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1、(10)申请公布号 CN 102796152 A (43)申请公布日 2012.11.28 CN 102796152 A *CN102796152A* (21)申请号 201210329030.8 (22)申请日 2012.09.07 C07H 15/256(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人 谱赛科 （江西） 生物技术有限公司 地址 341108 江西省赣州市赣县茅店镇洋塘 村洋塘工业园 (72)发明人 李善汪 (74)专利代理机构 南昌新天下专利商标代理有 限公司 36115 代理人 施秀瑾 (54) 发明名称 制取高 Reb-D 甜菊糖甙的方法 (57。
2、) 摘要 本发明公开了一种多柱二次树脂串联吸附提 纯甜菊糖甙的方法， 粉碎的甜叶菊叶经预处理、 脱 盐、 吸附、 树脂处理及洗脱、 脱色、 离子交换、 纳滤 浓缩、 结晶、 干燥工序， 制得含Reb-D甙80%以上的 甜菊糖甙产品。本发明利用吸附树脂对甜菊糖甙 不同组分具有不同的亲和力原理， 用低浓度乙醇 对 Reb-D 甙进行洗脱， 提高了洗脱液中 Reb-D 甙 的相对含量 ； 再经过脱色除杂、 离子交换除杂、 结 晶分离等方法进一步提纯精制， 最后所得甜菊糖 甙产品总含甙量大于90%， 其中Reb-D甙含量达到 80% 以上。与普通甜菊糖甙相比， 甜度更高， 口感 更纯正， 无不良余味。。
3、 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 1/1 页 2 1. 一种制取高 Reb-D 甜菊糖甙的方法， 其特征在制备方法如下 ： （a） 预处理 ： 将粉碎的甜叶菊叶与 50 55软化水混合， 连续逆流萃取， 使甜叶菊叶 的糖甙萃取率达到 99.99% 以上， 制成甜菊糖甙萃取液， 萃取液经过絮凝沉淀和板框压滤两 道工序后， 进入下一道工序 ； （b） 脱盐 ： 将上述滤液用离子交换树脂脱盐， 得透光率 65、 电导率 6700us/cm 的 脱盐滤液， 脱盐滤液进入下一道工序。
4、 ； （c） 吸附 ： 采用树脂吸附上述脱盐滤液中甜菊糖甙有效成分， 到树脂出甜时止 ； （d） 树脂处理及洗脱 ： 1） 树脂处理 ： 用氢氧化钠稀溶液、 盐酸稀溶液、 纯水洗树脂， 至 流出液 pH 值达到 7 时止 ； 2） 树脂解析 ： 用浓度为 30% 的乙醇溶液对树脂进行洗脱， 得含 Reb-D 甙 4-5% 的洗脱液， 洗脱液进入下一道工序 ； （e） 脱色 ： 将活性炭置入洗脱液中混合搅拌， 经过板框过滤得含 Reb-D 甙 5-6% 的脱色 液， 脱色液进入下一道工序 ； （f） 离子交换 ： 脱色液依次通过阳离子交换树脂和阴离子交换树脂除杂后， 得含 Reb-D 甙 6-7。
5、% 的交换液， 交换液进入下一道工序 ； （g） 纳滤浓缩 ： 交换液经过纳滤膜浓缩过滤得糖甙浓度为 25%30% 的浓缩液， 浓缩液 进入下一道工序 ； （h） 结晶 ： 将纳滤后的浓缩液放置于 10以下静止结晶 48h， 过滤、 淋洗晶体， 结晶体进 入下一道工序 ； （i） 干燥 ： 将结晶体真空干燥， 得到含 Reb-D 甙 80% 以上的甜菊糖甙产品。 权 利 要 求 书 CN 102796152 A 2 1/2 页 3 制取高 Reb-D 甜菊糖甙的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种甜菊糖甙的制备及提纯技术， 尤其是一种制取高 Reb-D 甜菊糖甙 的方法。 背景技术 000。
6、2 甜菊糖甙是从菊科草本植物甜叶菊的叶片中提取出来的一种高甜度、 低热能、 味 质好、 安全无毒的新型天然甜味剂， 可广泛应用于食品、 饮料、 医药、 日化工业等行业。甜菊 糖甙是多组分糖甙混合物， 甜度和口感取决于它的糖甙组分及含量。在甜菊糖甙已知的九 种组分中， 甜菊甙 （简称 Stv 甙） 、 瑞包迪 A 甙 （简称 Reb-A 甙） 、 瑞包迪 C 甙 （简称 Reb-C 甙） 占绝大部分约 92%， 而瑞包迪 D 甙 （简称 Reb-D 甙） 相对含量较少约 0.8%， 但是 Reb-D 甙的甜 度最高约为白砂糖的 450 倍， 而且味质最好， 不含任何不良余味， 被业内人士誉为 “。
7、甜菊糖 甙中的黄金” ， 售价也是其他糖甙的 3-5 倍， 是一种最为理想的天然甜味剂。因此， 制取含量 高的 Reb-D 甙的甜菊糖甙产品具有广阔的市场前景。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种制取高 Reb-D 甜菊糖甙的方法。 0004 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是 ： （a） 预处理 ： 将粉碎的甜叶菊叶与 50 55软化水混合， 连续逆流萃取， 使甜叶菊叶 的糖甙萃取率达到 99.99% 以上， 制成甜菊糖甙萃取液， 萃取液经过絮凝沉淀和板框压滤两 道工序后， 进入下一道工序 ； （b） 脱盐 ： 将上述滤液用离子交换树脂脱盐， 得透光率 65、 电导率 6700。
8、us/cm 的 脱盐滤液， 脱盐滤液进入下一道工序 ； （c） 吸附 ： 采用树脂吸附上述脱盐滤液中甜菊糖甙有效成分， 到树脂出甜时止 ； （d） 树脂处理及洗脱 ： 1） 树脂处理 ： 用氢氧化钠稀溶液、 盐酸稀溶液、 纯水洗树脂， 至 流出液 pH 值达到 7 时止 ； 2） 树脂解析 ： 用浓度为 30% 的乙醇溶液对树脂进行洗脱， 得含 Reb-D 甙 4-5% 的洗脱液， 洗脱液进入下一道工序 ； （e） 脱色 ： 将活性炭置入洗脱液中混合搅拌， 经过板框过滤得含 Reb-D 甙 5-6% 的脱色 液， 脱色液进入下一道工序 ； （f） 离子交换 ： 脱色液依次通过阳离子交换树脂和阴。
9、离子交换树脂除杂后， 得含 Reb-D 甙 6-7% 的交换液， 交换液进入下一道工序 ； （g） 纳滤浓缩 ： 交换液经过纳滤膜浓缩过滤得糖甙浓度为 25%30% 的浓缩液， 浓缩液 进入下一道工序 ； （h） 结晶 ： 将纳滤后的浓缩液放置于 10以下静止结晶 48h， 过滤、 淋洗晶体， 结晶体进 入下一道工序 ； （i） 干燥 ： 将结晶体真空干燥， 得到含 Reb-D 甙 80% 以上的甜菊糖甙产品。 0005 本发明的效果是 ： 利用吸附树脂对甜菊糖甙不同组分具有不同的亲和力原理， 用 说 明 书 CN 102796152 A 3 2/2 页 4 低浓度乙醇对 Reb-D 甙进行洗。
10、脱， 提高了洗脱液中 Reb-D 甙的相对含量 ； 再经过脱色除 杂、 离子交换除杂、 结晶分离等方法进一步提纯精制， 最后所得甜菊糖甙产品总含甙量大于 90%， 其中 Reb-D 甙含量达到 80% 以上。与普通甜菊糖甙相比， 甜度更高， 口感更纯正， 无不 良余味。 具体实施方式 0006 下面结合实施例对本发明做进一步详细描述。 0007 （a） 预处理 ： 将甜叶菊与 50 55软水按重量 / 体积比 1:15 混合， 浸泡制得 甜菊糖甙提取液， 经过絮凝沉淀和板框压滤两道工序， 板框过滤后的滤清液进入下一道工 序 ； （b） 脱盐 ： 将上述滤液用 732 型阳、 LK-330 阴离。
11、子交换树脂脱盐， 所得脱盐液透光率为 78.2、 电导率为 4950s/cm， 脱盐液进入下一道工序 ； （c） 吸附洗脱 ： 用 YW-03F 吸附树脂吸附上述脱盐滤液中的甜菊糖甙有效成分， 吸附饱 和后的树脂， 先用 2BV 树脂体积 0.5% 氢氧化钠溶液和 2BV 树脂体积 0.5% 盐酸稀溶液清洗 树脂柱， 然后用足量的纯水淋洗吸附柱至流出液PH值为7， 再用2BV树脂体积30%的乙醇溶 液对树脂柱进行洗脱， 得到含 Reb-D 甙 4.8% 的洗脱液， 洗脱液进入下一道工序 ； （d） 脱色 ： 将植物活性炭按洗脱液体积的 0.4% 置入洗脱液中混合搅拌 1 小时， 板框过 滤得到。
12、含 Reb-D 甙 5.6% 的脱色液， 脱色液进入下一道工序 ； （e） 离子交换 ： 脱色液依次通过 732 型阳离子交换树脂和 YW-07t 阴离子交换树脂进行 除杂处理， 得到含 Reb-D 甙 7.8% 的交换液， 交换液进入下一道工序 ； （f） 纳滤浓缩 ： 交换液经过纳滤膜浓缩过滤得糖甙浓度为 28% 的浓缩液， 浓缩液进入下 一道工序 ； （g） 结晶 ： 将纳滤后的浓缩液放置于 10以下静止结晶 48h， 过滤、 淋洗得晶体， 晶体进 入下一道工序 ； （h） 干燥 ： 将晶体真空干燥， 得甜菊糖甙产品。经高效液相色谱分析， 产品含甙量为 92.75%， 其中 Reb-D 甙含量为 84.63%。 0008 文中各参数的测定方法为 ： （1） 含甙量即纯度的检测方法 ： 按 JECFA 2010 Steviol Glycosides ； （2） 透光率测定方法 ： 室温 25 722 型可见光分光光度计 波长 480 纳米 ； （3） 电导率测定方法 ： 室温 25 电导率仪 ； （4） 比吸光度测定方法 ： 按 GB 8270-1999。 说 明 书 CN 102796152 A 4 。