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1、10申请公布号CN104163687A43申请公布日20141126CN104163687A21申请号201410311237122申请日20140630C05G3/0020060171申请人桂林丰茂源农业技术开发有限公司地址541200广西壮族自治区桂林市灵川县青狮潭甘草村桂林丰茂源农业技术开发有限公司72发明人王运凤74专利代理机构桂林市持衡专利商标事务所有限公司45107代理人林培54发明名称一种添加柚子皮的木耳培养基57摘要本发明公开了一种添加柚子皮的木耳培养基，由以下重量百分比的原料制成木屑5363，辅料2834，柚子皮715，糖0814，石膏0613。采用本发明的木耳培养基培养木耳。
2、，在木耳生长过程中，可以有效抑制杂菌生长，保护菌种，同时培养出的木耳抗氧化能力增强。51INTCL权利要求书1页说明书6页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页10申请公布号CN104163687ACN104163687A1/1页21一种添加柚子皮的木耳培养基，其特征在于，由以下重量百分比的原料制成木屑5363，辅料2834，柚子皮715，糖0814，石膏0613。2根据权利要求1所述的添加柚子皮的木耳培养基，其特征在于，由以下重量百分比的原料制成木屑58，辅料31，柚子皮9，糖11，石膏09。3根据权利要求1或2所述的添加柚子皮的木耳培养基，其特征在于所述的。
3、木屑来源于杨树、泡桐、柳树、椴树中的一种。4根据权利要求1或2所述的添加柚子皮的木耳培养基，其特征在于所述的辅料为玉米粉、麸皮、棉籽壳、玉米芯、米糠中的两种或两种以上。5根据权利要求1或2所述的添加柚子皮的木耳培养基，其特征在于所述的糖为蔗糖或葡萄糖。权利要求书CN104163687A1/6页3一种添加柚子皮的木耳培养基技术领域0001本发明涉及食用菌培养基领域，特别涉及一种添加柚子皮的木耳培养基。背景技术0002木耳，别名黑木耳、光木耳。真菌学分类属担子菌纲，木耳目，木耳科。色泽黑褐，质地柔软，味道鲜美，营养丰富。木耳蛋白质的含量是牛奶的六倍，钙、磷、铁纤维素含量也不少，此外，还有甘露聚糖、。
4、葡萄糖、木糖等醣类，及卵磷脂、麦角甾醇和维生素C等，蛋白质丰富，而且富含多种维生素和矿物质，特别是铁元素含量极高，每100克干木耳含铁达185毫克，是肉类的100倍，黑木耳是缺铁性贫血患者的极佳食品。木耳可素可荤，不但为中国菜肴大添风采，而且能养血驻颜，令人肌肤红润，容光焕发，并可防治缺铁性贫血等，具有很多药用功效，如木耳具有预防动脉粥样硬化的功效；黑木耳还有润肠解毒功能；黑木耳中的腺嘌呤核苷有显著的抑制血栓形成的作用，因此，还是中老年人的优良保健食品；黑木耳对胆结石、肾结石、膀胱结石、粪石等内源性异物也有比较显著的化解功能；黑木耳还含有多种矿物质，能对各种结石产生强烈的化学反应，剥脱、分化、。
5、侵蚀结石，使结石缩小，排出。黑木耳为补品，药力平缓，故只宜用于轻症、缓症或亚健康者的日常保健，若遇重症、急症当需配伍他药或作为治疗辅助品。0003黑木耳是我国传统的出口商品，目前已经实现规模化、袋料化栽培。但由于粗放的栽培方式、缺乏科学、配套杂菌污染措施，使得杂菌污染危害增大，成为黑木耳高产、稳产的重要限制因素。所以，有效地控制黑木耳杂菌的危害是实现黑木耳高产、稳产、优质的重要环节。如何寻找一种具有抗菌功能的木耳培养基成为木耳培养领域的新需求。0004柚子是芸香科植物柚的成熟果实，主要产于我国福建、江西、广东、广西等南方地区，现在我国的湖南、浙江、四川等地均有栽培。柚子清香、酸甜、凉润，营养丰。
6、富，药用价值很高，是人们喜食的名贵水果之一，也是医学界公认的最具食疗价值的水果。柚子皮是柚子的表皮又名橘红，性温，味苦、辛，有理气化痰、健脾消食、散寒燥湿的作用。而人们在食用了柚子后，柚子皮往往被当成垃圾丢弃，不仅为环境保护带来负担，同时也降低了柚子整体的功效价值。柚子皮中含有大量的柚皮苷，是属于黄酮类化合物又称黄碱素，是一类低分子天然植物成分，是植物在长期自然选择过程中产生的一些次生代谢产物。许多研究表明，黄酮类化合物具有抗氧化、抗过敏、抗菌消炎、抗突变、降压、降血糖、抗肿瘤、延缓衰老和保肝护胃等功效。研究表明，柚子皮中含有非常丰富的蛋白质、有机酸、维生素以及钙、磷、镁、钠等人体必需的元素。。
7、将柚子皮应用在木耳培养基中具有广阔的市场前景和经济价值。发明内容0005本发明所要解决的技术问题是提供一种具有抗菌功能，能够提高木耳抗氧化功效的添加柚子皮的木耳培养基。0006一种添加柚子皮的木耳培养基，由以下重量百分比的原料制成木屑5363，辅料2834，柚子皮715，糖0814，石膏0613。说明书CN104163687A2/6页40007本发明所述的添加柚子皮的木耳培养基，优选由以下重量百分比的原料制成木屑58，辅料31，柚子皮9，糖11，石膏09。0008本发明所述的辅料优选为米糠、棉籽壳、玉米芯、玉米粉、麦麸、花生粕、豆粕中的两种或两种以上，以任意比例混合。在配方中添加这些辅料，有利。
8、于提高培养基的糖分与维生素含量，促进木耳生长，提高木耳的产量。0009本发明所述的糖优选为蔗糖或葡萄糖。因本发明所用木屑木质素含量高，为提高木耳对木质的利用率，在配料中适当提高糖的含量，以诱导木质素酶的产生并提高木质素酶的活性。0010一种添加柚子皮的木耳培养基的制备方法，包括如下步骤00111将木屑粉碎成12MM颗粒，晒干，将柚子皮晒干，粉碎成3050目细粉；00122将木屑颗粒、石膏、辅料、柚子皮细粉混合，将糖溶于水中倒入混合料中，边搅拌边喷水至含水率为5565，堆料12天；00133将培养基装入聚乙烯材料薄膜料筒袋，装袋250G/袋，然后在110蒸汽中常压灭菌813H，冷却至2326，即。
9、得添加柚子皮的木耳培养基。0014相比现有技术，本发明的优点在于00151、柚子皮中的黄酮及黄酮类物质对革兰氏阳性球菌，如葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌等，和革兰氏阴性杆菌，如大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌等都有抑制作用。在木耳培养基中添加柚子皮，有效抑制杂菌生长，保护木耳菌种。00162、柚子皮中的黄酮类物质成分具有抗氧化作用，本发明通过在木耳培养基加入柚子皮，可以增强木耳抗氧化功效。00173、柚子皮富含丰富的蛋白质、有机酸、维生素以及钙、磷、镁、钠等人体必需的元素，作为废料处理，浪费资源，将柚子皮添加到木耳培养基中，变废为宝，充分利用资源，提高柚子皮的利用价值。具体实施方。
10、式0018以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。0019实施例10020一种添加柚子皮的木耳培养基，由以下重量百分比的原料制成柳树木屑53，玉米粉23，麸皮11，柚子皮109，葡萄糖08，石膏13。0021添加柚子皮的木耳培养基的制备方法，包括如下步骤00221将柳树木屑粉碎成1MM颗粒，晒干，将柚子皮晒干，粉碎成30目细粉；00232将柳树木屑颗粒、石膏、玉米粉、麸皮、柚子皮细粉混合，将葡萄糖溶于水中倒入混合料中，边搅拌边喷水至含水率为55，堆料1天；00243将培养基装入聚乙烯材料薄膜料筒袋，装袋250G/袋，然后在100蒸汽中常压灭菌8H，冷却至25，即得添加。
11、柚子皮的木耳培养基。0025实施例20026一种添加柚子皮的木耳培养基，由以下重量百分比的原料制成泡桐木屑537，麸皮9，棉籽壳6，米糠14，柚子皮15，蔗糖12，石膏11。0027添加柚子皮的木耳培养基的制备方法，包括如下步骤说明书CN104163687A3/6页500281将泡桐木屑粉碎成15MM颗粒，晒干，将柚子皮晒干，粉碎成40目细粉；00292将泡桐木屑颗粒、石膏、麸皮、棉籽壳、米糠、柚子皮细粉混合，将蔗糖溶于水中倒入混合料中，边搅拌边喷水至含水率为60，堆料15天；00303将培养基装入聚乙烯材料薄膜料筒袋，装袋250G/袋，然后在110蒸汽中常压灭菌10H，冷却至26，即得添加柚。
12、子皮的木耳培养基。0031实施例30032一种添加柚子皮的木耳培养基，由以下重量百分比的原料制成杨树木屑58，麸皮5，棉籽壳6，玉米芯9，米糠11，柚子皮9，葡萄糖11，石膏09。0033添加柚子皮的木耳培养基的制备方法，包括如下步骤00341将杨树木屑粉碎成15MM颗粒，晒干，将柚子皮晒干，粉碎成40目细粉；00352将杨树木屑颗粒、石膏、麸皮、棉籽壳、玉米芯、米糠、柚子皮细粉混合，将葡萄糖溶于水中倒入混合料中，边搅拌边喷水至含水率为60，堆料15天；00363将培养基装入聚乙烯材料薄膜料筒袋，装袋250G/袋，然后在110蒸汽中常压灭菌11H，冷却至24，即得添加柚子皮的木耳培养基。003。
13、7实施例40038一种添加柚子皮的木耳培养基，由以下重量百分比的原料制成椴树木屑63，麸皮7，玉米粉9，米糠12，柚子皮7，蔗糖14，石膏06。0039添加柚子皮的木耳培养基的制备方法，包括如下步骤00401将椴树木屑粉碎成2MM颗粒，晒干，将柚子皮晒干，粉碎成50目细粉；00412将椴树木屑颗粒、石膏、麸皮、玉米粉、米糠、柚子皮细粉混合，将蔗糖溶于水中倒入混合料中，边搅拌边喷水至含水率为65，堆料2天；00423将培养基装入聚乙烯材料薄膜料筒袋，装袋250G/袋，然后在110蒸汽中常压灭菌13H，冷却至23，即得添加柚子皮的木耳培养基。0043对比例0044一种木耳培养基，由以下重量百分比的。
14、原料制成椴树木屑63，麸皮9，玉米粉10，米糠15，蔗糖14，石膏06，水1。0045木耳培养基的制备方法，包括如下步骤00461将椴树木屑粉碎成2MM颗粒，晒干，将柚子皮晒干，粉碎成40目细粉；00472将椴树木屑颗粒、石膏、麸皮、玉米粉、米糠混合，将蔗糖溶于水中倒入混合料中，边搅拌边喷水至含水率为65，堆料2天；00483将培养基装入聚乙烯材料薄膜料筒袋，装袋250G/袋，然后在110蒸汽中常压灭菌13H，冷却至23，即得木耳培养基。0049试验例1本发明添加柚子皮的木耳培养基对杂菌的抑制作用00501、培养基液体制备将本发明实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、对比例分别按料液比130。
15、加水提取，提取三次，合并提取液，浓缩至一定体积，加3倍95的乙醇沉淀，取上清液浓缩、干燥，得实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、对比例培养基粗提物备用。00512、供试菌种及其纯化培养与鉴定0052葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、大肠杆菌、变形杆菌，由广西大学动物科技学院提供。说明书CN104163687A4/6页60053菌种采用连续划线法进行纯化，培养后的菌落采用革兰氏染色法进行鉴别，鉴别后的菌种斜面培养、备用。0054革兰氏染色法细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌，后者为革兰。
16、氏阴性菌。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。00553、细菌培养基的配制0056采用牛肉膏蛋白胨培养基，为了增加细菌的生长速度，每LKG水中加入10G葡萄糖以对培养基进行改良，O1MPA灭菌20MIN，制成平板。00574、供试菌液的制备0058挑取经纯化和鉴定的菌落，接种于普通肉汤培养基中，36恒温振荡培养至浑浊。然后吸取一定量菌液接种于数支大试管中，重复上述条件培养。菌液10倍稀释，分别取01ML涂于平。
17、板，36恒温培养，菌落形成后计数，制成51O8CFU/ML菌液。00595、打孔器法测定本发明添加柚子皮的木耳培养基对杂菌的抑制作用0060用R06CM的打孔器在平板上打孔，涂布己经准备好的菌液，然后在孔中加入浓度为100G/L的不同培养基备用粗提物的溶液，37恒温培养23天后观察，测其抑菌圈的大小。00616、试验结果0062表1加入不同木耳培养基溶液抑菌圈半径的大小统计单位CM0063变形杆菌葡萄球菌链球菌大肠杆菌炭疽杆菌实施例1165167165178167实施例2167168170179169实施例3168162166174159实施例4161160163172162对比例023033。
18、0240260210064从表1可以看出，本发明实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的添加柚子皮的木耳培养基对葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、大肠杆菌、变形杆菌有较强的抑制作用，对比例的未添加柚子皮的木耳培养基对杂菌抑制作用极其微弱。0065试验例2本发明培养的木耳抗氧化作用00661、材料本发明实施例1、实施例3、对比例培养的木耳。00672、试验方法00681木耳粗体物制备提取方法取本发明实施例1、实施例3、对比例培养的木耳10G，分别粉碎，按料液比135加水提取，提取三次，合并提取液，浓缩至一定体积，加3倍95的乙醇沉淀，取上清液浓缩、干燥，得木耳粗提物备用。00692还原力的测定样品将铁。
19、氰化钾K3FECN6还原成亚铁氰化钾K4FECN6,亚铁氰化钾再与FE3作用，生成亚铁氰化铁普鲁士蓝，以在700NM波长处检测普鲁士蓝的吸光度表示还原力的大小，吸光度越高，样品的还原力就越强，抗氧化性越强。在700NM波长处，分别测定浓度为5MG/ML的本发明实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物说明书CN104163687A5/6页7的吸光值。00703清除超氧阴离子实验在产生超氧阴离子自由基O2的反应体系中，分别加入浓度为5MG/ML的本发明实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物，测定它们清除率。00714清除羟基自由基的实验FESO4与H2O2反应产生OH，在体系内加入水杨酸。
20、，可捕捉羟基自由基并产生有色物质，该物质在510NM处有最大吸收，当反应体系中存在OH自由基清除剂时，此氧化过程受到抑制，吸光度值则降低。在FESO4与H2O2反应体系中，分别加入浓度为30MG/ML的本发明实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物，测定清除率。00725模拟胃液PH条件下的NO2清除反应作用清除亚硝酸盐是有效防止N亚硝基化合物致癌的途径之一。在模拟体系中加入分别加入浓度为14MG/ML的本发明实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物，测定清除率。00736DPPH法测定木耳抗氧化活性DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，广泛用于抗氧化评价体系中。在体系中，分别加入浓。
21、度为30MG/ML的本发明实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物，测定清除率。00743、试验结果0075表2不同培养基培养的木耳粗提取物的还原能力0076实施例1实施例3对比例吸光值1512154309420077表2结果表明，实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物具有抗氧化性，实施例1、实施例4抗氧化性优于对比例。0078表3不同培养基培养的木耳粗提取物清除超氧阴离子的能力0079实施例1实施例3对比例清除率2932230080表3表明，实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物都具有清除超氧阴离子的能力，实施例1、实施例3清除能力优于对比例。0081表4不同培养基培养的木耳。
22、粗提取物清除羟基自由基的能力0082实施例1实施例3对比例清除率7577570083表4表明，实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物都具有清除羟基自由基的能力，实施例1、实施例3清除能力优于对比例。0084表5不同培养基培养的木耳粗提取物对NO2清除作用0085实施例1实施例3对比例清除率6062390086表5表明，实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物对NO2都有清除作用，实施例1、实施例3清除能力优于对比例。0087表6不同培养基培养的木耳粗提取物对DPPH清除效果0088说明书CN104163687A6/6页8实施例1实施例3对比例清除率6670410089表6表明，实施例1、实施例3、对比例培养的木耳粗提取物对DPPH都有清除效果，实施例1、实施例3清除效果优于对比例，表明添加柚子皮的木耳培养基培养的木耳具有很好的抗氧化性。0090综合上述氧化反应体系试验结果，可知实施例1、实施例3、对比例培养的木耳具有抗氧化性，而实施例1、实施例3优于对比例，说明添加柚子皮的木耳培养基能够增强木耳的抗氧化功效。说明书CN104163687A。