一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法.pdf

上传人:1*** 文档编号:472281 上传时间:2018-02-18 格式:PDF 页数:5 大小:673.91KB
返回 下载 相关 举报
摘要
申请专利号:

CN201410251602.4

申请日:

2014.06.09

公开号:

CN104041412A

公开日:

2014.09.17

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情:

授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A01H 4/00申请日:20140609|||公开

IPC分类号:

A01H4/00

主分类号:

A01H4/00

申请人:

广西壮族自治区药用植物园

发明人:

李翠; 张占江; 韦坤华; 李林轩; 韦莹; 王一诺; 王晓峰

地址:

530023 广西壮族自治区南宁市长岗路189号

优先权:

专利代理机构:

广西南宁明智专利商标代理有限责任公司 45106

代理人:

黎明天

PDF下载: PDF下载
内容摘要

一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体进行消毒;将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽;将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株;将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗;取完整的带根苗进行炼苗后移植于石灰岩土壤生长一个半月,再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量贵州半蒴苣苔的优质种苗,对贵州半蒴苣苔资源保护和可持续利用具有重要价值。

权利要求书

1.  一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-20min、添加2-3滴吐温-20的100 ml0.1%升汞消毒7-9min、无菌水冲洗3-5次,最后用灭菌滤纸吸去表面水分,剪成长约1cm长的外植体;
(2)顶芽分化获得丛生芽培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26℃、光照强度1500lux、光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天,顶芽分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.5-1.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(3)丛生芽壮苗继代培养:将步骤(2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中,在培养温度23-26℃、光照强度1500lux、光照时间为10-12小时/天的条件下培养20-25天得到完整的健壮植株,其中MS壮苗培养基中含1.0-2.0mg/L的6-BA、0.5-1.0mg/L的NAA、0.5-1.0mg/L KT,25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度23-26℃、光照强度1500lux、光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含1.0-1.5mg/L的IAA、0.5 mg/L的ABT、25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内散射光照射2-4天,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中,在石灰岩土壤中生长一个半月后移栽大田。

2.
  如权利要求1所述的贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。

说明书

一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法。
背景技术
贵州半蒴苣苔,为苦苣苔科植物贵州半蒴苣苔(Hemiboea cavaleriei var. paucinervis W. T. Wang & Z. Y. Li)。多年生草本。茎上升,无毛,不分枝或分枝,花期8—10月,果期10-12月。分布于我国广西、广东、福建、湖南等省。生于山谷林下石上,海拔250-1500m。全草入药,微酸、涩,凉。清热解毒。用于治疗痈、烫伤、跌打损伤、刀伤出血,腹水。
贵州半蒴苣苔花色褐紫色或淡绿色,具有较高的园林观赏和一定的药用价值,一般生于山谷林下石上或阴处,林缘沟旁或岩石上、沟边石缝中,石灰岩山地阴湿处,对环境要求比较苛刻,加之近年来环境资源遭到严重破坏,使贵州半蒴苣苔植株数量大大减少。
发明内容
本发明的目的是采用生物技术组织培养方法,有效快速地提高贵州半蒴苣苔种苗的繁殖速度和质量,在短期内就能提供大量贵州半蒴苣苔的优质种苗。
本发明采取的技术方案是:
1、一种组织培养快速繁殖方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-15min、添加了2-3滴吐温-20的100 ml0.1%升汞消毒7-9min、无菌水冲洗3-5次,最后用灭菌滤纸吸去表面水分,剪成长约1cm长的外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)顶芽分化获得丛生芽培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天,顶芽分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.5-1.0mg/L的NAA(萘乙酸) 、25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(3)丛生芽继代培养:将步骤(2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20-25天得到完整的健壮植株,其中MS壮苗培养基中含1.0-2.0mg/L的6-BA(苄氨基腺嘌呤)、0.5-1.0mg/L的NAA、0.5-1.0mg/L KT(激动素),25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含1.0-1.5mg/L的IAA(吲哚乙酸)、0.5 mg/L的ABT(生根粉)、25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内散射光照射2-4天,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中,在石灰岩土壤中生长一个半月后移栽大田。
采用生物技术组织培养技术,不仅可以有效快速地提高贵州半蒴苣苔种苗的繁殖速度和质量,且采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,对贵州半蒴苣苔资源保护和可持续利用具有重要价值。
具体实施方式
    下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤: 
(1)外植体的选择与消毒:取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100 ml0.1%升汞消毒7-9min、无菌水冲洗3-5次,最后用灭菌滤纸吸去表面水分,剪成长约1cm长的外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)顶芽分化获得丛生芽快速繁殖:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12h/d的条件下培养25-30天,顶芽分化后获得大量丛生芽,其中MS培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.5-1.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,数据分析发现6-BA,NAA对贵州半蒴苣苔丛生芽增殖倍率具有显著影响,根据生长率指标确定的最适培养基激素浓度为1.5 mg/L的6-BA和0.5mg/L的NAA,此时贵州半蒴苣苔顶芽分化倍率为5.72。
表1 不同激素对顶芽分化效果的影响

注:芽增殖倍数=(30 天后芽数-接种时芽数)/接种时芽数
(3)丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20-25天得到完整的健壮植株,其中MS壮苗培养基中含1.0-2.0mg/L的6-BA、0.5-1.5mg/L的NAA、0.1-0.4mg/L KT,25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,观察发现,壮苗培养基中6-BA浓度增加,贵州半蒴苣苔植株的高度增加长势趋好,培养基中添加0.2mg/L的KT、2.0mg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA壮苗效果最好,壮苗指数达到5.75,而且经过壮苗后得到的植株叶片舒展,适合进行生根培养;
表2 不同激素水平对贵州半蒴苣苔丛生芽壮苗效果的影响

注:壮苗指数=[茎粗(cm)/株高(cm)+培养基上质量(g)/培养基下质量(g)]*全株质量
(4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含1.0-1.5mg/L的IAA、0.5 mg/L的ABT、25-30g/L蔗糖和4.0-4.4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;观察发现,培养基中IAA浓度增加,组培苗的生根率也增加;培养基中添加1.0mg/L的IBA和1.5mg/L的IAA生根效果最好,生根率达100%,平均根长达到4.68cm;
表3 不同激素水平对贵州半蒴苣苔组培苗生根效果的影响

(6)炼苗与移栽:获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内散射光照射2-4天,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光的石灰岩及沙土壤(1:1)基质中,在石灰岩及沙土壤中生长一个月后移栽大田。移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时温度条件为18-28℃,相对湿度75-80%,遮阳率60%。

一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法.pdf_第1页
第1页 / 共5页
一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法.pdf_第2页
第2页 / 共5页
一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法.pdf_第3页
第3页 / 共5页
点击查看更多>>
资源描述

《一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法.pdf(5页珍藏版)》请在专利查询网上搜索。

1、10申请公布号CN104041412A43申请公布日20140917CN104041412A21申请号201410251602422申请日20140609A01H4/0020060171申请人广西壮族自治区药用植物园地址530023广西壮族自治区南宁市长岗路189号72发明人李翠张占江韦坤华李林轩韦莹王一诺王晓峰74专利代理机构广西南宁明智专利商标代理有限责任公司45106代理人黎明天54发明名称一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法57摘要一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体进行消毒;将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽;将所述丛生芽。

2、置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株;将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗;取完整的带根苗进行炼苗后移植于石灰岩土壤生长一个半月,再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量贵州半蒴苣苔的优质种苗,对贵州半蒴苣苔资源保护和可持续利用具有重要价值。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104041412ACN104041412A1/1页21一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法,其特征在于该方法包括以下步骤(1)外植体的选择与消毒取贵州半蒴苣苔顶芽作为。

3、外植体,依次用2洗洁精水溶液浸泡510MIN、线状自来水冲洗1020MIN、添加23滴吐温20的100ML01升汞消毒79MIN、无菌水冲洗35次,最后用灭菌滤纸吸去表面水分,剪成长约1CM长的外植体;(2)顶芽分化获得丛生芽培养将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为2326、光照强度1500LUX、光照时间为1012小时/天的条件下培养2530天,顶芽分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0515MG/L的6BA、0510MG/L的NAA、2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58;(3)丛生芽壮苗继代培养将步骤(2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基。

4、中,在培养温度2326、光照强度1500LUX、光照时间为1012小时/天的条件下培养2025天得到完整的健壮植株,其中MS壮苗培养基中含1020MG/L的6BA、0510MG/L的NAA、0510MG/LKT,2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58;(4)丛生芽生根培养将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度2326、光照强度1500LUX、光照时间为1012小时/天的条件下培养2530天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含1015MG/L的IAA、05MG/L的ABT、2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58;(5)炼。

5、苗与移栽步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25的室内散射光照射24天,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗24天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中,在石灰岩土壤中生长一个半月后移栽大田。2如权利要求1所述的贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法,其特征在于所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。权利要求书CN104041412A1/3页3一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法技术领域0001本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法。背景技术0002贵州半蒴苣苔,为苦苣苔科植物贵州半蒴苣苔(HEMIBOEACAVALERIEIVA。

6、RPAUCINERVISWTWANGZYLI)。多年生草本。茎上升,无毛,不分枝或分枝,花期810月,果期1012月。分布于我国广西、广东、福建、湖南等省。生于山谷林下石上,海拔2501500M。全草入药,微酸、涩,凉。清热解毒。用于治疗痈、烫伤、跌打损伤、刀伤出血,腹水。0003贵州半蒴苣苔花色褐紫色或淡绿色,具有较高的园林观赏和一定的药用价值,一般生于山谷林下石上或阴处,林缘沟旁或岩石上、沟边石缝中,石灰岩山地阴湿处,对环境要求比较苛刻,加之近年来环境资源遭到严重破坏,使贵州半蒴苣苔植株数量大大减少。发明内容0004本发明的目的是采用生物技术组织培养方法,有效快速地提高贵州半蒴苣苔种苗的繁。

7、殖速度和质量,在短期内就能提供大量贵州半蒴苣苔的优质种苗。0005本发明采取的技术方案是1、一种组织培养快速繁殖方法,其特征在于该方法包括以下步骤(1)外植体的选择与消毒取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体,依次用2洗洁精水溶液浸泡510MIN、线状自来水冲洗1015MIN、添加了23滴吐温20的100ML01升汞消毒79MIN、无菌水冲洗35次,最后用灭菌滤纸吸去表面水分,剪成长约1CM长的外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,(2)顶芽分化获得丛生芽培养将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为2326,光照强度1500LUX,光照时间为1012小时/天的条件下培养2530天,顶芽。

8、分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0515MG/L的6BA、0510MG/L的NAA(萘乙酸)、2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58,(3)丛生芽继代培养将步骤(2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中,在培养温度2326,光照强度1500LUX,光照时间为1012小时/天的条件下培养2025天得到完整的健壮植株,其中MS壮苗培养基中含1020MG/L的6BA(苄氨基腺嘌呤)、0510MG/L的NAA、0510MG/LKT(激动素),2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58,(4)丛生芽生根培养将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基。

9、中,在培养温度2326,光照强度1500LUX,光照时间为1012小时/天的条件下培养2530天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含1015MG/L的IAA(吲哚乙酸)、05MG/L的ABT(生根粉)、2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58,说明书CN104041412A2/3页4(5)炼苗与移栽步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25的室内散射光照射24天,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗24天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中,在石灰岩土壤中生长一个半月后移栽大田。0006采用生物技术组织培养技术,不仅可以有。

10、效快速地提高贵州半蒴苣苔种苗的繁殖速度和质量,且采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,对贵州半蒴苣苔资源保护和可持续利用具有重要价值。具体实施方式0007下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。0008一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤(1)外植体的选择与消毒取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体,依次用2洗洁精水溶液浸泡510MIN、线状自来水冲洗1020MIN、添加了23滴吐温20的100ML01升汞消毒79MIN、无菌水冲洗35次,最后用灭菌滤纸吸去表面水分,剪成长约1CM长的外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,(2)顶芽分化获得丛生芽快速繁殖将步骤(1)得到的外植体。

11、接种到MS培养基中,在培养温度为2326,光照强度1500LUX,光照时间为1012H/D的条件下培养2530天,顶芽分化后获得大量丛生芽,其中MS培养基中含0515MG/L的6BA、0510MG/L的NAA、2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58,数据分析发现6BA,NAA对贵州半蒴苣苔丛生芽增殖倍率具有显著影响,根据生长率指标确定的最适培养基激素浓度为15MG/L的6BA和05MG/L的NAA,此时贵州半蒴苣苔顶芽分化倍率为572。0009表1不同激素对顶芽分化效果的影响注芽增殖倍数(30天后芽数接种时芽数)/接种时芽数(3)丛生芽壮苗培养将步骤(2)中得到的试管苗。

12、不定芽置于MS增殖培养基中,在培养温度2326,光照强度1500LUX,光照时间为1012小时/天的条件下培养2025天得到完整的健壮植株,其中MS壮苗培养基中含1020MG/L的6BA、0515MG/L的NAA、0104MG/LKT,2530G/L蔗糖和4045G/L的琼脂,培养基的PH值为58,观察发现,壮苗培养基中6BA浓度增加,贵州半蒴苣苔植株的高度增加长势趋好,培养基中添加02MG/L的KT、20MG/L的6BA和15MG/L的NAA壮苗效果最好,壮苗指数达到575,而且经过壮苗后得到的植株叶片舒展,适合进行生根培养;表2不同激素水平对贵州半蒴苣苔丛生芽壮苗效果的影响说明书CN104。

13、041412A3/3页5注壮苗指数茎粗(CM)/株高(CM)培养基上质量(G)/培养基下质量(G)全株质量(4)丛生芽生根培养将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度2326,光照强度1500LUX,光照时间为1012小时/天的条件下培养2530天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含1015MG/L的IAA、05MG/L的ABT、2530G/L蔗糖和40445G/L的琼脂,培养基的PH值为58;观察发现,培养基中IAA浓度增加,组培苗的生根率也增加;培养基中添加10MG/L的IBA和15MG/L的IAA生根效果最好,生根率达100,平均根长达到468CM;表3不同激素水平对贵州半蒴苣苔组培苗生根效果的影响(6)炼苗与移栽获得带根的完整植株后,在室温为25的室内散射光照射24天,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗24天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光的石灰岩及沙土壤(11)基质中,在石灰岩及沙土壤中生长一个月后移栽大田。移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾35次,每次10MIN,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10MIN;移栽时温度条件为1828,相对湿度7580,遮阳率60。说明书CN104041412A。

展开阅读全文
相关资源
猜你喜欢
相关搜索

当前位置:首页 > 人类生活必需 > 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼


copyright@ 2017-2020 zhuanlichaxun.net网站版权所有
经营许可证编号:粤ICP备2021068784号-1