量。
2.4.3 糖尿病相关的氧化因子的测定
腹主动脉采血约6ml，注入干净的试管内，4℃，2000rpm离心10min，分离血清，按相应的试剂盒说明书要求严格操作，一部分血清用于测定血清中TC、TG、HDL、LDL、SOD、MDA含量；另外一部分血清用放射免疫分析方法测定IL-1β、IL-6、TNF-α、INS、C肽含量，以Homa Model方法计算ISI和胰岛素抵抗指数(Homa-IR)。
2.4.4 胰岛细胞形态学观察
采集各鼠胰腺，10％甲醛固定，作免疫组化，进行胰岛细胞的形态学观察。
3.统计学分析
数据以均数±标准差表示，计量资料进行组间t检验。
4.实验结果
4.1 高脂饮食对正常大鼠血脂的影响
与正常组比较，模型组大鼠连续ig脂肪乳剂10日后出现血脂代谢紊乱：TC、TG、FFA含量均显著增高(P＜0.01)，结果见Tab.3。
Tab.3.Effect of highly fatted food on serum lipid in normal rats(n＝12)

#P＜0.05，##P＜0.01 vs control
4.2 TFMP对大鼠2型糖尿病模型FBG及肝糖原的影响
在模型组大鼠出现血脂代谢紊乱的基础上舌下iv 30mg/kg STZ后，模型对照组大鼠第0、1、2、3、4周血糖值与正常对照组相比均显著升高(P＜0.01)，第4周肝糖原含量与正常对照组相比明显降低(P＜0.05)，表明大鼠T2DM模型建立成功。与模型对照组比较，TFMP35、70mg/kg剂量组于药后第3、4周FBG均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，第4周肝糖原含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01)，提示TFMP可显著改善T2DM大鼠的高血糖症状，提高肝糖原含量，见Tab.4及Tab.5。
        Tab.4.Effect of TFMP on blood glucose in T2DM rats

#P＜0.05，##P＜0.01 vs normal；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model
Tab.5.Effect of TFMP on liver glycogen content in T2DM rats

#P＜0.05 vs normal；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model
4.3 TFMP对T2DM大鼠血脂及脂代谢的影响
与正常组比较，模型对照组TG、TC、LDL-C含量值均显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，HDL-C含量明显下降(P＜0.01)；与模型对照组比较，TFMP 70mg/kg剂量组TC、TG及LDL-C含量值显著下降(P＜0.05或P＜0.01)；TFMP 70mg/kg HDL-C值明显上升(P＜0.05)，表明TFMP可以改善T2DM大鼠的血脂代谢紊乱。结果见Tab.6。
Tab.6.Effect of TFMP on serum lipid in T2DM rats

#P＜0.05，##P＜0.01 vs normal；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model
4.4 TFMP对T2DM大鼠胰岛素分泌功能及胰岛素抵抗的影响
与正常组相比，模型对照组血清中胰岛素和C-肽含量及胰岛素分泌指数ISI显著下降(P＜0.01)，Homa-IR明显升高(P＜0.01)；与模型对照组比较，TFMP 70mg/kg剂量组及二甲双胍组胰岛素和C-肽含量及ISI显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，Homa-IR明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，说明TFMP能改善T2DM胰岛β细胞功能，促进胰岛素分泌，增强组织对胰岛素的敏感性，改善IR。结果见Tab.7。
Tab.7.Effect of TFMP on Ins、C-peptide、Homa-IR and ISI in T2DM rats

##P＜0.01 vs normal；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model
4.5 TFMP对T2DM大鼠血清SOD活性及MDA含量的影响
与正常组相比，模型对照组SOD活性明显降低(P＜0.01)，MDA含量明显增加(P＜0.01)；与模型对照组比较，TFMP 35、70mg/kg剂量组及二甲双胍组SOD活性明显提高(P＜0.05或P＜0.01)，MDA含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，结果见Tab.8。
Tab.8Effect of TFMP on SOD activity and MDA content in T2DM rats

##P＜0.01 vs normal；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model
4.6 TFMP对T2DM大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的影响
与正常组相比，模型对照组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显升高(P＜0.05或P＜0.01)；与模型对照组比较，TFMP 35、70mg/kg剂量组及二甲双胍组IL-1β含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；TFMP 70mg/kg剂量组IL-6含量下降(P＜0.05)；TNF-α含量有下降趋势，但无显著性差异。结果见Tab.9。
Tab.9.Effect of TFMP on IL-1β、IL-6and TNF-αin T2DM rats

#P＜0.05，##P＜0.01 vs normal；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model
4.7 胰岛细胞形态学观察
与正常对照组比较，模型组胰岛数目减少，胰岛结构失去完整性，胰岛细胞分散，分布不均匀，胰岛内β细胞数明显减少；与模型对照组比较，FCM35、70mg/kg组及二甲双胍组胰岛数目增多，胰岛结构趋向完整，胰岛内β细胞数增多，对胰岛的损伤有较好的改善作用。
以上实验结果表明，：1.TFMP对小鼠肾上腺素所致高血糖有明显的对抗作用，于药后60min开始起效持续到90min。2.TFMP对小鼠葡萄糖所致高血糖有一定的对抗作用，但无显著性差异。3.TFMP可以明显降低T2DM大鼠的血糖，并于给药后第3周开始血糖值降低最为显著；并且能升高T2DM大鼠肝糖元的含量。4、TFMP可以改善T2DM大鼠的脂代谢紊乱。5、TFMP可以升高T2DM大鼠血清中C-肽水平和胰岛素含量，提高胰岛β细胞分泌指数，降低胰岛素抵抗指数，改善IR。6、TFMP可以降低T2DM大鼠的血清MDA含量，升高SOD活性。7、TFMP可以降低T2DM大鼠的血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量，减轻炎性反应。证明九里香叶总黄酮对糖尿病及其并发症具有显著的预防与治疗作用。
附图说明
图1胰岛β细胞形态学免疫组化分析。