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1、10申请公布号CN104140993A43申请公布日20141112CN104140993A21申请号201410368834822申请日20140730C12P21/0620060171申请人晶叶（青岛）生物科技有限公司地址266000山东省青岛市城阳区棘洪滩街道金岭5号路东、2号路南侧72发明人许安邦74专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所普通合伙11350代理人汤东凤54发明名称一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法57摘要一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法，包括如下步骤将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的05MOL/L柠檬酸中，加入鱼鳞质量的2微生物蛋白酶，搅拌提取24H，提取。
2、液加入一定量的NACL溶液至最终浓度为09MOL/L过夜，在4条件10000G离心15MIN，弃去上清，加入10倍体积的05MOL/L醋酸中溶解，重复盐析和离心操作一次，在10倍体积的01MOL/L的醋酸溶液中透析12H，每4H换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用，此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104140993ACN104140993A1/1页21一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法，包括如下步骤将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的05MO。
3、L/L柠檬酸中，加入鱼鳞质量的2微生物蛋白酶，搅拌提取24H，所述微生物蛋白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进行发酵获得，具有胰蛋白酶作用，提取液加入一定量的NACL溶液至最终浓度为09MOL/L过夜，在4条件10000G离心15MIN，弃去上清，加入10倍体积的05MOL/L醋酸中溶解，重复盐析和离心操作一次，在10倍体积的01MOL/L的醋酸溶液中透析12H，每4H换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用，此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。权利要求书CN104140993A1/2页3一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法技术领域0001本发明涉及一种利用微生物酶提。
4、取鱼鳞胶原蛋白的方法。背景技术0002胶原蛋白是结缔组织中极其重要的一种结构蛋白，其提取制品已广泛应用于医药、保健、食品加工、化妆品等众多领域。鱼鳞含有丰富的蛋白质和钙、磷等矿物质，主要由蛋白质和羟基磷灰石组成，其中蛋白质占鱼鳞总重的5070，主要为胶原蛋白和角蛋白，可见鱼鳞是非常好的胶原蛋白生产原料。0003提取胶原蛋白，目前常用的方法有碱法、酸法、酶法和热处理。利用酶法提取胶原蛋白，具有较高的回收率，水解反应速度快，时间短，无环境污染等优点。而且酶法提取的水解胶原蛋白纯度高，水溶性好，理化性质稳定。目前常用的蛋白酶主要来自于动植物，例如胃蛋白酶，胰酶，木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，利用微生物来源。
5、的蛋白酶进行胶原蛋白提取还属鲜见。微生物来源的蛋白酶产量高，价格低，若能达到目前动植物蛋白酶的提取效果，将有利于工业化生产。发明内容0004本发明的目的设计一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法。0005本发明的目的是通过以下技术方案实现的将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的05MOL/L柠檬酸中，加入鱼鳞质量的2微生物蛋白酶，搅拌提取24H，所述微生物蛋白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进行发酵获得，具有胰蛋白酶作用，提取液加入一定量的NACL溶液至最终浓度为09MOL/L过夜，在4条件10000G离心15MIN，弃去上清，加入10倍体积的05MOL/L醋酸中溶解，重复盐析和离。
6、心操作一次，在10倍体积的01MOL/L的醋酸溶液中透析12H，每4H换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用，此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。0006本发明采用自产微生物蛋白酶，提取酶溶性胶原蛋白，及降低了生产成本，同时最大限度避免了酸提取法可能造成的环境污染。具体实施方式0007为了使本发明专利保护的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下对本发明进行进一步详细说明。0008实施例1将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的05MOL/L醋酸中，加入鱼鳞质量的2微生物蛋白酶，所述微生物蛋白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进行发酵获得，具有胰蛋白酶作用，搅拌提取24H，。
7、提取液加入一定量的NACL溶液至最终浓度为09MOL/L过夜，在4条件10000G离心15MIN，弃去上清，加入10倍体积的05MOL/L醋酸中溶解，重复盐析和离心操作一次。在10倍体积的01MOL/L的醋酸溶液中透析12H，每说明书CN104140993A2/2页44H换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用。此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。0009采用以上方法最终纯化获得胶原蛋白的水平达到026G/10G鱼鳞。0010实施例2将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的05MOL/L盐酸中，加入鱼鳞质量的2微生物蛋白酶，所述微生物蛋白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进。
8、行发酵获得，具有胰蛋白酶作用，搅拌提取24H，提取液加入一定量的NACL溶液至最终浓度为09MOL/L过夜，在4条件10000G离心15MIN，弃去上清，加入10倍体积的05MOL/L醋酸中溶解，重复盐析和离心操作一次。在10倍体积的01MOL/L的醋酸溶液中透析12H，每4H换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用。此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。0011采用以上方法最终纯化获得胶原蛋白的水平达到025G/10G鱼鳞。0012应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。说明书CN104140993A。