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1、(10)申请公布号 CN 103070267 A (43)申请公布日 2013.05.01 CN 103070267 A *CN103070267A* (21)申请号 201310014683.1 (22)申请日 2013.01.16 A23F 3/34(2006.01) (71)申请人 湖南城市学院 地址 413000 湖南省益阳市迎宾东路 518 号 (72)发明人 刘石泉 赵运林 龙立平 胡治远 (74)专利代理机构 长沙正奇专利事务所有限责 任公司 43113 代理人 魏国先 (54) 发明名称 富金花荷叶茶发花制备工艺 (57) 摘要 一种富金花荷叶茶发花制备工艺， 其步骤为 ： 冠。
2、突散囊菌的纯化分离 ； 一定老化度冠突散 囊菌孢子悬液制备与浓度确定 ； 初级荷叶茶制 作与保存 ； 初级荷叶茶渥堆 ； 添加冠突散囊 菌孢子悬液 ； 烘茶 ； 发花 ； 干燥和保存。本 发明研制成功了富金花荷叶茶发花制备工艺， 使 之能在 3-7 天短期内实现发花， 而且金花普遍 茂盛， 色泽鲜艳金黄， 颗粒肥大， 发花率均能达到 100%。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 (10)申请公布号 CN 103070267 A CN 103070267 A 。
3、*CN103070267A* 1/1 页 2 1. 一种富金花荷叶茶发花制备工艺， 其特征在于 ： 具体步骤如下 ： 冠突散囊菌的纯化分离 ； 一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定 ； 初级荷叶茶制作与保存 ； 初级荷叶茶渥堆 ； 添加冠突散囊菌孢子悬液 ； 烘茶 ； 发花 ； 干燥和保存。 2. 根据权利要求 1 所述的富金花荷叶茶发花制备工艺， 其特征在于 ： 所述的冠突散囊 菌的纯化分离方法为 ： 用添加 10% 茯砖茶汁的 PDA 琼脂固体培养基平板梯度稀释分离 ； 所 述的一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定方法为 ： 挑取纯化的金花菌落， 接种 至添加10%茯砖茶汁、 。
4、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养基培养， 28静置培养5天， 然后 升高温度至30-32培养14-30天， 震荡分散孢子， 无菌水稀释孢子悬液浓度控制在107-108 个 /mL ； 所述的初级荷叶茶制作与保存 ： 将荷叶洗净， 切丝成 0.2cm 宽长条状， 使其维持含 水量 10%， 在 100密闭杀青 2 小时， 然后揉捻成条索状后， 37渥堆 24 小时， 40-50干燥 1 天后制成初级荷叶茶， 常温室内保存 ； 所述的初级荷叶茶渥堆 ： 用茯砖茶汁拼配使其维持 含水量28%， 37渥堆24小时 ； 冠突散囊菌孢子悬液添加量为0.25 mL/100g ； 所述的烘茶条 件为。
5、密闭 65-68、 1 小时 ； 所述的发花为 ： 控制湿度和温度发花条件为前两天湿度 80%、 温 度 26， 然后湿度 70%、 温度 28直至金花生长普遍茂盛、 色泽鲜艳金黄、 颗粒肥大， 菌花香 浓郁为止 ； 所述的干燥和保存为 ： 富金花荷叶茶 40-50干燥 1 天后常温室内保存。 权 利 要 求 书 CN 103070267 A 2 1/4 页 3 富金花荷叶茶发花制备工艺 技术领域 0001 本发明涉及农产品加工技术领域， 具体涉及一种富金花荷叶茶发花制备工艺， 其 荷叶茶的荷叶是指睡莲科植物莲 Nelumbo nuciferagaertn. 的叶， 其发花所述的花即冠 突散囊。
6、菌 （Eurotium cristarum (Raper & Fennell) Malloch & Cain） ， 俗称金花。 背景技术 0002 荷叶茶的营养价值很丰富， 含有莲碱、 原荷叶碱和荷叶碱等多种生物碱及维生素 C。有清热解毒、 凉血、 止血、 减肥的作用。荷叶茶的功效也是有医学资料记载的， 总结为以 下六大功效 ： (1) 消脂 ： 荷叶的主要化学成分荷叶碱中含有多种有效的化脂生物碱， 能强悍密布人 体肠壁上， 形成一层脂肪隔离膜， 阻止脂肪吸收， 防止脂肪堆积， 有效分解体内的脂肪， 并且 强劲排出体外。 0003 (2) 排毒养颜 ： 常喝荷叶茶可以润肠通便， 排毒功效显著，。
7、 能有效打通人体各类代 谢通路， 清除自由基， 调解脏腑功能。有便秘迹象的人每天喝四次荷叶茶， 坚持一段时间后 可以使大便畅通， 体内毒素的减少让减肥事半功倍， 体内毒素少了， 皮肤气色也自然好了。 0004 (3) 清热降火 ： 荷叶茶中的荷叶碱具有清心火、 平肝火、 泻脾火、 降肺火以及清热 养神的功效， 调解内分泌， 改善人体微循环， 荷叶的祛火功能让荷叶茶成为当之无愧的养心 佳品。 0005 (4) 去油腻 ： 荷叶碱改善油腻饮食习惯， 其具有较强的油脂排斥功效， 荷叶碱长期 积存人体， 抑制脂肪吸收， 会产生潜信号惯化大脑饮食神经， 从而让你对荤腥油腻的食物渐 渐产生反感。 0006。
8、 (5) 降三高 ： 100% 纯天然荷叶茶对无任何副作用， 不仅无害， 反而益处多多， 降血 压， 降血脂， 减肥等功效， 长期坚持喝能明显降低血清中甘油三醇和胆固醇含量， 对 “三高” 即高血压、 高血脂、 高胆固醇有显著的功效。是一种老少皆宜的饮品。 0007 (6) 疾病保健 ： 由于肥胖人体细胞对胰岛素不敏感， 患者糖耐量常减低， 总脂、 胆 固醇、 甘油三酯及游离脂肪酸常增高， 呈高脂血症与高脂蛋白血症， 此为诱发糖尿病动脉粥 样硬化、 冠心病、 胆石症、 高血压等疾病的基础， 荷叶碱能有效分解降低体细胞脂肪， 提高其 对胰岛素的感知度， 杜绝高脂疾病发生。 0008 冠突散囊菌，。
9、 也叫金花， 过去只在千年灵芝上才偶尔发现过， 尤其在湖南安化的黑 茶中的茯砖茶中生长及其茂密， 这是湖南安化黑茶所独有的益生菌种， 也叫金花菌， 这种菌 能有效的抑制肠癌， 胃癌， 肝癌细胞的扩散。在高倍放大镜下，金花 呈金黄色， 形状如球 形蘑菇， 大量的研究和临床数据表明， 冠突散囊菌的功效与前年灵芝孢子粉非常的类同， 能 够有效的提升人体免疫能力， 防癌， 抗癌， 抗氧化， 抗衰老， 令人延年益寿， 此外， 消脂减肥的 功效远远超越其他任何的菌种， 所以安化黑茶中金花菌成为了世界各个科研机构的研究热 点。 近期， 湖南农业大学研究发现， 冠突散囊菌 ( 金花 ) 对延长人的寿命能够产生。
10、积极的 作用， 另外对改善肠道， 降三高， 糖尿病等慢性病， 也具有非常显著的效果。金花普遍茂盛、 说 明 书 CN 103070267 A 3 2/4 页 4 色泽鲜艳金黄、 颗粒肥大历来是优质茯茶的最重要品质特征。 0009 本发明是为实现金花和荷叶的双重功能而开发研制的一种富金花荷叶茶发花制 备工艺。 发明内容 0010 本发明所要解决的技术问题是 ： 解决金花在荷叶上生长困难， 也就是发花技术存 在的问题， 提供一种富金花荷叶茶发花制备工艺， 能在 3-7 天短期内实现发花， 而且金花普 遍茂盛， 色泽鲜艳金黄， 颗粒肥大， 其发花率均能达到 100%。 0011 本发明采用的技术方案。
11、是 ： 一种富金花荷叶茶发花制备工艺， 具体步骤如下 ： 冠突散囊菌的纯化分离 ； 一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定 ； 初级荷叶茶制作与保存 ； 初级荷叶茶渥堆 ； 添加冠突散囊菌孢子悬液 ； 烘茶 ； 发花 ； 干燥和保存。 0012 上述技术方案中， 所述的冠突散囊菌的纯化分离方法为 ： 用添加 10% 茯砖茶汁的 PDA 琼脂固体培养基平板梯度稀释分离 ； 所述的一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓 度确定方法为 ： 挑取纯化的金花菌落， 接种至添加10%茯砖茶汁、 20%蔗糖和10%NaCl的PDA 液体培养基培养， 28静置培养 5 天， 然后升高温度至 30-32培养 。
12、14-30 天， 震荡分散孢 子， 无菌水稀释孢子悬液浓度控制在107-108个/mL ； 所述的初级荷叶茶制作与保存 ： 将荷叶 洗净， 切丝成 0.2cm 宽长条状， 使其维持含水量 10%， 在 100密闭杀青 2 小时， 然后揉捻成 条索状后， 37渥堆24小时， 40-50干燥1天后制成初级荷叶茶， 常温室内保存 ； 所述的初 级荷叶茶渥堆 ： 用茯砖茶汁拼配使其维持含水量28%， 37渥堆24小时 ； 冠突散囊菌孢子悬 液添加量为0.25 mL/100g ； 所述的烘茶条件为密闭65-68、 1小时 ； 所述的发花为 ： 控制湿 度和温度发花条件为前两天湿度 80%、 温度 26，。
13、 然后湿度 70%、 温度 28直至金花生长普 遍茂盛、 色泽鲜艳金黄、 颗粒肥大， 菌花香浓郁为止 ； 所述的干燥和保存为 ： 富金花荷叶茶 40-50干燥 1 天后常温室内保存。 0013 PDA 指 Potato Dextrose Agar 的简称。 0014 PDA 琼脂固体培养基指将马铃薯洗净去皮， 称取 200g， 切成小块放入烧杯中， 加适 量蒸馏水， 煮沸 1 小时， 稍冷后用双层纱布过滤， 在滤液中加入 15g 琼脂， 加热熔化， 最后加 入蔗糖 20g， 混匀， 用量筒定容至 1000mL， 趁热分装在三角瓶中， 在 1.1kg/cm2（121） 中保 持 20 分钟灭菌。。
14、 0015 PDA 液体培养基指上述培养基配制过程操作， 但不添加琼脂。 0016 PDA 平板指上述培养基灭菌结束后冷却至 50左右， 在超净工作台上将培养基倒 入事先已经灭菌并干燥的培养皿中， 待冷却即为制得的 PDA 琼脂固体培养基平板。 0017 10%茯砖茶汁的PDA固体培养基指将马铃薯洗净去皮， 称取200g， 切成小块放入烧 说 明 书 CN 103070267 A 4 3/4 页 5 杯中， 加适量蒸馏水， 煮沸 1 小时， 稍冷后用双层纱布过滤， 在滤液中加 100mL 制备好的茶 汁， 然后加入 15g 琼脂， 加热熔化， 最后加入蔗糖 20g 混匀， 用量筒定容至 100。
15、0mL， 趁热分装 在三角瓶中， 在1.1kg/cm2(121)中保持20分钟灭菌。 灭菌结束后冷却至50左右， 在超 净工作台上将 10% 茯砖茶汁的 PDA 琼脂固体培养基倒入事先已经灭菌并干燥的培养皿中， 待冷却即为制得的 10% 茯砖茶汁的 PDA 琼脂固体培养基平板。 0018 10% 茯砖茶汁的 PDA 液体培养基与上述操作过程相同， 但不添加琼脂。 0019 平板梯度稀释法为 ： 将成品茯砖样本用植物微型粉碎机将样品粉碎， 200目过筛、 65干燥2小时后称取1g 样品， 定容10mL， 即配成110 1g/mL的茯砖样本溶液， 从上述溶液中取1 mL定容10 mL配 成 110。
16、 1g/mL 的茯砖样本溶液， 依次配制成浓度 110 3、 110 4、 110 5g/mL 的茯砖 茶样本溶液各 10 mL 备用。取 110 3、 110 4、 110 5g/mL 的茯砖样本溶液各 0.5 mL， 用涂布器涂布到 10% 茯砖茶汁的 PDA 琼脂固体培养基平板上， 超净台上吹干 15 分钟左右， 倒置平皿， 28培养， 3 4 天后挑取优势菌金花菌， 同样条件继代培养直至纯化。 0020 画线接种指用灭菌的接种针在超净台上将已经生长好的菌落挑取， 在新的固体培 养基平皿画线分离相应微生物。 0021 金花菌落指金花菌在固体培养基平板上生长到一定时候形成的一个菌落集合体，。
17、 菌落是指聚集在一起的微生物团。 0022 茯砖茶汁的具体制备方法 ： 按照 1g 茯砖茶样本比 30mL 蒸馏水的比例称取 20g 茯 砖茶， 加入 600mL 蒸馏水， 100水浴 2 小时， 待稍冷却后用量筒定容至 600mL 即为制备好的 茯砖茶汁。 0023 配成 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5是指浓度， 单位为 g/mL。孢子悬液浓度 107-108个 / ml 中的 “个” 是指单个的金花菌的子囊孢子。计数方法为用梯度稀释法涂布在添加 10% 茶 汁的 PDA 琼脂固体培养基平板上生长计数或用 722 型分光光度计测量其 OD 值， 控制在 0.6 左右。
18、， 使金花孢子悬液浓度控制在每毫升 107-108个金花孢子。 0024 本发明提供了一种能在 3-7 天的短期内实现荷叶发花， 而且金花普遍茂盛、 色泽 鲜艳金黄、 颗粒肥大， 丰富了功能饮品的品种和口味， 极大地提高荷叶和金花的品质。 附图说明 0025 图 1 为本发明培养 7 天分离纯化的冠突散囊菌落照片 ； 图 2 为本发明冠突散囊菌的孢子悬液 20 天培养结果照片 ； 图 3 为富金花荷叶茶发花结果照片。 具体实施方式 0026 1. 金花的分离、 纯化 ： 冠突散囊菌即金花从益阳茶厂成品湘益牌茯砖样本中分离。具体分离和纯化过程为 ： 将成品湘益牌茯砖样本粉碎， 用平板梯度稀释法在。
19、添加 10% 茯砖茶汁的 PDA 琼脂固体培养 基平板上 28培养， 继代泡饮直至纯化。 0027 2. 一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定 ： 挑取纯化的金花菌落， 接种至添加 10% 茯砖茶汁、 20% 蔗糖和 10%NaCl 的 PDA 液体培养 说 明 书 CN 103070267 A 5 4/4 页 6 基培养， 28静置培养 5 天， 然后升高温度至 30-32培养 14-30 天， 震荡分散孢子， 无菌水 稀释孢子悬液浓度控制在 107-108个 /mL。 0028 3. 初级荷叶茶制作与保存 ： 将荷叶洗净， 切丝成 0.2cm 宽长条状， 使其维持含水量 10%， 在。
20、 100密闭杀青 2 小时， 然后揉捻成条索状后， 37渥堆 24 小时， 40-50干燥 1 天后制成初级荷叶茶， 常温室内保 存。 0029 4. 初级荷叶茶渥堆 ： 用茯砖茶汁拼配使其维持含水量 28%， 37渥堆 24 小时 ； 5. 添加冠突散囊菌孢子悬液 ： 初级荷叶茶1002小时灭菌冷却后， 按照每100g初级荷叶茶添加0.25mL冠突散囊菌 孢子悬液的比例， 以喷雾的形式添加， 混匀。 0030 6. 烘茶 ： 烘茶条件为密闭 65-68、 1 小时。 0031 7. 发花控制湿度和温度发花 ： 控制湿度和温度发花条件为前两天湿度 80%、 温度 26， 然后湿度 70%、 温。
21、度 28直至 金花生长普遍茂盛、 色泽鲜艳金黄、 颗粒肥大， 菌花香浓郁为止。 0032 8. 干燥和保存 ： 富金花荷叶茶 40-50干燥 1 天后常温室内保存。 0033 实施例 1 ： 金花的分离、 纯化 ： 将成品湘益牌茯砖样本用植物微型粉碎机粉碎， 200 目过筛、 65干燥 2 小时后称取 1g 样品， 定容 10mL， 配成 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5各 10mL， 取 10-3、 10-4、 10-5三个梯度各 0.0.5mL涂布添加10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培养基平板， 超净台上吹干， 28培养3天， 挑取金黄色优势菌落， 画线至添加10%茯。
22、砖茶汁的PDA琼脂固体培养基平板上， 同样条件继 代培养直至纯化。 0034 分离纯化的金花菌落见附图 1。 0035 实施例 2 ： 冠突散囊菌的孢子悬液制备 ： 挑取纯化的金花菌落， 接种至添加 10% 茯砖茶汁、 20% 蔗糖和 10%NaCl 的 PDA 液体培养 基培养， 28静置培养 5 天， 然后升高温度至 30-32培养 14-30 天， 震荡分散分生孢子， 用 双层无菌纱布过滤， 再后 280rpm 振荡培养分散分生孢子， 无菌水稀释孢子悬液至 OD 值为 0.6， 孢子悬液浓度控制在 107-108个 /mL， 即为可用的冠突散囊菌孢子悬液。 0036 冠突散囊菌的孢子悬液。
23、培养结果见附图 2。 0037 实施例 3 ： 富金花荷叶茶发花验证 取新鲜荷叶 2Kg， 以不接种作为对照， 按照具体实施方式中 1-8 步在湖南省黑茶品质与 发酵关键技术控制产学研示范基地进行发花实验， 其发花率均能达到 100%， 生长普遍茂盛、 色泽鲜艳金黄、 颗粒肥大， 菌花香浓郁。 0038 富金花荷叶茶发花结果见附图 3。 说 明 书 CN 103070267 A 6 1/3 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 103070267 A 7 2/3 页 8 图 2 说 明 书 附 图 CN 103070267 A 8 3/3 页 9 图 3 说 明 书 附 图 CN 103070267 A 9 。