TRPC7基因第十八号外显子多态性.pdf

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摘要
申请专利号:

CN03115066.7

申请日:

2003.01.22

公开号:

CN1519371A

公开日:

2004.08.11

当前法律状态:

撤回

有效性:

无权

法律详情:

发明专利申请公布后的视为撤回|||公开

IPC分类号:

C12Q1/68; C07H21/00; C12P19/34; C12N15/11

主分类号:

C12Q1/68; C07H21/00; C12P19/34; C12N15/11

申请人:

上海人类基因组研究中心;

发明人:

黄薇; 施锦绣; 奚慧峰; 金力

地址:

201203上海市浦东新区碧波路250号

优先权:

专利代理机构:

代理人:

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内容摘要

本发明涉及TRPC7基因第十八号外显子的单核苷酸多态性(SNP)。本发明提供了分析TRPC7基因第十八号外显子的SNP或其活性的方法。本发明的SNP是SEQ ID NO:1所示序列的人TRPC7基因第十八号外显子的第192位的C->T多态性。该SNP导致编码蛋白第3位发生Pro(P)->Leu(L)改变,从而改变了蛋白活性。

权利要求书

1: 一种检测人TRPC7基因第十八号外显子的单核苷酸多态性的方法,其特征 在于,它包括步骤: (a)确定在人TRPC7基因第十八号外显子的SEQ ID NO:1所示序列的第192 位的核苷酸; (b)检测在所述位置是否存在单核苷酸多态性。
2: 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的单核苷酸多态性是在第192 位存在T。
3: 一种分离核酸,其特征在于,它具有SEQ ID NO:1所示的序列,且第192 位为T。
4: 一种等位基因特异性的核酸引物,其特征在于,其长度为15-50bp,且特异 性地杂交并扩增出含人TRPC7基因第十八号外显子的SEQ ID NO:1所示序列中第 192位单核苷酸多态性的扩增产物。
5: 一种等位基因特异性的寡核苷酸探针,其特征在于,其长度为15-50bp,且 特异性地杂交并检测含人TRPC7基因第十八号外显子的SEQ ID NO:1所示序列中 第192位单核苷酸多态性。
6: 一种诊断试剂盒,其特征在于,它包括: (1)特异性扩增人TRPC7基因第十八号外显子的引物对, (2)检测扩增产物与正常的TRPC7基因第十八号外显子相比是否存在变化 所需的试剂,所述的SEQ ID NO:1所示序列中第192位单核苷酸多态性。
7: 一种诊断试剂盒,其特征在于,它包括:权利要求4所述的引物和/或权利 要求5所述的寡核苷酸探针。

说明书


TRPC7基因第十八号外显子多态性

    【技术领域】

    本发明涉及TRPC7基因第十八号外显子的单核苷酸多态性。本发明还涉及分析TRPC7基因第十八号外显子的等位基因突变的方法。

    背景技术

    TRPC7(transient receptor potential-related channels)是一种人脑中高表达的钙通道蛋白。该蛋白有7个穿膜功能区。编码此蛋白的TRPC7基因有32个外显子。研究者认为,该基因极有可能是一些遗传疾病如遗传性耳聋、Knobloch综合症等等的候选基因。(Genomics 1998 Nov 15;54(1):124-31)

    在本申请之前,还没有TRPC7基因第十八号外显子多态性的相关报道。

    【发明内容】

    本发明的目的就是提供TRPC7基因第十八号外显子的多态性及其检测方法。

    在本发明的第一方面,提供了一种检测人TRPC7基因第十八号外显子的单核昔酸多态性的方法,它包括步骤:

    (a)确定在人TRPC7基因第十八号外显子的SEQ ID NO:1所示序列的第192位的核苷酸;

    (b)检测在所述位置是否存在单核苷酸多态性。

    在一优选例中,所述的单核苷酸多态性是在第192位存在T。

    在本发明的第二方面,提供了一种分离核酸,它具有SEQ ID NO:1所示的序列,且第192位为T。

    在本发明的第三方面,提供了一种等位基因特异性的核酸引物,其长度为15-50bp,且特异性地杂交并扩增出含人TRPC7基因第十八号外显子的SEQ ID NO:1所示序列中第192位单核苷酸多态性地扩增产物。

    在本发明的第四方面,提供了一种等位基因特异性的寡核苷酸探针,其长度为15-50bp,且特异性地杂交并检测含人TRPC7基因第十八号外显子的SEQ ID NO:1所示序列中第192位单核苷酸多态性。

    一种试剂盒包括:

    (1)特异性扩增人TRPC7基因第十八号外显子的引物对,

    (2)检测扩增产物与正常的TRPC7基因第十八号外显子相比是否存在变化所需的试剂,所述的SEQ ID NO:1所示序列中第192位单核苷酸多态性。

    另一种诊断试剂盒包括:本发明上述的引物和/或本发明上述的寡核苷酸探针。

    【具体实施方式】

    本发明人通过广泛而深入的研究,已经发现了TRPC7基因第十八号外显子所编码的蛋白序列中第3位Pro(P)->Leu(L)多态(即mRNA上192位C->T多态性),在此基础上完成了本发明。

    根据对正常人TRPC7基因测序结果,发现了该SNP。经分析发现,该SNP导致3位氨基酸由Pro(P)->Leu(L)。由于这是不同性质氨基酸的置换,因此,会导致TRPC7基因第十八号外显子所编码的蛋白的活性发生改变。

    TRPC7基因第十八号外显子的cDNA序列列于SEQ ID NO:1,其中开放阅读框为第185-316位,其所编码的氨基酸序列列于SEQ ID NO:2。TRPC7基因第十八号外显子的基因组序列可以从GenBank中获得。

    本领域的技术人员知道,有大量的分析技术可用于检测TRPC7基因第十八号外显子中所述位点是否存在单核苷酸多态性。这些技术包括(但并不限于):DNA测序、杂交测序;酶促错配切割、异源双链分析、点杂交、寡核苷酸阵列(DNA芯片)、Mini-sequencing、Taqman技术、分子信标等,变性高效液相色谱法(DHPLC)。

    另一方面,本发明的检测方法被用于评估个体患TRPC7基因第十八号外显子相关疾病的易感性。

    用于本发明的测试样品没有特别限制,对于检测SNP而言,可以是从血液、组织等样品中抽提出的DNA或mRNA。对于检测TRPC7基因第十八号外显子活性而言,可以任何含有TRPC7基因第十八号外显子的样品,如血液等。

    用于本发明方法或检测试剂盒的引物和探针,根据TRPC7基因第十八号外显子的cDNA序列(SEQ ID NO:1的序列)或基因组序列进行设计,并可用常规的合成技术进行合成即可。

    下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,例如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:ColdSpring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。

    实施例1

    基因的抽提和测序

    用常规酚氯仿法从人的血液中提取DNA,浓度校正至20ng/ul后,用于常规PCR扩增。引物是:

    有义引物:5’-aaagtgggag gctctattcc t-3’(SEQ ID NO:3)

    反义引物:5’-caaagatacg agaagggcat t-3’(SEQ ID NO:4)

    扩增出的482bp的产物,纯化后进行DNA测序。

    实施例2

    SNP的获得

    对TRPC7基因进行直接测序。将测定的各样本序列进行比较,从而得出序列的差异,获得SNP。

    实施例3

    检测试剂盒

    制备一检测TRPC7基因相关疾病易感性的检测试剂盒,其中,含有下列可扩增出192位SNP的引物对:

    有义引物:5’-aaagtgggag gctctattcc t-3’(SEQ ID NO:3)

    反义引物:5’-caaagatacg agaagggcat t-3’(SEQ ID NO:4)

    对扩增产物与正常对照用变性高效液相色谱仪(DHPLC)进行色谱分析,可轻易地检测出192位的C->T型SNP。

    在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

                                                    SEQUENCE LISTING

    <110>上海人类基因组研究中心

    <120>TRPC7基因第十八号外显子多态性

    <130>030115

    <160>4

    <170>PatentIn version 3.1

    <210>1

    <211>482

    <212>DNA

    <213>Homo sapiens

    <220>

    <221>CDS

    <222>(185)..(316)

    <223>

    <400>1

    aaagtgggag gctctattcc tcaatctcat gccagctttg aacacctggg atgcagggcc    60

    caccagagcc ctttgcctcc agggcccacc tgggctagga caggtggagg ggcgacgggg    120

    gacagctctg ggggctgctg tgagcaggtg gctgagatgt gtgtgcttct gcccggcggc    180

    cagg ctc atc ccg gcg acg ctg tac ccc ggg cgc gtc atc ctc tct ctg     229

         Leu Ile Pro Ala Thr Leu Tyr Pro Gly Arg Val Ile Leu Ser Leu

         1               5                   10                  15

    gac ttc atc ctg ttc tgc ctc cgg ctc atg cac att ttt acc atc agt      277

    Asp Phe Ile Leu Phe Cys Leu Arg Leu Met His Ile Phe Thr Ile Ser

                    20                  25                  30

    aag acg ctg ggg ccc aag atc atc att gtg aag cgg atg gtaagggggc       326

    Lys Thr Leu Gly Pro Lys Ile Ile Ile Val Lys Arg Met

                35                  40

    gggggcaccg gctccatcgc ggcctgcagc ccagggtggg cctcggggag ggcaggcccc    386

    ttgccagtgg ctcggactgg ggcttaaaca cacctgtagg ttccccgtcc ctgctttgcc    446

    ccttgggctc ccaagaatgc ccttctcgta tctttg                              482

    <210>2

    <211>44

    <212>PRT

    <213>Homo sapiens

    <400>2

    Leu Ile Pro Ala Thr Leu Tyr Pro Gly Arg Val Ile Leu Ser Leu Asp

    1               5                   10                  15

    Phe Ile Leu Phe Cys Leu Arg Leu Met His Ile Phe Thr Ile Ser Lys

                20                  25                  30

    Thr Leu Gly Pro Lys Ile Ile Ile Val Lys Arg Met

            35                  40

    <210>3

    <211>21

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>misc_feature

    <223>引物

    <400>3

    aaagtgggag gctctattcc t                                               21

    <210>4

    <211>21

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>misc_feature

    <223>引物

    <400>4

    caaagatacg agaagggcat t                                               21

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本发明涉及TRPC7基因第十八号外显子的单核苷酸多态性(SNP)。本发明提供了分析TRPC7基因第十八号外显子的SNP或其活性的方法。本发明的SNP是SEQ ID NO:1所示序列的人TRPC7基因第十八号外显子的第192位的CT多态性。该SNP导致编码蛋白第3位发生Pro(P)Leu(L)改变,从而改变了蛋白活性。。

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