哌啶乙酸衍生物及其在 血栓性疾病治疗 中的用途 本发明涉及乙酸衍生物、其制备方法、含有该化合物的药物组合物及其在药物中的用途。
人们普通认为是糖蛋白配合物GpⅡb/Ⅲa作为血小板上的纤维蛋白原结合部位来传递血小板聚集和血栓形成所需的粘合功能。我们现已发现一类非肽类化合物，它们通过阻滞纤维蛋白原结合到推定的纤维蛋白原受体GpⅡb/Ⅲa配合物来抑制纤维蛋白原依赖的血小板聚集作用。
在本发明的优先权日之后公开的未决申请WO 96/20192和WO96/41803描述了充当纤维蛋白原依赖的血小板聚集作用抑制剂的化合物、其制备方法及其在药物中的用途。
本发明因此提供了一种式(Ⅰ)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中：X代表CH2-CH2或CH=CH；Y代表基团R0代表SO2Me或CONH2；和R1代表SO2Me。
本发明进一步提供了一种式(Ⅰa)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中：X代表CH2-CH2或CH=CH。
本发明更进一步提供了一种式(Ⅰb)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中：X代表CH2-CH2或CH=CH。
本发明更进一步提供了一种式(Ⅰc)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中：X代表CH2-CH2或CH=CH。
适合于本发明的化合物包括：{4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸；{4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸；及其盐、溶剂化物和生理学功能衍生物。
更适合于本发明的化合物包括：{4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸；{4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸；及其盐、溶剂化物和生理学功能衍生物。
进一步适合于本发明的化合物包括：{4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸；{4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-乙基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸；及其盐、溶剂化物和生理学功能衍生物。
本发明优选的一个化合物是{4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。
本发明更优选的一个化合物是{4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。
本发明进一步优选的一个化合物是{4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-乙基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。
本文以下对“式(Ⅰ)化合物”或“本发明化合物”的引用均指的是如上所述的式(Ⅰ)和式(Ⅰa)至(Ⅰc)化合物及其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。
术语“生理学功能衍生物”指式(Ⅰ)化合物的化学衍生物，它们与机体内例如通过转化而得的游离的式(Ⅰ)化合物具有相同的生理功能。按照本发明，生理学功能衍生物的实例包括其中羧基已被修饰的式(Ⅰ)化合物，例如变为羧酸酯，如C1-6烷基酯。
适用于药物的式(Ⅰ)化合物地盐和溶剂化物中，反离子或相关溶剂是药学上可接受的。不过，具有非药学上可接受的反离子或相关溶剂的盐和溶剂化物也在本发明范围内，可将其用作制备式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物和生理学上可接受的衍生物的中间体。
适合的式(Ⅰ)化合物的药学上可接受的盐包括与无机酸或有机酸所形成的酸加成盐(例如氢氯酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、苯甲酸盐、萘甲酸盐、羟基萘甲酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、氨基磺酸盐、抗坏血酸盐、酒石酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、戊二酸盐、戊烯二酸盐、乙酸盐、丙三羧酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐和马来酸盐)和无机碱盐，如碱金属盐(例如钠盐)。式(Ⅰ)化合物的氢氯酸盐是某些给药方式所优选的。其他式(Ⅰ)化合物的盐包括与三氟乙酸所形成的盐。
适合的式(Ⅰ)化合物的药学上可接受的溶剂化物包括水合物。
术语“烷基”作为一个基团或基团的一部分，指一个直链或支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基或叔丁基。
本发明被理解为涵盖了式(Ⅰ)化合物的所有异构体及其盐、溶剂化物和生理学功能衍生物，包括所有的几何、互变和旋光形式，及其混合物(例如外消旋混合物)。
术语“药学上可接受的衍生物”指的是如上文定义的式(Ⅰ)化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物或生理学功能衍生物”。
使用Born型光学聚集作用测量仪，通过对人的洗涤后再悬浮的血小板(HRP)所进行的研究(Born,G.V.,1962《自然》194,927-929)证实，式(Ⅰ)化合物具有抑制血小板的聚集作用。
鉴于其纤维蛋白原拮抗剂活性，式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物对用于人和兽药来说是有意义的，特别是用于治疗血栓性疾病。血栓性疾病的具体例子是本领域已知的，包括闭塞性血管疾病，如心肌梗塞、心脏致命性疾病、绞痛、瞬间缺血和血栓发作，动脉硬化，血管壁疾病，外周血管疾病，肾病，视网膜病，术后血栓形成，肺栓塞，深静脉血栓形成和视网膜静脉血栓形成。式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物对用于预防性治疗手术期间及术后并发症也是有效的，如器官移植(特别是心脏和肾脏移植)、冠状动脉分流术、外周动脉分流术、血管成形术、血栓溶解和动脉内膜剥除术。
式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物也可用于治疗其他疾病，这些疾病涉及糖蛋白配合物GpⅡb/Ⅲa或其他整联蛋白受体。例如，式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物可促进伤口愈合，用于治疗由骨吸收导致或引起的骨疾病。骨疾病的具体例子是本领域已知的，包括骨质疏松症、恶性高钙血症、骨移位变化所致骨质稀少、牙周疾病、甲状旁腺功能亢进、类风湿性关节炎中的关节周围糜烂、Paget病、夹板固定诱发的骨质稀少和糖皮质激素疗法。
式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物也可用于某些癌性疾病的治疗，例如预防或延迟癌的转移。
本发明进一步提供了一种用于人或兽药的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物，特别是用于血栓性疾病的治疗。
按照本发明的另一方面，我们提供了一种用于治疗以糖蛋白配合物GpⅡb/Ⅲa或其他整联蛋白受体为诱导媒介的病病的式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物。
按照本发明的进一步方面，我们提供了一种治疗人或动物的以糖蛋白配合物GpⅡb/Ⅲa或其它整联蛋白受体为诱导媒介的疾病的方法，该方法包括将有效量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物对所述受治疗者给药。
按照本发明的另一方面，我们提供了式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物在制备治疗血栓性疾病的治疗剂中的用途。
按照本发明的进一步方面，我们提供了一种治疗人或动物的血栓性疾病的方法，该方法包括将有效量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物对所述受治疗者给药。
除非另有明确的说明，“治疗”一词应被理解为既包括确定症状的治疗，也包括预防性治疗。
不言而喻，式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物与一或多种其他治疗剂的联合使用是有利的。适合于附加疗法的药剂的实例包括血栓溶解剂或任意其他刺激血栓溶解或纤维蛋白溶解的化合物和细胞毒药物。本发明被理解为覆盖了式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物与一或多种其他治疗剂联合使用的用途。
式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物以药物组合物的形式给药较为方便。因此在本发明的另一方面，我们提供了一种适用于人或兽药的含有式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物的药物组合物。该组合物在以常规方式使用时，可方便地以与一或多种生理学上可接受的载体或赋型剂的混合物形式存在。
式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物以可被配制成以任何适当方式给药的制剂。例如该化合物可配制成局部给药或通过吸入给药，更优选为口服给药、透皮给药或胃肠外给药的剂型。
对口服给药来说，该药物组合物例如可采用片剂、胶囊、药粉、溶液、糖浆或混悬液的剂型，按常规方法用可接受的赋型剂制备。
对透皮给药来说，该药物组合物可以以透皮贴剂的方式，例如透皮离子电渗贴。在优选的方式中，本发明提供了一种离子电渗释放组件(例如离子电渗贴)，该组件含有式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物，一种药学上可接受的盐，以氢氯酸盐的例为宜。离子电渗组件及系统是现有技术已知的，例如，WO-A 9116946、WO-A 9116944、WO-A 9116943、WO-A9115261、WO-A 9115260、WO-A 9115259、WO-A 9115258、WO-A9115257、WO-A 9115250、WO-A 9109645、WO-A 9108795、WO-A9004433、WO-A 9004432、WO-A 9003825、EP-A 254965、US4717378、EP-A252732和GB-A2239803，这些均引入本发明参考文献。
对胃肠外给药来说，该药物组合物可以以注射剂或持续输注液的方式给出(例如静脉内、肌内或皮下)。该组合物可采取油或含水载体中的混悬液、溶液或乳液等剂型，并可含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。对注射给药来说，它们可采取单剂量的形式或多剂量的形式，优选加入一种防腐剂。
或者，胃肠外给药的活性成分可以是用一种适当载体重组的粉末形式。
式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物也可被制成积存制剂。该长效制剂可以通过埋入法(例如皮下或肌内)给药，或通过肌内注射给药。例如，可将化合物与适当的聚合物或疏水性物质(例如在一种可接受的油中的乳液)或离子交换树脂进行配制，或者制成有节制性可溶衍生物，例如一种有节制性溶解的盐。
如上所述，式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的衍生物也可与其他治疗剂结合使用。本发明因此进一步提供了一种含有式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物与另一种治疗剂(特别是血栓溶解剂)一起合用的药物。
上述的合用可以方便地以药物制剂的方式，因此含有上述联合物以及一种药学上可接受的载体或赋型剂的药物制剂构成了本发明进一步方面的内容。该联合中的各成分在分离的或联合的药物制剂中既可以按顺序给药，也可以同时给药。
当式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的衍生物与第二种抗相同疾病的治疗活性剂联合使用时，每种化合物的剂量可以不同于化合物被单独使用时的剂量。适当的剂量是本领域技术人员容易了解的。
对人的治疗来说，式(Ⅰ)化合物的建议每日剂量为0.01mg/kg至30mg/kg，并可方便地分1至4次给药。所用的精确剂量将取决于患者的年龄与病情以及给药途径。例如，0.1mg/kg至10mg/kg的每日剂量适用于全身给药。
式(Ⅰ)化合物及其盐、溶剂化物和生理学功能衍生物可以按照相似结构的化合物制备领域中任意已知方法进行制备，例如按照下述方法。
按照方法(A)，在过渡金属催化剂的存在下并在高温下，使式(Ⅱ)化合物或其被保护的衍生物其中Y定义如式(Ⅰ),R代表一个离去基团，如氯、溴或碘，或一个-OSO2CF3基团，与式(Ⅲ)化合物或其被保护的衍生物反应，可制得式(Ⅰ)化合物。适当的过渡金属催化剂包括钯催化剂，如钯三芳基膦催化剂。适当的温度，从约20℃至约160℃，如80至120℃，或者是溶剂的回流温度。该反应宜在叔胺等一种碱的存在下、在一种溶剂中进行，如一种极性溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺。
按照另一种方法(B)，利用其他式(Ⅰ)化合物作为前体，通过互变作用可制备式(Ⅰ)化合物。
例如，其中X代表CH2-CH2的式(Ⅰ)化合物可从其中X代表CH=CH的相应式(Ⅰ)化合物或其被保护的衍生物通过加氢来制备。该氢化反应可以在一种过渡金属催化剂的存在下进行，如阮内镍或一种钯、铂或铑催化剂。反应宜在一种溶剂中进行，如一种醇(例如乙醇)。
可供选择的方法是，可用化学方法进行氢化反应，例如使用二酰亚胺。二酰亚胺宜就地从一种适当的盐(如二氮烯二羧酸、二钾盐)生成，且该反应宜在乙酸等一种酸和醇等一种溶剂(例如甲醇)的存在下进行。
对本领域技术人员来说不言而喻的是，在上述方法任意步骤中将分子中一或多个敏感基团保护起来以防止不需要的副反应发生，这些都是必要或需要的。
另一种制备式(Ⅰ)化合物的方法(C)因此包括将式(Ⅳ)化合物去保护其中X与Y定义如式(Ⅰ)化合物，P＇是一个羧基或被保护的羧基，P＂是氢或一个氨基保护基团，其条件是若P＇是羧基，则P＂不是氢，若P＇是氢，则P＂不是羧基。
式(Ⅳ)化合物可按照上述方法(A)和(B)制备，或使用任意适当的方法制备，如实施例中所述的方法。
在方法(C)的详细实施方式中，式(Ⅰ)化合物可以从式(Ⅰ)化合物的羧基被保护的衍生物制备，即式(Ⅳ)化合物，其中P＇是被保护的羧基。在该方法的进一步实施方式中，式(Ⅰ)化合物可以从式(Ⅰ)化合物的氨基和/或羧基被保护的衍生物制备，即式(Ⅳ)化合物，其中P＂是氨基保护基团。
用于制备式(Ⅰ)化合物的保护基团可以按常规方式使用。例如参见Theodora W.Green著《有机合成中的保护基团》第二版(John Wiley and Sons,1991)所述，该书也描述了除去这些基团的方法。
详细的被保护的羧基例如包括羧酸酯基，如羧酸烷基或芳烷基酯，例如该酯官能团的烷基或芳烷基部分是甲基、乙基、叔丁基、甲氧基甲基、苯甲基、二苯甲基、三苯甲基或对硝基苯甲基。当该酯是一种非支链烷基(例如甲基)酯时，去保护作用既可以在碱性水解条件下进行，例如用氢氧化锂，也可以在酸性水解条件下进行，例如用氢氯酸。叔丁基及三苯甲基酯基可以在酸水解条件下除去，例如在室温下用甲酸或三氟乙酸，或用氢氯酸的乙酸溶液。苯甲基、二苯甲基及硝基苯甲基酯基可以在一种金属催化剂(例如钯)的存在下通过氢解作用除去。
详细的氨基保护基团例如包括芳烷基，如苯甲基、二苯甲基或三苯甲基；酰基，如N-苯甲氧基羰基、叔丁氧基羰基或三氟乙酰基。可以参考上述标准条件除去酰基。
如果需要式(Ⅰ)化合物的特定异构体形式，所需异构体用制备型高效液相色谱法(h.p.l.c.)可以方便地分离，用上述方法(A)至(C)的最终目标化合物进样，或在所述方法任意最终的去保护步骤之前进样。
式(Ⅱ)和式(Ⅳ)化合物或其被保护的衍生物可用任意适当的方法制备，例如实施例中所述的方法。
上述某些中间体是新颖的化合物，因此可理解为本文所有新颖的中间体构成了本发明进一步方面的内容。式(Ⅱ)化合物，例如[4-(5-溴-3-甲磺酰基-吲唑-1-基)-哌啶-1-基]-乙酸叔丁酯、和5-溴-1-(1-叔丁氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-羧酸甲酯，是关键的中间体，代表本发明的特定方面。式(Ⅳ)化合物也是本发明的一个重要方面，包括4-{2-[1-(1-叔丁氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-3-甲磺酰基-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯、1-(1-叔丁氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-5-[2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-(E)-乙烯基]-1H-吲唑-3-羧酸甲酯、4-{2-[1-(1-叔丁氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-3-氨甲酰基-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯、和4-{2-[3-(1-叔丁氧基羰基甲基)-哌啶-4-基)-1-甲磺酰基-1H-吲唑-6-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯。
本发明化合物随着制成酸加成盐(例如三氟乙酸盐或氢氯酸盐)而被分离。本发明化合物的药学上可接受的酸加成盐可通过常规的离子交换法从相应的三氟乙酸盐制备，例如将三氟乙酸盐用诸如含水氢氧化钠等一种碱中和，然后加入一种适当的有机或无机酸，例如氢氯酸。或者，用适当的有机或无机酸(例如氢氯酸)进行去保护，藉此可以直接制得药学上可接受的酸加成盐。通过加入一种适当的强碱、如氢氧化钠，也可从相应的三氟乙酸盐制得本发明化合物的无机碱盐。
上述方法步骤之一的操作方法可生成本发明化合物的溶剂化物(例如水合物)。
下列实施例举例说明本发明，但无论如何不限制本发明。所有温度均以℃表示。薄层色谱法(T.I.C.)在硅胶板上进行。除非另有说明，制备型高效液相色谱法(h.p.l.c.)使用Dynamax60ACl88μM 25cm×41.4mmi.d.柱，洗脱用溶剂混合物的组成为(ⅰ)0.1％三氟乙酸水溶液，和(ⅱ)乙腈，该洗脱液表示为溶剂混合物中含有(ⅱ)的百分率，所用流速为每分钟45ml。除非另有说明，分析型h.p.l.c.使用Dynamax 60ACl8 8μM 25cm×4.6mmi.d.柱，洗脱用溶剂混合物的组成为(ⅰ)和(ⅲ) 0.05％三氟乙酸的乙腈溶液，该洗脱液表示为溶剂混合物中含有(ⅲ)的百分率，所用流速为每分钟1ml。用到了下列缩写：Me=甲基；Et=乙基；THF=四氢呋喃；DMF=N,N-二甲基甲酰胺；TR=hplc保留时间。实施例1{4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三(三氟乙酸酯)的合成(ⅰ)5-溴-2-硝基-2H-吲唑
在-5℃下向搅拌的乙酸酐(410ml)中滴加发烟硝酸(8.5ml)。20分钟后，溶液冷却至-15℃，并保持在-15°下分次加入5-溴吲唑1(7.70g)。混合物在-15°下搅拌2h。过滤收集固体并使其在二乙醚和5M含水氢氧化钠之间分配。含水层用二乙醚萃取，合并了的有机萃取液干燥(Na2SO4)并在真空中蒸发，得到目标化合物，为一橙色固体(7.54g)。色谱m/z243(MH+)1参考：C.Dell＇Erba等，《四面体》1994,50,3529(ⅱ)5-溴-3-甲磺酰基-1H-吲唑
将5-溴-2-硝基-2H-吲唑(3.12g)与甲亚磺酸钠(2.89g)在DMF(20ml)中的混合物在20°下搅拌5h。混合物在真空中浓缩，使残余物在二氯甲烷和饱和含水碳酸氢钠之间分配。含水层用二氯甲烷萃取。合并了的有机萃取液干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩，得到目标化合物，为一黄色固体(1.88g)。质谱m/z 294(MNH4+)。(ⅲ)4-(5-溴-3-甲磺酰基-吲唑-1-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯
将搅拌的5-溴-3-甲磺酰基-1H-吲唑(1.20g)、4-甲磺酰氧基-哌啶-1-羧酸叔丁酯2(1.58g)、碳酸钾(1.81g)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)在100℃下加热18h。冷却了的混合物在真空中浓缩。残余物用硅胶闪蒸色谱法精制(Merck9385)，用乙酸乙酯∶环己烷1∶5洗脱，得到目标化合物，为一奶油状固体(1.37g)。质谱m/z(459)(MH+)。2参考：EP-A-0 560 268 Al(ⅳ)5-溴-3-甲磺酰基-1-哌啶-4-基-1H-吲唑
将4-(5-溴-3-甲磺酰基-吲唑-1-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.36g)的三氟乙酸(10ml)溶液在20°下搅拌1.5h。在真空中除去溶剂并使残余物在二氯甲烷和0.5M含水氢氧化钠之间分配。含水层用二氯甲烷萃取，合并了的有机萃取液用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩，得到目标化合物，为一奶油状固体(0.90g)。质谱m/z360(MH+)。(ⅴ)[4-(5-溴-3-甲磺酰基-吲唑-1-基)-哌啶-1-基]-乙酸叔丁酯
将5-溴-3-甲磺酰基-1-哌啶-4-基-1H-吲唑(0.90g)、溴乙酸叔丁酯(0.390ml)和碳酸氢钠(0.380g)在N,N-二甲基甲酰胺(15.0ml)中的混合物在20°下搅拌20h。混合物在真空中浓缩，并使残余物在二氯甲烷和水之间分配。含水层用二氯甲烷萃取，合并了的有机层在真空中浓缩。残余物用硅胶闪蒸色谱法(Merck 9385)精制，用乙酸乙酯-环己烷(1∶4至1∶3梯度)洗脱，得到目标化合物，为一奶油状固体(0.870g)。质谱m/z 474(MH+)。(ⅵ)4-{2-[1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-3-甲磺酰基-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯
在氮气下，将搅拌的[4-(5-溴-3-甲磺酰基-吲唑-1-基)-哌啶-1-基]-乙酸叔丁酯(0.350g)、4-乙烯基-哌啶-1-羧酸叔丁酯3(0.177g)、三乙胺(0.320ml)、乙酸钯(Ⅱ)(0.014g)、三邻甲苯基膦(0.037g)和N,N-二甲基甲酰胺(2.50ml)的混合物在110°下加热16h。冷却了的混合物在真空中浓缩，并使其在乙酸乙酯和饱和含水碳酸氢钠之间分配。含水层用乙酸乙酯萃取，合并了的有机层在真空中浓缩。残余物用硅胶闪蒸色谱法(Merck9385)精制，用二氯甲烷∶乙醇∶880氨水(80∶18∶2)洗脱，得到目标化合物，为一白色固体(0.270g)。质谱m/z603(MH+)3参考PCT/EP 95/05043(ⅶ){4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸盐
将4-{2-[1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-3-甲磺酰基-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.270g)溶于三氟乙酸(10ml)，混合物在20°下搅拌5h。混合物在真空中浓缩，残余物通过用二乙醚研制的方法进行精制。过滤收集所得固体并在真空中干燥，得到目标化合物，为一奶油状固体(0.170g)。质谱：m/z447(MH+)分析实测值：C,42.0；H,3.9；N,6.8；S,3.9C22H30N4O4S.3.2CF3CO2H要求：C,42.0；H,4.1；N,6.9；S,3.95％实施例2{4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸盐的合成方法A
在室温和压力下，将[4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三(三氟乙酸酯)(0.782g)进行氢化反应，反应使用10％钯碳(50％，糊，0.20g)，并在水：乙醇70∶30中进行6h。滤出催化剂，在真空中蒸发溶剂，得到一黄色油状物(0.577g)。用制备型HPLC(梯度范围10-75％(ⅱ)20分钟，250nM检测，RT 10.3分钟)精制，所得胶状物用无水乙醚研制，得到目标化合物，为一白色固体(0.180g)。质谱m/z449(MH+)分析实测值：C,44.6；H,5.2；N,7.8；S,4.3C22H32N4O4S.2.4CF3COOH要求：C,44.6；H,4.8；N,7.8；S,4.4方法B(a)4-溴-(2-甲硫基甲基)苯胺
在0至-5℃下，向搅拌的N-氯琥珀酰亚胺(139.7g)的二氯甲烷(3750ml)溶液中滴加二甲基硫(105ml)，所得混悬液冷却至-20℃。向其中滴加4-溴苯胺(150.0g)的二氯甲烷(300ml)溶液，混悬液在-20℃下搅拌0.5h，反应混合物用三乙胺(292ml)稀释。反应混合物在环境温度下搅拌58h，用水、2N氢氯酸、8％w/w含有碳酸氢钠洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空中蒸发，得到目标化合物，为一淡黄色固体(162.0g)。质谱m/z232.9(MH+)(b)5-溴-3-甲基硫烷基(sulfanyl)-1H-吲唑
在10-15℃下，向搅拌的4-溴-(2-甲硫基甲基)苯胺(163.0g)与氟硼酸(230ml,48％ w/w水溶液)的水(815ml)溶液中滴加氰化钠(48.4g)的水(100ml)溶液。所得黄色混悬液在环境温度下搅拌1h，过滤分离固体，将该固体用水和二乙醚洗涤，最后悬浮在氯仿(4000ml)中。搅拌的混悬液用乙酸钾(138.0g)和18-冠醚-6(9.30g)处理，并在环境温度下搅拌2h。将反应混合物过滤，滤液用2N氢氧化钠洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空中蒸发，得到目标化合物，为一淡黄色固体(147.7g)。质谱m/z243.9(MH+)(c)5-溴-3-甲磺酰基-1H-吲唑
向搅拌的5-溴-3-甲基硫烷基-1H-吲唑(36.0g)的甲醇(450ml)与水(135ml)混悬液中分次加入过硫酸氢钾制剂TM(182.2g)。反应混合物在环境温度下搅拌3h，在真空中浓缩，并使所得油状物在乙酸乙酯和水之间分配。分离该两相混合物，含水相用乙酸乙酯萃取，合并了的有机相用8％w/w含水碳酸氢钠和水洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空中蒸发，得到目标化合物，为一不完全白色固体(38.8g)。质谱m/z293.9(MNH4+)(d)4-[3-甲磺酰基-5-{1-(1-叔丁氧羰基甲基-2-哌啶-4-基-乙基)}-1H-吲唑-1-基]-1-吡啶乙酸叔丁酯
向预氢化的10％ Pd/C(115.5g)的乙醇(77ml)与水(19ml)混悬液中加入4-{2-[1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-3-甲磺酰基-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-1-哌啶乙酸叔丁酯(77.0g)的乙醇(760ml)溶液，所得搅拌的混悬液在环境温度下氢化26h。反应混合物通过hyflo过滤，残余物用乙醇洗涤，并将合并了的滤液在真空中蒸发，得到一淡绿色油状物，用Biotage色谱法精制，用乙酸乙酯∶环己烷(1∶1)洗脱，得到目标化合物，为一胶状固体(46.8g)。质谱m/z 605.3(MH+)(e)二盐酸4-[3-甲磺酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-1H-吲唑-1-基]-1-哌啶乙酸
将4-[3-甲磺酰基-5-{1-叔丁氧羰基甲基-2-哌啶-4-基-乙基)}-1H-吲唑-1-基]-1-哌啶乙酸叔丁酯(25.0g)的三氟乙酸(250ml)溶液在环境温度下搅拌4h。反应混合物在真空中蒸发，残余物用制备型HPLC精制，用水∶乙腈∶三氟乙酸洗脱(90∶10∶0.1至25∶75∶0梯度，20分钟，260nm检测，RT13分钟)，得到一白色固体，将其溶于2N盐酸，并在真空中蒸发，得到一白色固体。盐酸溶解步骤重复两次。该白色固体用丙酮(100ml)研制，混悬液在真空中蒸发。固体再次用丙酮(100ml)研制，混悬液在环境温度下搅拌0.5h并过滤分离固体，用丙酮洗涤并在45℃下真空中干燥至恒重，得到目标化合物，为一白色结晶状固体(10.03g)。分析实测值：C,46.9；H,6.8；N,9.9C22H32N4O4S.2HCl.2H2O要求：C,47.3；H,6.8；N,10.0％实施例3{4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸酯的合成(a)5-溴-1-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-羧酸甲酯
将含有4-甲磺酰氧基-哌啶-1-羧酸叔丁酯2(40.9g,153mmol)的5-溴-1H-吲唑-3-羧酸4甲酯(35.8g)的无水THF(400ml)溶液用叔丁醇钾(15.75g,140mmol)处理，并在氮气、回流条件下搅拌24h。冷却后，混合物在真空中蒸发，残余物用含水饱和氯化铵(400ml)处理。混合物用乙酸乙酯萃取，合并、干燥(Na2SO4)后的有机萃取液在真空中蒸发至硅胶上。将所得硅胶用作硅胶闪蒸柱填料，用环己烷∶乙酸乙酯(19∶1至3∶1梯度)洗脱，先得到一种异构体，然后是目标产物(22.8g)。T.l.c.SiO2(环己烷：EtOAc,7∶3),Rf 0.294参考：G.A.Bistrocchi等《Farmaco.Ed.Sci.》1981,36,315(b)5-溴-1-哌啶-4-基-1H-吲唑-3-羧酸甲酯双(三氟乙酸酯)
在23°下历时1分钟，向5-溴-1-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-羧酸甲酯(22.75g)中加入三氟乙酸(100ml)。1h后，混合物在真空中蒸发并与二氯甲烷共蒸发，得到目标产物(28.05g)，为一浅黄色固体。T.l.c.SiO2(CH2Cl2∶EtOH：880NH3,89∶10∶1),Rf0.18(c)5-溴-1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-羧酸甲酯
在氮气、23°下，一边搅拌一边将5-溴-1-哌啶-4-基-1H-吲唑-3-羧酸甲酯双(三氟乙酸酯)(28.05g)与溴乙酸叔丁酯(7.3ml)DMF(500ml)溶液用二异丙基乙基胺(25.9ml)处理，并保持4天。进一步加入溴乙酸叔丁酯(1.4ml)、然后是二异丙基乙基胺(5.0ml)并继续搅拌2h。混合物在真空中蒸发，用含水饱和碳酸氢钠(400ml)处理，并用乙酸乙酯萃取。合并、干燥(Na2SO4)后的有机萃取液在真空中蒸发，残余物从乙酸乙酯中结晶，得到目标产物(13.43g)。T.l.c.SiO2(环己烷∶EtOAc,7∶3).Rf0.17(d)1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-5-[2-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-(E)-乙烯基]-1H-吲唑-3-羧酸甲酯
将5-溴-1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-羧酸甲酯(13.43g)、4-乙烯基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(6.90g)、乙酸钯(Ⅱ)(666mg)、三邻甲苯基膦(1.81g)、三乙胺(12.4ml,89.1mmol)，和DMF(200ml)的混合物在120°、氮气下搅拌15h。冷却后，混合物在真空中蒸发，用含水饱和碳酸氢钠(200ml)处理，并用乙酸乙酯萃取。合并、干燥(Na2SO4)后的有机萃取液在真空中蒸发，残余物用硅胶闪蒸色谱法精制。用二氯甲烷∶乙醇∶880氨水梯度洗脱(989∶10∶1至978∶20∶2梯度)，得到目标化合物，为一浅橙色泡沫，(8.94g)。T.l.c.SiO2(CH2Cl2∶EtOH∶880NH3,978∶20∶2)Rf0.14(e)4-{2-[1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-3-氨甲酰基-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯
将1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-5-[2-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)]-(E)-乙烯基]-1H-吲唑-3-羧酸甲酯(600mg)在用氨水饱和了的甲醇(20ml)中的溶液在80°下加热50h。将冷却后的溶液在真空中蒸发，残余物用硅胶闪蒸色谱法精制。用二氯甲烷∶乙醇：0.88氨水梯度洗脱(989∶10∶1至967∶30∶3梯度)得到目标产物，将一白色泡沫(373mg)。T.l.c.SiO2(CH2Cl2∶EtOH∶880NH3,978∶20∶2)Rf 0.08(f){4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸酯
将4-{2-[1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-3-氨甲酰基-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(292mg)的三氟乙酸(6ml)溶液在23°下保持2h。溶液在真空中蒸发，与水(3ml)共蒸发，并用二乙醚研制，得到目标产物，为一白色固体(311mg)。质谱m/z412(MH+)分析实测值：C,45.0；H,4.8；N,9.4C22H29N5O3,2.8CF3CO2H要求：C,45.4；H,4.4；N,9.6％实施例4{4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸酯方法A
向预氢化的活化碳(70mg)上的10％钯的水(10ml)悬液中加入{4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸酯(100mg)的水(40ml)溶液，并在氢气下搅拌4h。滤出催化剂，洗涤，滤液用三氟乙酸(2滴)处理。溶液在真空中蒸发，残余物用乙醚研制，得到目标产物，为一纯白色结晶(74mg)。质谱m/z414.1(MH+)分析型HPLC RT 9.2分钟分析实测值：C,45.7；H,4.9；N,9.9C22H31N5O3,2.65CF3CO2H要求：C,45.8；H,4.7；N,9.8％方法R(a)5-溴-3-甲酰基-1H-吲唑
在20-25°下，历时0.5h向5-溴吲哚(100g)与氰化钠(350g)的1,4-二烷(3.5L)与水(18vol)溶液中稳定加入3N氢氯酸(18L)，使其酸化至pH2.5。混合物搅拌0.75h，然后用乙酸乙酯萃取。合并了的有机萃取液用乙酸乙酯(IL)稀释并用水洗涤。合并了的水洗涤用乙酸乙酯萃取。有机层用水洗涤，与主要的有机萃取液合并蒸发，得到一暗黑-棕色固体。该固体用乙酸乙酯(200ml)研制1h，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤并干燥，得到目标化合物，为一红棕色固体(60.8g)。质谱m/z223,225[M-H+]-(b)5-溴-3-氰基-1H-吲唑
将5-溴-3-甲酰基-1H-吲唑(143g)的混悬液在羟基胺-0-磺酸(93.4)的水(1.4L)溶液中在65-70°下加热16h。历时1h将混合物冷却至20°，过滤，滤饼用水洗涤并在45℃下干燥，得到一固体(146g)。该固体在甲苯(3.65L)中回流加热1h并在90℃下过滤。滤液再加热，得到一溶液，搅拌并冷却至10℃。过滤该混悬液，滤饼用甲苯洗涤并干燥，得到目标化合物，为一淡棕色固体(111g)。质谱m/z220,222[M-H+]-(c)4-(5-溴-3-氰基-1H-吲唑-1-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯
将5-溴-3-氰基-1H-吲唑(111g)、1-叔丁氧羰基-4-甲磺酰基-哌啶(168g)和碳酸钾(193g)在DMF(1.1L)中的混悬液在105-110°下加热6h，蒸发至干，并使橙色残余物在二氯甲烷和水之间分配。含水相再次用二氯甲烷萃取，合并了的有机相用水洗涤，并蒸发得到一橙色残余物(130g)。该残余物用环己烷与乙酸乙酯的混合物(6∶1,1.04L)研制1h，过滤。滤饼用环己烷与乙酸乙酯的混合物洗涤，干燥，得到目标化合物，为一淡黄色粉末(125g)。质谱m/z405,407[MH+](d) 5-溴-1-哌啶-4-基-1H-吲唑-3-羧酰胺
在20-30°下，历时1h向浓硫酸(620g)中分次加入4-(5-溴-3-氰基-1H-吲唑-1-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(62g)，混悬液搅拌2h。将混合物倾倒在冰(1.24kg)上，在20-30°下历时1.5h用5N氢氧化钠(2.44L)碱化至pH12，用水(300ml)稀释，过滤。滤饼用水洗涤并干燥，得到目标化合物，为一不完全白色固体(51.5g)。质谱m/z323,325[MH+](e)4-(5-溴-3-氨基羰基-1H-吲唑-1-基)-1-哌啶乙酸叔丁酯
在20-30°下，向5-溴-1-哌啶-4-基-1H-吲唑-3-羧酰胺(100g)与三乙胺(43.3ml)的DMF(1L)溶液中小心地加入溴乙酸叔丁酯(60.4g)，混合物搅拌2h。在＜25°下历时1h向混合物中滴加水(1.5L)，混悬液搅拌1h，过滤。滤饼用水洗涤，干燥，得到目标化合物，为一淡黄色固体(121g)。质谱m/z437,439[MH+](f)4-{2-[3-氨基羰基-1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯
将4-(5-溴-3-氨基羰基-1H-吲唑-1-基)-1-哌啶乙酸叔丁酯(120g)、4-(E)-乙烯基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(60.8g)、三乙胺(114.6ml)、三邻甲苯基膦(16.7g)、乙酸钯(6.2g)和harborlite J2助滤剂(60g)在DMF(2.4L)中的混合物在105-110°下加热14h。混合物冷却至约35°，加入炭(30g)，混合物在约35°下搅拌1h，然后冷却至环境温度。混合物过滤，滤垫用N,N-二甲基甲酰胺和环己烷洗涤。合并了的滤液用水(240ml)稀释，产生相分离，N,N-二甲基甲酰胺/水萃取液用环己烷洗涤，浓缩得到一红色胶状物。该胶状物在水(600ml)中搅拌1h，进一步加入水(1.8L)，混悬液搅拌0.5h，过滤。滤饼用水洗涤，干燥，得到目标化合物(153g)，为一橙黄色固体。质谱m/z568[MH+](g)4-{2-[3-氨基羰基-1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-5-基]-乙基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯
向4-{2-[3-氨基羰基-1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-5-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(147g)的四氢呋喃(2.94L)溶液中加入10％钯-碳催化剂(73.5g)，并在氢气、环境温度下搅拌5h。第二次加入10％钯-碳催化剂(73.5g)和四氢呋喃(200ml)，混悬液进一步在氢气下搅拌18h，然后第三次加入催化剂(73.5g)和四氢呋喃(200ml)，混悬液另在氢气下搅拌20h。混合物过滤，用四氢呋喃洗涤，并蒸发得到一深黑色油状物。该油状物用Biotage硅胶色谱法精制，先用乙酸乙酯-环己烷(1∶1)再用乙酸乙酯洗脱，得到目标化合物，为白色结晶(32.65g)。质谱m/z570[MH+](h){4-[3-氨甲酰基-5-(2-哌啶-4-基-乙基)-吲唑-1-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸酯
向三氟乙酸(330ml)中分两等份加入4-{2-[3-氨基羰基-1-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-5-基]-乙基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯(32.65g)，溶液在环境温度下搅拌3h。混合物浓缩至100g重，并用制备型HPLC(KromsilC8,10μm，反相)精制，用水-乙腈-三氟乙酸90∶10∶0.1％v/v(A)和水-乙腈25∶75(B)洗脱，得到一白色固体(26g)。将该固体(23.6g)溶于HPLC级水(60ml)，并在20-30°下历时0.5h加入880氨水溶液(20ml)，调至pH10。乳白色混悬液在20°下搅拌1.5h，过滤。滤饼用水洗涤，并在两次洗涤之间真空吸取10分钟，在40°下干燥10h后在环境条件下平衡4h，得到目标化合物，为一白色粉末(12.05g)。质谱m/z414[MH+]实施例5{4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸的合成(a)1-[4-(2,4-二溴-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-乙酮(ethanone)
向搅拌的盐酸1-乙酰基-哌啶-4-羧基氯5(21.8g)与氯化铝(Ⅲ)(34.5g)的混合物中加入1,3-二溴苯(65ml)，混合物在95-100°下加热1.5h。冷却后，将该混合物倾入冰-水混合物(50ml)中，用乙酸乙酯萃取。合并、干燥(Na2SO4)后的有机萃取液在真空中蒸发，残余物用硅胶闪蒸色谱法(Merck9385)精制。用乙醚-乙醇梯度洗脱(99∶1至90∶10梯度)，得到目标化合物，为一橙色油状物(16.7g)。T.l.c.SiO2(Et2O-EtOH,9∶1)Rf=0.235参考：EP-A-0 428 437(b)盐酸(2,4-二溴-苯基)-哌啶-4-基-甲酮
将搅拌的1-[4-(2,4-二溴-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-乙烷酮(11.00g)与含水5M氢氯酸(60ml)的混合物在氮气下回流加热7h。混合物在真空中蒸发，得到目标化合物，为一白色固体(10.8g)。T.l.c.SiO2(CH2Cl2-EtOH-880NH3,89∶10∶1)Rf=0.17(c)(2,4-二溴-苯基)-哌啶-4-基-亚甲基-肼
将搅拌的盐酸(2,4-二溴-苯基)-哌啶-4-基-甲酮(7.04g)、肼(6.0ml)与乙醇(150ml)的溶液在氮气下回流加热16h。冷却了的溶液在真空中蒸发，用含水1M碳酸钠(50ml)处理，用乙醚萃取，并将合并、干燥(Na2SO4)后的有机萃取液在真空中蒸发。残余物用闪蒸色谱法(Merck 9385)精制，用二氯甲烷-乙醇-880氨水洗脱(89∶10∶1至835∶150∶15梯度)，得到目标化合物，为一奶油状固体(5.71g)。T.l.c.SiO2(CH2Cl2-EtOH-880NH3,78∶20∶2)Rf=0.13(次要)和Rf=0.16(主要)(d)盐酸6-溴-3-哌啶-4-基-1H-吲唑
将搅拌的(2,4-二溴-苯基)-哌啶-4-基-亚甲基-肼(5.64g)、氢化钠(1.25g,60％油分散系)和无水DMF(150ml)的混合物在105°、氮气下加热6.5h。进一步加入氢化钠(200mg)继续加热2h。混合物在真空中蒸发，加入含水2M盐酸酸化至pH1，然后加入含水1H碳酸钠碱化至pH8。混合物用乙醚萃取，合并、干燥(Na2SO4)后的有机萃取液在真空中蒸发。残余物用闪蒸色谱法(Merck 9385)精制，用二氯甲烷-乙醇-880氨水(89∶10∶1至78∶20∶2梯度)洗脱，得到目标化合物，为一黄色奶油状固体(2.50g)。T.l.c.SiO2(CH2Cl2-EtOH-880NH3,78∶20∶2)Rf=0.6(e)[4-(6-溴-1H-吲唑-3-基)-哌啶-1-基]-乙酸叔丁酯
将盐酸6-溴-3-哌啶-4-基-1H-吲唑(500mg)、溴乙酸叔丁酯(0.29ml)、碳酸氢钠(150mg,1.87mmol)和DMF(10ml)的混合物在23°、氮气下搅拌18h。混合物在真空中蒸发，用含水饱和碳酸氢钠(25ml)处理，并用乙酸乙酯(50ml)萃取。干燥(Na2SO4)后的有机层在具空中蒸发至硅胶(Merck 7734)上。用闪蒸色谱法(Merck9385)精制，用二氯甲烷-乙醇-880氨水(967∶30∶3至945∶50∶5梯度)洗脱，得到目标化合物，为一纯白色结晶(347mg)。T.l.c.SiO2(CH2Cl2-EtOH-880NH3,945∶50∶5)Rf=0.27(f)4-{2-[3-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-6-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯
将[4-(6-溴-1H-吲唑-3-基)-哌啶-1-基]-乙酸叔丁酯(1.34g)、4-乙烯基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.75g)、三乙胺(1.4ml)、乙酸钯(ⅱ)(0.050g)和三(邻甲苯基)膦(0.210g)在DMF(60ml)中的混合物在120°、氮气下搅拌16h。混合物在真空中蒸发，用闪蒸色谱法(Merek 9385)精制，洗脱液为乙酸乙酯∶环己烷∶三乙胺(50∶50∶2至100∶0∶2)，得到目标化合物，为一黄色固体(1.18g)。T.l.c.SiO2(CH2Cl2∶EtOH∶880NH3 95∶5∶0.5)Rf=0.32(g)4-{2-[3-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶4-基]-1-甲磺酰基-1H-吲唑-6-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯
将4-{2-[3-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基]-1H-吲唑-6-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.211g)的DMF(10ml)溶液用氢化钠(60％油悬液，0.019g)处理，在23℃、氮气下搅拌0.5h。加入甲磺酰氯(0.03ml)，混合物进一步搅拌40h。在真空中蒸发溶剂，使残余物在水(20ml)和乙酸乙酯之间分配。萃取液干燥(Na2SO4)，在真空中干燥，用硅胶闪蒸色谱法精制，洗脱液为环己烷∶乙醚∶三乙胺50∶50∶2，得到目标化合物，为一无色胶状物(0.141g)。质谱m/z603(MH+)(h){4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸酯
将4-{2-[3-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基]-1-甲磺酰基-1H-吲唑-6-基]-(E)-乙烯基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.138g)用三氟乙酸(3ml)处理，在22℃下搅拌2h。在真空中蒸发溶剂，残余物用制备型HPLC精制(梯度范围20-70％(ⅱ)18分钟，Rf12.5分钟)。用乙醚研制，得到目标化合物，为一白色结晶状固体(0.114g)。质谱m/z 447.2(MH+)分析实测值：C,44.5；H,4.7；N,7.7C22H30N4O4S.2.4C2HF3O2要求：C,44.7；H,4.5；N,7.8％实施例6{4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-乙基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸的合成方法A
向搅拌的10％钯碳(600mg)的水(30ml)悬液中加入{4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-(E)-乙烯基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸三氟乙酸酯(690mg)的水(90ml)溶液，混合物在23°、氮气下搅拌6h。滤出催化剂，滤液在真空中蒸发，得到目标化合物，为纯白色结晶(420mg)。质谱m/z449(MH+)分析实测值：C,42.6；H,4.9；N,7.2C22H32N4O4S.3C2HF3O2.0.3C4H10O要求：C,42.4；H,4.6；N,6.8％方法B(a)4-{2-[1-甲磺酰基-3-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-6-基]-乙基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯
在环境温度下，向搅拌的4-{2-[3-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-基)-1H-吲唑-6-基]-乙基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(40.1g)和4-N,N-二甲氨基吡啶(0.96g)的吡啶(280ml)溶液中滴加甲磺酰氯(7.6ml)。所得棕色溶液在环境温度下搅拌18h，用水(400ml)稀释，用二氯甲烷(400ml)萃取。合并了的有机萃取液在真空中蒸发，棕色残余物用乙醇(400ml)稀释后在真空中蒸发，得到一棕色油状物。将该油状物用乙醇(400ml)研制，在真空中蒸发至约200ml，得到一混悬液。过滤分离所得固体，用乙醇洗涤，在45℃真空中干燥，得到目标化合物，为一不完全白色固体(37.6g)。质谱m/z605(MH+)(b){4-[1-甲磺酰基-6-(2-哌啶-4-基-乙基)-1H-吲唑-3-基]-哌啶-1-基}-乙酸；
将4-{2-[1-甲磺酰基-3-(1-叔丁氧羰基甲基-哌啶-4-堪-1H-吲唑-6-基]-乙基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(20g的5N盐酸(200ml)溶液在环境温度下搅拌5h。反应混合物用饱和碳酸钾(300ml)中和，用异丙醇萃取。合并了的有机萃取液在真空中蒸发，得到一油状物，用乙醇(300ml)稀释，用旋转蒸发法浓缩，得到一白色固体。将该不完全白色固体用闪蒸色谱法(Merck9385)精制，用乙醇∶二氯甲烷∶0.88氨水(15∶3∶1至15∶3∶1.5梯度)洗脱，得到目标化合物，为一白色固体(10.1g)。分析实测值：C,56.3；H,7.7；N,11.0％(C22H32N4O4S.0.80H2O 0.83 C2H6O)×0.984要求：
C,55.8；H,7.6；N,11.1％实施例7片剂
(a)本发明化合物 5.0mg
乳糖 95.0mg
微晶纤维素 90.0mg
交联聚乙烯吡咯烷酮 8.0mg
硬脂酸镁 2.0mg
压制重量 200.0mg
将本发明化合物、微晶纤维素、乳糖和交联聚乙烯吡咯烷酮通过500微米筛，在一种适当的混合机中混合。将硬脂酸镁通过250微米筛，与活性混合物混合。用适当的冲压机将混合物压制成片。
b)本发明化合物 5.0mg
乳糖 165.0mg
预胶化淀粉 20.0mg
交联聚乙烯吡咯烷酮 8.0mg
硬脂酸镁 2.0mg
压制重量 200.0mg
将本发明化合物、乳糖和预胶化淀粉一起混合后用水造粒。湿材干燥、磨细。将硬脂酸镁和交联聚乙烯吡咯烷酮通过250微米筛，与颗粒混合。所得混合物用适当压片机压片。实施例8胶囊
a)本发明化合物 5.0mg
预胶化淀粉 193.0mg
硬脂酸镁 2.0mg
填充重量 200.0mg
将本发明化合物和预胶化淀粉通过500微米孔筛，一起混合，用硬脂酸镁(通过250微米筛)润滑。混合物填入适当尺寸的硬胶囊中。
b)本发明化合物 5.0mg
乳糖 177.0mg
聚乙烯吡咯烷酮 8.0mg
交联聚乙烯吡咯烷 8.0mg
硬脂酸镁 2.0mg
填充重量 200.0mg
将本发明化合物与乳糖混合，用聚乙烯吡咯烷酮溶液造粒。湿材干燥、磨细。将硬脂酸镁和交联聚乙烯吡咯烷酮通过250微米筛，与颗粒混合。所得混合物填入适当尺寸的硬胶囊中。实施例9糖浆
a)本发明化合物 5.0mg
羟基丙甲基纤维素 45.0mg
羟基苯甲酸丙酯 1.5mg
羟基苯甲酸丁酯 0.75mg
糖精钠 5.0mg
山梨糖醇溶液 1.0ml
适当的缓冲剂 适量
适当的矫味剂 适量
纯净水 至10ml
将羟丙甲基纤维素以及羟基苯甲酸酯分散在一定比例热的纯水中，使溶液冷却至环境温度。向本体溶液中加入糖精钠矫味剂和山梨糖醇溶液。将本发明化合物溶于一定比例的其余水中，加入到本体溶液中。可以加入适当的缓冲剂来调节pH在保持最大稳定性的范围内。溶液补充至所需体积，过滤，装入适当容器中。实施例10注射剂
％w/v
本发明化合物 1.00
注射用水(英国药典) 至100.00
可加入氯化钠来调节溶液张力、用稀酸或碱、或加入适当缓冲盐可将pH调节至最大稳定性和/或促进本发明化物溶解的值。也可加入抗氧化剂和金属螯合盐。将溶液净化、用水补充至最终体积，必要时再次测量和调节pH，得到10mg/ml的式(Ⅰ)化合物。
可将溶液灌装在注射剂包装中，例如灌装在密封在安瓿、小瓶或注射器中。安瓿、小瓶或注射器可以无菌灌装(例如可对溶液进行过滤除菌，在无菌条件下装入无菌安瓿)和/或最后灭菌(例如使用一个可接受的周期在高压灭菌器中加热)。可在惰性氮气下进行溶液包装。
优选将溶液装入安瓿，玻璃熔融密封，最后灭菌。
按类似方法制备进一步的含有0.5、2.0和5％w/v式(Ⅰ)化合物的无菌制剂，从而分别得到5、20和50mg/ml的式(Ⅰ)化合物。生物学数据1．人洗涤的血小板测定
按照下列方法测定本发明化合物对血小板聚集的抑制作用。从志愿者身上获得柠檬酸化的全血(1份3.8％w/v柠檬酸三钠；9份血)，志愿者在献血前至少10天不接受药物治疗。血液用阿斯匹林(0.1mM)和环前列腺素(0.06μM)处理，然后离心(1400g,4分钟，20℃)。分离富含血小板的血浆(PRP)上清液，进一步离心(1400g,10分钟，20℃)，使血小板沉降下来。弃去上清液，将血小板小丸再次悬浮在已调至pH6.4的生理盐溶液(HEPES5mM,NaHCO3 12mM,NaCl,140mM,KH2PO4 0.74mM,D-葡萄糖5.6mM和KCl 2.82mM)中。该血小板混悬液离心(1400g,8分钟，20℃)，将所得血小板小丸再次悬浮在已调至pH7.4的生理盐溶液中。稀释所得洗涤过的血小板制剂，得到最终血小板数为3×108/l。将精制的人纤维蛋白质(Knight,L.C.等1981《血栓形成止血法》46(3)593-596)、Ca2+Mg2+加回到洗涤过的血小板制剂中，得到最终浓度分别为0.5mg/ml、1mM和0.5mM。用浊度计定量测量血小板的聚集。供试化合物与洗涤过的血小板恒温(37℃)5分钟，然后加入1μM血小板聚集激动剂U-46619(一种稳定的凝血烷A2模拟剂)。供试化合物的抑制效价以IC50值表示，其定义为抑制50％血小板聚集所需的化合物浓度。得到下列本发明化合物的IC50值：表1 实施例编号 IC50(nm) 1 100 2 53 3 ＜100 4 ＜100 5 ＜100 6 ＜100