超声酶解制备肝素钠制备方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201310087477.3

申请日:

2013.03.19

公开号:

CN103122040A

公开日:

2013.05.29

当前法律状态:

撤回

有效性:

无权

法律详情:

发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C08B 37/10申请公布日:20130529|||公开

IPC分类号:

C08B37/10

主分类号:

C08B37/10

申请人:

如皋市永兴肠衣有限公司

发明人:

费苹; 陈银芳; 费正明; 陈明全

地址:

226557 江苏省南通市如皋市桃园镇天堡村十五组(如皋市正大肠衣有限公司内)

优先权:

专利代理机构:

代理人:

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内容摘要

本发明涉及一种肝素钠技术,尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术背景技术。本发明的目的是在于提供一种双酶法提取肝素钠的制备方法,利用双酶组进行酶促提取肝素纳,通过选择酶的种类、酶组合的比例、超声场的强度、控制好时间以及其他几道工序制成肝素钠。本发明与现有技术相比,具有如下优点:1、整个工序的时间减少了大概33%;2、产品的收率提高了29.6%;3、效价稳定在120以上(国内先进技术产品效价90-"0)。

权利要求书

权利要求书一种超声酶解制备肝素钠制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
    (a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐,在加温前先加入重量比为2,3%‑2.8%的精盐,调PH值到9.0‑9.2;将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐,复频超声条件为20+40kHZ,选择超声强度在0.1W/m2到0.9W/m2;
    (b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃‑45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10:0.5到10:5之间,双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0.3%‑0.4%,继续加温到50℃‑55‘C,保温酶解2h‑5h,然后继续加温到80℃‑85℃,保温10‑20分钟后过滤;
    (c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。
 根据权利要求l所述的超声酶解制备肝素钠制备方法,其特征在于:所述的步骤(b)中,所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10:2。
 根据权利要求1或2所述的超声酶解制备肝素钠制备方法,其特征在于:所述的步骤(b)中,所选择保温酶解的优选时间在2h。
根据权利要求1所述的超声酶解制备肝素钠制备方法,其特征在于:复频超声反应罐所选择的超声强度优选为0.3W/m2到0.7W/m’。
所述的步骤(b)中,所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10:2。

说明书

说明书超声酶解制备肝素钠制备方法
技术领域
    本发明涉及一种肝素钠技术,尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术背景技术。
背景技术
    目前我国生产几乎全部采用猪小肠为原料,在常规反应器内运用盐解法、  碱解法和酶解法等几种,其中盐解法应用最为普通,其生产工序是:原料(肠  黏膜)、常规反应器内盐水提取、过滤、树脂吸附、洗脱、乙醇沉淀、脱水、干  燥、肝素钠粗品。
    上述方法生产肝素钠的工艺过程虽然比较简单易于实现,但存在的不足之处在于过程的精致,因为粗品肝素钠经反复的酸碱处理,不仅会使肝素钠的收率减少,而且对肝素钠的生物活性也影响很大,尤其效价很难达到90USPu/mg以上,并且时间较长。
  发明内容
    本发明的目的是在于提供一种双酶法提取肝素钠的制备方法,利用双酶组进行酶促提取肝素纳,通过选择酶的种类、酶组合的比例、超声场的强度、控制好时间以及其他几道工序制成肝素钠。
    该方法采用以下步骤:
   一种超声酶解制备肝素钠制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
    (a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐,在加温前先加入重量比为2,3%‑2.8%的精盐,调PH值到9.0‑9.2;将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐,复频超声条件为20+40kHZ,选择超声强度在0.1W/m2到0.9W/m2;
    (b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃‑45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10:0.5到10:5之间,双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0.3%‑0.4%,继续加温到50℃‑55‘C,保温酶解2h‑5h,然后继续加温到80℃‑85℃,保温10‑20分钟后过滤;
    (c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。
    所述的步骤(b)中,所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10:2。
   本发明与现有技术相比,具有如下优点:
    1、整个工序的时间减少了大概33%;
    2、产品的收率提高了29.6%;
    3、效价稳定在120以上(国内先进技术产品效价90‑"0)。
  具体实施方式
    实施例1
    制小肠粘膜(10副小肠),每根小肠与水混合后约4‑6公斤,将刮制好的小肠抽入常规酶解罐,在加温前先加入2.3‑2.8%(体量)的精盐,调PH值9.0‑9.2:在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10:2),占总溶液重量比为0.4%;继续加温至52℃,保温3小时后进行酶解,然后继续加温到80℃‑85‘C,保温15分钟后过滤,对上述步骤中的过滤溶液进行吸附:吸附水过滤,冷却到58’C时加入树脂吸附;洗涤:收集树脂,清水漂洗数次,再用清水加温58‑60‘C,调PH到7。5,到树脂洗干净为止,用1.2N盐水溶液,调PH到8加入树脂中,加温到60℃,洗涤0.5h,去处洗涤溶液,滤干树脂;洗脱:用4M的NaCl溶液洗脱2次后,将两次洗脱溶液合并,过滤:沉淀:将一、二次洗脱液用85%的乙醇沉淀,体积比例是1:1.5左右,兑好后的酒精混合液浓度大约是30‑40度,沉淀后脱水干燥得肝素钠产品。

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1、(10)申请公布号 CN 103122040 A (43)申请公布日 2013.05.29 CN 103122040 A *CN103122040A* (21)申请号 201310087477.3 (22)申请日 2013.03.19 C08B 37/10(2006.01) (71)申请人 如皋市永兴肠衣有限公司 地址 226557 江苏省南通市如皋市桃园镇天 堡村十五组 (如皋市正大肠衣有限公司 内) (72)发明人 费苹 陈银芳 费正明 陈明全 (54) 发明名称 超声酶解制备肝素钠制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种肝素钠技术, 尤其是一种复 频组合超声强化双酶提取肝素钠技术背景技术。

2、。 本发明的目的是在于提供一种双酶法提取肝素钠 的制备方法, 利用双酶组进行酶促提取肝素纳, 通 过选择酶的种类、 酶组合的比例、 超声场的强度、 控制好时间以及其他几道工序制成肝素钠。本 发明与现有技术相比, 具有如下优点 : 1、 整个工 序的时间减少了大概 33 ; 2、 产品的收率提高了 296 ; 3、 效价稳定在 120 以上 ( 国内先进技术 产品效价 90-“0)。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 (10)申请公布号 CN 103122040 A CN 10312。

3、2040 A *CN103122040A* 1/1 页 2 1. 一种超声酶解制备肝素钠制备方法, 其特征在于, 该方法包括以下步骤 : (a)、 将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐, 在加温前先加入重量比为 2, 3 -28 的精盐, 调 PH 值到 90-92 ; 将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐, 复频超声条件为 20+40kHZ, 选择超声强度在 01W m2到 09W m2; (b)、 将步骤 (a) 中的溶液加温到 40 -45时加入胰蛋白酶和脂肪酶, 并且使其比例 在 10 : 05 到 10 : 5 之间, 双酶在步骤 (a) 中溶液的重量比为 03 -04, 继续加温到 5。

4、0 -55C, 保温酶解 2h-5h, 然后继续加温到 80 -85, 保温 10-20 分钟后过滤 ; (c)、 对步骤 (b) 中的过滤溶液进行吸附、 洗涤、 洗脱、 沉淀、 脱水干燥常规步骤后获得 肝素钠产品。 2.根据权利要求l所述的超声酶解制备肝素钠制备方法, 其特征在于 : 所述的步骤(b) 中, 所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为 10 : 2。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的超声酶解制备肝素钠制备方法, 其特征在于 : 所述的步 骤 (b) 中, 所选择保温酶解的优选时间在 2h。 4. 根据权利要求 1 所述的超声酶解制备肝素钠制备方法, 其特征在于 : 复频超声反。

5、应 罐所选择的超声强度优选为 03W m2 到 07W m 。 5. 所述的步骤 (b) 中, 所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为 10 : 2。 权 利 要 求 书 CN 103122040 A 2 1/2 页 3 超声酶解制备肝素钠制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种肝素钠技术, 尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术 背景技术。 背景技术 0002 目前我国生产几乎全部采用猪小肠为原料, 在常规反应器内运用盐解法、 碱解 法和酶解法等几种, 其中盐解法应用最为普通, 其生产工序是 : 原料 ( 肠 黏膜 )、 常规反应 器内盐水提取、 过滤、 树脂吸附、 洗脱、 乙醇沉淀。

6、、 脱水、 干 燥、 肝素钠粗品。 0003 上述方法生产肝素钠的工艺过程虽然比较简单易于实现, 但存在的不足之处在于 过程的精致, 因为粗品肝素钠经反复的酸碱处理, 不仅会使肝素钠的收率减少, 而且对肝素 钠的生物活性也影响很大, 尤其效价很难达到 90USPu mg 以上, 并且时间较长。 0004 发明内容 本发明的目的是在于提供一种双酶法提取肝素钠的制备方法, 利用双酶组进行酶促提 取肝素纳, 通过选择酶的种类、 酶组合的比例、 超声场的强度、 控制好时间以及其他几道工 序制成肝素钠。 0005 该方法采用以下步骤 : 一种超声酶解制备肝素钠制备方法, 其特征在于, 该方法包括以下步骤。

7、 : (a)、 将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐, 在加温前先加入重量比为 2, 3 -28 的精盐, 调 PH 值到 90-92 ; 将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐, 复频超声条件为 20+40kHZ, 选择超声强度在 01W m2到 09W m2; (b)、 将步骤 (a) 中的溶液加温到 40 -45时加入胰蛋白酶和脂肪酶, 并且使其比例 在 10 : 05 到 10 : 5 之间, 双酶在步骤 (a) 中溶液的重量比为 03 -04, 继续加温到 50 -55C, 保温酶解 2h-5h, 然后继续加温到 80 -85, 保温 10-20 分钟后过滤 ; (c)、 对步骤 (b) 。

8、中的过滤溶液进行吸附、 洗涤、 洗脱、 沉淀、 脱水干燥常规步骤后获得 肝素钠产品。 0006 所述的步骤 (b) 中, 所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为 10 : 2。 0007 本发明与现有技术相比, 具有如下优点 : 1、 整个工序的时间减少了大概 33 ; 2、 产品的收率提高了 296 ; 3、 效价稳定在 120 以上 ( 国内先进技术产品效价 90-“0)。 0008 具体实施方式 实施例 1 制小肠粘膜 (10 副小肠 ), 每根小肠与水混合后约 4-6 公斤, 将刮制好的小肠抽入常规 酶解罐, 在加温前先加入 23-28 ( 体量 ) 的精盐, 调 PH 值 90-92 。

9、: 在 42时加入 胰蛋白酶和脂肪酶 ( 比例为 10 : 2), 占总溶液重量比为 04; 继续加温至 52, 保温 3 小 时后进行酶解, 然后继续加温到 80 -85C, 保温 15 分钟后过滤, 对上述步骤中的过滤溶 说 明 书 CN 103122040 A 3 2/2 页 4 液进行吸附 : 吸附水过滤, 冷却到58 C时加入树脂吸附 ; 洗涤 : 收集树脂, 清水漂洗数次, 再 用清水加温 58-60C, 调 PH 到 7。5, 到树脂洗干净为止, 用 12N 盐水溶液, 调 PH 到 8 加 入树脂中, 加温到 60, 洗涤 05h, 去处洗涤溶液, 滤干树脂 ; 洗脱 : 用 4M 的 NaCl 溶液洗 脱 2 次后, 将两次洗脱溶液合并, 过滤 : 沉淀 : 将一、 二次洗脱液用 85的乙醇沉淀, 体积比 例是 1 : 15 左右, 兑好后的酒精混合液浓度大约是 30-40 度, 沉淀后脱水干燥得肝素钠产 品。 说 明 书 CN 103122040 A 4 。

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