一种红景天有效成分提取物的制备方法 【技术领域】
本发明属植物化学技术领域。具体涉及一种红景天有效成分提取物的制备方法。
背景技术
红景天(Rhodiola rosea)是多年生草本或灌木植物，主要分布在前苏联远东地区及中国东北、西北，西南等高寒地区，其药理活性类似于西泊利亚人参，灵芝，西洋参，主要表现在：抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射，清除体内自由基，调节和恢复人体内代谢平衡。其中研究最多的活性成分为红景天苷(Salidroside)和苷元酪醇(Tyrosol)，随着国内外研究的不断深入，发现红景天中有一种比红景天苷活性更好的成分—洛塞维，并且这种活性成分已经被广泛的应用于保健食品中。
洛塞维，英文名为Rosavin，化学名为β-(E)-肉桂醇基-O-(6′-O-α-L-比喃阿拉伯糖基)-D-吡喃葡萄糖苷，其结构式如下：
Rosavin在红景天原药材中的含量非常低，由于Rosavin和红景天苷的化学极性很近，从薄层层析(TLC)来看，两者的Rf值接近，很难将这两者分开，所以制备Rosavin单体的工艺难度较大。另外，含有Rosavin的这种活性成分的红景天药材种类也很少，资源条件相对有限，所以这样对于红景天保健产品的大规模开发无疑是个约束。
研究表明，红景天具有抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射，清除体内自由基，调节和恢复人体内代谢平衡的作用。最初的应用是作为宇航员的抗缺氧的保健食品和被运动员用于提高运动成绩，现在已经有越来越多的保健食品中添加了红景天提取物的原料。
以前人们研究较多的活性成分为红景天和苷元酪醇，随着国内外近年的深入研究发现，红景天中洛塞维(Rosavin)成分地药理活性远强于红景天苷和酪醇，从而成为保健食品原料的新宠儿，所以更好的开发Rosavin这一活性成分，无疑对于健康产业的发展拓展了很大的空间。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题在于设计一种制备方法，能有效地提取获得红景天中不同的有效成分提取物。
本发明提供了一种红景天有效成分提取物的制备方法，该方法包括下列步骤：
1.取材：选取高山红景天原料200g，加入5-8倍65-85％的乙醇溶液提取三次，得到提取液。回收提取液中的乙醇，得到浸膏，分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取，选择正丁醇萃取部位。
2.分离纯化：取正丁醇萃取物，加入3-5倍的水分散，然后用活性炭脱色，得到的滤液上大孔树脂柱，先用水洗脱，然后用10-90％梯度的乙醇洗脱，同时做TLC和HPLC跟踪，收集50-70％的乙醇洗脱液。
3.得到成品：将收集到的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到比例提取物。
4.检验：经过HPLC的含量检测，和对照品做比较，分析出比例提取物的关系，其中含有红景天苷(Salidroside)的含量在5-95％区间，洛塞维(Rosavin)的含量在95-5％范围内。
由于红景天的原药材产地不同，品种不同，所以其中所含的红景天苷和洛塞维成分的含量也不同。本发明内容所选择的原料为高山红景天品种。在研究的实施例中，考虑到乙醇的梯度洗脱，可能会造成部分损失，最后的得率有所降低。
通过使用本发明制备方法得到的红景天活性成分是在红景天同一萃取部位中制备的不同活性成分提取物，它们的含量比例为红景天苷(Salidroside)5-95：洛塞维(Rosavin)95-5。
本发明的方法工艺简单，能一次获得多种有效成分，有机溶剂残留少，并可以有效的提高红景天中的活性成分含量，适用于规模化生产，至今未见国内外任何报道。
【附图说明】
图1设计制备含有红景天活性成分的流程图
图2红景天中的Rosavin(洛塞维)标准品图谱
由天津尖峰公司为纳贝公司提供
图3为得到的样品所作图谱，其中含Rosavin(洛塞维)约8％
由天津尖峰公司中心代验室为纳贝公司提供，由于样品中
含有成分较少，所以在5分钟左右杂峰较多
图4样品中Rosavin所形成的质谱，Rosavin分子量428，在
作图过程中，使用加一分子Na+，得分子离子峰451.07，
符合样品中含有得活性成分Rosavin
图5进一步验证了样品中的Rosavin成分，两分子Rosavin与
一分子Na结合，得到分子离子峰879.17，即428×2+23
×1＝879
由上海医药工业研究院质谱室提供
【具体实施方式】
实施例一
取高山红景天的原药材200g，磨碎，用65％的乙醇溶液提取三次，每次加入乙醇的量分别为1200ml、1000ml、800ml，得到提取液，浓缩后浸膏称重19.4g，然后用乙酸乙酯(1∶1)和正丁醇(1∶1)分别萃取三次，取正丁醇萃取液，浓缩称重得5.3g，加入3倍的水溶解，经活性炭脱色后称重3.8g，上D-101型大孔树脂交换柱，先用水进行洗脱，然后分别用10％、30％、50％、70％、90％的乙醇进行梯度洗脱，收集50-70％的洗脱部位，得到红景天的有效部位提取物1.2g，其中红景天苷约1.03g，洛塞维0.011g。
实施例二
取高山红景天的原药材1kg，磨碎，用75％的乙醇溶解提取三次，得到提取液，浓缩后浸膏称重118g，然后用乙酸乙酯(1∶1)和正丁醇(1∶1)分别萃取三次，取正丁醇萃取液，浓缩得26.7g，4倍量的水溶解后，经活性炭脱色得到14.5g，上AB-8型大孔树脂交换柱，先用水洗脱，再用30％、50％、70％、90％的乙醇梯度洗脱，收集50-70％的洗脱部位，得到红景天的有效部位提取物4.9g，其中红景天苷2.79g，洛塞维为1.74g。
实施例三
取红景天的原料2kg，磨碎，用85％的乙醇溶解提取三次，得到提取液，浓缩后浸膏称重237g，然后用乙酸乙酯(1∶1)和正丁醇(1∶1)分别萃取三次，取正丁醇萃取液，浓缩得58.7g，5倍量的水溶解后，经活性炭脱色得到30.2g，上D-101型大孔树脂交换柱，先用水洗脱，再用30％、50％、70％、90％的乙醇进行梯度洗脱，收集50-70％的洗脱部位，得到红景天的有效部位提取物11.4g，其中红景天苷2.39g，洛塞维为8.21g。
检测条件：(附图谱)
1.红景天苷：
流动相： 水∶甲醇∶乙睛＝70∶25∶5
检测波长：273nm
流速： 0.6ml/min
色谱柱： ODS C18 250*4.6mm 5um
2.洛塞维：
流动相： 水∶乙睛＝75∶25
检测波长： 252nm
流速： 0.8ml/min
色谱柱： ODS C18 250*4.6mm 5um